HIF-1α在七氟烷预处理减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤中的作用

目的 研究低氧诱导因子1α(HIF-1α)在七氟烷预处理减轻离体大鼠心脏缺血再灌注(I-R)损伤中的作用.方法 84只雄性SD大鼠随机均分为七组:假手术组(Sham组)、I-R组、七氟烷预处理组(S组)、七氟烷预处理十二甲氧乙二酰甘氨酸(DMOG)组(S+D组)、七氟烷预处理+3-(5 '-羟基甲基-2’-呋喃基)-1-苯基吲哚(YC-1)组(S+Y组)、DMOG组(D组)和YC-1组(Y组).应用Langendorff离体心脏灌流装置建立大鼠心肌I-R损伤模型,连续测定心功能指标,并取心肌测HIF-1α及半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达水平及HIF-1α目的基因的表达水平.结果 与I-R组相比,S组、S+D组和S+Y组I-R损伤心功能的各项指标明显改善(P＜0.05),HIF-1α表达水平显著升高(P＜0.05),Caspase-3蛋白表达水平显著下降(P＜0.05).结论 HIF-1α促进七氟烷预处理对离体大鼠心脏I-R损伤的保护作用.     

PI3K-Akt信号转导通路在舒芬太尼后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸-苏氨酸激酶(PI3K-Akt)信号转导通路在舒芬太尼后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用。方法健康雄性SD大鼠50只,体质量230²80 g,2280 g,2³月龄,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=10):假手术组(S组)、心肌缺血再灌注损伤组(I/R组)、舒芬太尼后处理组(PO组)、舒芬太尼后处理组+PI3K特异性抑制剂LY294002组(PO+L组)、PI3K特异性抑制剂LY294002组(L组)。I/R组,PO组,PO+L组,L组采用结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min的方法来建造心肌缺血再灌注的模型。I/R组在再灌注前5 min时尾静脉注射0.9%氯化钠注射液1 ml,PO组在再灌注前5 min时尾静脉注射1ml舒芬太尼稀释液1μg/kg,PO+L组尾静脉注射1 ml舒芬太尼稀释液1μg/kg+LY2940020抑制剂0.3mg/kg,L组尾静脉注射1 ml LY2940020抑制剂0.3 mg/kg。于再灌注120 min时处死大鼠,取缺血部位心肌组织,用10%甲醛固定,常规石蜡包埋,切片。光镜下观察病理学结果,采用免疫组织化学方法测定心肌细胞Akt及磷酸化Akt(p-Akt)的表达,计算p-Akt平均吸光度值与Akt平均吸光度值的比值(p-Akt/Akt),采用TUNEL染色法检测心肌细胞凋亡,计算心肌细胞凋亡指数(AI)。结果与S组比较,其余4组AI、p-Akt/Akt的表达均升高(P<0.05);PO组比I/R组、PO+L组、L组AI降低,p-Akt/Akt的表达升高(P<0.05);PO+L组比L组AI降低,p-Akt/Akt的表达升高(P<0.05);I/R组与PO+L组及L组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PI3K-Akt信号转导通路参与了舒芬太尼后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用。     

JAK-STAT信号通路在离体大鼠心肌缺血再灌注损伤激活时程的研究

目的观察JAK-STAT信号通路在离体大鼠心肌缺血再灌注损伤过程中激活的时程及意义。方法采用Langendorff离体灌流模型,将42只雄性Wistar大鼠随机分为7组:对照组:用改良的KH液持续灌流180 min;I/R组:按再灌注时间分为R0、R5、R15、R30、R60、R120 6组,用改良的KH液灌流平衡30 min后,全心停灌30 min,分别再灌注0、5、15、30、601、20 min。连续监测左室发展压(LVDP)、左室压力最大升降速度(+dp/dtmax)以评价心功能,采用改良的Gonori变色酸(GCA)亮绿特殊染色法观察心肌缺血程度;免疫印迹法检测再灌注不同时程磷酸化的STAT1、STAT3蛋白表达的变化。结果与对照组相比,再灌注不同时程LVDP及+dp/dtmax明显降低((P<0.01),GCA特殊染色显示缺血变性的心肌细胞数量明显增多(P<0.01),再灌注各时程STAT1、STAT3均处于激活状态,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。但二者表达存在时间差异,p-STAT1在缺血30 min增高不明显,再灌注过程中处于显著激活状态(P<0.01);p-STAT3在缺血30 min即明显升高(P<0.01),而再灌注期未见进一步升高(P>0.05),p-STAT1/p-STAT3与LVDP及GCA特殊染色阳性率呈显著的相关性。结论JAK-STAT信号通路参与了心肌缺血再灌注损伤的发生,磷酸化的STAT1与STAT3的比例可能决定了再灌注损伤的严重程度。     

