血管性血友病因子裂解酶对血管新生的抑制作用

目的 观察血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)对血管内皮细胞生长因子(VEGF)介导的血管新生的抑制作用.方法 以不同浓度的ADAMTS13(1、5、25、50、100 nmol/L)处理脐带静脉内皮细胞(HUVEC),采用MTT法检测ADAMTS13对HUVEC增殖的影响,通过管腔形成实验观察ADAMTS13对HUVEC分化的影响,通过刮伤愈合实验观察ADAMTS 13对HUVEC迁移的影响,利用鸡胚绒毛尿囊膜实验和基质胶塞实验观察ADAMTS13在体内对血管新生的影响.结果 与对照组相比,25、50、100 nmol/L ADAMTS13对HUVEC增殖均有明显的抑制作用(P值均＜0.01).在刮伤愈合实验中,制造损伤8h后,对照组HUVEC的迁移距离为(79±22)μm,VEGF处理组为(250±8) μm,VEGF+ADAMTS13处理组为(170±23)μm,组间差异均有统计学意义(P值均＜0.05).在管腔形成试验中,VEGF处理组、VEGF+ADAMTS13处理组HUVEC培养16h后形成的管状结构长度分别是对照组的(450.6±16.6)％、(235.3±19.0)％,VEGF+ ADAMTS13处理组管状结构少于VEGF处理组(P＜0.001).鸡胚绒毛尿囊膜实验中,VEGF(20 ng/ml)、ADAMTS13(100 nmol/L)、ADAMTS13(100nmol/L) +VEGF(20 ng/ml)处理组的血管形成数量分别为对照组的(228.2±10.8)％、(69.2±21.1)％、(184.6±15.2)％.基质胶塞实验结果显示VEGF+ADAMTS13处理组小鼠体内的血管数量为VEGF组的43.5％.结论 体外实验结果表明ADAMTS13对HUVEC增殖、分化、迁移能力均有抑制作用;体内实验结果提示ADAMTS13对血管新生有抑制作用.     

循环血浆VEGF IL-8水平与胃癌关系研究

目的探讨胃癌患者循环血管内皮生长因子 (VEGF)和白细胞介素-8(IL-8)水平的变化及其与胃癌临床病理学特征的关系. 方法应用酶联免疫吸附法 (ELISA)测定47例胃癌患者循环血浆VEGF、IL-8浓度,结合临床病理学资料进行分析. 结果胃癌患者循环血浆VEGF浓度为(65.12±29.53)pg/ml,显著高于正常对照组(32.97±9.79)pg/ml (P<0.01);IL-8浓度为(3.01±0.68)pg/ml,与对照组比较,差异无显著性意义(P>0.05).肿瘤浸润深度超过肌层,伴有淋巴结转移、血管浸润者,其循环血浆VEGF明显升高(P<0.05或P<0.01).循环血浆VEGF、IL-8之间呈弱正相关(r=0.433). 结论循环血浆VEGF水平与胃癌浸润、转移等有关.循环VEGF、IL-8之间有一定的相关性,联合检测循环血浆VEGF、IL-8对胃癌的诊断、疗效判断等有一定的价值.     

胃癌患者血浆血管内皮生长因子浓度变化的测定及意义

目的　探讨胃癌患者血浆血管内皮生长因子 (VEGF)浓度变化与胃癌生物学行为的关系。方法　应用酶联免疫吸附法 (ELISA)测定 40例胃癌患者血浆VEGF含量 ,并与胃癌生物学行为进行分析。结果　胃癌患者血浆VEGF浓度为 12 0 .16± 86.45pg/ml,显著高于正常对照组 (n =15) 73 .41± 11.56pg/ml(P <0 .0 1) ,胃癌≥ 5cm组 (n =2 7)血浆VEGF较 <5cm组 (n =13 )明显升高 ,分别为 12 8.78± 74.51pg/ml与 98.45± 3 8.91pg/m1(P <0 .0 5)。另外 ,血浆VEGF与胃癌TNM分期、有无淋巴结转移 ,细胞病理类型无明显关系。结论　血浆VEGF的水平与胃癌肿瘤负荷有关 ,血浆VEGF是诊断胃癌的客观指标之一     

