红细胞生成素治疗兔脑血管痉挛及对核因子κB表达的影响

目的探讨红细胞生成素（EPO）对兔蛛网膜下腔出血（SAH）后迟发性脑血管痉挛（CVS）的疗效及其对核因子κB（NF-κB）表达的影响。方法取雄性新西兰白兔36只,随机分为对照组、SAH组和EPO治疗组,每组12只。采用枕大池二次注血SAH模型诱发迟发性CVS。EPO注射剂量为1000IU/kg,1次/8h;对照组和SAH组均给予EPO的溶剂（含人血清蛋白2.5mg/ml、氯化钠352mmol/L及蒸馏水）,以1ml/kg经腹腔注射,连续腹腔注射15次。造模后第5天处死动物,取基底动脉,采用HE染色测定基底动脉管腔横截面积,并用凝胶电泳迁移分析法检测NF-κB活性。结果①对照组、SAH组和EPO治疗组兔的基底动脉管腔横截面积分别为（0.412±0.034）、（0.210±0.018）和（0.342±0.030）mm2。SAH组与对照组比较,P〈0.01;EPO治疗组与SAH组比较,P〈0.01,与对照组比较,P〈0.05。②对照组、SAH组和EPO治疗组的NF-κB活性灰度值分别为：1.20±0.11、9.30±1.12和6.60±0.13,SAH组与对照组比较、EPO治疗组与对照组和SAH组比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论EPO能够缓解SAH后的迟发性CVS,并抑制SAH后血管中NF-κB的表达。     

CT血管造影评价兔基底动脉痉挛模型

目的探讨采用多层螺旋CT血管造影（multi-slices CT angiography，MSCTA）技术显示兔基底动脉，为兔脑血管痉挛（cerebralvasospasm，CVS）动物模型建立新的评价方法。方法取日本大耳白兔25只，分为对照组（5只）和蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage，SAH）组（20只）。SAH组采用枕大池二次注血法制作兔脑基底动脉CVS模型，均经兔耳后中央静脉穿刺注射非离子型对比剂（碘海醇，含碘量300mg／m1），剂量按2．6ml／kg（体重）。采用高压注射器给药，注射速度0．4ml／s，延时15S开始扫描。SAH组于注血后1、4、7、11d，行2～5次基底动脉MSCTA。原始图像三维后处理技术采用容积重建（volume rendering，VR）。结果SAH组注血后1、4、7、11d基底动脉直径分别为（1．28±0．36）、（0．82±0．24）、（0．83±0．20）及（0．95±0．28）mm。VR法测得实验兔注血前基底动脉横径平均为（1．30±0．40）mm。CVS在注血后第1天出现，第4天达到高峰，第11天可见基底动脉痉挛有一定程度的缓解。结论MSCTA技术能够较理想地显示兔基底动脉，是评价活体动物CVS模型的可靠方法。     