七氟烷后处理对大鼠心肌缺血再灌注时细胞凋亡的影响

目的探讨七氟烷后处理对大鼠在体心肌缺血再灌注时细胞凋亡的影响。方法将40只雄性SD大鼠随机分为5组(n=8):假手术组(S组);缺血再灌注组(IR组);1%、2%、3%七氟烷后处理组(SP1、SP2、SP3组),建立心肌缺血再灌注模型,再灌注结束时测定血清LDH浓度、心肌p53蛋白表达水平和细胞凋亡。结果与S组比较,各组血清LDH浓度、心肌p53蛋白表达和细胞凋亡升高(P<0.05);与IR组比较,各SP组血清LDH浓度、心肌p53蛋白表达和细胞凋亡降低(P<0.05);与SP2组比较,SP1组和SP3组血清LDH浓度、心肌p53蛋白表达和细胞凋亡升高(P<0.05)。结论七氟烷后处理可通过下调p53蛋白表达抑制细胞凋亡,从而减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,2%七氟烷后处理的效果更显著。     

七氟烷后处理减轻兔肺缺血再灌注损伤中AQP1的表达及意义研究

目的 探讨水通道蛋白1 (aquaporin1,AQP1) mRNA在七氟烷后处理中对兔肺组织的作用.方法 选择新西兰大白兔12只,雌雄不拘,随机分为两组,每组6只:Ⅰ组为肺缺血再灌注损伤模型组;S组为七氟烷后处理组.所有实验动物于阻断左肺门前(T1)、阻断左肺门60 min(T2)、实验结束时(T3)3个时间点分别检测肺组织AQP1 mRNA表达及病理改变,实验结束时检测肺湿/干重比.结果 两组肺组织AQP1 mRNA表达随时间推移逐渐下降;T3时点,S组AQP1mRNA表达高于Ⅰ组,肺湿/干重比低于Ⅰ组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 七氟烷后处理对肺缺血再灌注损伤有保护作用,可能与AQP1 mRNA表达上调有关.     

七氟烷后处理对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤心功能和线粒体的影响

目的探讨七氟烷后处理对大鼠离体心脏缺血/再灌注的保护作用。方法48只SD大鼠,随机分为4组(n=12):假手术组(Sham),缺血/再灌注组(I/R)缺血后处理组(Post),七氟烷后处理组(Sevo)。采用Langendroff离体心脏灌注模型。除Sham组其余各组均平衡灌注30min,全心缺血30min,再灌注90min,Post组在再灌注即刻给予4个循环复灌20s/缺血20s,Sevo组在再灌注开始给予含1.5MAC(2.57V/V)七氟烷的K-H液灌注5min,再用K-H液冲洗10min,纪录平衡灌注末,再灌注30min、60min、90min时左室舒张末压(LVEDP)、左室发展压(LVDP)、左室内压上升最大速率(+dp/dt)、左室内压下降最大速率(-dp/dt)、心率(HR)、冠脉血流量(CF),再灌注90min时,计算心肌梗死面积百分比,电子显微镜观察线粒体的损伤程度,Westernblot半定量测定胞质和线粒体、细胞色素C的水平。结果平衡灌注末各组间心功能指标(基础值)差异未见统计学意义(P>0.05)。七氟烷后处理组和缺血后处理组可改善再灌注损伤心功能的各项指标(P<0.05)。复灌90min,Sevo组和Post组心肌梗死面积显著低于I/R组(P<0.05)。与I/R组比较,Sevo组和Post组胞质细胞色素C的含量明显减少(P<0.05),同时伴随线粒体细胞色素C的含量明显增多(P<0.05)。电子显微镜观察线粒体形态,Sevo组和Post组的损伤程度比I/R组明显减轻。结论七氟烷后处理对大鼠离体心脏再灌注损伤有明显的保护作用,其保护强度与缺血后处理相当,机制可能与减轻线粒体的损伤,抑制细胞色素C的释放有关系。     