乳腺癌VEGF与E2的检测及相关性研究

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)在乳腺癌组织中的表达及检测乳腺癌患者血清中VEGF与雌激素(E2)的含量对诊断乳腺癌的意义.方法 选取龙岗中心医院普外科2007～2010年乳腺癌标本42例.组织学分级:Ⅰ级7例,Ⅱ级21例,Ⅲ级14例.有淋巴结转移者29例,无淋巴结转移者13例.同时取乳腺良性病变26例,以上患者术前均未经任何治疗.正常对照组为36例来自体检正常的健康女性.选择VEGF单克隆抗体及超敏(鼠)S-P试剂盒利用免疫组化技术检测42例乳腺癌组织中VEGF蛋白表达.所有受试者均于晨起空腹采血,同时用化学发光法检测血清中VEGF与E2的含量.采用SPSS13统计分析软件处理数据,组间用t检验对实验数据进行处理,分析VEGF与E2两种指标与临床指标的关系.结果 乳腺癌组织中VEGF表达阳性率为60.95％,VEGF表达阴性者癌周淋巴结较少,癌间质内皮细胞不表达或呈弱阳性表达.乳腺癌患者VEGF与E2值分别为160.58±14.37 ng/ml和199.26±49.31 pg/ml,t值47.250,P值0.024;乳腺良性病变组VEGF与E2值分别为78.30±9.12 ng/ml和107.41±38.86 pg/ml,t值34.549,P值0.037.不同临床分期乳腺癌患者VEGF及E2浓度与TNM分期之间经方差分析,显示各项指标之间均有显著性差异.Ⅰ期乳腺癌VEGF与E2值分别为137.17±13.63 ng/ml和112.69±33.57 pg/ml;Ⅱ期乳腺癌VEGF与E2值分别为226.70±23.47 ng/ml和171.16±37.61 pg/ml,t值31.035,P值0.032;Ⅲ期乳腺癌VEGF与E2值分别为374.86±36.59 ng/ml和250.20±41.43 pg/ml,t值41.548,P值0.020.且有淋巴结转移的乳腺癌患者VEGF与E2值分别为128.40±12.19ng/ml和79.63±35.90 pg/ml,t值25.370,P值0.047;而无淋巴结转移的乳腺癌患者VEGF与E2值分别为267.12±30.25 ng/ml和187.66±41.34 pg/ml,且E2,VEGF水平呈正相关(P＜0.05),乳腺癌患者血清E2,VEGF随TNM分期有一定相关性.结论 VEGF的表达可能与淋巴结转移密切相关且VEGF对乳腺癌淋巴结转移具有间接促进作用,由此推测VEGF和E2能加速乳腺癌进程发展,二者可能是乳腺癌主要的致癌因子.     

EGCG对多发性骨髓瘤细胞KM3促血管新生作用的抑制效应及机制初探

本研究探讨绿茶茶多酚成分之一表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG)]对多发性骨髓瘤细胞KM3促血管新生作用的影响及其机制。体外培养多发性骨髓瘤细胞KM3,观察不同浓度EGCG作用后的培养上清对血管内皮细胞株HUVEC迁移和形成血管能力的影响。ELISA法检测KM3细胞培养上清中血管内皮生长因子(VEGF)分泌水平;RT-PCR方法检测KM3细胞VEGF mRNA表达水平。结果表明:EGCG以浓度依赖方式抑制KM3细胞培养上清促内皮细胞迁移的作用,5,25,50和100μmol/L的EGCG迁移细胞数目分别为414±27,299±70,202±42及116±13个,且EGCG的浓度与内皮细胞的迁移数目呈负相关(r=-0.952,p<0.05)。同时,内皮细胞形成小管的面积随EGCG浓度的升高而减少,25及50μmol/L时的面积分别是88343.9±3231.1和60897.5±914.1μm2,均明显低于对照组(p<0.01),小管面积与EGCG浓度呈负相关(r=-0.888,p<0.05)。5、25、50、100μmol/L的EGCG作用于KM3细胞48小时后培养上清中VEGF的含量分别为1399.0±47.4pg/ml,660.1±5.7pg/ml,108.5±5.8pg/ml和26.2±18.6pg/ml,与对照组比较,25、50、100μmol/L组均有统计学意义(p<0.01)。RT-PCR结果显示EGCG抑制KM3细胞VEGF的mRNA水平表达,且呈浓度依赖性。结论:EGCG能显著抑制多发性骨髓瘤细胞KM3的促血管新生作用;下调VEGF转录水平的表达,减少VEGF的分泌可能是其药理作用机制之一。     

