去卵巢大鼠骨质疏松症中Sost对Wnt信号通路的影响

目的观察去卵巢大鼠骨质疏松时股骨中Sost、lrp5和β-catenin的表达水平的变化,探讨Sost在去卵巢骨质疏松发生中的作用。方法 20只雌性SD大鼠随机分为去卵巢组和假手术组（对照组）,去卵巢组切除大鼠双侧卵巢诱发骨质疏松,假手术组开腹后仅切除少量脂肪即缝合。确定造模成功后自腹主动脉取血测定E2水平,利用骨骼强度检测仪对一侧股骨进行生物力学检测并用双能X线骨密度仪进行骨密度测定;提取另一侧股骨总RNA,行RT-PCR检测Sost、lrp5和β-catenin mRNA水平;提取总蛋白,利用Western blot检测Sost表达产物sclerosteosis、Lrp5和β-catenin的蛋白含量。结果与假手术组相比,去卵巢组大鼠血清E2浓度显著降低;股骨组织中Sost表达明显上调,lrp5的mRNA水平及蛋白水平检测变化不大,β-catenin mRNA变化不大,但蛋白含量显著减少;股骨抗弯曲力和抗压碎力明显减弱,骨密度降低。结论卵巢摘除术可导致SD大鼠E2分泌明显减少,进而诱发骨质疏松在此过程中伴有Sost基因表达水平增高,β-catenin降解增多,提示去卵巢后E2分泌减少导致大鼠骨质疏松发生其机制可能和Sclerosteosis竞争性结合LRP5,抑制Wnt通路,从而下调β-catenin有关。     

杜仲叶醇提物预防去势大鼠骨质疏松症的实验研究

目的：通过去卵巢大鼠骨质疏松模型，研究杜仲叶醇对骨密度和血清雌激素、IL-6水平的影响。方法：切除雌性Wistar大鼠双侧卵巢建立骨质疏松动物模型，给予杜仲叶醇灌胃，治疗12周后，检测大鼠骨密度、血清雌激素、IL-6水平。结果：去势后大鼠骨密度降低，采用杜仲叶醇治疗后骨密度、血清雌二醇（E2）含量显著升高（P〈0．05），IL-6水平显著下降（P〈0．05）。结论：杜仲叶醇可显著提高去势大鼠骨密度和血清雌激素水平，对血清IL-6水平有抑制作用。     

Wnt/β-catenin信号通路对间充质干细胞衰老的影响及其作用机制

目的:研究不同年龄血清对Wnt/β-catenin信号通路激活水平的影响,探讨Wnt/β-catenin信号通路对间充质干细胞(MSCs)衰老、增殖、存活能力的作用及其机制。方法:提取年轻(8～12周)及老年(64～72周)SD大鼠血清,实验分为4组,分别为年轻血清(Young rat serum,YRS)组,YRS+Wnt 3a组、老年血清(Old rat serum,ORS)组和ORS+DKK1组。免疫细胞化学染色和Western blotting检测胞浆、胞核β-catenin的表达。SA-β-半乳糖苷酶染色检测各组细胞衰老,MTT法检测细胞增殖,AO/EB染色法检测MSCs存活和凋亡。为研究Wnt/β-catenin信号通路导致MSCs衰老的作用机制,免疫细胞化学染色和Western blotting检测γ-H2A.X和p53蛋白表达,RT-PCR法检测p53、p21 mRNA表达。结果:ORS组β-catenin表达较YRS组明显增强,尤其是胞核,出现β-catenin聚集现象,而ORS+DKK1组β-catenin表达减弱。与YRS组相比,YRS+Wnt 3a组细胞SA-β-半乳糖苷酶染色阳性细胞...     