七氟烷后处理联合七氟烷预处理对急性心肌缺血-再灌注大鼠血浆SOD及MDA的影响

目的探讨七氟烷后处理联合预处理是否能减轻再灌注损伤,其作用是否较单一作用更强及其机制,为临床应用提供实验依据。方法健康雄性Wistar大鼠50只,随机分为5组,假手术组（S组）：大鼠冠脉只穿线不结扎;缺血再灌注组（I/R组）：大鼠造模,缺血30 min,再灌注120 min;七氟烷预处理组（sevopre组）：缺血前30 min,吸入2.5%的七氟烷15 min,洗脱15 min,结扎左冠状动脉前降支,再灌注120 min;七氟烷后处理组（sevopo组）：大鼠再灌注前1 min吸入2.5%的七氟烷5 min,再灌注120 min;七氟烷后处理＋七氟烷预处理组（pre＋po组）：缺血前30 min,吸入2.5%的七氟烷15 min,洗脱15 min,结扎左冠状动脉前降支,再灌注前1 min吸入2.5%的七氟烷5 min,再灌注120 min。实验结束时取颈动脉血及心肌组织分别测定丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性及心肌梗死面积。结果再灌注120 min后,pre＋po组与sevopre组、sevopo组比较心肌梗死面积显著减少（P〈0.05）,显著升高了SOD活性,降低了丙二醛含量（P〈0.05）。结论七氟烷后处理联合预处理能减少心肌梗死面积,提高再灌注后SOD活性,降低MDA含量,从而减轻心肌缺血再灌注损伤。     

p38MAPK在纳洛酮减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的 研究大鼠心肌缺血再灌注损伤后p38 MAPK的变化及纳洛酮对其的影响.方法SD大鼠24只随机均分为假手术组(sham)、缺血再灌注组(IR)、纳洛酮组(Nal).采用结扎左冠状动脉左前降支30 min,再灌注2h制作心肌缺血再灌注模型.观察心电图J点电位的变化;Western Bloting检测p38 MAPK、...     

七氟烷对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

肝脏缺血再灌注损伤(Hepatic ischemia reperfusion injury,HIRI)是许多病理过程以及肝脏外科手术中常见的病理生理过程,如出血性休克、肝叶切除术、肝脏移植等过程都可能发生肝脏缺血再灌注损伤.肝脏缺血再灌注损伤直接影响术后患者肝功能和肝脏再生能力,是术后肝功能异常、原发性移植肝无功能、多器官功能衰竭的重要原因,与术后肝功能衰竭的发生和患者死亡率的上升直接相关[1].因此,如何预防和减轻肝脏缺血再灌注损伤具有重要的临床意义.     