血浆结缔组织生长因子对心力衰竭的诊断价值

目的探讨血浆结缔组织生长因子(CTGF)浓度对临床上心力衰竭患者的诊断价值.方法评估100例心力衰竭患者(心衰组),根据NYHA分级,心衰组按心功能Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级分为第一组、第二组、第三组、第四组,对照组为25例健康体检者,测定研究对象的血浆CTGF水平,将血浆CTGF浓度和其他纤维化标志物与临床及超声心动图的数据进行评估和比较.结果心衰各组患者血浆CTGF浓度均明显高于对照组,对照组测定值为(0畅7994±0畅1650)ng/ml,第一组测定值为(1畅1124±0畅2512)ng/ml(P<0畅01),第二组测定值为(1畅2563±0畅2983)ng/ml(P<0畅01),第三组测定值为(1畅2886±0畅3864)ng/ml(P<0畅01),第四组测定值为(1畅3539±0畅3241)ng/ml(P<0畅01),心衰患者中,血浆CTGF浓度与血浆脑钠肽的浓度显著正相关(r=0畅396,P<0畅01),与血浆转化生长因子β正相关(r=0畅518,P<0畅01),与组织多普勒评估的E/A值呈负相关(r=-0畅446,P<0畅05),但不与反映左心室收缩功能的EF值相关.结论血浆CTGF浓度可作为一种新的心衰诊断标志物应用于临床.     

沙利度胺联合化疗治疗急性白血病对血浆VEGF及其受体水平的影响

目的 观察沙利度胺联合化疗治疗急性白血病的临床疗效及其对血浆血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)水平的影响.方法 急性白血病患者36例,随机分为实验组及对照组各18例.每组均予以常规化疗方案标准剂量化疗,实验组同时长期口服沙利度胺100 mg/d.治疗前及治疗后8周分别采集外周血用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆VEGF和VEGFR含量.结果 实验组与对照组的有效率分别为88.9%和77.8%,差异有统计学意义(χ2=4.103,P<0.05).血浆VEGF水平实验组与对照组治疗前结果(389.78±249.94 pg/ml,318.54±125.78 pg/ml)分别与健康组(132.91±26.66 pg/ml)相比差异有统计学意义(t=3.141,t=3.024,P<0.01,P<0.01);实验组与对照组治疗后结果(211.74±36.72 pg/ml,288.02±31.77 pg/ml)分别与健康组相比差异有统计学意义(t=2.413,t=2.324,P<0.05,P<0.05);实验组与对照组治疗前相比差异无统计学意义(t=1.384,P>0.05);实验组与对照组治疗后相比差异有统计学意义(t=2.793,P<0.05).血浆VEGFR水平实验组与对照组治疗前结果(2 490.75±1 695.9 pg/ml,2 322.78±1 105.87 pg/ml)分别与健康组(1 134.98±378.45 pg/ml)相比差异有统计学意义(t=2.914,t=2.783,P<0.01,P<0.01);实验组与对照组治疗后结果(1359.71±390.24 pg/ml,1753.89±337.04 pg/ml)分别与健康组相比差异有统计学意义(t=2.572,t=2.447,P<0.05,P<0.05);实验组与对照组治疗前相比差异无统计学意义(t=1.276,P>0.05);实验组与对照组治疗后相比差异有统计学意义(t=2.486,P<0.05).直线相关分析发现血浆VEGF及VEGFR水平与临床疗效间具有一定的相关性(r=0.613,r=0.575,P<0.05).结论 沙利度胺联合化疗可提高急性白血病患者的缓解率,其作用机制可能通过抑制血浆VEGF及其受体水平的表达而发挥其抗血管增殖的抗白血病作用.     

