抗果蝇ECP蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的:制备抗果蝇ECP蛋白的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定。方法:用大肠杆菌表达并纯化的GST-ECP融合蛋白,免疫6~8wk的雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA筛选和克隆化培养制备杂交瘤细胞系。用间接ELISA及Western blot等方法对mAb的Ig亚类(型)、腹水效价及特异性进行鉴定。结果:获得1株杂交瘤细胞株,命名为8G9。Ig亚类(型)鉴定表明,此株mAb为IgG1(κ型)。腹水mAb的效价为1∶1×105。Western blot分析表明,该株mAb可与果蝇的幼虫、蛹及成虫组织中表达的ECP特异性结合,可特异性的识别ECP抗原的231~300aa区段。结论:获得1株能稳定分泌抗ECP mAb的细胞株,为进一步研究ECP的功能奠定了基础。     

抗酪氨酸酶相关蛋白-1B细胞表位区多克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备多克隆抗体并初步用于TRP—1抗原表位区的研究，为白癜风、恶性黑素瘤的免疫治疗提供实验依据。方法：在大肠杆菌中表达PRSETA／TRP—1融合蚩白，用所获得的蛋白免疫新西兰白兔得到多克隆抗体，并用ELISA、Western—blot方法进行此抗体的鉴定。结果：①表达了PRSETA／TRP—1融合蛋白；②制备了抗TRP—1B细胞表位区的多克隆抗体；③并用多克隆抗体检测了毕赤酵母表达的6His—TRP1蛋白，证实此抗体效价高、特异性强。结论：此抗体可用于TRP—1B细胞表位肽段的进一步研究。     

抗人甲胎蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

利用细胞融合技术建立了５株分泌抗人甲胎蛋白（ＡＦＰ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株，快速酶联免疫分析法测得其亲和常数为５×１０７～２×１０９Ｍ－１之间；单抗的Ｉｇ亚类１Ｄ６和１Ｅ６为鼠ＩｇＧ２ａ（κ），３Ａ８、５Ａ７和７Ｈ１１为ＩｇＧ１（κ）。免疫组化中５株单抗均在肝癌细胞的胞浆显色，３Ａ８和１Ｄ６还能结合在肝癌细胞膜上。应用方阵配对实验初步证实，５株单抗至少针对ＡＦＰ分子上３个不同表位，并分析了单抗在ＥＬＩＳＡ反应中的特性。     

抗人F蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

Ｆ蛋白是存在于哺乳动物肝细胞质中的一种水溶性不稳定的单链蛋白质,相对分子质量（Ｍｒ）为４４０００。正常人肝组织中大约含Ｆ蛋白２７４ｍｇ／ｇ〔１，２〕,而血清中仅含０．２ｍｇ／Ｌ,提示血清Ｆ蛋白作为判断肝损伤程度的可能性。为对Ｆ蛋白进行深入研究,并提高对其检测的灵敏度,１９９５年以来,我们先后制备了３株抗人Ｆ蛋白的单克隆抗体（ｍＡｂ）,并进行了初步鉴定。１材料和方法１．１材料人Ｆ蛋白抗原的制备〔３〕：取肝外伤手术切除的新鲜肝组织５０ｇ,剪成约５ｍｍ３的组织碎块后,置于含有１ｇ／ＬＩＶ型胶原酶（Ｓｉｇｍａ）…     

抗3种标签蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的：制备并鉴定抗GST、His x6及FLAG的单克隆抗体（mAb）。方法：分别以含GST、His x6及FLAG标签的融合蛋白为抗原免疫BALB／c小鼠，通过细胞融合制备抗相应标签蛋白的mAb。用Western blot检测mAb对变性融合蛋白的反应性。用流式细胞术（FCM）检测抗FLAG mAb对细胞膜表面融合蛋白的反应性。结果：其获得12株可稳定分泌抗3种标签蛋白mAb的杂交瘤细胞（其中5株可分泌抗GST mAb，5株可分泌抗His x6 mAb，2株可分泌抗FLAG mAb）。11株mAb均可用于相应融合蛋白的Western blot检测。1株抗FLAG mAb检测细胞膜表面融合蛋白的阳性率，与商品化的mAb M2相接近。用1株抗His x6 mAb制备亲和层析柱，并用于纯化IL-8-His融合蛋白，也获得较满意的结果。结论：成功地制备了抗GST、抗His x6及抗FLAG的mAb，为含标签的融合蛋白的研究和应用提供了重要的工具。     