辛伐他汀对兔脑血管痉挛中炎性反应的影响

目的探讨辛伐他汀对兔蛛网膜下腔出血（SAH）后脑血管痉挛（CVS）中炎性反应的影响。方法36只新西兰大白兔随机分为3组,每组12只。①对照组：给予常规饲养并枕大池二次注入等渗盐水;②sAH组：通过枕大池二次注血法建立SAH模型;③SAH＋辛伐他汀组：对SAH兔经胃灌注辛伐他汀5mg·kg^-1·d^-1,连续7d。在各组兔造模前后,行两次脑血管造影。第2次脑血管造影后1d,取基底动脉组织制作病理切片,分别于光镜和透射电镜下观察其显微及超微结构。行免疫荧光染色后,采用共聚焦显微镜观察基底动脉内皮细胞核转录因子-κB（NF—kB）表达量的变化,同时采用实时荧光定量PCR技术检测其细胞间黏附分子1（ICAM-1）mRNA的表达。结果①脑血管造影显示二次注血后,SAH组兔基底动脉出现明显的痉挛,管径变细,SAH组的管径为（0．68±0．09）mm,对照组为（0．87±0．06）mm,P〈0．05;而给予辛伐他汀后,痉挛减轻,SAH＋辛伐他汀组的管径为（0．77±0．08）mm,与SAH组管径比较,P〈0．05。SAH组兔基底动脉壁略有增厚,电镜显示平滑肌细胞内合成旺盛;而给予辛伐他汀预处理后,这些变化明显减轻。@SAH组兔基底动脉管壁内皮细胞内NF—κB表达高于对照组（156±9和84±8,P〈0．05）,而给予辛伐他汀后,NF—κB表达量降低（118±9）,与SAH组比较,P〈0．05。SAH组兔基底动脉组织ICAM-1mRNA的表达量高于对照组（0．843±0．029和0．673±0．011,P〈0．05）;给予辛伐他汀后,基底动脉ICAM-1mRNA的表达量低于SAH组（0．763±0．037）,与SAH组比较,P〈0．05。结论辛伐他汀可能通过抑制炎性反应从而预防SAH后CVS的发生,其抑制炎性反应,可能是通过NF—κB信号途径实现的。     

蛛网膜下腔出血后M4型瞬时受体电位通道对大鼠脑动脉肌源性紧张度的作用研究

目的探讨蛛网膜下腔出血(SAH)后M4型瞬时受体电位通道(TRPM4)对大鼠脑动脉肌源性紧张度的作用。方法 60只清洁级健康SD大鼠,性别不限,按随机数字表法分为SAH组(30只)和假手术组(30只)。采用立体定向仪向大鼠鞍上池注射自体鼠尾动脉血建立蛛网膜下腔出血模型。向SAH组注射0.2 ml自体动脉血,向假手术组注射0.2 ml等渗盐水。SAH模型建立5 d后,分离大鼠脑动脉,采用加压肌动扫描技术观察脑动脉管径并计算肌源性紧张度。对每个实验组脑动脉均采用时间贯序法观察其位于人工脑脊液(a CSF)、含0.03 mmol/L TRPM4特异性阻滞剂9-菲酚(9-phenanthrol,9-Phe)的a CSF和含0.1 mmol/L地尔硫卓的无钙a CSF中的动脉管径,并依此计算肌源性紧张度。结果 SAH后,脑动脉位于a CSF中时,SAH组脑动脉管径较假手术组显著缩小[(45.9±6.6)μm比(74.9±5.1)μm,t=5.08,P 0.05],脑动脉肌源性紧张度明显高于假手术组[(58.7±2.4)%比(41.2±3.4)%; t=2.77,P 0.05]。a CSF中加入9-Phe后,SAH组及假手术组脑动脉管径较加入前舒张明显[分别为(98.4±6.1)、(95.1±5.5)μm],差异均有统计学意义(均P 0.05); SAH组肌源性紧张度的下降程度明显高于假手术组[(42.4±4.4)%比(15.3±3.2)%;t=2.83,P 0.05]。结论 SAH后,TRPM4介导大鼠脑动脉肌源性紧张度增加。     

米力农对瓣膜置换术病人围术期肌钙蛋白Ⅰ的影响

目的研究瓣膜置换病人围术期的心肌损害程度及米力农对其的影响。方法20例心功能Ⅱ级~Ⅲ级瓣膜置换术病人,随机分为米力农组和对照组,主动脉开放即刻米力农组10min内用负荷剂量米力农50μg/kg、继以0.5μg/(kg·min)持续静脉输注,对照组则只给予生理盐水。分别于麻醉诱导后开胸手术前(T0)、主动脉开放后30min(T1)、6h(T2)、24h(T3)取中心静脉血,免疫荧光法检测血清肌钙蛋白I(cTnI)。结果两组T1、T2、T3cTnI均明显升高,米力农组cTnI在T1、T2、T3显著低于对照组(P<0.05)。结论体外循环下瓣膜置换术应用米力农能够有效减轻心肌损伤程度。     