多发性骨髓瘤细胞对共培养内皮细胞分化的影响及其机制的初步研究

目的 研究人多发性骨髓瘤（MM）细胞对内皮细胞分化为管状结构的影响及调控脑源性神经营养因子（BDNF）分泌的初步机制。方法 采用人MM细胞系RPM18226细胞或原代MM细胞与人脐静脉内皮细胞（HUVEC）混合共培养和隔离共培养；以同期单独培养的HUVEC为对照，对与MM细胞共培养的HUVEC进行Matrigel基质管状结构形成实验，评价MM细胞对HUVEC血管新生能力的影响；采用ELISA方法检测两种共培养体系培养上清中BDNF的含量；用抗人CD29和CD18的单克隆抗体（单抗）对MM细胞进行预处理后，在混合共培养的基础上进行管状结构形成实验并检测培养上清中BDNF的含量。结果 与同期单独培养的HUVEC相比，与RPM18226细胞隔离共培养的HUVEC形成的管状结构数量明显增多，但增加幅度（约75％）低于混合共培养体系（约113％）。原代MM细胞促HUVEC管状结构形成效应在隔离共培养体系和混合共培养体系分别为138％与188％。HUVEC单独培养上清中BDNF的含量为（12．4±5．1）ng／ml，RPM18226细胞混合共培养上清和隔离共培养上清的BDNF含量分别为（38．5±8．2）ng／ml和（31．6±7．2）ng／ml；原代MM细胞混合共培养上清和隔离共培养上清的BDNF含量分别为（37．1±8．7）ng／ml和（27．9±7．6）ng／ml。两种黏附分子抗体能不同程度地阻断混合共培养体系中MM细胞促HUVEC管状结构形成效应，并抑制BDNF的分泌。结论 MM细胞可刺激共培养HUVEC分化为管状结构；并受到MM细胞与HUVEC间可溶性细胞因子和黏附作用的共同调控，其调控机制与BDNF相关。     

复方苦参注射液联合热疗抗血管生成作用的实验研究

目的探讨复方苦参注射液联合热疗对体内外血管生成的抑制作用。方法采用MTT法观察复方苦参注射液联合热疗对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、人结肠癌LOVO细胞增殖的影响;采用transwell板,观察复方苦参注射液对HUVEC迁移的影响;采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,观察复方苦参注射液对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的抑制作用。结果复方苦参注射液在6.25~200μL/mL时具有抑制HUVEC增殖的作用(细胞存活率82.2%~32.5%),与浓度呈负相关(相关系数r及P值分别为-0.972、0.001),此浓度范围内对人结肠癌LOVO细胞增殖的抑制明显低于对HUVEC的抑制,具有明显的抗血管生成作用。12.5μL/mL和25μL/mL复方苦参注射液联合热疗在体外具有抗血管生成的协同效应,6.25μL/mL、50μL/mL、100μL/mL和200μL/mL复方苦参注射液联合热疗在体外具有抗血管生成的次加效应。复方苦参注射液在3.125~25μL/mL时具有抑制HUVEC迁移的作用,在12.5~50μL/mL时对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管具有明显的抑制作用。结论小剂量复方苦参注射液在体内外具有抑制血管生成作用,联合热疗具有协同或次加效应。     

