轻型β-地中海贫血的β-珠蛋白基因突变检测

目的对深圳地区临床诊断为轻型β-地中海贫血个体的β-珠蛋白基因进行突变分析。方法用PCR法对轻型β-地中海贫血个体的β-珠蛋白基因进行扩增,扩增产物经纯化后测序,确定其基因突变。结果在25例深圳地区轻型β-地中海贫血个体的β-珠蛋白基因所分析的片段中仅发现三种基因突变,它们分别是外显子1上的CD 41/42(-TCTT)突变、启动子中-28(A→G)突变及内含子1上IV S-I-11(A→C)突变。结论在深圳地区轻型β-地中海贫血个体中仅发现两种流行的β-珠蛋白基因突变,同时发现一种新的β-珠蛋白基因突变。     

新的珠蛋白基因突变引起少见地中海贫血四例报告及文献复习

目的:分析4例少见地中海贫血（地贫）患者的DNA序列、临床表型,提高对地贫的认识。方法:对2014年5月至2019年12月4例少见地贫患者的临床及DNA序列特征进行回顾性分析并复习相关文献。结果:地贫基因常规检测显示,例1~3均未检测到常见的3种α株蛋白1/2（HBA1/A2）基因缺失及其3种点突变和16种β株蛋白（H...     

轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者β-珠蛋白基因( AC)n(AT)x Ty多态性分析

目的 探讨轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者β-珠蛋白基因(AC)n(AT)xTy多态性与其基因突变的相关性.方法 选取2009年2月至2010年7月深圳市宝安区人民医院89例已知基因突变类型的轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者和110名中国汉族人群健康对照者.抽取所有个体外周静脉血,抽提基因组DNA,通过聚合酶链反应扩增β-珠蛋白基因BP1蛋白结合区序列,经DNA测序确定(AC)n(AT)xTy序列的多态性,分析(AC)n(AT)xTy多态性与其基因突变的关系.轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者和健康对照者间(AC)n(AT)xTy多态性单倍型频率的比较,以及同一单倍型患者的不同突变类型发生率间的比较采用x2检验.结果 在轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者的β-珠蛋白基因BP1蛋白结合区存在9种(AC)n(AT)xTy多态性序列,分别是(AC)2(AT)7T7、(AC)2 (AT)8T5、(AC)3 (AT)7T5、(AC)2 (AT)9T5、(AC)2 (AT)8T9、(AC)3 (AT)8T5、(AC)2(AT)10T3、(AC)2(AT)7T5和(AC)2(AT) 11T3,其中(AC)2 (AT)7T7和(AC)2(AT)8T5是常见单倍型.轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者的(AC)2(AT)7T7、(AC)3 (AT)7T5和(AC)2(AT)8T9单倍型频率分别为38.8％( 69/178)、11.8％( 21/178)、9.0％( 16/178),显著高于健康对照组的24.1％(53/220)、5.4％ (12/220)、3.2％ (7/220),差异有统计学意义(x2=9.966、4.371、6.093,P＜0.05);(AC)2 (AT)9T5单倍型频率为10.1％(18/178),显著低于健康对照组的33.2％ (73/220),差异有统计学意义(x2=29.691,P＜0.01);而(AC)2 (AT)8T5单倍型频率在患者组和健康对照组分别为25.3％ (45/178)和29.1％ (64/220),差异无统计学意义(x2 =0.718,P＞0.05).在(AC)2 (AT)7T7单倍型患者中,codon41/42(-TTCT)和IVS-II-654(C→T)的突变率分别为59％( 10/17)和29％(5/17),差异无统计学意义(x2=2.982,P＞0.05);在(AC)2( AT)8T5单倍型患者中,codon41/42(-TTCT)和IVS-Ⅱ-654(C→T)的突变率分别为29％(4/14)和57％ (8/14),差异无统计学意义(x2=2.333,P＞0.05).结论 β-珠蛋白基因BP1蛋白结合区的(AC)2 (AT) 7T7、(AC)3 (AT)7T5和(AC)2(AT)8T9单倍型与轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血存在连锁不平衡.在轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者中,携带( AC)2( AT)7T7单倍型和(AC)2(AT) 8T5单倍型患者的主要致病突变分别为codon41/42 (-TTCT)和IVS-II-654(C→T).     