c-jun氨基末端激酶在兔蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛中的作用

目的观察兔蛛网膜下腔出血(SAH)后基底动脉中原癌基因c-jun氨基末端激酶(JNK)的表达规律,以探讨其与脑血管痉挛(CVS)的关系。方法将72只新西兰大白兔随机分为2组:①对照组:12只;②SAH组:60只。SAH组又随机分为注血后1、3、5、7、10 d,共5组,每组12只。采用枕大池二次注血法建立稳定的兔CVS模型,应用苏木素-伊红染色和Western印迹分别观察兔基底动脉的形态学改变和JNK的表达情况,并通过测量管径的变化来判断CVS的严重程度。结果 SAH组的基底动脉出现相应的病理学改变,管腔狭窄呈急性期收缩和迟发性痉挛双相改变;SAH组的JNK表达升高,在第7天时达到高峰(P<0.01),第10天后表达稍下降,但仍高于对照组(P<0.01)。结论在兔CVS模型的基底动脉中JNK的表达明显上调,呈现一定的时序性变化规律,与迟发性CVS的严重程度一致,在CVS的发生和发展过程中起了重要的作用。     

罗格列酮对大鼠蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的保护作用

目的研究过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPAR-γ）激动剂-罗格列酮对大鼠蛛网膜下腔出血（SAH）模型脑血管痉挛的作用及对基底动脉Toll样受体4（TLR4）介导的炎性信号通路的影响。方法取SD雄性大鼠78只,应用抽签法随机分为对照组、SAH组及罗格列酮组,每组26只。采用枕大池二次注血法建立SAH模型。在2次注血前后30min,罗格列酮组大鼠经腹腔注射罗格列酮（3mg/kg,0．5mg/ml,二甲亚砜为溶剂）,给予SAH组大鼠等体积的二甲亚砜;对照组经枕大池注入等量等渗盐水,腹腔注射等体积二甲亚砜。于造模后第5天取基底动脉标本,HE染色观察管径和横截面积,免疫组化染色观察髓过氧化物酶（MPO）和细胞间黏附因子γ（ICAM-γ）的表达,Western blot检测TLR4蛋白的表达。结果对照组、SAH组、罗格列酮组大鼠的基底动脉的横截面积分别为（555084±4630）、（32139±3239）、（459694±4465）μ㎡,直径分别为（2604±14）、（1954±12）、（2374±12）μm。ICAM-1阳性细胞数分别为（0．5±0．2）、（4．7±0．7）、（2．5±0．6）个,MPO阳性细胞数分别为（0．9±0．3）、（17．9±2．6）、（6．5±1．3）个。TLR4蛋白的表达量分别为0．15±0．19、1．094±0．14、0．45±O．16。SAH组、罗格列酮组的上述指标与对照组比较差异有统计学意义,SAH组与罗格列酮组比较差异亦有统计学意义,P值均〈0．01。结论罗格列酮可能通过抑制TLR4信号通路途径,减轻SAH后基底动脉的炎性反应,缓解脑血管痉挛。     

蛛网膜下腔出血后兔脑血管肌钙蛋白mRNA表达的研究

目的观察蛛网膜下腔出血(SAH)后兔脑血管平滑肌细胞内肌钙蛋白(calponin)mRNA水平表达的变化规律。方法将25只雄性新西兰白兔随机分为对照组及SAH组,SAH组又分为第1、4、7、14天组,共5组,每组5只兔。采用二次注血法建立SAH后脑血管痉挛的动物模型,以血管造影检测兔基底动脉的血管直径变化,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测alponinmRNA表达变化。结果SAH组第1、4、7、14天组calponinmRNA表达分别为0.34±0.08,0.32±0.08,0.28±0.04和0.15±0.04;对照组calponinmRNA为0.37±0.02,与SAH各组比较,差异有显著意义(P<0.05)。结论calponinmRNA在SAH后逐渐降低,可能与脑血管痉挛的发生、发展有关。     