银杏总黄酮通过调节自噬减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的研究

目的 探讨银杏总黄酮是否可以通过调节自噬减轻心肌缺血再灌注(I/R)损伤以及可能的机制。方法 采用大鼠心肌I/R模型(缺血30 min,再灌注4 h),雄性SD大鼠30只随机分为三组:假手术组(SO组,n=10)、缺血再灌注组(I/R组,n=10)和银杏总黄酮治疗组(YLTF+I/R组,n=10,100 mg·kg-1,造模前灌胃7 d)。检测心肌损伤标记物肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)和肌钙蛋白I(cTnI);检测氧化应激水平,即丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平;检测自噬蛋白beclin-1和LC3水平。结果 与SO组比较,I/R可诱导心肌损伤标记物(CK、LDH和cTnI)表达升高,氧化应激水平的增加(MDA表达增加,SOD表达降低)和自噬的过度激活(LC3-Ⅱ/Ⅰ比值增加,beclin-1表达增加);与I/R比较,银杏总黄酮可显著的降低心肌损伤标记物(CK、LDH和cTnI)的表达、氧化应激水平(MDA表达降低,SOD表达增加)和自噬的过度激活(LC3-Ⅱ/Ⅰ比值降低,beclin-1表达减低)。结论 银杏总黄酮可以通过抑制过度自噬减轻心肌I/R损伤,这可能与其抑制氧化应激作用有关。     

Mechanical Stretch-Induced Protection against Myocardial Ischemia-Reperfusion Injury Involves AMP-Activated Protein Kinase

AMP-activated protein kinase (AMPK) protects various tissues and cells from ischemic insults and is activated by many stimuli including mechanical stretch. Therefore, this study investigated if the activation of AMPK is involved in stretch-induced cardioprotection (SIC). Intraventricular balloon and aorto-caval shunt (ACS) were used to stretch rat hearts ex vivo and in vivo, respectively. Stretch preconditioning reduced myocardial infarct induced by ischemia-reperfusion (I/R) and improved post-ischemic functional recovery. Phosphorylation of AMPK and its downstream substrate, acetyl-CoA carboxylase (ACC) were increased by mechanical stretch and ACC phosphorylation was completely blocked by the AMPK inhibitor, Compound C. AMPK activator (AICAR) mimicked SIC. Gadolinium, a blocker of stretch-activated ion channels (SACs), inhibited the stretch-induced phosphorylation of AMPK and ACC, whereas diltiazem, a specific L-type calcium channel blocker, did not affect AMPK activation. Furthermore, SIC was abrogated by Compound C and gadolinium. The in vivo stretch induced by ACS increased AMPK activation and reduced myocardial infarct. These findings indicate that stretch preconditioning can induce the cardioprotection against I/R injury, and activation of AMPK plays an important role in SIC, which might be mediated by SACs.     

降钙素基因相关肽预处置对阿霉素所致离体大鼠心脏损伤的保护作用

在离体灌流大鼠心脏研究了降素基因相关肽（CGRP）预处理对阿霉素所致心肌损伤的保护作用。阿霉素（100和200μmol/L）导致冠脉流量减少，心脏功能降低和丙二醛（MDA）含量的升高。CGRP（5nmol/L）灌流预处置5分钟能增加冠脉流量，改善心脏功能及抑制MDA的升高。这些结果提示：CGRP预处置对阿霉素所致的心脏损伤具有保护作用，其保护作用可能与抑制脂质过氧化有关。     

重组人Elafin对肝脏缺血-再灌注损伤的保护作用

目的探讨重组人Elafin在大鼠肝脏缺血-再灌注损伤中的保护作用。方法将50只大鼠随机均分为5组,即正常对照组、肝脏缺血-再灌注损伤模型组以及Elafin低、中、高剂量组。对Elafin低、中、高剂量组给予不同浓度的重组人Elafin进行治疗,然后取血液及肝脏标本,检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬酸氨基转移酶(AST)及乳酸脱氢酶(LDH)水平,测定肝组织中髓过氧化物酶(MPO)和一氧化氮(NO)含量,并观察肝脏的病理组织学改变。结果缺血-再灌注后大鼠肝组织损害较重,血清ALT和AST以及LDH水平明显升高(P<0.001),肝组织中MPO和NO含量明显升高(P<0.001);若手术前给予大鼠一定浓度的重组人Elafin,可使ALT,AST,LDH,MPO及NO水平明显降低(P<0.05)。结论重组人Elafin对肝脏缺血-再灌注损伤有一定的保护作用。     

