贝母类药材湖北贝母Fritillaria hupehensis系统位置的探讨——来自ITS,rpl16,matK序列的证据

湖北贝母为传统中药,然而《Flora of China》将其基原植物湖北贝母Fritillaria hupehensis归并于天目贝母F.monantha项下。该实验采用分子系统学方法,以川百合Lilium davidii为外类群,用核基因ITS序列和叶绿体基因rpl16序列、matK序列等3个片段对湖北贝母及其近缘类群天目贝母F.monantha、安徽贝母F.anhuiensis等进行联合建树分析,对湖北贝母植物的系统位置进行了探讨,为湖北贝母药材的安全使用提供分子证据。结果显示,分子系统树上,3种贝母各自的居群聚为一支,之后天目贝母与安徽贝母聚为一支,最后与湖北贝母聚为一支。表明湖北贝母与天目贝母的亲缘关系可能要远于安徽贝母与天目贝母之间的关系,因此不适宜将湖北贝母归并于天目贝母。     

蛋白质电泳指纹图谱在各产地贝母亲缘关系研究中的应用

目的研究浙贝母和其他产地贝母品种的亲缘关系。方法采用蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳指纹技术,对具有代表性的7个品种(系)浙贝及东贝、皖贝、川贝这3种近缘药用贝母(共30份个体)进行分析。结果 10种贝母的基因多样性指数为0.333 4,Shannon信息指数为0.490 2,多态位点百分率(PPB)为85.71%。结论浙贝母的宽叶、轮叶、狭叶、梅园和新梅园品种间的相似性系数在0.772 2~0.933 2之间,其中宽叶种与轮叶贝母遗传距离最小,三籽和多籽与其他浙贝品种(系)亲缘关系较远,而与东贝母的遗传相似性高于上述5个浙贝母品种(系),并且皖贝与川贝之间亲缘关系较近,聚为另一类。     

川产贝母种质资源遗传多样性的ISSR分析

目的:为阐明川产贝母资源间亲缘关系提供更多证据.方法:利用ISSR分子标记技术对川产10个种1变种共19份材料进行分析,采用NTSYS软件计算材料间相似系数,并用UPGMA法构建了系统树.结果:从35个ISSR引物中共筛选出11个多态性明显、反应稳定的引物,在19份供试材料DNA中共扩增出179条谱带,其中多态性条带163条,占86.8%.材料间ISSR标记遗传相似性系数(GS)在0.569～0.855.聚类分析结果显示,所有供试材料均可区分开,并聚为4组.第1组包括川贝母、甘肃贝母、长腺贝母和短丝贝母,第Ⅱ组由暗紫贝母和浓蜜贝母组成,槽鳞贝母、浙贝母、瓦布贝母和梭砂贝母聚为第Ⅲ组,湖北贝母单独为第Ⅳ组.试验结果还表明,来源于同一地区的多数川产贝母材料可分别聚在一起.结论:ISSR标记适用于川产贝母资源的遗传多样性研究,但药典收载的川贝母药材的4种基原植物种间及其与其他川产贝母属各物种间尚不能仅通过采用ISSR标记技术进行分子鉴定.此外,ISSR聚类结果同川产贝母资源的地理分布有一定关系.     

海风藤、山蒟的RAPD鉴别研究

目的确定海风藤、山蒟的DNA扩增谱带的相似性,用RAPD技术对两种药材进行分子水平的鉴定。方法用植物基因组DNA提取试剂盒提取海风藤、山蒟药材的总DNA,以随机引物进行随机扩增。结果从20条随机引物中筛选出13条有效引物能够证明二者扩增谱带的相似性。结论RAPD技术能快速、有效地从DNA水平上确定海风藤、山蒟的相似之处。     

海风藤、山药的RAPD鉴别研究

目的 以确定海风藤、山蒟的DNA扩增谱带的相似性,用RAPD技术对两种药材进行分子水平的鉴定.方法 用植物基因组DNA提取试剂盒提取海风藤、山蒟药材的总DNA,以随机引物进行随机扩增.结果 从20条随机引物中筛选出13条有效引物能够证明二者扩增谱带的相似性.结论 RAPD技术能快速、有效地从DNA水平上确定海风藤、山蒟的相似之处.     