增生性糖尿病视网膜病变患者玻璃体、房水和血浆中VEGF表达与IL-6，IL-8和TNF-α水平的相关性研究

目的　探讨增生性糖尿病视网膜病变（proliferative diabetic retinopathy,PDR）患者玻璃体、房水、血浆中血管内皮生长因子（VEGF）和白细胞介素6(IL-6),白细胞介素8(IL-8),肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的相关性。方法　选择2016 年5 月~2019 年6 月鄂东医疗集团中心医院眼科收治的76 例行玻璃体切割治疗的PDR 患者（PDR 组）和42 例行超声乳化白内障吸除术治疗的白内障患者（对照组）。PDR 组采集血浆、房水和玻璃体标本,对照组采集血浆和房水,采用酶联免疫吸附法检测VEGF,IL-6,IL-8 和TNF-α 水平。比较PDR 组、对照组血浆、房水中VEGF,IL-6,IL-8 和TNF-α 水平差异以及PDR 组血浆、房水和玻璃体VEGF,IL-6,IL-8 和TNF-α 水平差异。Pearson 相关性分析PDR 组血浆、房水和玻璃体中VEGF 与IL-6,IL-8,TNF-α 相关性。结果　PDR 组血浆、房水中VEGF,IL-6,IL-8 和TNF-α 水平分别为53.51±10.62 pg/ml,125.64±15.34 pg/ml,102.35±11.35 pg/ml,12.65±3.26 ng/ml和332.16±26.35 pg/ml,295.25±21.43 pg/ml,261.35±25.49 pg/ml,21.26±4.26 ng/ml,均高于对照组,差异有统计学意义（t=22.418,37.409,42.754,15.959;71.433,54.329,41.620,5.435,均P ＜ 0.05）。PDR 患者玻璃体VEGF,IL-6,IL-8 和TNF-α 水平高于房水和血浆（F=46.359,58.265,47.265,39.562,P ＜ 0.05）,房水VEGF,IL-6,IL-8和TNF-α 水平高于血浆（均P ＜ 0.05）,差异均有统计学意义。Pearson 相关性分析结果显示PDR 患者玻璃体 VEGF水平与IL-6,IL-8,TNF-α 呈正相关（r=0.841,0.800,0.787,均P ＜ 0.05）,血浆、房水中VEGF 水平与IL-6,IL-8和TNF-α 无相关性（r=0.461,0.565,0.439;0.218,0.131,0.210,均P ＞ 0.05）。结论　玻璃体是PDR 视网膜病理事件的主要场所,IL-6,IL-8,TNF-α 可能通过促使VEGF 表达参与PDR 视网膜新生血管形成过程。     

多发性骨髓瘤细胞脑源性神经营养因子对血管新生作用的研究

目的研究多发性骨髓瘤(MM)细胞脑源性神经营养因子(BDNF)的表达水平及其与MM细胞诱导的血管新生的关系。方法采用RT-PCR法、Western blot法及ELISA法检测MM细胞系KM3、RPMI8226细胞BDNF的表达及分泌。采用MTT法观察MM细胞培养上清液对脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的作用;用改良的Boyden小室法观察MM细胞培养上清液对HUVEC迁移的影响;采用体外小管形成实验,观察MM细胞培养上清液对HUVEC分化的影响。结果KM3、RPMI8226细胞不仅表达BDNF mRNA,也表达和分泌BDNF蛋白,BDNF的基础分泌水平在其生物学作用范围内。KM3、RPMI8226细胞培养上清液均可明显促进HUVEC增殖,含50.0%KM3细胞培养上清液组和完全KM3细胞培养上清液组HUVEC数分别为对照组的(1.85±0.23)倍和(2.16±0.29)倍(P<0.05),抗人类BDNF中和抗体可部分抑制其促增殖活性;含50.0%KM3细胞培养上清液组HUVEC迁移指数为1.85±0.23,完全KM3细胞培养上清液组HUVEC迁移指数为2.16±0.29,与对照组比较,差异有统计学意义(P值均<0.05),并可明显促进基质胶中网状毛细血管形成(P<0.01),抗BDNF中和抗体可明显抑制其作用。结论MM细胞表达和分泌BDNF,BDNF可能参与MM细胞诱导的血管新生。     