一种新的β地中海贫血基因突变类型的分子诊断和产前基因诊断

目的 对产前地中海贫血筛查确诊为β地中海贫血的一对夫妇进行β珠蛋白基因突变分析,并对胎儿进行产前基因诊断.方法 根据血常规和血红蛋白分析进行地中海贫血的筛查,对筛查诊断为β地中海贫血患者采用聚合酶链反应/寡核苷酸探针反向斑点杂交法检测中国人常见的17个β珠蛋白基因突变类型.对于未发现常见突变者采用β珠蛋白基因DNA测序和变性高效液相色谱分析.结果 丈夫为CD41/42(-TCTT)突变杂合子,妻子携带一种迄今在中国人中未见报道的β地中海贫血基因突变IVS-Ⅰ-110(G→A),产前诊断胎儿为IVS-Ⅰ-110(G→A)和CD41/42(-TCTT)突变双重杂合子,并进行引产.结论 β地中海贫血IVS-Ⅰ-110(G→A)突变的发现,丰富了中国人β地中海贫血基因突变种类,对遗传咨询和地中海贫血产前基因诊断具有重要意义.

Abstract：

Objective To conduct molecular and prenatal diagnosis for a couple with β thalassemia.Methods Blood routine examination and hemoglobin analysis were used for screening of thalassemia. Seventeen common Chinese mutations of β thalassemia were detected for the carriers with β thalassemia using PCR/RDB. The unknown mutation of β thalassemia was identified by DNA sequencing and DHPLC analysis. Results The husband was heterozygote of CD41/42(-TCTT). The wife carried a mutation IVS- Ⅰ -110(G→A)of β thalassemia having not been reported in Chinese so far. The fetus was a double mutated heterozygote of IVS- Ⅰ -110(G→A)and CD41/42(-TCTT). The pregnancy was terminated. Conclusion Mutation IVS- Ⅰ -110(G→A)of β thalassemia in Chinese is of importance to the genetic counseling and prenatal diagnosis of thalassemia.     

中国人群中少见β地中海贫血家系的分子遗传学特征分析

目的 探讨在中国人群中发现的1个少见β地中海贫血家系的分子遗传学特征.方法 采用标准的血液学分析技术检测先证者及家系成员红细胞参数,包括RBC、Hb、MCV、MCH、MCHC和RDW,进行表型诊断.利用SPIFE快速自动电泳分析系统检测其血红蛋白组分Hb A、Hb A2和Hb F.采用RDB技术检测β地中海贫血基因突变,并进一步进行克隆测序及家系分析,明确突变位点.结果 先证者及其父亲红细胞参数呈典型的小细胞低色素改变,MCV和MCH均降低,MCV分别为79.1 fl及63.1 fl,MCH为19.9 pg及20.9 pg;而先证者母亲的MCV及MCH均正常.先证者及其父亲Hb A2增加,分别为5.66%及5.60%,提示其为轻型β地中海贫血基因携带者.进一步的基因分析表明,先证者在一个β珠蛋白基因同时发生CD41/42(-TTCT)和转录区+40～+43缺失突变,诊断为β41/42、CAP/βA基因型的轻型地中海贫血患儿,其父母基因型分别为β41/42、CAP/βA 和βA/βA.结论 先证者在一个β珠蛋白基因同时发生CD41/42(-TTCT)和转录区+40～+43缺失突变,β41/42、CAP/βA基因型的发现丰富了中国人群β珠蛋白基因突变研究数据,有助于β地中海贫血的起源和演变的研究.

