肺炎患儿外周血白细胞表面粘附分子CD11b、CD54、CD62L表达的研究

目的 探讨肺炎患儿外周血白细胞表面CD11b、CD54、CD62L在发病中的作用及其与病情的关系。方法 采用全血直接免疫荧光流式细胞术检测34例肺料患儿及22例正常小儿外周血白细胞粘附分子（AMS）CD11b、CD54、CD62L的表达。结果 1．肺炎组与对照组比较：淋巴细胞（L）、单核细胞（M）、多形核细胞（PMN）表面CD11b、CD54、CD62L的阳性细胞百分率（PPC）和（或）平均荧光强度（MFI）普遍上调（P＜0．05或＜0．0001），其中以M的AMS牙调最为显著；2．重型肺料组与轻型组比较；PGE表面CD11b、L表面CD62L的PPC和（或）MFI表达上调，3类白细胞表面CD54的PPC和MFI表达均显著上调（P＜0．05或P＜0．001）。结论 1．AMS在肺炎的发病中发挥了重要作用；在三类白细胞表面CD54表达均同时上调的水平有可能作为判断肺炎病情程度的免疫学指标；3．此结果可能为肺炎的抗粘附疗法提供了一些依据。     

儿童外周血不同类型白细胞柯萨奇-腺病毒受体的表达

目的研究柯萨奇-腺病毒受体（CAR）在儿童外周血不同类型白细胞中的表达。方法采用全血免疫荧光流式细胞术检测南华大学附属第一医院儿科2005年1-6月不同年龄组体检正常儿童外周血淋巴细胞、多形核细胞及单核细胞3种白细胞的平均荧光强度（MFI）和阳性细胞百分率（PPC）。结果流式细胞检测表明,同年龄组内多形核细胞及单核细胞MFI和（或）PPC比较无显著性差异（P〉0.05）,但2类细胞MFI和（或）PPC均显著高于淋巴细胞（Pa〈0.01）;不同年龄组淋巴细胞、多形核细胞及单核细胞3种白细胞的MFI和（或）PPC比较有显著性差异（Pa〈0.01）,其中以0-1岁组表达最高,2-3岁组次之,4-7岁组较低,8-15岁组表达最低。结论儿童外周血白细胞CAR表达以多形核细胞及单核细胞为主,流式细胞术是检测白细胞CAR表达的有效方法之一。     

多参数流式细胞术检测急性白血病患儿CD14表达的意义

为了探讨CD14在小儿白血病中的表达及其在白血病诊断和鉴别诊断中的意义 ,本文采用CD45/SSC多参数散点图设门多色流式细胞术分析158例小儿急性白血病 (AL)患儿白血病细胞的CD14及其它白血病相关抗原的表达情况。结果 :158例中有9例 (5.7 %)表达CD14,且均为急性髓系白血病 (AML)。CD14在M4/M5患儿中的阳性率明显高于非M4/M5患儿 (P<0.01) ;M4和M5b患儿CD14的阳性率明显高于M2及M5a(P均<0.01);CD11b在M2的阳性率 (6/20例,30 %)明显低于M5(7/9例,77.8 % ,P<0.05) ;CD15在M5a的阳性率明显低于M5b (P<0.05)、M2 (P<0.01)及M4 (P<0.05)。在AML组中 ,CD14的表达与CD11b、CD15呈正相关 (P均<0.01)。提示CD14有助于淋巴系白血病、髓系白血病及单核细胞相关性白血病 (MLIL)的诊断与鉴别诊断 ,其对单核细胞相关性白血病免疫分型诊断中的特异性为100% ,敏感性为64.3 %。CD14和CD15有助于M5亚型的区分及M2与M5a、M2与M4的鉴别诊断 ,CD14和CD11b则有助于M2与M5的鉴别诊断     

IL-11及其受体在再生障碍性贫血小鼠外周血中的意义

目的 了解再生障碍性贫血(AA)小鼠外周血中IL-11及受体(IL-11R)的含量及其相互之间的关系,进一步探讨(AA)的发病机制,试图为IL-11治疗(AA)提供新的理论依据.方法 免疫法诱导建立AA的动物模型,分别用ELISA法及流式细胞仪分别测定(AA)小鼠外周血中IL-11及IL-11R的水平.结果 试验组大部分AA小鼠血中IL-11及IL-11R的水平发生了变化,其中17/30只小鼠同时存在IL-11及IL-11R水平降低,而13/30只小鼠仅有IL-11R水平的下降.结论 IL-11及IL-11R在AA发病机制中起一定作用.但其发挥作用的原理和过程尚需进一步探讨.     