脑源性神经营养因子通过AKT和ERK1/2信号通路诱导内皮细胞血管生成

本研究探讨脑源性神经营养因子（BDNF）促进血管新生的作用及其参与的信号通路,为抗肿瘤血管生成的研究提供新的实验依据。以人脐静脉内皮细胞为对象,采用Western blot方法检测细胞内磷酸化Akt、ERK1/2蛋白质的表达;采用Transwell小室迁移实验和管腔形成实验评价体外内皮细胞血管新生的能力,MTT法检测内皮细胞增殖活性,FITC-Annexin-Ⅴ/PI双染流式细胞术分析细胞调亡。结果表明：BDNF以时间依赖性的方式激活PI3K/Akt和MEK1/ERK信号通路。应用PI3K激酶抑制剂Ly294002、MEK1激酶抑制剂PD98059可以明显阻断BDNF对PI3K/Akt、MEK1/ERK信号通路的激活。100ng/ml的BDNF体外促内皮细胞血管新生能力与25ng/ml血管内皮生长因子（VEGF）相当,其中BDNF诱导的细胞迁移分别被Ly294002和PD98059阻断,其抑制率分别约为74%和36%;同样,Ly294002、PD98059可部分阻断BDNF诱导的小管形成效应,其阻断率分别约57%和37%;而BDNF的促增殖效应仅被PD98059拮抗,抑制凋亡效应仅受Ly294002影响。结论：BDNF在体外有促血管新生的作用。PI3K/Akt和MEK1/ERK信号通路以不同机制共同调节这一过程,其中PI3K/Akt信号通路起着更为重要的调节作用。     

AKT/eNOS信号途径在脑源性神经营养因子诱导内皮细胞血管新生中的作用

目的探讨脑源性神经营养因子（BDNF）促进内皮细胞血管新生的机制及其参与的信号通路，为抗多发性骨髓瘤血管生成的研究提供新的实验依据。方法以人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为对象，采用Western blot印迹法检测细胞内磷酸化丝／苏氨酸激酶（AKT）、内皮细胞一氧化氮合酶（eNOS）蛋白质的表达；采用Transwell小室迁移实验、小管形成实验评价体外内皮细胞血管新生的能力，小鼠体内Matrigel plug实验评估体内内皮细胞血管新生的能力，采用硝酸还原酶法检测HUVEC上清中内皮细胞源性一氧化氮（eNO）的含量，FITC-Annexin V／PI双染色流式细胞术分析细胞凋亡。结果BDNF以时间一浓度依赖性的方式激活P13K／AKT／eNOS信号通路，应用PI3K激酶抑制剂Ly294002可以明显阻断BDNF刺激后内皮细胞eNO的生成。在体外，BDNF诱导的细胞迁移和小管形成效应均分别能被Ly294002和L-NAME（NOS抑制剂）阻断；而BDNF的抑制凋亡效应与L-NAME无关，仅受Ly294002影响；在体内，经L-NAME喂养的小鼠皮下Matrigel栓中的新生血管数量与未经L-NAME喂养的小鼠相比显著减少。结论BDNF通过AKT／eNOS途径活化介导血管薪生，这可能成为治疗多发性骨髓瘤血管新生的新靶点。     

z-Guggulsterone, a constituent of Ayurvedic medicinal plant Commiphora mukul, inhibits angiogenesis in vitro and in vivo.