米力农对扩张型心肌病患者肿瘤坏死因子α和左室射血分数及肺动脉收缩压的影响

目的研究米力农对扩张型心肌病(DCM)患者血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、心脏左室射血分数(LVEF)及肺动脉收缩压(PASP)的影响,探讨米力农治疗DCM的可行性及病理生理学机制。方法 80例DCM患者随机分为3组。对照组(30例)使用常规药物治疗;低剂量米力农组(28例)在常规药物治疗的基础上静脉使用米力农(2周内总药量≤100mg);高剂量米力农组(22例)在常规药物治疗的基础上静脉使用米力农(2周内总药量>100mg)。于研究开始及2周后用酶联免疫吸附法(ELISA)测定患者血清TNF-α水平、通过超声心动图计算患者的LVEF及PASP,并进行统计学分析。结果治疗后高剂量米力农组TNF-α水平高于低剂量米力农组和对照组,低剂量米力农组TNF-α水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);高、低剂量米力农组LVEF高于对照组,PASP低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论米力农会增加患者TNF-α水平,同时提高患者LVEF、降低PASP。低剂量使用米力农可通过血流动力学的改善在一定程度上代偿了TNF-α水平的增高,对预后影响不大。而大剂量使用米力农后TNF-α水平会显著增加,且不能完全通过血流动力学代偿,对预后不利。     

TCD检测继发于蛛网膜下出血的椎基动脉痉挛

动脉瘤引致蛛网膜下出血(SAH)之后的椎基动脉区域血管痉挛很少被观察到,也少见有关经颅多普勒超声(TCD)检测椎基动脉痉挛的报道。作者作了脑血管造影和常规TCD对照研究,旨在明确TCD检测椎动脉(VA)和基底动脉(BA)痉挛的敏感性和特异性,探讨假阴性和假阳性的原因,并提出TCD诊断VA和BA痉挛的指标。 对象为血管痉挛危险期的SAH病人42例(男12例,女30例,28～70岁)。都在24小时内完成数字减影血管造影和TCD。共检测了64支VA和42支BA。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对兔脑血管痉挛的作用

目的观察吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）对兔蛛网膜下腔出血（SAH）后脑血管痉挛的影响及NF—κBp65、ICAM-1在基底动脉的表达。方法新西兰大白兔48只（雌雄不限）。随机分为对照组（8只）、SAH组（20只）及PDTC组（20只）。SAH组和PDTC组又分为SAH后1、3、5、7、14d亚组,每组4只。采用枕大池二次注血法制作SAH模型。PDTC组在第2次注血后即脑池内注射PDTC,0．25ml／次,2次／d,连续2d。观察基底动脉管径和厚度、病理形态学改变;免疫组化检测NF—κBp65、细胞间黏附分子1（ICAM-1）的表达。结果①SAH组在第3天开始出现基底动脉管径变细、管壁增厚,第7天最明显,与第1天比较,差异有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01）;PDTC组仅第7天与第1天比较有差异（P〈0．05）。在第3、5、7天时,SAH组与对照组及PDTC组比较上述指标,差异均有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01）;PDTC组与对照组比较,差异均无统计学意义。（2）PDTC组与SAH组同时间点比较,病理形态损害、炎性细胞浸润程度减轻。③SAH组在第3天开始出现NF—κBp6、ICAM—1表达,第7天达高峰。第3、5、7d（ICAM-1包括第14d）,SAH组表达量均明显高于对照组和PDTC组（P〈0．01）。PDTC组与对照组比较亦增高,P〈0．05。结论PDTC对SAH后迟发性脑血管痉挛具有一定的预防作用。通过抑制NF—κBp65、ICAM-1的表达可能是其机制之一。     

Preliminary report: Effect of cobaltous ion on cerebral vasospasm in a rabbit subarachnoid hemorrhage model