Abstract：

Objective To investigate the molecular characterization of a Chinese pedigree with rare β thalassemia genotype.Methods Phenotypic analysis was performed using standard hematological tests to measure red blood cell parameters, including RBC,Hb,MCV,MCH,MCHC and RDW.SPIFE automatic Hb agarose gel electrophoresis instrument was used to measure hemoglobin fraction Hb A,Hb A2 and Hb F.The alleles of β thalassemia mutation were determined by RDB assay, and then cloning and sequencing were performed to define the mutation sites.Results The proband and his father had typical microcytic hypochromic anemia with low MCV and MCH(79.8, 63.1 fl and 19.9, 20.9 pg, respectively) and high level of Hb A2 (5.66% and 5.60%, respectively).The proband′s mother had normal MCV and MCH. β thalassemia mutation analysis with RDB assay showed that the proband had thalassemia minor resulting from double mutations on one globin gene.One showed codons 41/42 (-TTCT) mutation and the other was CAP mutation from positions +40 to +43 in the promoter region.These two mutations were inherited from his father.The genotype of the proband and his father was β41/42、CAP/βA ,and the genotype of his mother was βA/βA.Conclusions It′s rare that double mutations occur on single β globin gene, with one mutation on CD41/42(-TTCT) and the other mutation from positions +40 to +43 relative to the mRNA cap site in the promoter region.The findings enrich knowledge of the mutation spectrum of β thalassemia.     

重型β地中海贫血γ珠蛋白基因启动子区甲基化状态

本研究旨在通过对广西省重型β地中海贫血患者和正常人外周血中γ珠蛋白基因启动子区CpG岛的甲基化位点的确认和对各个CpG位点甲基化率在重型β地中海贫血患者与正常人之间的差异性分析,初步筛选出可能影响γ珠蛋白表达的主要甲基化位点。采用重亚硫酸盐测序法修饰,递降PCR扩增,最后对PCR产物进行DNA克隆测序,得到目的片段中每个CG位点的甲基化情况,定量检测甲基化的确切位置与程度。结果表明:重型β地中海贫血患者与正常人γ珠蛋白基因启动子区存在4个CpG甲基化位点,在序列中分别位于28、122、231和234bp,均呈高度甲基化,其中122和231 bp位点甲基化率明显低于正常对照组,差异均有统计学意义。28和234 bp位点甲基化率与正常对照组均无显著性差异。结论:证实γ基因启动子区存在甲基化位点、明确位点位置且经定量分析证实无论地中海贫血患者还是正常人各个甲基化位点均呈高甲基化状态;初步筛选出影响γ珠蛋白表达的主要位点可能在122和231 bp,为后续通过调节γ珠蛋白的表达缓解重型β地中海贫血的临床症状、靶向基因治疗研究提供了实验依据。     

β地中海贫血杂合子δ珠蛋白mRNA表达

为研究β地中海贫血（β地贫）杂合子δ珠蛋白ｍＲＮＡ表达及其意义，应用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）介导的珠蛋白ｍＲＮＡ共扩增定量测定技术分析了１０例典型β地贫杂合子以及１２例正常人外周血的红系细胞中δ珠蛋白ｍＲＮＡ水平，结果表明１０例β地贫杂合子的δ珠蛋白ｍＲＮＡ相对含量（δ／α）为０．２１±０．０２，与正常人（０．０３±０．０１）相比，有显著的差异（Ｐ＜０．００１），绝对定量测定结果显示所有受检的β地贫杂合子的δ珠蛋白ｍＲＮＡ含量（７８．４±１７．３ａｍｏｌ／μｇＲＮＡ）比正常人（１．２±０．２ａｍｏｌ／μｇＲＮＡ）明显升高。提示在β地贫杂合子普遍存在的ＨｂＡ２升高现象乃主要由于δ珠蛋白基因转录产物增高所致。研究结果为深入探讨珠蛋白基因表达的控制提供了资料。     