人精子蛋白17单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的:制备抗精子蛋白17(Sp17)的单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。方法:克隆人Sp17cDNA,表达带有6His标记的重组Sp17,用纯化的重组Sp17免疫BALB/c小鼠制备mAb。用ELISA筛选抗体阳性的细胞克隆。用免疫组化染色法及阻断试验鉴定mAb的特异性。结果:获得2株杂交瘤细胞系3C12和3D6,其分泌的mAb的Ig亚类(型)分别为IgG1和IgM(κ),杂交瘤细胞培养上清的ELISA效价分别为1∶64和1∶32;腹水mAb的效价分别为1∶1×105和1∶5×104。用人和大鼠睾丸组织以及人精液精子免疫组化染色及阻断试验证明,抗Sp17mAb具有良好的特异性。抗Sp17mAb也可识别卵巢癌组织中异常表达的Sp17。结论:成功地制备特异性的抗Sp17mAb,为研究该蛋白的功能、天然分布及异常表达奠定了基础。     

抗沙眼衣原体MIP蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的:制备小鼠抗沙眼衣原体MIP蛋白单克隆抗体并鉴定其生物学特性。方法:重组MIP蛋白免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行常规融合,间接ELISA法筛选阳性克隆并进行有限稀释克隆化,建立分泌抗MIP蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,进一步采用ELISA法鉴定单克隆抗体的效价、类别及抗MIP蛋白特异性,IFA法鉴定单克隆抗体的衣原体种属特异性及中和能力。结果:建立了2株能稳定分泌抗MIP蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1R6H6、2L9D2),ELISA法测得培养上清效价均为1:1 600,免疫球蛋白类型分别为IgG2a和IgG1;2株单克隆抗体不仅能特异性的识别MIP重组蛋白,而且能特异性识别沙眼衣原体血清型A、D、L2所编码的内源性MIP蛋白,但不识别其他衣原体优势蛋白及MoPn、AR39和6BC;体外中和试验表明,2株单克隆抗体均能有效中和衣原体的感染性。结论:获得了有活性的能特异性识别MIP蛋白的单克隆抗体,为深入研究MIP蛋白的结构和功能奠定了基础。     

抗人c-erbB2单克隆抗体的制备及其特异性鉴定

目的:制备小鼠抗人c-erbB2mAb,并进行特异性鉴定。方法:应用计算机软件分析人源c-erbB2抗原表位,人工合成羧基端含优势表位的13肽,与钥孔戚血蓝蛋白(KLH)偶联后,免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次经HAT选择培养、间接ELISA法、克隆化和免疫组化染色法筛选出稳定分泌抗天然人源c-erbB2mAb的杂交瘤细胞株。用交叉反应试验和阻断试验检测mAb的特异性。结果:获得1株可稳定分泌抗天然人源c-erbB2抗体的杂交瘤细胞株。该mAb与已知的c erbB2抗原阳性的乳腺癌标本起反应;与其他不表达c-erbB2分子的细胞不起反应。用合成的13肽阻断后,失去与c-erbB2抗原的反应性。结论:用合成的13肽作为免疫原成功地制备出1株抗c-erbB2的mAb。     

抗人肺鳞癌单克隆抗体的制备及其特性鉴定

目的:制备和鉴定抗人肺鳞癌单克隆抗体(mAb),为肺癌的早期诊断和靶向治疗提供候选抗体药物及为肺癌抗原的筛选提供工具。方法:用肺癌细胞株YTMLC-90做抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,间接ELISA和有限稀释法筛选抗体阳性的杂交瘤细胞获得mAb。染色体计数法鉴定杂交瘤细胞,并进行mAb同种型鉴定;对细胞培养上清液和腹水中的mAb采用间接ELISA法进行初步特异性检测及效价测定;采用Western blot法鉴定其与不同组织抗原结合活性;采用免疫组化染色法鉴定其在肺癌组织中的分布。结果:筛选出5株可稳定分泌抗肺鳞癌mAb的杂交瘤细胞株E2、F9、E11、D5和C6,分泌的抗体均为IgG1亚类,κ亚型。C6染色体数目为89～112条,细胞培养上清和腹水效价分别为1∶1 004和1∶104,ELSA和Western blot结果显示其能特异性与肺癌细胞结合,未见与其他高发癌组织和正常组织结合。结论:成功地制备了能够特异识别肺癌组织的mAb。     