新生儿和婴幼儿手术应激后外周血单核细胞Toll样受体水平变化及临床意义

目的 探讨新生儿、婴幼儿手术应激后外周血单核细胞Toll样受体(TLR)2、4表达变化规律及临床意义.方法 选择择期手术患儿32例,包括新生儿组9例,婴幼儿组23例,分别于术前、术后、术后1天、3天、7天采集外周血2ml肝素抗凝.采用流式细胞术检测单核细胞表面TLR2、4的水平;分离外周血单核细胞,用LPS刺激后,EUSA法测定上清液中TNF-α和IL-6的水平.结果 新生儿组和婴幼儿组术后TLR2和TLR4表达均明显降低,与术前比较差异有统计学意义(P<0.05),术后1天均恢复正常(P>0.05).LPS刺激的TNF-α水平术后明显抑制,术后1天逐渐上升;IL-6水平无明显变化.结论 手术创伤早期可致TLR2和TLR4表达下调,导致机体对病原微生物的敏感性下降.     

肺炎支原体感染患儿外周血单个核细胞CD40L的表达及其临床意义

目的 了解CD40L在肺炎支原体(MP)肺炎及支气管哮喘患儿致病中的作用。方法 采用流式细胞仪对26例MP肺炎患儿、24例支气管哮喘合并MP感染患儿、23例支气管哮喘非MP感染患儿和25例正常对照组儿童外周血单个核细胞CD40L的表达进行了研究。结果 所有MP肺炎组和支气管哮喘组患儿CD40L表达在PMA和离子霉素(ionomycin)刺激前后均显著高于正常对照组。结论 外周血单个核细胞表面CD40L的表达与支气管哮喘的发病有重要关系，MP感染后外周血单个核细胞高表达CD40L可能促进支气管哮喘的发病。     

柯萨奇-腺病毒受体在病毒性心肌炎患儿白细胞中的表达及意义

目的观察柯萨奇-腺病毒受体(CAR)在病毒性心肌炎(VM)外周血白细胞中的表达及意义。方法选择柯萨奇B病毒性心肌炎患儿及同龄健康儿童各20例,采用全血免疫荧光流式细胞术检测白细胞中CAR表达水平,并对VM患儿CAR表达值与心功能(EF值)的变化相关性进行分析。结果流式细胞表明,心肌炎组(VM组)平均荧光强度(MFI)和阳性细胞百分率(PPC)均明显高于正常对照组,差异均有高度显著性(t=6.23、10.87,P均<0.01);其MFI与EF值呈显著负相关(r=-0.757,P<0.05)。结论CAR表达水平有助于判断患儿对柯萨奇B组病毒感染的易感性,对VM的诊断、判断病情和预后有一定的价值。     

孟鲁司特钠对哮喘小鼠气道重塑及Th17/CD4~+CD25~+Treg表达的影响

目的探讨白三烯受体拮抗剂孟鲁司特钠干预哮喘小鼠后气道重塑及Th17细胞/CD4~+CD25~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+Treg)表达的动态变化及其相关性。方法将Balb/c小鼠随机分成空白组、哮喘组、孟鲁司特钠组,每组经腹腔注射鸡卵清蛋白(OVA)和氢氧化铝混悬液致敏并雾化吸入2.5%OVA以制备哮喘气道重塑模型,空白组以生理盐水替代;孟鲁司特钠组雾化前给予孟鲁司特钠混悬液灌胃,空白组及哮喘组以生理盐水代替。3组分别在雾化2周、4周及8周后的24 h内随机处死8只小鼠。肺组织病理切片观察气道重塑程度;流式细胞技术检测脾组织中Th17、CD4~+CD25~+Treg细胞占CD4~+T细胞百分比。结果各时间点哮喘组和孟鲁司特钠组支气管总管壁厚度、平滑肌厚度均高于空白组(P0.05),干预8周时孟鲁司特钠组较哮喘组上述变化明显减轻(P0.05)。与空白组比较,各时间点哮喘组和孟鲁司特钠组均显示Th17细胞数增加,与气道重塑呈正相关(P0.05);而CD4~+CD25~+Treg细胞数逐渐降低,与气道重塑呈负相关(P0.05)。干预8周时孟鲁司特钠组与哮喘组比较,Th17细胞数显著下降(P0.05);而CD4~+CD25~+Treg细胞数明显增加(P0.05)。结论孟鲁司特钠干预哮喘小鼠后能减轻气道重塑的发生,且随着用药时间延长,改善越明显;机制可能是通过改善哮喘小鼠体内Th17/CD4~+CD25~+Treg的免疫紊乱,抑制气道炎症反应从而减轻或延缓气道重塑来起作用的。     