Experimental studies have suggested what the primary role is of free radical products in the development of vasospasm. It has been suggested that the degradation products of hemolysis trigger free radical reactions leading to lipid peroxidation is subarachnoid hemorrhage (SAH). Therefore, Fe²⁺, a degradation product of hemoglobin, seems to be the most important substance in the pathogenesis of vasospasm. Cobaltous ion was shown to be a powerful inhibitor of lipid peroxidation in biological membrane. Eleven rabbits were anesthetized and received 5 ml of autologous arterial blood into the cisterna magna. Group 1 (n=6) received 0.1 mg/kg cobalt solution intratecally via the cisterna magna simultaneously with blood. Group 2 (n =5) underwent sham operation as a control group. Forty-eight hours later the rabbits were deeply anesthetized and the brainstem was quickly removed and put under the operating microscope to measure the basilar artery diameter. Afterwards, the upper part of the brainstem was used for lipid peroxidation measurement and the lower part for the histopathological examination. Significant vasospasm was observed in four and moderate vasospasm in one rabbit of group 2; mild vasospasm was seen in five rabbits and moderate vasospasm was seen in one rabbit of group 1. There was no vasospasm in the control group. A statistically significant increase in the levels of lipid peroxide was found in the brainstem of group 2. These data demonstrate that cobaltous ion represents a promising therapeutic tool in vasospasm after SAH.     

脑红蛋白对蛛网膜下腔出血大鼠早期脑损伤的保护作用

目的探讨脑红蛋白（NGB）对蛛网膜下腔出血（SAH）大鼠早期脑损伤的保护作用。方法将60只清洁级sD大鼠随机分为4组：正常组、假手术组、SAH组、治疗组（SAH＋腹腔注射氯化血红素）组。除SAH组30只外,其余每组10只大鼠。采用枕大池单次注血法建立大鼠SAH模型。采用免疫组化法和图像分析技术观测SAH后,不同时间大脑皮质颞叶的NGB免疫组化反应及平均吸光度A值;采用干湿法测量脑含水量,原位细胞凋亡检测法（TUNEL）检测颞叶神经元凋亡情况。结果①正常组和SAH后24h组平均吸光度4值分别是0．133±0．021和0．236±0．028：②sAH后颞叶皮质NGB阳性反应细胞迅速增加,24h达高峰,随后逐渐减少;③SAH组脑含水量为（77．5±0．4）％,治疗组脑含水量为（76．5±0．6）％,治疗组脑含水量较SAH组减少,差异有统计学意义（P〈0．05）;④治疗组和SAH组脑颞叶神经元凋亡程度为（9．8±2．4）％、（18．5±2．3）％。治疗组脑皮质神经元凋亡程度较SAH组降低（P〈0．05）。结论SAH后大鼠大脑皮质NGB阳性反应细胞呈动态变化。早期给予NGB能减少大鼠SAH模型的皮质神经元凋亡,降低脑水肿程度,具有明显的脑保护作用。     

Attenuation of canine cerebral vasospasm after subarachnoid hemorrhage by protein kinase C inhibitors despite augmented phosphorylation of myosin light chain

The purpose of the present study is to assess the roles of protein kinase C (PKC) isoforms, especially PKC delta and alpha, and 20-kD myosin light chain (MLC(20)) phosphorylation in the mechanism of cerebral vasospasm following subarachnoid hemorrhage (SAH). We had shown that those PKC isoforms are involved in the development of cerebral vasospasm. Using PKC isoform-specific inhibitors in a 'two- hemorrhage' canine model, we examined changes in the development of cerebral vasospasm, translocation of PKC isoforms and MLC(20) phosphorylation level in canine basilar arteries. A PKC inhibitor (5 microM rottlerin for PKC delta or chelerythrine for PKC alpha) was injected into the cisterna magna on day 4 before the second hemorrhage. The treatment was continued daily until day 7. Rottlerin inhibited the initial phase of vasospasm and PKC delta translocation, but did not significantly inhibit PKC alpha translocation. Chelerythrine inhibited cerebral vasospasm, and the translocation of both PKC delta and alpha throughout the entire course of the study. Although cerebral vasospasm after SAH was inhibited by each PKC inhibitor, the MLC(20) phosphorylation level remained elevated as in the untreated hemorrhage-control study. We conclude that cerebral vasospasm following SAH depends on PKC delta and alpha, while the enhancement of MLC(20) phosphorylation contributes little to this form of vasospasm.     