一个HPFH复合β地中海贫血家系的^Aγ珠蛋白基因分析

一个ＨＰＦＨ复合β地中海贫血家系的Ａγ珠蛋白基因分析孙琼陈美珏任兆瑞曾溢滔我们已报道过一个β地中海贫血（β地贫）复合遗传性持续性胎儿血红蛋白症（ＨＰＦＨ）的家系［１］。研究结果表明，该家系的β地贫基因为ＩＶＳ－Ⅱ－６５４Ｃ→Ｔ剪接缺陷型突变，来自母系...     

温州籍轻型β珠蛋白合成障碍性贫血患者的基因多态性

本研究旨在对14例临床诊断的温州籍轻型β珠蛋白合成障碍性贫血患者的血液学及分子生物学进行分析，测定其PCR产物序列，找出引起该病的致病突变位点并进行单核苷酸多态性分析。对临床诊断的患者抽取静脉血，EDTA-K2抗凝，及时提取模板，设计相关引物，进行PCR扩增后测序，最后经过序列比对和分析，找出引起β珠蛋白合成障碍性贫血的致病突变位点。结果表明：14例标本的DNA扩增产物测序分析中发现4例在IVS-2-654位点发生了C→T的杂合突变；1例为CD41／42位-TTCT缺失；2个位点存在单核苷酸多态性，分别是外显子1第59位的T／C多态性、IVS-2 nt665，T／C多态性。结论：温州籍轻型β珠蛋白合成障碍性贫血患者单核苷酸多态性具有一定的特殊性；发现了两种基因突变类型，分别为IVS-2-654 C→T的杂合突变和CD41／42位-TTCT缺失。     

β-珠蛋白基因新突变导致的β-珠蛋白生成障碍性贫血

本研究对1例轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者的β-珠蛋白基因进行序列分析,寻找基因的致病突变。提取患者外周血基因组DNA,扩增全长β-珠蛋白基因,然后对扩增产物进行DNA测序。结果显示,患者的β-珠蛋白基因1号内含子存在杂合IVS-I-129(A→G)突变。结论:IVS-I-129(A→G)突变为剪接突变使未成熟的β-珠蛋白基因mRNA产生剪接异常,导致其后的β-珠蛋白基因翻译错误。该突变为首次报道。     

轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者β-珠蛋白基因单核苷酸多态性分析

目的对临床诊断为轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者进行β-珠蛋白基因单核苷酸多态性分析.方法用PCR法对β-珠蛋白基因进行扩增,扩增产物经纯化后测序,确定其单核苷酸多态性.结果β-珠蛋白基因分析片段中共发现3个位点存在单核苷酸多态性,分别是外显子1第59位的T/C多态性、内含子2第-16位的G/C多态性及内含子2第-74位的T/G多态性.结论同国外报道的正常人群相比,轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者的β-珠蛋白基因单核苷酸多态性位点显著减少,各位点的碱基频率也有不同.     

α地中海贫血与β地中海贫血患者铁负荷水平分析

目的对比分析α地中海贫血与β地中海贫血患者的铁负荷水平。方法对广东医科大学附属中山医院2016年2月至2018年2月收治的150例地中海贫血患者体内的铁指标(包括HbF、HbA2、血液锌原卟啉、血清铁蛋白、血清铁、铁结合力及铁饱和度)进行检测,并进行点阵列杂交技术基因分析。结果150例地中海贫血患者中37例(24.67%)合并铁缺乏,33例(22.00%)铁负荷过重;在合并铁缺乏患者中α地中海贫血明显多于β地中海贫血患者,但二者所占比例差异无统计学意义(P>0.05);铁负荷过重患者中β地中海贫血患者所占比例较α地中海贫血与所占比例高,但差异无统计学意义(P>0.05);在所有地中海贫血基因型中,纯合子β地中海贫血患者最容易发生铁负荷过重,静止型α地中海贫血患者最容易合并铁缺乏。结论容易发生铁负荷过重的地中海贫血基因型为纯合子β基因型及非缺失型HbH病,而容易发生铁缺乏的地中海贫血基因型为静止型与标准型α基因型、杂合子β基因型,临床中应根据地中海贫血患者的不同基因型进行相应处理,以改善患者的临床症状。     