CD4+CD25high+CD127low调节性T 细胞在毛细支气管炎患儿外周血中的表达改变及其临床意义

目的：探讨CD4+CD25high+CD127low调节性T 细胞（regulatory T cell, Treg）在毛细支气管炎患儿外周血中的数量变化及其临床意义。方法：随机选取31例2岁以下毛细支气管炎患儿作为毛细支气管炎组,同期住院的同年龄段支气管肺炎患儿25例和患有疝气、肾结石等非感染性疾病患儿25例分别作为支气管肺炎组和对照组,采用流式细胞术检测3组患儿外周血中CD4+CD25high+CD127lowTreg 占CD4+T 细胞百分比。结果：毛细支气管炎组患儿外周血中CD4+CD25high+CD127lowTreg 占总CD4+T 细胞的8.0%±2.1%,低于支气管肺炎组（9.6%±2.6%）及对照组（11.3%±2.9%）,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：毛细支气管炎患儿外周血CD4+CD25high+CD127lowTreg水平可能是一个较好的反映毛细支气管炎患儿免疫功能状态的参考指标,其在外周血中数量下降提示Treg细胞可能参与毛细支气管炎的发生发展。     

癫癎患儿外周血中调节性T细胞的变化及其临床意义

目的：研究CD4+ CD25+ Foxp3+ 调节性T细胞（Treg细胞）在癫癎患儿外周血的表达水平,探讨其在癫癎发病机制中的作用。方法：采用流式细胞术分别检测41例癫癎患儿和38例健康儿童外周血Treg细胞占CD4+ T细胞的比例,及CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、自然杀伤细胞（NK）、B细胞分别占淋巴细胞的比例。结果：癫癎组患儿外周血Treg细胞比例、CD4+ T细胞比例、CD4+ /CD8+ 比值分别为（2.4±0.5）%、（35±5）%、1.32±0.24,较对照组的（6.1±1.2）%、（38±4）%、1.60±0.24显著降低（P<0.05）;而癫癎组CD8+ T细胞比例、NK细胞比例、B淋巴细胞比例分别为（27±3）%、（11.1±5.1）%、（24±9）%,较对照组的（24±3）%、（8.5±1.9）%、(16±5)%显著升高（P<0.05）。结论：癫癎患儿外周血中存在 Treg 细胞比例异常,提示免疫机制可能参与了癫癎的发生和发展。     

双时相rhG-CSF对大鼠外周血CD34~+细胞动员的研究

目的观察双时相重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)对新生大鼠外周血CD34+细胞的动员作用,掌握双时相注射rhG-CSF后外周血CD34+细胞的变化趋势。方法正常7日龄新生大鼠分为3组。A组皮下注射rhG-CSF 50μg/(kg.d),连续注射5 d(第0天至第4天),流式细胞仪测定外周血白细胞中CD34+细胞的比例(CD34+/WBC),当CD34+细胞比例下降3 d后继续给予皮下注射rhG-CSF 50μg/(kg.d),再连续注射5 d;B组皮下注射rhG-CSF 50μg/(kg.d),连续注射5 d(第0天至第4天);C组注射相同剂量的生理盐水,流式细胞仪测定外周血白细胞中CD34+细胞的比例(CD34+/WBC),观察CD34+细胞比例的变化趋势。结果A组外周血CD34+/WBC比例在第4天时达高峰,第5天直线下降,随后1周基本维持在正常值4～7倍的稳定水平。结论双时相rhG-CSF动员能够使外周血CD34+/WBC比例首先达到较高水平,随后1周时间维持在正常值4～7倍的稳定水平。     

Functional assessment of CD2, CD3 and CD28 on the surface of peripheral blood T-cells from infants at low versus high genetic risk for atopy