8种贝母的RAPD分析

1引言中药贝母来源于百合科(LiliaceaeL.)贝母属(FritillariaL.)多种植物的鳞茎,具有清热润肺,化痰止咳之功效[1]。我国产的贝母属植物有20种和2变种,不同种类贝母药材的市场价格差异较大,传统的鉴定方法有一定的局限性[2],而将先进的分子生物学技术与传统药用植物的研究结合起来,是药用植物研究现代化的重要途径[3]。RAPD的核心技术是多聚酶链反应(PCR)[4,5],应用人工合成的10个左右的寡核苷酸引物,随机扩增基因组DNA,产生多态性扩增谱带。本研究通过不同产地的8种贝母RAPD的分析,探讨贝母种间的遗传差异,为进一步发掘和充分利用贝…     

基于ISSR的新疆贝母属植物遗传多样性研究

目的 通过对新疆贝母属植物进行遗传多样性分析,以期获得新疆贝母属不同种之间的遗传多态性.方法 应用琼脂糖凝胶电泳法结合ISSR分子标记,对所选材料进行遗传多样性与亲缘关系的综合分析.结果 2％琼脂糖凝胶电泳扩增总条带数为185条,其中多态性条带为181条,多态性条带比率(PPB)为97.84％.基于UPGMA软件对10种贝母的遗传差异性分析表明,12个ISSR引物可以将新疆贝母不同种之间遗传差异明显区分开来,其遗传相似系数范围在0.37～0.80,以0.50为最低遗传相似系数,可将10种贝母分成4个大类.结论 揭示了10种贝母种质资源间的遗传多样性与亲缘关系,为新疆野生贝母属植物资源的收集和种间分类等提供理论依据.     

采用ISSR标记分析草珊瑚的DNA指纹图谱与其品质相关性

目的 分析不同质量级别的草珊瑚样品的DNA指纹图谱与其品质相关性,为进一步利用这些资源进行分子辅助育种奠定一定基础。方法 采用ISSR-PCR方法对UBC801～UBC900共100个ISSR引物进行筛选,筛选出多态性好的ISSR引物23个。利用这23个ISSR引物扩增18份草珊瑚样品,以18份草珊瑚样品的ISSR扩增谱带为基础,利用Excel文件建立供试材料扩增条带指纹数据库。结果 共获得198条谱带,平均每个引物扩增出8条谱带,其中多态性谱带184条,多态性条带比率为92.9%。从23个多态性好的ISSR引物中遴选出UBC811、UBC825 2个引物中7个位点为一个组合,UBC827、UBC834、UBC842共3个引物中7个位点为另一个组合,分别建立了18份受试草珊瑚样品的基因组的DNA 指纹图谱,并从184条多态性谱带中筛选了出u844-6条带与样品质量有一定相关性。结论 ISSR分子标记可以有效辨别18份受试草珊瑚样品的DNA指纹图谱,并筛选获得一条与其品质有一定相关性的特征条带。     

用PCR方法鉴别金钱白花蛇及其伪品

本实验引用一对金钱白花蛇的特异性引物Ｂｕｌ－１和ＢｕＨ－１,用聚合酶链反应方法（以下简称ＰＣＲ）对金钱白花蛇、大白花锦蛇、赤链游蛇和蕲蛇等五种样品同时进行扩增、琼脂糖凝胶电泳,并对电泳结果进行分析。结果显示,金钱白花蛇样品扩增产物可见一条２３０ｂｐ的目的的片段,而其它四种蛇样品扩增后未见扩增产物出现。本法简单、快速、特异性强、微量。     

湖北麦冬及其近缘种的ISSR多样性研究

目的:对形态上难以区分的湖北麦冬及其近缘植物,利用ISSR分子标记技术进行多样性研究,并探索其亲缘关系。方法:设计5因素4水平正交实验,进行PCR反应体系的优化;从ISSR引物序列表中随机选取80个引物,对所有样品进行PCR扩增,筛选实验有效引物;用优选的条件对样品进行ISSR分子标记,计算样品间的相似系数,构建聚类分析树系图。结果:建立了麦冬类植物优化的PCR扩增程序,筛选出了9个有效引物,得到了各样品的ISSR电泳谱和系统发育树系图,谱和图清楚反映出了各品种之间的区别及其亲缘关系。结论:本文建立的IS-SR分子标记技术可用于湖北麦冬及其近缘种的多样性及亲缘关系研究。     

应用位点特异性引物鉴定白花蛇舌草

目的:建立一种简便实用的白花蛇舌草药材的DNA分子鉴定方法.方法:收集目前市场上出现的白花蛇舌草及伪品共9种,分别提取总DNA,扩增rDNA ITS-2区序列,对比所有样品的该段核苷酸序列,并设计能专一性鉴别白花蛇舌草的位点特异性引物.结果:白花蛇舌草及其混淆品在ITS-2区的序列有显著差异.用位点特异性引物对所有样品DNA进行PCR扩增,只有白花蛇舌草有明显的约392 bp扩增产物,而其它8种植物在同等条件下无阳性产物.结论:所设计的鉴别引物对白花蛇舌草有高度的特异性.     