补骨脂提取物对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢水平的影响*

目的 探讨补骨脂提取物对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢指标的影响。方法 将60只雌性SD大鼠随机分为对照组、模型组、补骨脂提取物组和西药组，每组15只。除对照组外，各组通过切除大鼠两侧卵巢组织进行造模，对照组大鼠仅暴露卵巢而不行切除术。造模成功后，补骨脂提取物组给予补骨脂素（88 mg/kg）灌胃，西药组给予阿仑膦酸钠（7 mg/kg）灌胃，对照组和模型组则灌胃等体积生理盐水;连续12周。采用酶联免疫吸附实验检测各组大鼠血清骨钙素（osteocalcin，OCN）、骨特异性碱性磷酸酶（bone specific alkaline phosphatase，BAP）、Ⅰ型胶原交联C-末端肽（C-terminal telopeptide of type Ⅰ collagen，CTX）水平;采用RT-PCR法检测大鼠股骨和胫骨骨髓中Wnt3a和β-catenin的mRNA表达;采用双能X线骨密度仪检测大鼠腰椎和股骨的骨密度（bone mineral density，BMD）。结果 与对照组比较，模型组大鼠血清CTX水平显著升高（P＜0.05），OCN、BAP含量明显降低（P均＜0.05）;与模型组比较，各用药组大鼠血清CTX水平显著降低（P均＜0.05），OCN、BAP含量明显升高（P均＜0.05），但各用药组之间比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。与对照组比较，模型组大鼠股骨和胫骨骨髓中Wnt3a、β-catenin的mRNA表达明显降低（P均＜0.05），第4腰椎及左、右股骨BMD明显降低（P均＜0.05）;与模型组比较，各用药组大鼠股骨和胫骨骨髓中Wnt3a、β-catenin的mRNA表达水平，第4腰椎及左、右股骨BMD均升高（P均＜0.05），但各用药组之间比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 补骨脂提取物能提高去卵巢骨质疏松大鼠骨密度，改善骨代谢指标，其作用可能与活化Wnt/β-catenin有关。     

艾灸对去卵巢骨质疏松症大鼠骨髓间充质干细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 观察艾灸三阴交、关元穴对去卵巢骨质疏松症大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)中Wnt/β-catenin信号通路的影响,探索艾灸影响骨代谢的内在机制。方法 将60只6月龄SD大鼠随机分为正常组（20只）和去卵巢组（40只）,采用去卵巢法复制大鼠骨质疏松症模型,将去卵巢组再随机分为模型组、雌二醇组和艾灸组,每组10只。采用MTT法检测大鼠BMMSCs活性,酶联免疫吸附法检测大鼠BMMSCs中骨钙素（bone glaprotein,BGP）含量,实时荧光定量PCR法测定Wnt3a、低密度脂蛋白受体相关蛋白-5（low density lipoprotein receptor associated protein-5,LRP-5）、LRP-6、Dkk1、β-连环蛋白（β-catenin）和T细胞因子（T-cell factor, TCF）mRNA相对表达水平,Western blot法测定Wnt3a、Dkk1、β-catenin、TCF蛋白的表达水平。结果 在体外培养第12、16天时,艾灸可显著提高骨质疏松症大鼠降低的BMMSCs活性。艾灸可显著升高骨质疏松症大鼠BMMSCs中降低的BGP含量,显著上调BMMSCs中降低的LRP-5、LRP-6 mRNA的表达水平,显著上调降低的Wnt3a、β-catenin和TCF mRNA及其蛋白的表达水平,显著下调升高的Dkk1 mRNA及其蛋白的表达水平,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 艾灸三阴交、关元穴增加去卵巢大鼠BMMSCs活性,提高BGP含量,其机制与干预Wnt/β-catenin信号通路有关。     

强骨合剂通过Wnt3a/β-catenin/VEGF信号通路促进血管生成改善围绝经期大鼠骨质疏松的研究

  目的  探讨强骨合剂对围绝经期骨质疏松SD大鼠的疗效及其可能的作用机制。  方法  采用HPLC建立强骨合剂标准指纹图谱。将50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、雌二醇组、强骨合剂高剂量(12 g · kg-1)组、低剂量(6 g · kg-1)组, 每组10只。双侧卵巢切除法制备围绝经期大鼠骨质疏松模型, 分别灌胃给予生理盐水,雌二醇,高、低剂量强骨合剂, 连续给药30 d。记录大鼠体质量和子宫质量, 检测大鼠骨力学相关指标, 股骨HE染色观察成骨细胞量及骨小梁面积。qPCR检测Wnt3a、β-catenin、VEGF、OPG mRNA表达水平; 免疫荧光检测VEGFR-2、CD31, 评价血管生成情况; Western blot检测股骨组织Wnt3a、p-GSK3β、VEGF、β-catenin、Lamin蛋白表达情况。  结果  10批次提取的强骨合剂指纹图谱相似度均大于0.9, 表明10批样品质量稳定。与模型组比较, 雌二醇组,强骨合剂高、低剂量组可显著改善大鼠子宫指数、骨密度、骨力学性能指标(P < 0.05, P < 0.01), 明显改善骨微结构, 提高股骨组织中Wnt3a、β-catenin、VEGF、OPG mRNA水平(P < 0.05, P < 0.01), 以及VEGF、CD31、Wnt3a、p-GSK3β、β-catenin、Lamin蛋白表达水平(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  强骨合剂可能通过Wnt3a/β-catenin信号通路调节VEGF表达, 促进血管生成, 从而提高大鼠骨密度, 改善骨组织形态, 进而发挥抗骨质疏松的作用。      