Our previous studies have shown that z-guggulsterone, a constituent of Indian Ayurvedic medicinal plant Commiphora mukul, inhibits the growth of human prostate cancer cells by causing apoptosis. We now report a novel response to z-guggulsterone involving the inhibition of angiogenesis in vitro and in vivo. The z-guggulsterone treatment inhibited capillary-like tube formation (in vitro neovascularization) by human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) and migration by HUVEC and DU145 human prostate cancer cells in a concentration- and time-dependent manner. The z- and E-isomers of guggulsterone seemed equipotent as inhibitors of HUVEC tube formation. The z-guggulsterone-mediated inhibition of angiogenesis in vitro correlated with the suppression of secretion of proangiogenic growth factors [e.g., vascular endothelial growth factor (VEGF) and granulocyte colony-stimulating factor], down-regulation of VEGF receptor 2 (VEGF-R2) protein level, and inactivation of Akt. The z-guggulsterone-mediated suppression of DU145 cell migration was increased by knockdown of VEGF-R2 protein level. Ectopic expression of constitutively active Akt in DU145 cells conferred protection against z-guggulsterone-mediated inhibition of cell migration. Oral gavage of 1 mg z-guggulsterone/d (five times/wk) to male nude mice inhibited in vivo angiogenesis in DU145-Matrigel plug assay as evidenced by a statistically significant decrease in tumor burden, microvessel area (staining for angiogenic markers factor VIII and CD31), and VEGF-R2 protein expression. In conclusion, the present study reveals that z-guggulsterone inhibits angiogenesis by suppressing the VEGF-VEGF-R2-Akt signaling axis. Together, our results provide compelling rationale for further preclinical and clinical investigation of z-guggulsterone for its efficacy against prostate cancer.     

干细胞因子对内皮细胞增殖、迁移、管状形成能力的影响及对CD133+细胞的趋化效应

目的 探讨干细胞因子(SCF)对脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移、管状形成能力的影响,以及对CD133+细胞的趋化效应.方法 应用MTT及CCK-8增殖分析法检测HUVEC在不同细胞因子[空白试剂、SCF、血管内皮生长因子(VEGF)、抗人SCF、人IgG]条件下增殖能力的差异性;采用细胞划痕法与Matrigel体外三维成型法分别检测内皮细胞的增殖、迁移和管状形成能力;并应用Transwell技术检测不同细胞因子诱导的CD133+细胞体外趋化效应.结果 MTT及CCK-8增殖分析结果显示SCF无HUVEC增殖刺激活性;SCF可显著提升HUVEC迁移能力;SCF呈剂量依赖性增强HUVEC 管状形成能力,在适宜浓度SCF(100 ng/ml)作用下,HUVEC完整小管形成数量[(30.0 ±3.4)/105HUVEC]显著高于空白试剂组[(5.0±2.6)/105HUVEC,P<0.01];SCF可高效诱导CDl33+细胞体外趋化,SCF组[(118.0±6.5)/104CD133+细胞]Transwell小室跨膜迁移细胞数显著高于空白试剂组[(47.0±4.7)/104CDl33+细胞,P<0.01].结论 SCF可显著增强HUVEC的迁移及管状形成能力,并有效诱导CD133+细胞体外趋化,提示SCF/c-kit信号转导在内皮细胞及其祖细胞的血管新生与血管发生过程中可能发挥重要作用.

Abstract：

Objective To explore the effects of stem cell factor (SCF) on proliferation, transmigration, capillary tube formation of human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) and on the chemotaxis of CD133+ cells. Methods In the presence of blank control, SCF, vascular endothelial growth factor ( VEGF) , anti-human SCF (anti-SCF) or human IgG, the difference in proliferation capacity of HUVEC was analyzed by MTT and CCK-8 methods, and wound scratch assay and three-diamensional in vitro Matrigel assay were used for transmigration and capillary tube formation of HUVEC, respectively. In addition, the chemotaxis of CD133 + cells sorted from human umbilical cord blood by flow cytometry was investigated by Transwell migration assay. Results SCF didn't improve the proliferative capacity of HUVEC, but significantly enhanced the transmigration capacity, and increased capillary tube formation in a dose-dependent manner.The number of intact tubules [(30.0 ±3.4)/105 HUVEC] formed by HUVECs in the presence of the optimal concentration of SCF (100 ng/ml) was remarkably higher than that in blank control group [(5.0 ±2.6)/105HUVEC,P <0.01]. SCF also significantly induced a chemotactic response of CD 133+ cells, the transmembrane migration cell number into Transwell lower chamber was significantly higher in SCF group [(118.0 ±6.5)/104 CD133+ cells] than in blank control group [(47. 0 ±4. 7)/104 CD133 + cells,P <0.01]. Conclusions SCF significantly promotes the transmigration and capillary tube formation of HUVEC, and induces a chemotactic response of CD133 + cells. SCF/c-kit signaling possibly plays a critical role in regulating angiogenesis of vascular endothelial cells and vasculogenesis of endothelial progenitor cells.     