云南草果种质资源DNA条形码序列分析

目的 筛选与评价适用于云南草果居群的DNA条形码。方法 以云南省草果种质资源为样本对ITS、psbA-trnH、matK、rbcL和ycf1 5条DNA条形码常用序列进行筛选与评价,并对草果居群进行扩增,测序,测序序列用Genestar进行拼接,然后用Mega进行数据处理,并对草果多样性及其鉴定进行分析。结果 引物ITS5和ITS4对草果的扩增片段长度大约为520 bp;rbcLa-F和rbcLa-R对草果的扩增片段长度大约为498 bp;引物ycf1-bF和ycf1-bR对草果的扩增片段长度大约为800 bp;引物psbA-trnH-1F和psbA-trnH-1R对草果的扩增片段长度大约为400 bp;引物matK-2F和matK-2R对草果的扩增片段长度大约为470 bp。扩增及测序的成功率均较高,结果大多可用。通过对草果ITS、psbA-trnH、matK和ycf1序列的扩增结果进行分析,草果与其他豆蔻属植物都可以被清晰地区分开;ITS序列所有样本分为MG5白花草果居群和其他居群;psbA-trnH序列所有样本分为MG5白花草果居群,MG6黄花草果居群和其他居群;matK序列所有样本分为MG6黄花草果居群和其他居群,MG5白花草果样本扩增失败;ycf1序列所有样本分为MG6黄花草果居群和其他居群,MG5白花草果居群与其他22个草果居群聚为一支;rbcL序列对所有样本的扩增均一致。结论 ITS、matK、psbA-trnH及ycf1序列均能将草果与其他同属植物进行准确区分;MG6的matK、psbA-trnH及ycf1序列发现了序列位点的变异,为草果品种的选育做出贡献。ITS和psbA-trnH序列可将黄花和白花草果序列区分开;草果白花黄花所有样本rbcL序列无任何变异,且用rbcL序列无法鉴别草果与其他同属植物,可将其舍去。     

ISSR-PCR在石斛种间鉴别中的应用

目的 采用ISSR-PCR方法对石斛属9种植物进行鉴别,探讨不同种石斛在DNA分子水平上的差异。方法 选取10条由SSR组成的引物,对9种石斛进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳分析。结果 10条引物中有7条扩增出多态性条带。每条引物可检测的多态性位点最少7个,最多14个,扩增片段大小为220-1260 bp。其中,引物UBC-807和UBC-864具有较高的多态性条带比率,均可以独立将所有被测种区分开来。结论ISSR-PCR作为一种简便、可靠的分子标记鉴定技术,可以作为石斛属种间鉴别的方法之一。     

化橘红rDNA ITS序列特征的初步分析

目的:研究化橘红及其近缘种rDNA ITS区碱基序列的特征及差异。方法:利用PCR产物直接测序,并作序列变异分析。结果:5个植物样品的rDNA ITS序列长度为675bp-683bp,其中5.8S rDNA长度为165bp,编码区较保守。基于K2P参数遗传距离模型构建的化橘红与沙田柚、柑橘rDNA ITS序列遗传距离分别为1.05和2.29。结论:化橘红与其近缘品种rDNA ITS序列有明显的差异。     

获取人参、西洋参特定序列位点(STS)标记的新方法

目的：寻找人参、西洋参的分子鉴定新方法。方法：在人参、西洋参已知rDNA序列上设计单引物进行PCR扩增,对多态性条带克隆测序,根据序列比对情况设计人参、西洋参特异引物,通过对PCR条件的优化得到人参、西洋参的STS 标记。结果：引物Pg-q36F能得到人参、西洋参的多态性条带,特异引物Pg-6F,Pg-479R仅对人参扩增474 bp条带,特异引物Pq-442F,Pq-658R仅对西洋参扩增217 bp条带,能成功鉴定人参和西洋参。结论：建立了一种获取人参、西洋参STS标记的新方法。本方法大大加快STS标记的建立过程,可为其他中药材分子标记的获得提供指导。     