Wnt/β-catenin信号通路对问充质干细胞衰老的影响及其作用机制

目的:研究不同年龄血清对Wnt/β-catenin信号通路激活水平的影响,探讨Wnt/β-catenin信号通路对间充质干细胞(MSCs)衰老、增殖、存活能力的作用及其机制.方法:提取年轻(8 ～12周)及老年(64—72周)SD大鼠血清,实验分为4组,分别为年轻血清(Young rat serum,YRS)组,YRS+ Wnt 3a组、老年血清(Old rat serum,ORS)组和ORS+ DKK1组.免疫细胞化学染色和Western blotting检测胞浆、胞核β-catenin的表达.SA-β-半乳糖苷酶染色检测各组细胞衰老,MTT法检测细胞增殖,AO/EB染色法检测MSCs存活和凋亡.为研究Wnt/β-catenin信号通路导致MSCs衰老的作用机制,免疫细胞化学染色和Western blotting检测γ-H2A.X和p53蛋白表达,RT-PCR法检测p53、p21 mRNA表达.结果:ORS组β-catenin表达较YRS组明显增强,尤其是胞核,出现β -catenin聚集现象,而ORS+ DKK1组β-catenin表达减弱.与YRS组相比,YRS+ Wnt 3a组细胞SA-β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数显著增多(P＜0.01),细胞增殖和存活能力减弱.而ORS+ DKK1组与ORS组相比,SA-β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数显著减少(P＜0.01),细胞增殖和存活能力增强.免疫细胞化学染色、Western blotting和RT-PCR检测结果显示,ORS组内γ-H2A.X、p53、p21表达较YRS组明显增强,而在ORS内加入DKK1后,γ-H12A.X、p53、p21表达较ORS组明显减弱.结论:ORS培养可以激活MSCs内Wnt/β-catenin信号通路.Wnt/β-catenin信号通路对MSCs衰老发挥重要调控作用.DNA损伤反应和p53/p21途径是Wnt/β-catenin信号通路导致MSCs衰老的重要介导因素.     

梅花鹿茸Ⅰ型胶原对骨质疏松大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的研究梅花鹿茸I型胶原(SDC-I)对骨质疏松大鼠Wnt/β-Catenin信号通路的影响,探索SDC-I对骨质疏松大鼠的保护作用机制。方法应用去势法建立大鼠骨质疏松模型,随机分成空白组,模型组, SDC-I低、中、高剂量组(0.05、0.1、0.2 g/kg),灌胃给药90 d后取材。应用X线仪及骨骼强度仪检测大鼠股骨密度(BMD)和最大载荷量;采用ELISA法检测大鼠血清中血清骨钙素(BGP)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)水平;应用Real Time PCR(RT-PCR)技术检测Wnt/β-Catenin信号通路中β-链蛋白(β-Catenin)、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP5)的mRNA表达水平。结果与模型组相比,SDC-I作用的各组大鼠BMD、最大载荷量显著增高;血清中BGP水平增高而TRACP水平减低;Wnt通路相关β-Catenin、LRP5的mRNA表达水平显著增高。结论 SDC-I可显著提高骨质疏松大鼠的骨密度,其保护机制与上调骨质疏松大鼠骨中β-Catenin、 LRP5的m RNA表达,激活Wnt/β-Catenin信号通路相关。     

健骨颗粒对去卵巢骨质疏松模型鼠整合素信号转导通路的影响

目的 从分子水平探讨健骨颗粒对去卵巢骨质疏松模型鼠整合素传导通路的影响.方法切除大鼠卵巢建立骨质疏松模型,药物干预,运用荧光定量PCR检测模型鼠骨组织中Ⅰ型胶原、整合素β1(Itgβ1)和粘着斑激酶(FAK)mRNA表达. 结果 切除卵巢后12周,大鼠骨密度明显降低,模型成立.Ⅰ型胶原、整合素β1和FAK mRNA表达均明显下降.经过健骨颗粒治疗后12周,骨密度虽然未能达到正常,但与生理盐水组对比明显回升;Ⅰ型胶原、Itgβ1和FAK的mRNA表达则显著增加. 结论 健骨颗粒可通过整合素信号转导通路作用于成骨细胞,提高成骨细胞的功能活性,从而改善骨质量,控制骨密度的继续下降.     