奥扎格雷对大鼠肢体缺血再灌注所致肺损伤的保护作用

目的：探讨奥扎格雷钠(Ozagrel sodium)对大鼠肢体缺血再灌注后肺损伤的影响。方法：将60只雄性SD大鼠随机分成正常对照组、缺血再灌注组和奥扎格雷组,建立大鼠肢体缺血再灌注损伤模型。利用光镜和电镜观察肺组织形态学改变和超微结构改变,利用竞争放射免疫分析法测定血浆血栓素A2（TXA2)代谢产物血栓烷素B2(TXB2)和前列环素(PGI2)代谢产物6-酮-前列腺素F1a(6-Keto-PGF1a),比色法测定肺组织中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶(SOD)、黄嘌呤氧化酶（XOD）,双抗体夹心ABC-ELISA法测定肺组织中白细胞介素(IL)-8、肿瘤坏死因子(TNF )-α,并进行比较。结果：与缺血再灌注组相比,奥扎格雷组肺血管扩张、炎性细胞聚集、组织水肿等均减轻,线粒体水肿、空泡变性,内膜下基底膜水肿、内皮细胞肿胀等情况明显减轻;血浆TXB2和6-keto-PGFla含量显著降低;肺组织MDA、XOD活力明显降低,SOD活力升高,IL-8、TNF-α水平均明显降低。结论：奥扎格雷钠可减轻大鼠肢体缺血再灌注后肺部的损伤。     

Astragaloside IV Alleviates Hypoxia/Reoxygenation-Induced Neonatal Rat Cardiomyocyte Injury via the Protein Kinase A Pathway

Background: Astragaloside IV (As-IV) exerts beneficial effects on hypoxia/reoxygenation (H/R)-induced cardiomyocyte injury, possibly through normalization of sarcoplasmic reticulum Ca(2+) ATPase (SERCA2a) function. The exact mechanisms remain unknown. This study was designed to investigate the role of protein kinase A (PKA) in the protective effect of As-IV on SERCA2a function. Methods: Cultured cardiomyocytes from neonatal rats were exposed to 6 h of hypoxia followed by 3 h of reoxygenation (H/R) with or without As-IV treatment. Myocyte injury was determined by the creatine kinase (CK)-MB fraction in supernatant. Myocardial SERCA2a activity and PKA kinase activity were assessed. PKA subunit mRNA expression and Ser(16) phosphorylated phospholamban (Ser(16)-PLN) protein expression were detected by real-time PCR and Western blot, respectively. Results: The administration of As-IV significantly decreased CK-MB release and restored SERCA2a activity in H/R cardiomyocytes. The mRNAs of PKA subunits, PKA-RIα, PKA-RIIα, PKA-RIIβ, PKA-Cα and PKA-Cβ, were downregulated in H/R cardiomyocytes. However, PKA-Cα mRNA expression was significantly increased after As-IV treatment. Meanwhile, there was a tendency to recovery of the H/R-induced PKA kinase activity decrease after As-IV treatment. The expression of Ser(16)-PLN protein, which is specifically phosphorylated by PKA, was upregulated in As-IV-treated H/R cardiomyocytes. Conclusions: These results suggest that the cardioprotection of As-IV may be through the upregulation of PKA and Ser(16)-PLN, thereby restoring SERCA2a function in H/R injury.     

穿心莲内酯对大鼠脑缺血 再灌注损伤的影响

目的：观察穿心莲内酯(AP)对大鼠脑缺血 再灌注损伤的影响。方法：32只大鼠随机平分为AP高剂量组(2.50 mg·kg 1×2)、AP低剂量组(1.25 mg·kg 1×2)、模型组和对照组。结扎大鼠双侧颈总动脉，30 min后松开，再灌注60 min，复制脑缺血 再灌注损伤模型。AP高、低剂量组及模型组大鼠于颈总动脉结扎前10 min和剪断结扎线前(再灌注前)分别经颈静脉注入高、低剂量AP和等容积0.9%氯化钠注射液，再灌注维持60 min，对照组基本与模型组处理相同，但不结扎双侧颈总动脉。处死大鼠，测定再灌注后海马组织中过氧化物歧化酶(SOD)、Na＋ K＋ ATP酶、Ca2＋ ATP酶、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH Px)活性及丙二醛(MDA)含量。结果：穿心莲内酯能明显提高脑缺血 再灌注后海马结构中SOD、GSH Px、Ca2＋ ATP酶、Na＋ K＋ ATP酶活性及降低脂质过氧化产物MAD含量。结论：穿心莲内酯对脑缺血 再灌注损伤的海马结构具有保护作用。     