Recent studies from several laboratories suggest that the rate of postnatal maturation of T-cell function(s) associated with in vitro activation may be slower in children at high genetic risk for atopy (HR), compared to their normal (low risk; LR) counterparts. The present study compared the in vitro activity of the function-associated surface molecules CD2, CD3 and CD28 in panels of 27 HR and 13 LR infants, with a reference panel of 10 adults, employing assay systems involving T-cell stimulation with MoAbs against these molecules. The response maxima induced by saturating levels of the MoAbs were equivalent in all 3 groups, but T-cells from the HR infants required 10–50 fold higher levels of anti-CD3 stimulation to attain their maximum response, relative to adults (p = 0.02); T-cells from LR infants were also less responsive to anti-CD3 than adults, but these differences were smaller and did not attain statistical significance. It is suggested that these differences are attributable to varying proportions of competent T-memory cells (which respond to low levels of anti-CD3) in PBL from these populations, the postnatal accumulation of which proceeds slowest in the HR group.     

呼吸道合胞病毒下呼吸道感染外周血Th细胞亚群的研究

为探讨RSV下呼吸道感染辅助性T淋巴细胞CD4~+及其亚群CD4~+CD45RA~+、CD4~+CD45RO~+的表达及其意义,用单克隆抗体双色免疫荧光PE/FITC双标记,流式细胞仪检测30例RSV下呼吸道感染患儿急性期外用血单个核细胞(PBMCs)辅助性T淋巴细胞 CD4~+及其亚群CD4~+CD45RA~+、CD4~+CD45RO~+的表达;同时检测15例年龄、性别无差异的健康儿为对照。结果显示,RSV下呼吸道感染组患儿外周血辅助性T淋巴细胞CD4~+明显低于对照组(P<0.05);CD4~+CD45RA~+细胞明显下降(P<0.05);CD4~+CD45RO~+细胞虽稍有下降,但与对照组相比无统计学差异(P>0.05);CD4~+CD45RA~+/CD4~+CD45RO~+比值与对照组相比明显降低(P<0.05)。表明婴幼儿RSV下呼吸道感染急性期的免疫功能紊乱主要表现为辅助性T淋巴细胞CD4~+及其亚群CD4~+CD45RA~+/CD4~+CD45RO~+的失衡。     

Prognostic influence of minimal residual disease detected by flow cytometry and peripheral blood stem cell transplantation by CD34+ selection in childhood advanced neuroblastoma

OBJECTIVE: To determine whether neuroblastoma (NB) minimal residual disease (MRD) in bone marrow (BM) detected by flow cytometry could predict prognosis and whether tumor cell purging by CD34(+) cell selection prior to transplantation will impact on disease-free survival. METHODS: NB MRD in BM was evaluated by flow cytometry with CD45-FITC-/CD81-PE+/CD56-PECy5+ monoclonal antibodies cocktail. Peripheral blood stem cell (PBSC) was enriched via positive CD34(+) cell selection by magnetic-activated cell separation system (MACS). RESULTS: Eleven of 31 patients with CD45(-)/CD81+/CD56+ cells by flow cytometry at diagnosis became negative after an average of four courses of chemotherapy. All 11 patients remained alive without evidence of disease. Thirteen of the 20 patients with positive MRD relapsed and 1 patient died from disease (mean 25.8 months). There was a significant difference between these two groups. MRD in BM was tested before PBSC transplantation (PBSCT) for 19 NB patients. Fourteen was negative, 4 of them relapsed and 10 patients remained alive without evidence of disease. Another 5 patients with positive MRD, all of them relapsed (mean 17 months after PBSCT) with a significant difference between these two groups. Fourteen of 19 PBSC were purged with CD34(+) selection procedure. Six of 14 relapsed (mean 18.43 months after PBSCT). Five patients did not purge for CD34(+) selection, and 3 of them relapsed with no significant difference between these two groups. CONCLUSIONS: Positive MRD in BM after an average of four courses of chemotherapy and before PBSCT is an unfavorable factor for stage IV NB. CD34(+) selection purging for PBSCT may not improve the prognosis for children with neuroblastoma in advanced stage.     