抗人白细胞单克隆抗体的特异性及其特性鉴定

目的制备抗人白细胞单克隆抗体（ｍＡｂ），并对其识别抗原及组织的特异性进行鉴定。方法采用分离的人全白细胞悬液免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取脾细胞与Ｓｐ２／０细胞常规融合，用间接ＥＬＩＳＡ筛选ｍＡｂ，流式细胞仪及免疫组化染色ＳＰ法鉴定其组织特异性。　结果成功地制备１株抗人白细胞　ｍＡｂ，命名为ＳＺ－１０５。ＥＬＩＳＡ法测定其腹水效价为１×１０－５。琼脂糖双扩散鉴定为ＩｇＧ１类。流式细胞仪间接免疫荧光技术及免疫组化ＳＰ法测定表明，ｍＡｂ　ＳＺ－１０５可选择性地与外周血液的粒细胞、单核细胞和淋巴细胞呈强阳性反应，而与红细胞及血小板不出现反应。该ｍＡｂ还可与正常人骨髓的白细胞前体起反应。另外，在肝、肺、脾、胸腺及淋巴结正常组织中的巨噬细胞表面，也有ＳＺ－１０５抗原表达。ＳＺ－１０５抗原经亲和层析纯化，再经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ　和Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ证实，ｍＡｂ　ＳＺ－１０５识别的抗原是相对分子质量（Ｍｒ）为７５　０００左右的单链蛋白多肽。结论　获得１株具有高度免疫学活性和组织特异性的抗人白细胞ｍＡｂ　ＳＺ－１０５，其对研究白细胞的分化、免疫功能，以及隐匿性急、慢性炎症疾病的放免显像诊断都具有一定的临床意义。     

抗创伤弧菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及特性鉴定

目的:制备高效、特异的抗创伤弧菌的单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定。方法:用创伤弧菌菌体蛋白抗原免疫小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术,制备抗创伤弧菌的杂交瘤细胞株。用ELISA法及Western blot等筛选、鉴定其与创伤弧菌溶血素蛋白(vvhA)及其他重要海洋细菌的交叉反应性和效价。结果:共获得5株抗创伤弧菌的mAb,鉴定结果表明,5株mAb均具有良好的特异性和免疫反应性。结论:获得5株抗创伤弧菌的特异性mAb,为建立创伤弧菌快速检测试剂盒提供了重要制剂。     

肝癌候选标志物HCCR单克隆抗体的制备和鉴定

目的:制备肝癌候选标志物HCCR蛋白的单克隆抗体(mAb).方法:重组表达HCCR-1167-360蛋白用于动物免疫,用含有HCCR蛋白抗原表位YLGTRR的重组蛋白(Ep-HCCR)检测血清抗体效价及筛选阳性克隆.通过ELISA、Western blot、免疫荧光和免疫组化方法鉴定制备的HCCR抗体的性质.结果:获得1株分泌HCCR抗体杂交瘤细胞株,通过ELISA方法测定抗体的亲和力常数为5.4×106L/mol;Western blot结果显示,该抗体能特异识别肝癌HepG2细胞中HCCR-1和HCCR-2蛋白;免疫荧光检测显示,HCCR蛋白主要分布在细胞质和细胞膜中;免疫组化检测到肝癌组织中有HCCR蛋白表达但在正常组织中没有.结论:成功制备了1株抗HCCR特异性mAb,为建立基于HCCR的肝癌检测方法奠定了基础.     

一株抗双链DNA单克隆抗体的制备及其特性研究

制备抗双链DNA(dsDNA)单克隆抗体并对其生物学特性进行初步研究。以活化淋巴细胞的DNA为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体;用体内诱生法制备腹水,以间接酶链反应吸附试验(ELISA)法分析抗体的亚类、特异性和亲和力;用免疫荧光法检测抗体的荧光核型;用考马斯亮蓝法检测注入杂交瘤细胞的小鼠的尿蛋白含量。结果显示,成功获得了1株持续稳定分泌抗dsDNA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为6C2;该细胞株所分泌的抗体亚类为小鼠IgG2a,能特异性结合dsDNA,亲和力常数为2.67×10~8mol/L,免疫荧光核型为均质型;将6C2细胞注入正常BALB/c小鼠腹腔后,小鼠的尿蛋白含量较对照组明显增高。结果表明,抗dsDNA单克隆抗体6C2是致病性抗体,对于进一步研究抗dsDNA抗体的致病机制具有重要的价值。     