脂质体转染反义寡核苷酸对重型β-地中海贫血红系细胞α-珠蛋白的调控作用

目的 研究脂质体转染反义寡核苷酸(ASON)对重型β-地中海贫血(β-地贫)患者红系细胞α-珠蛋白基因的调控作用,为基因治疗β-地贫提供新的思路.方法 将前期实验筛选获得的高效抑制α-珠蛋白基因表达的ASON以最佳浓度作用于体外培养的重型β-地贫患者红系细胞,并没空白对照组,经实时荧光定量RT-PCR分析ASON组和空白对照组中红系细胞α、β、γ-珠蛋白基因表达情况,观察ASON对相应珠蛋白基因表达的影响,通过高效液相色谱法(HPLC)检测ASON作用后血红蛋白水平,并经透射电子显微镜(电镜)观察ASON作用前后红系细胞内α-珠蛋白肽链沉积情况,了解ASON对β-地贫患者红系细胞内过剩α-珠蛋白肽链的影响.结果 实时荧光定量RT-PCR结果显示ASON组α-珠蛋白基因mRNA表达(9.04±0.29)较空白对照组(24.23±0.29)减低(P<0.01),α/(β+γ)珠蛋白比例失衡得到改善[ASON组、空白对照组分别为(0.79±0.02)、(2.26±0.06),P<0.01];HPLC检测表明ASON作用后α-珠蛋白基因表达下调,HbA2和HbF表达增加;透射电镜结果证实ASON作用后革型β-地贫患者红系细胞内过剩的α-珠蛋白肽链沉积减少,特别是在早期幼稚红细胞中,在空白对照组中沉积物无明显变化.结论 高效ASON可抑制体外培养的重型β-地贫患者红系细胞α-珠蛋白基因表达,有助于改善珠蛋白基因α/(β+γ)比例失衡,并减少过剩α-珠蛋白肽链在红系细胞内的沉积,为基因治疗β-地贫提供新的思路.     

中国罕见的移码突变型β珠蛋白生成障碍性贫血家系调查

目的 鉴定一位育龄妇女所携带的在中国人中罕见的β珠蛋白生成障碍性贫血基因突变并对其家系进行研究.方法 将先证者及其他3位家系成员（父亲、母亲与丈夫）一起作为调查分析对象.血液学表型分析采用常规红细胞指数及高效液相色谱技术（HPLC）;α与β珠蛋白生成障碍性贫血常规基因检测分别采用Gap-PCR和反向点杂交法（RDB）.另外对常规基因检测不能确诊的β珠蛋白生成障碍性贫血基因突变进行β珠蛋白基因序列测定.结果 先证者及其父亲具有典型的β珠蛋白生成障碍性贫血血液学表型,RDB法未检测出已知的β珠蛋白生成障碍性贫血突变类型,测序显示这两位家系成员的β珠蛋白基因共缺失CD89-CD92全部的密码子和CD93第1与第2位的核苷酸（-AGTGAGCTG-CACTG,-14bp）,并发生了移码突变,使CD89位上提前出现终止密码子TGA;先证者丈夫基因型为CD41-42（-TCTT）/N.结论 CD89-93（-14bp）移码突变在中国人群中属于比较罕见的β珠蛋白生成障碍性贫血类型,其在β珠蛋白生成障碍性贫血高风险家庭中的检出,对β珠蛋白生成障碍性贫血的产前诊断工作有参考价值.     