针刺肾俞、足三里抑制大鼠绝经后骨质疏松症的机制研究*

目的探讨针刺肾俞足三里调节wnt/β-catenin通路抑制大鼠绝经后骨质疏松症（PMOP）的作用机制。方法将50只雌性SD大鼠随机分为空白组、假模型组、模型组、穴位组和非经非穴组。治疗组、非经非穴组每天针刺1次,留针30 min,10次为1个疗程,疗程间休息5 d,共针刺6个疗程后,X线检测股骨颈、股骨骨密度,比色法检测大鼠血清碱性磷酸酶（ALP）活性及RT-PCR法检测腰椎Wnt1,β-catenin,GSK-3β,Dsh,mRNA表达。结果与模型组、非经非穴组比较,实验组大鼠股骨颈骨密度明显升高,血清ALP活性明显降低,Wnt1、GSK-3β、Dsh的mRNA表达差异均有统计学意义（P<0.05）。结论针刺肾俞、足三里穴对绝经后骨质疏松症有明显抑制作用,其作用机制可能与调节Wnt/β-Catenin通路中信号分子表达有关。     

阿托伐他汀对激素性股骨头坏死大鼠的作用及对Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 探究阿托伐他汀对激素性股骨头坏死大鼠的作用及对果蝇无翅基因/β-连环蛋白（Wnt/β-catenin）信号通路的影响。方法 30只SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组及阿托伐他汀组，每组10只。模型组和阿托伐他汀组复制激素性股骨头坏死模型并对每只大鼠腹腔注射醋酸泼尼松龙（24.5 mg/kg）和青霉素钠（8万u），2次/周，连续给药6周，共18只大鼠模型复制成功。模型复制的同时，阿托伐他汀组腹腔注射阿托伐他汀1 mg/（kg·d），对照组与模型组给予等量的生理盐水，连续治疗6周后，检测各组大鼠血清钙（S-Ca）、血清磷（S-P）水平，以及血清碱性磷酸酶（ALP）、转化生长因子β₁（TGF-β₁）水平；比较大鼠骨组织ALP、TGF-β₁ mRNA相对表达量；比较大鼠骨组织Wnt1、β-catenin蛋白的表达。结果 与对照组比较，模型组大鼠血清S-Ca、S-P及TGF-β1水平降低（P <0.05），ALP水平升高（P <0.05），ALP mRNA相对表达量升高（P <0.05），TGF-β₁ mRNA相对表达量降低（P <0.05），Wnt1水平和β-catenin蛋白相对表达量下降（P <0.05）；与模型组比较，阿托伐他汀组大鼠血清S-Ca、S-P及TGF-β₁水平升高（P <0.05），ALP水平降低（P <0.05），ALP mRNA相对表达量下降（P <0.05），TGF-β₁ mRNA相对表达量升高（P <0.05），Wnt1水平和β-catenin蛋白相对表达量升高（P <0.05）。结论 阿托伐他汀能够改善激素性股骨头坏死大鼠骨代谢指标，其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。     