Mito-KATP在七氟醚延迟预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注氧化损伤中的作用

目的:探讨线粒体ATP敏感性钾通道(mito-KATP)在七氟醚延迟预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注(IR)氧化损伤中的作用。方法:健康雄性SD大鼠60只随机分为5组(n=12),假手术(Sham)组、IR组、七氟醚预处理(SPC)组、七氟醚预处理+5-羟基癸酸(SPC+5-HD)组和5-羟基癸酸(5-HD)组。灌注结束时检测血清肌钙蛋白(IcTnI)水平,氯化三苯四氮唑(TTC)染色确定心肌梗死面积。检测心肌丙二醛(MDA)、Ca2+含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽硫转移酶(GST)活性以及谷胱甘肽硫转移酶Mu(GSTM)表达。结果:IR组较Sham组心肌梗死面积和cTnI释放增加,心肌MDA含量和Ca2+浓度增加,SOD、GST活性和心肌GSTM表达降低(P<0.01);SPC组较IR组心肌梗死面积和cTnI释放减少,心肌MDA含量和Ca2+水平也减少,SOD和GST活性以及心肌GSTM增加(P<0.01);SPC+5-HD组较SPC组心肌梗死面积和cTnI释放增加,心肌MDA含量和Ca2+浓度增加,SOD、GST活性和心肌GSTM表达降低(P<0.01)。结论:七氟醚延迟预处理能减轻大鼠心肌缺血再灌注所致氧化损伤,mito-KATP在其中起调节作用。     

乌司他丁对幼兔未成熟心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:研究乌司他丁对幼兔离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用.方法:建立幼兔离体心脏Langendorff模型,灌注停跳液使心脏停跳30 min,用加入乌司他丁的K-H液复灌30 min.于缺血前0 min,复灌后10、20、30 min记录心率(HR)、左室内压(LVP)、左室内压最大上升速率(LVdp/dt)、冠脉流量(CF);于缺血前1 min,复灌后10、20、30min测定冠状静脉流出液中肌酸激酶(CK)、肌钙蛋白(cTnI)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的浓度.结果:(1)乌司他丁组心脏复灌后HR、CF、LVdp/dtmax均升高(P<0.05或P<0.01);冠状静脉流出液CK、cTnI、TNF-α、IL-6浓度均低于对照组(P<0.01).(2)对照组心肌细胞横纹模糊不清,可见多灶性细胞崩解,心肌纤维断裂,间质充血、出血并有中性粒细胞和淋巴细胞浸润;乌司他丁组心肌细胞胞浆嗜伊红均质浓染,可见局灶性细胞崩解,间质充血只有少量淋巴细胞浸润.结论:乌司他丁能明显减轻幼兔未成熟心肌缺血再灌注损伤.     

基于缺血性脑卒中再灌注损伤机制的抗氧化纳米药物研究进展

在缺血性脑卒中-再灌注过程中,活性氧异常增多引起的脑组织神经元氧化应激是脑缺血-再灌注损伤的最主要病理机制。快速恢复脑组织血流灌注,同时抑制神经元氧化损伤是治疗缺血性脑卒中的有效途径。目前抗氧化类药物存在生物利用率低、作用方式单一及副作用大等缺点,极大限制了其疗效与临床应用。近年来,纳米药物因其尺寸、形貌可控及表面可修饰性等优势,在生物应用中展现出良好的应用前景,有望突破缺血性脑卒中神经保护类药物开发的瓶颈。重点阐明脑缺血-再灌注损伤的机制,综述抗氧化纳米药物的设计合成及其逆转神经元氧化损伤的作用机制与应用,为防治缺血性脑卒中提供新的思路。