一株鼠抗人PD-1功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定

研制特异性鼠抗人PD-1功能性单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。以高表达人PD-1分子的基因转染细胞L929/PD-1作为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,以L929/PD-1作为抗体筛选细胞,L929/mock为对照细胞,经间接免疫荧光标记和流式细胞术分析、反复筛选和多次克隆化培养,筛选出分泌特异性鼠抗人PD-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用Western blot、Ig亚型快速定性试纸法、间接免疫荧光法、竞争结合抑制试验和MTT增殖实验对单抗进行生物学特性的分析。结果表明,成功获得1株特异、稳定分泌鼠抗人PD-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为6E2。对6E2生物学功能的研究结果提示,该单抗能够识别活化T细胞表达的PD-1分子,且在体外能够显著抑制T细胞的增殖和细胞因子的分泌。获得的特异性鼠抗人PD-1功能性单克隆抗体,通过激发PD-1负性途径能够有效抑制T细胞的功能,为进一步研究PD-1信号奠定了物质基础。     

Preparation and characterization of monoclonal antibodies against human apolipoprotein E

Laboratory of Lipoproteins, All-Union Research Center for Preventive Medicine, Ministry of Health of the USSR. Laboratory of Molecular and Cellular Cardiology, All-Union Cardiologic Scientific Center, Academy of Medical Sciences of the USSR, Moscow. (Presented by Academician of the Academy of Medical Sciences of the USSR V. N. Smirnov.) Translated from Byulleten' Éksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 112, No. 8, pp. 179–181, August, 1991.     

抗ARL-1单克隆抗体的制备及初步应用

目的: 制备抗醛糖还原酶相似蛋白(aldosereductaselikeprotein, ARL- 1)的单克隆抗体 (mAb)并进行初步应用。方法: 用纯化的ARL- GST蛋白免疫BALB/c小鼠, 采用杂交瘤技术制备mAb。间接ELISA法、Westernblot及免疫组织化学染色法, 对mAb进行鉴定及初步应用。结果: 获得 1株可稳定分泌抗ARL -1蛋白mAb的杂交瘤细胞系。mAb的Ig亚类为IgG2b, 轻链属于κ型。腹水mAb的效价为: 1∶4. 096×105。Westernblot的结果表明, ARL 1蛋白在被检测的肝癌组织中呈高表达, 而在相应的癌旁组织中不表达。免疫组织化学染色的结果表明, ARL -1蛋白在肝癌组织中呈高表达且主要定位在胞质内。结论: 成功地制备 1株抗ARL -1蛋白的mAb。初步应用的结果表明, ARL- 1蛋白在肝癌组织中呈高表达, 为进一步研究ARL -1蛋白的功能, 以及其与肝癌的确切关系奠定了基础。     

抗rhNDPK-A单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :研制抗rhNDPK A (recombinanthumannucleosidediphosphatekinase A)单克隆抗体 (mAb) ,并鉴定其特性。 方法 :以纯化的rhNDPK A免疫BALB/c小鼠 ,采用杂交瘤技术制备抗rhNDPK AmAb ;用免疫双扩散鉴定Ig亚类 ;West ernblot鉴定mAb的特异性 ;间接ELISA检测mAb的腹水效价、亲和常数 ,并进行表位分析。结果 :获得 6株可分泌特异性mAb的抗rhNDPK A的杂交瘤细胞系 2D9、8C7、13E2、15D9、15E3和 2 0D9,Ig亚类均为IgG1;其效价为 1× 10 -4～5× 10 -6;亲和常数为 4 .5× 10 -9～ 2 .8× 10 -10 mol/L ;共有3个抗原表位。结论 :获得抗rhNDPK A的mAb ,为进一步用于临床诊断和实验研究创造了条件     

抗人GCRG213单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备GCRG213单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。方法:在大肠杆菌中表达HIS-GCRG213融合蛋白,并以所获蛋白作为免疫原制备鼠mAb。采用ELISA、Westernblot法鉴定抗体的效价及特异性。免疫组化染色观察GCRG213在胃癌和正常组织中的表达。结果:HIS-GCRG213融合蛋白在大肠杆菌中获得高效表达,经常规的细胞融合和筛选获得2株可稳定分泌抗GCRG213的杂交瘤细胞株。ELISA法检测腹水的效价可达到1∶106,Western blot证实该抗体可与重组HIS-GCRG213蛋白特异性结合。免疫组化染色显示GCRG213在胃癌组织中的表达明显强于正常胃黏膜组织。结论:成功地制备出2株抗GCRG213的mAb,为进一步研究GCRG213的生物学功能提供了有效的工具。