基于Wnt/β-catenin通路探讨益气活血方对急性心肌梗死大鼠心肌损伤的修复作用

[目的]探讨益气活血方对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌损伤的修复作用及机制.[方法]将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组、Wnt-C59(Wnt/β-catenin信号通路抑制剂)组,每组15只.模型组、中药组、Wnt-C59组大鼠采用冠状动脉前降支结扎法建立AMI模型,假手术组大鼠仅打开胸腔后缝合.成功造模后,中药组大鼠灌胃益气活血方药液6.48 g·kg-1·d-1,Wnt-C59组大鼠灌胃Wnt-C5930 mg·kg-1·d-1,假手术组和模型组大鼠灌胃0.9％氯化钠(NaCl)溶液20 mL·kg-1,共4周.给药结束后,评价大鼠心功能变化,采用苏木素-伊红(HE)法和Masson染色法观察大鼠心肌组织病理学改变,脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导的核苷酸(dUTP)缺口末端标记法(TUNEL)染色检测心肌细胞凋亡情况,实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-qPCR)法检测心肌组织半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达,酶联免疫吸附分析(ELISA)法检测血清心肌损伤指标乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)、CK同工酶(CK-MB)的含量,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测心肌组织Wnt3a、β-catenin及β-catenin靶基因细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、C-myc蛋白表达水平.[结果]与正常组比较,模型组大鼠心功能显著降低,出现明显心室扩张和重构,心肌组织排列紊乱、纤维化明显、细胞凋亡增加,Caspase-3、Bax mRNA表达水平上调,Bcl-2 mRNA表达水平下调,血清心肌损伤因子含量显著升高,心肌组织Wnt3a、β-catenin、Cyclin D1、C-myc蛋白表达水平显著升高(P<0.05).与模型组比较,中药组和Wnt-C59组大鼠心功能指标得到显著改善,心肌组织排列较为整齐,胶原纤维沉积减少,细胞凋亡减少,Caspase-3、Bax mRNA表达水平降低,Bcl-2 mRNA表达水平增加,血清心肌损伤因子含量降低,心肌组织Wnt3a、β-catenin、Cyclin D1、C-myc蛋白表达水平降低(P<0.05).[结论]益气活血方可能通过调节Wnt/β-catenin信号通路改善AMI大鼠心肌损伤.     

柴胡桂枝汤加减通过调节Wnt/β-catenin信号通路对骨质疏松大鼠的改善作用及机制研究

目的 探讨柴胡桂枝汤加减(CGD)调节Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对骨质疏松大鼠的改善作用。方法 将SD大鼠分组为Model组、CK组、高剂量CGD组(CGD-H组,20 g/kg)、低剂量CGD组(CGD-L组,5 g/kg)、戊酸雌二醇组(EV组,9 mg/kg)、DKK-1组(Wnt/β-catenin通路抑制剂,100 mg/kg)和CGD-H+DKK-1组(20 g/kg+100 mg/kg),每组12只。除CK组外,其他组大鼠均通过灌胃70 mg/kg维甲酸的方式构建骨质疏松症(OP)大鼠模型,CK组大鼠灌胃等量的生理盐水。造模4周开始给予相应的药物干预4周。ELISA法检测大鼠血清中Ⅰ型胶-原C端肽(CTX-Ⅰ)、骨钙素(BGP)水平;观察股骨微观结构相关指标骨体积分数、骨小梁厚度、骨密度、骨小梁数量的变化;HE染色检测大鼠股骨病理变化;碱性磷酸酶(ALP)钙-钴染色检测大鼠股骨中成骨细胞活性;抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测大鼠股骨组织中破骨细胞活性;Western blot检测各组大鼠股骨组织中Wnt3a、β-catenin蛋白。结果 与C...     

骨痹通方干预凋亡软骨细胞Wnt/β-catenin通路的实验研究

目的探讨骨痹通方通过Wnt/β-catenin通路抑制软骨细胞凋亡的作用机制。方法SD大鼠关节软骨细胞传至第三代后分为空白组,模型组,骨痹通方高、中、低剂量组(简称高、中、低剂量组)。除空白组外其余各组用白细胞介素-1β(IL-1β)诱导软骨细胞凋亡,空白组及模型组培养基中加空白大鼠血清,骨痹通方各组分别加相应剂量的含药血清,并于培养0 h、24 h、72 h时测定各组软骨细胞MTT值,干预后第4天收集软骨细胞,运用PCR及Western Blot法测定Wnt5a、β-catenin mRNA的表达量及蛋白表达水平。结果各组0 h、24 h及72 h所测的MTT值无显著差异(P0.05)。模型组Wnt5a与β-catenin的mRNA表达量与空白组比较明显升高(P0.05),骨痹通方各剂量组能够下调Wnt5a与β-catenin表达,且骨痹通方低剂量组与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。模型组与空白组比较Wnt5a、β-catenin的蛋白表达量上调,差异不显著(P0.05),骨痹通方高、中、低剂量组Wnt5a、β-catenin的蛋白表达量与模型组比较均有下调趋势,差异不显著(P0.05),骨痹通方各组间Wnt5a、β-catenin的蛋白表达量比较差异无统计学意义(P0.05)。结论骨痹通方可能通过抑制Wnt5a与β-catenin的表达,从而达到延缓软骨细胞凋亡的作用。     

杜仲叶醇提取物对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢生化指标、骨密度、IL-6及TNF-α的影响