羟基脲体外对类β珠蛋白基因表达的影响

β地中海贫血 (β地贫 )是一种常见的遗传性疾病。类 β珠蛋白和类α珠蛋白基因按其在个体发育不同阶段出现的先后顺序分别在 11和 16号染色体上排列成簇。胎儿血红蛋白 (ＨｂＦ) (α2 γ2 )的水平在出生后 1年降至正常 ,由成人血红蛋白取代。但成人在镰形细胞贫血、β地贫、遗传性持续性胎儿血红蛋白血症 (ＨＰＦＨ)患者中都存在着γ珠蛋白的高表达状态。此外 ,也观察到细胞毒性药物在治疗白血患者时 ,外周血ＨｂＦ含量也增加[1] 。同时 ,在糖尿病患者母亲的婴儿中观察到由ＨｂＦ向成人血红蛋白转换延迟[2 ] 。基于这些观察 ,人们试图以药…     

两例β-地中海贫血病例中罕见HBB基因突变的鉴定

目的明确2例疑似β-地中海贫血病例的珠蛋白基因突变,探讨基因型与血液学表型的关系。方法采用血细胞常规检测和血红蛋白电泳进行血液学表型分析,用PCR-反向点杂交法检测常见的α-地中海贫血和β-地中海贫血基因突变,应用PCR-DNA测序技术对β珠蛋白基因(HBB)进行测序,检测基因突变类型。结果 2例无亲缘关系的汉族病例血液学检测结果呈现轻型β-地中海贫血样表型,但未检测到常见的α-和β-地中海贫血基因突变;DNA测序发现2个病例均为HBB基因Codon5(-CT)碱基缺失性突变(血红蛋白变异数据库HGVS命名为:HBB:c.17_18delCT,为β0突变)的杂合子。结论罕见β0突变Codon5(-CT)的杂合子携带者即可产生轻度贫血,联合运用血液学、血红蛋白电泳和基因检测是检出罕见地中海贫血基因突变的有效方法,在地中海贫血高发区有助于降低罕见致病突变的漏检率和减少重症患儿的出生。     

15例非典型β地中海贫血杂合子分析

对１５例“非典型β地中海贫血杂合子”进行了血液学，血红蛋白组成，肽链生物合成速率和珠蛋白基因及其ｍＲＮＡ含量的分析。发现患者β珠蛋白基因的表达呈中等程度甚至较明显的减少，结合家系调查，认为他们是典型β地中海贫血基因和非典型β地中海贫血基因的复合杂合子。提出应用药物（如羟基脲）来调变珠蛋白基因的表达可能是治疗“非典型性β地中海贫血杂合子”的有效途径。     

优化第三代慢病毒载体稳定表达β-珠蛋白治疗β-地中海贫血的研究

目的:优化第三代慢病毒载体HS4区实现β-珠蛋白稳定表达,为β-地中海贫血安全有效的细胞治疗提供研究依据。方法:优化第三代慢病毒表达载体HS4区构建lenti-HBB;转染小鼠红白血病细胞系MEL后,通过RT-PCR、Western-blot分析β-globin基因转录及翻译情况;进一步通过正常人脐带血及重型β-地中海贫血患者外周血CD34⁺细胞感染lenti-HBB,经克隆形成实验、细胞涂片实验及流式细胞术检测CD34⁺细胞是否发生红系分化;通过NSG小鼠体内实验验证lenti-HBB的安全性及有效性。结果:小鼠MEL细胞感染优化后的lenti-HBB后能稳定表达β-珠蛋白;正常人脐血及重度β-地中海贫血患者外周血CD34⁺细胞感染优化后的lenti-HBB后可分化为红细胞;人CD34⁺细胞感染优化后的lenti-HBB移植NSG小鼠3.5个月后表达β-珠蛋白。结论:通过优化第三代慢病毒载体HS4区稳定表达CD34⁺细胞β-珠蛋白,对重型β-地中海贫血及其他β-珠蛋白异常疾病...