中药材龟甲细胞色素b基因特异性鉴定研究

 目的 建立一种实用、简便、准确的中药材龟甲DNA分子标记鉴定方法。方法 采用酚-三氯甲烷抽提法和盐析法提取龟甲mtDNA。从GenBank数据库中下载乌龟及常见伪品源动物mtDNA细胞色素b基因序列,经序列比较分析,设计特异性引物,并使用该引物对正品及其伪品mtDNA进行扩增并测序。结果 盐析法提取DNA的浓度高于酚-三氯甲烷抽提法,并且盐析法省时、经济。本实验所设计引物只能扩增正品龟甲mtDNA,测序结果与龟甲同源性100%。结论 盐析法是一套适合从龟甲中提取高质量DNA的方法,本实验所设计的引物具有高度特异性,可用于龟甲类药材的鉴定。     

α-葡萄糖苷酶抑制活性跟踪分离芙蓉菊中的活性成分

目的：研究芙蓉菊全草中具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的化学成分。方法：采用体外α-葡萄糖苷酶抑制活性跟踪方法和各种柱色谱技术进行化学成分的分离和纯化;应用各种谱学方法鉴定化合物的结构;对单体化合物进行α-葡萄糖苷酶抑制活性试验,确定活性成分。结果：芙蓉菊70%乙醇提取物的醋酸乙酯萃取部分和水溶性部分对α-葡萄糖苷酶活性具有较强的抑制作用,从两部分分离鉴定了5,7-二羟基-3′,4′,5′-三甲氧基黄酮 (1),东莨菪素(2),艾菊素,粗毛豚草素(3),5,5′,7-三羟基-3′,4′-二甲氧基黄酮(4),柯伊利素(5),万寿菊黄素-3,6,7-三甲基醚(6),石杉黄素(7),东莨菪苷(8)和槲皮万寿菊素-3,6-二甲醚(9)。其中,化合物2,3,5～7,9对α-葡萄糖苷酶活性具有较强的抑制作用,IC₅₀(μmol·L^-1)值分别为(34.36±2.06),(146.28±12.44),(246.26±8.73),(74.06±3.83),(42.19±5.25),(136.20±25.73),强于同条件下的阳性对照药阿卡波糖[IC50 =（489.25±38.55）μmol·L^-1]。化合物1,4,8和艾菊素的IC₅₀值皆大于1 000 μmol·L^-1。结论：化合物5和9为首次从该属植物中分离得到;化合物2,3,5～7,9对α-葡萄糖苷酶活性具有较强的抑制作用,其抑制作用类型属于竞争性抑制作用,它们可能是芙蓉菊防治糖尿病的物质基础。     

利用等位基因特异PCR鉴别虎掌南星及其部分混淆品

目的:建立中药材虎掌南星的分子鉴定方法,为天南星药材质量控制提供依据。方法:GenBank中下载半夏属、天南星属、犁头尖属物种的叶绿体rpl20基因序列,利用DNAMAN进行比对分析,发现半夏属和虎掌南星的SNP位点,并设计鉴别引物Ptrpl94F,Ptrpl708R和Pprpl148F,Pprpl484R,采用等位基因特异PCR方法对虎掌南星、半夏、水半夏3个物种的10个样品进行扩增。结果:引物Pprpl148F和Pprpl484R仅对虎掌南星扩增333 bp条带,半夏、水半夏均无扩增,能准确鉴别虎掌南星。引物Ptrpl94F和Ptrpl708R对半夏、虎掌南星均扩增611 bp条带,水半夏无扩增。结论:本实验建立的等位基因特异PCR方法能准确区别出虎掌南星和半夏、水半夏,为虎掌南星及半夏的正确用药提供了保障。     

8种卷柏属药用植物的RAPD分析

目的:用分子标记技术鉴别8种卷柏属药用植物并进行亲缘关系分析。方法:从60个随机引物中筛选出8个引物,采用随机引物扩增多态DNA(RAPD)技术,对8种卷柏属植物的17份样品的DNA提取物进行扩增和分析。结果:共扩增出58个位点,获得清晰的RAPD图谱,建立了8种卷柏属植物类群亲缘关系的树系结构图。结论:该方法显示了8种卷柏属植物之间明显的种间差异,以及同一种植物在不同产地产生的变异,能为这些植物种以及种下的分类鉴定提供遗传学依据。