目的:观察杜仲叶醇提取物对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢生化指标、骨密度、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的影响。方法:90只清洁级SD雌性大鼠随机分为对照组、假手术组、模型组、雌激素组和杜仲叶组各18只。模型组、雌激素组和杜仲叶组大鼠做去卵巢处理,假手术组同样手术但不切除卵巢。术后4周,对照组、假手术组和模型组大鼠给予蒸馏水灌胃;雌激素组大鼠给予戊酸雌二醇灌胃(0.6 mg·kg~(-1));杜仲叶组大鼠给予杜仲叶醇提取物灌胃(6 g·kg~(-1)),1次·d~(-1),连续8周。检测所有大鼠血清钙、磷,尿钙、磷,骨碱性磷酸酶(bone alkaline phosphatase,BALP),骨钙素,雌二醇,IL-6和TNF-α水平,并测定骨密度。结果:与对照组和假手术组比较,模型组大鼠尿Ca/Cr、P/Cr、BALP、骨钙素、IL-6、TNF-α均显著升高,血清雌二醇含量和骨密度显著降低,差异均有统计学意义(P0.05);与模型组比较,雌激素组和杜仲叶组大鼠尿Ca/Cr、P/Cr、BALP、骨钙素、IL-6、TNF-α均显著降低,血清雌二醇含量和骨密度显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:杜仲叶醇提取物对去卵巢骨质疏松大鼠具有较好的疗效,其作用机制可能与降低血清IL-6、TNF-α含量,调节骨代谢平衡,提高骨密度有关。     

雌激素对去卵巢大鼠骨组织Wnt16、β-catenin、OPG、RANKL表达的影响

目的研究雌激素对去卵巢大鼠骨组织中Wnt16、β-catenin、OPG、RANKL表达的影响,探讨雌激素对骨组织的保护作用。方法选取3月龄Wistar雌性大鼠40只,随机分为假手术组、去势组、实验组1和实验组2。两组实验组分别给予17β-雌二醇皮下注射4周和16周,其余两组给予等量0.9%氯化钠溶液。16周后测定骨组织中Wnt16、OPG、RANKL、β-catenin表达量,HE染色分析大鼠胫骨平台处骨小梁厚度（Tb.Th）、骨小梁数目（Tb.N）和骨小梁间距（Tb.SP）变化,ELISA法测定血清雌二醇（E2）水平。结果假手术组、实验组2与去势组比较,OPG、β-catenin、Wnt16mRNA、血清E2水平、Tb.Th和Tb.N明显升高,RANKL水平和Tb.SP明显下降,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。实验组1与去势组相比,β-catenin、血清E2水平、Tb.Th和Tb.N明显升高,RANKL水平和Tb.SP明显下降,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论雌激素可能通过上调Wnt16、β-catenin、OPG表达,下调RANKL表达,来预防骨质疏松。     

TGF-β/Smad与Wnt/β-catenin在博莱霉素致大鼠肺纤维化中的表达及相互作用

目的观察TGF-β/Smad和Wnt/β-catenin通路相关基因在肺纤维化大鼠模型肺组织中的表达,探讨两条通路对肺纤维化的影响及其相互作用。方法取Wistar大鼠36只,随机分为正常对照组和肺纤维化模型组,每组18只。采用气管内注入博来霉素(BLM)建立Wistar大鼠肺纤维化模型,每组分别于第14、21和28天处死大鼠各6只;取肺组织称重,测定肺组织中HYP、IL-1β水平,观察肺组织Col-I、IL-1β、TGF-β1、Smad3、α-SMA、Wnt1、β-catenin、LEF-1 mRNA的表达,并进行HE染色和Masson胶原染色。结果 (1)与正常对照组比,造模后14~28 d大鼠肺指数均明显升高(P0.01);肺组织HE染色呈现明显的肺纤维化病理改变,Masson染色结果可见造模后14~28 d肺间质蓝色胶原呈渐进性增加。(2)造模后第14天,肺组织IL-1β含量、IL-1βmRNA相对含量均显著升高(P0.01),随后逐渐降低,至造模后第28天IL-1β表达量接近正常水平(P0.05)。(3)造模后14~28d大鼠肺组织HYP含量、Col-I mRNA相对表达量均明显升高(P0.01)。(4)与正常组相比,模型组中TGFβ1、Smad3、α-SMA、Wnt1、β-Catenin、LEF-1 mRNA表达显著增加(P0.01),且TGFβ1、Smad3 mRNA分别与Wnt1、LEF-1、β-catenin mRNA的表达呈显著正相关。结论 TGF-β/Smad和Wnt/β-catenin通路相关基因在博来霉素致大鼠肺纤维化中表达上调,两条通路对肺纤维化可能有促进作用且它们间可能存在一定联系。     