毛细支气管炎CD4+CD25+调节性T细胞和Foxp3 mRNA表达及与IgE关系

目的：通过对呼吸道合胞病毒(RSV)毛细支气管炎患儿CD4+CD25+调节性T细胞（CD4+CD25+Treg）、Foxp3 mRNA的表达、IgE合成的检测,以探讨其在RSV毛细支气管炎发病机制中的作用。方法：在RSV检测阳性的57例毛细支气管炎患儿中,运用流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+Treg的比例,RT-PCR检测Foxp3 mRNA的表达量、ELISA法检测血清总IgE含量。25例健康儿童作为对照组。结果：毛细支气管炎患儿外周血CD4+CD25+Treg细胞数量减少,特应性体质（7.7±1.6%）和非特应性体质组（8.8±2.1%）均低于对照组（10.5±1.6%）（P均<0.01）。毛细支气管炎特应性体质和非特应性体质组外周血Foxp3 mRNA表达亦均低于对照组（P<0.01）。而血清总IgE含量毛细支气管炎特应性体质（241.2±102.5 IU/mL）和非特应性体质组(125.5±63.2 IU/mL)均高于对照组(27.2±10.5 IU/mL)（P<0.01）。外周血CD4+CD25+Treg细胞数量、Foxp3 mRNA表达及血清总IgE含量在毛细支气管炎特应性体质和非特应性体质组之间差异有显著性意义。CD4+CD25+Treg、Foxp3 mRNA与血清IgE水平之间相关密切,r=-0.70,-0.79(均P<0.01)。结论：毛细支气管炎外周血淋巴细胞CD4+CD25+Treg和Foxp3 mRNA表达降低,二者低水平表达使IgE合成增多,共同参与了RSV毛细支气管炎的发病。［中国当代儿科杂志,2009,11（5）：349-353］     

哮喘患儿单个核细胞表面CD86分子表达和TH源细胞因子水平及之间相关性研究

目的探讨哮喘急性发作患儿T细胞协同刺激途径和T细胞亚群激活状况.方法随机选择哮喘急性发作期患儿35例,对照组31例.用直接免疫荧光流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMC)中白细胞分化抗原14阳性(CD+14)细胞表达CD86的平均荧光强度;经脂多糖刺激后PBMC中CD+19细胞百分率及CD+19CD+86双阳性细胞百分率;ELISA检测植物血凝素刺激后PBMC培养上清白细胞介素(IL)-4、IL-13、IFN-γ水平及血浆总IgE水平,并分析它们之间的相关性.结果 (1)哮喘组CD+14细胞表达CD86的平均荧光强度(31.8±9.2)、CD+19细胞百分率[(13.5±4.0)%]、CD+19CD+86细胞百分率[(4.6±2.0)%]及血浆总IgE水平[186.6(64.3～723.6) kIU/L]与对照组[(23.5±6.4)、(8.2±3.0)%、(2.3±1.4)%、42.0(0.9～115.2)]比较差异有显著性;(2)哮喘组IL-4和IL-13水平均增高,IFN-γ水平降低,与对照组比较差异有显著性;(3)哮喘组CD+14细胞的CD86平均荧光强度与CD+19CD+86细胞百分率、CD+19CD+86百分率与血浆总IgE水平及CD+19、CD+19CD+86百分率与IL-4、IL-13水平均呈显著正相关.结论哮喘急性发作患儿PBMC中抗原递呈细胞表达CD86的强度或数量增高;B细胞和TH2细胞对丝裂原的活化作用应答增强.这提示CD86及TH亚群失衡在哮喘发病机制中起重要作用.     

过敏性紫癜患儿外周血CD40L mRNA表达及其与血清IL-6和IL-8的关系

目的 探讨过敏性紫癜患儿外周血单个核细胞(PBMC)中CD40L mRNA的表达及其与血清中IL-6和IL-8的关系.方法 应用逆转录一聚合酶链式反应(RT-PCR),从转录水平检测30例过敏性紫癜(HSP)患儿和20例正常儿童(对照组)PBMC中CD40L mRNA的表达,并应用ELISA双抗体夹心法检测血清中细胞因子IL-6和IL-8的水平.结果 HSP患儿(PBMC)中CD4JDL mRNA的表达明显高于对照组(P<0.05);HSP患儿血清中IL-6和IL-8水平明显高于对照组(P<0.05),加入抗-CD40L mAb后恢复正常.结论 HSP患儿PBMC中CD40L的表达异常增高,且CD40L的表达与血清中IL-6和IL-8呈正相关.