Interactive role of protein kinase C-delta with rho-kinase in the development of cerebral vasospasm in a canine two-hemorrhage model

BACKGROUND: We previously reported that protein kinase C (PKC)-delta was initially translocated from the cytosol to the membrane fraction (on day 4), followed by PKC-alpha, with the progression of cerebral vasospasm after subarachnoid hemorrhage (SAH) on day 7. Rho/Rho-kinase pathways have also been proposed to be involved in the vasospasm. Thus we investigated the interactive role of Rho-kinase and PKC in the development of cerebral vasospasm after SAH. METHODS: The cerebral vasospasm was produced using a 'two-hemorrhage' canine model. The animals were treated with Y-27632, a Rho-kinase inhibitor, and rottlerin, a PKC-delta inhibitor, both injected into the cisterna magna. RESULTS: Y-27632 inhibited the vasospasm, 20-kDa myosin light chain (MLC20) phosphorylation, and PKC-delta translocation after the second injection of autologous blood on day 4. In contrast, Y-27632 did not affect the vasospasm on day 7. Rottlerin also inhibited the vasospasm on day 4, but had no effect on MLC20 phosphorylation and RhoA translocation. The vasospasm was accompanied with the phosphorylation of caldesmon (CaD), an actin-linked regulatory protein, which was strongly attenuated by Y-27632 and rottlerin. The application of PKC-delta to skinned strips of isolated canine basilar arteries caused a contraction and an increase in CaD phosphorylation. CONCLUSION: The development of cerebral vasospasm after SAH (on day 4) is caused by at least two mechanisms: one involves MLC20 phosphorylation mediated by the inhibition of MLC20 phosphatase by Rho-kinase, and the other CaD phosphorylation mediated by the activation of PKC-delta by Rho-kinase, which results in the alleviation of the inhibition by CaD of myosin Mg2+-ATPase activity.     

尼莫地平联合依达拉奉对蛛网膜下腔出血大鼠海马神经细胞的保护作用

目的探讨联合应用尼莫地平和依达拉奉对蛛网膜下腔出血大鼠海马神经细胞的保护作用。方法取健康SD雄性大鼠24只,按随机数字表法随机将大鼠分为模型组、假手术组、尼莫地平组及联合用药组（尼莫地平＋依达拉奉）,每组6只大鼠。线刺法制备SAH模型成功后,尼莫地平组立刻腹腔注射尼莫地平1mg/kg,联合用药组注射尼莫地平1mg/kg、依达拉奉3mg/kg;模型组与假手术组腹腔注射等量等渗盐水（6.5ml/kg）。术后24h按同样方法、剂量再给药1次。采用免疫组化和Western印记法检测大鼠SAH后48h,海马区Caspase-3、Bcl-2阳性细胞的表达情况。结果①免疫组化检测Caspase-3阳性细胞表达：假手术组、模型组、尼莫地平组及联合用药组分别为（2.2±1.7）%、（17.8±3.5）%、（12.7±3.5）%及（7.3±2.2）%;Bcl-2阳性细胞表达分别为（4.8±1.3）%、（15.7±4.5）%、（24.2±5.0）%及（39.8±5.6）%。各组比较差异均有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）。②Western印记检测结果（与β-actin密度比值）：Caspase-3阳性细胞表达假手术组、模型组、尼莫地平组及联合用药组分别为0.09±0.07、0.65±0.10、0.46±0.12、0.28±0.12;Bcl-2阳性细胞表达分别为0.56±0.15、0.89±0.12、1.22±0.14、1.57±0.18,各组比较差异均有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）。结论尼莫地平或尼莫地平联合依达拉奉均可减少SAH后海马区Caspase-3阳性细胞表达,增加Bcl-2阳性细胞表达。尼莫地平联合依达拉奉的效果比单独应用尼莫地平的效果更佳。