骨形态发生蛋白-7调节肾病鼠Wnt1/β-catenin信号通路

目的观察骨形态发生蛋白-7(BMP-7)对嘌呤霉素氨基核苷酸肾病(PAN)鼠肾小球Wnt/β-catenin表达的影响,探讨BMP-7的肾保护作用及可能机制。方法 20只嘌呤霉素氨基核苷酸诱导的大鼠随机分为PAN组和PAN+BMP-7组(BMP-7组),每组各10只。BMP-7组每周2次腹腔注射人重组BMP-7 30微克/(千克.次)。另设正常对照组(NC,n=10)。第12周检测尿液红细胞(UE)、24h尿蛋白(24h UP),血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Cys C)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)。处死大鼠,反转录-聚合酶链反应检测Wnt1和β-catenin mRNA表达水平。Western blotting检测Wnt1和β-catenin蛋白表达水平。结果与NC组相比,PAN组UE、24h UP、Cys C、MIC、肾小球Wnt1和β-catenin mRNA和蛋白质的表达水平均显著升高,差异具有显著的统计学意义(P均<0.01)。BMP-6组UE、24h UP、Cys C、MIF、肾小球Wnt1和β-catenin mRNA和蛋白质的表达较PAN组降低,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论 BMP-7减轻尿液红细胞及尿蛋白的排泄,降低血清CysC、MIC水平,下调肾小球Wnt1/β-catenin信号通路的表达,减轻肾损伤。     

葛根素对成骨细胞体外增殖及Wnt/β-catenin信号通路表达的影响

目的:葛根素对成骨细胞体外增殖及Wnt/β-catenin信号通路表达的影响。方法:培养成骨细胞MC3T3-E1并分为对照组及10-6 mol/L PUE组、10~(-7) mol/L PUE组、10~(-8) mol/L PUE组,处理24小时后检测成骨细胞标志基因、凋亡基因、Wnt/β-catenin通路基因的mRNA表达量。结果:10-6 mol/L PUE组、10~(-7) mol/L PUE组、10~(-8) mol/L PUE组细胞ALP、Runx2、OC。Wnt1、Wnt2、Wnt3a、Wnt10b、β-catenin的mRNA表达量均显著高于对照组,caspase-3、caspase-8、caspase-9、caspase-12的mRNA表达量均显著低于对照组(P<0.05);且葛根素剂量越大,细胞中ALP、Runx2、OC、Wnt1、Wnt2、Wnt3a、Wnt10b、β-catenin的mRNA表达量越高,caspase-3、caspase-8、caspase-9、caspase-12的mRNA表达量越低(P<0.05)。结论:葛根素能够有效促进成骨细胞的增殖及Wnt/β-catenin通路的活化。     

老鹳草素对骨质疏松大鼠BMSCWnt3a表达的影响

［摘要］目的　研究老鹳草素对骨质疏松（OP）大鼠骨髓基质干细胞（BMSCs）信号分子Wnt3a表达的影响．方法　摘除大鼠双侧卵巢,复制骨质疏松症模型,分离、培养BMSC．将源于假手术大鼠第3代BMSCs常规培养作为正常对照组,将骨质疏松模型大鼠的BMSCs分别设以下组别:模型对照组、1 μmol/L的辛伐他汀阳性对照组、0.01、0.1、1、10、100 μmol/L的老鹳草素组．分别采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测mRNA及蛋白的表达．结果　与正常对照组比较,OP模型对照组Wnt3a蛋白及其mRNA的表达明显降低,且有统计学意义（P＜0.01）;与模型组比较,1 μmol /L辛伐他汀、0.1、1、10、100 μmol/L的老鹳草素明显升高Wnt3a蛋白及其mRNA的表达,且均有统计学意义,而0.01 μmol/L老鹳草素对Wnt3a表达无明显影响．结论　老鹳草素可能通过增加BMSC中Wnt/β-catenin信号通路的信号蛋白Wnt3a的表达,进一步激活Wnt/β-catenin信号通路,这有利于BMSC的成骨分化及骨形成．