表达脑源性神经营养因子的人多发性骨髓瘤小鼠模型的建立

过去的研究证实脑源性神经营养因子(BDNF)在体外具有促进多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖并诱导MM血管新生的能力。本研究探讨BDNF/TrkB途径是否为治疗MM的潜在靶点,并比较两种途径建立人MMNOD/SCID小鼠模型的优缺点,为深入探索治疗MM的新靶点奠定基础。选择糖尿病抵抗/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠,通过皮下注射或尾静脉注射人骨髓瘤细胞株RPMI8226建立两种异体移植动物模型。观察荷瘤后小鼠的生长状态,测量皮下瘤块的体积;荷瘤后3周,每周经眼眶后静脉丛采血,检测血清中人源λ轻链含量、Ca2 浓度和血浆中人源BDNF浓度,并计数红细胞;小鼠死后,采用组织学方法观察瘤细胞的形态特征,流式细胞术检测小鼠外周血和骨髓中人源性CD38 细胞比例,采用计算机X线数字摄影观察小鼠全身骨密度的改变和骨质破坏情况。结果表明:皮下注射模型的成瘤率高(5/5),具有多种与浆细胞瘤相似的病理学特征,但其骨髓中未检测到MM细胞,血清中钙离子浓度不高,M蛋白浓度升高不明显且未发现溶骨性损害的组织学和影像学证据。尾静脉注射模型成瘤率相对较低(4/7),骨髓中可检测到呈浸润生长的人CD38 细胞;而且在荷瘤3周后,血清中即可检测到人源M蛋白;随着肿瘤的生长,M蛋白水平、钙离子浓度逐渐升高,并有溶骨性损害的影像学证据。两种模型血浆中人源BDNF的水平亦逐渐升高,9周时浓度分别为(73±11)pg/ml和(105±18)pg/ml。结论:本研究成功建立了两种高表达BDNF的MM荷瘤NOD/SCID小鼠模型,两种模型相互结合应用,为探索MM治疗的新靶点BDNF/TrkB提供了合适的动物模型。     

脑源性神经营养因子单克隆抗体在NOD/SCID小鼠骨髓瘤模型体内的抗瘤活性

目的以多发性骨髓瘤（MM）细胞株RPMI8226异体移植小鼠为动物模型，评估抗脑源性神经营养因子（BDNF）单克隆抗体（单抗）在体内的抗肿瘤活性。方法选择糖尿病抵抗／重症联合免疫缺陷（NOD／SCID）小鼠，皮下注射RPMI8226细胞建立骨髓瘤细胞异体移植动物模型。以20μg／只的BDNF单抗剂量于接种肿瘤细胞后第1、2、3天腹腔内注射或者以100μg／只的剂量于检测到瘤体后每周1次腹腔内注射。采用组织学方法检测瘤细胞的形态特征，免疫化学染色法分析瘤组织的微血管密度（MVD）。用^3H—TdR掺入法和Matrigel网状结构形成实验分别检测BDNF单抗对RPMI8226细胞体外增殖和PRMI8226细胞诱导的内皮细胞血管新生的影响。结果在NOD／SCID小鼠体内建立的骨髓瘤细胞异体移植动物模型，其皮下种植的成瘤率高，具有多种与浆细胞瘤相似的病理学特征。未治疗组小鼠皮下注射RPMI8226细胞后（20±2）d可检测到皮下肿瘤；接种肿瘤细胞后连续3d注射20μgBDNF单抗的治疗组，小鼠平均无肿瘤生存期延长为（30±6）d，而相应对照抗体治疗组无肿瘤生存期为（22±3）d，与未治疗组相比差异无统计学意义；同时，其中位存活时间为（57±7）d，与相应的对照抗体治疗组[（48±4）d]相比明显延长（P〈0．05）；治疗组小鼠自然死亡时肿瘤体积为（157．94-21．6）mm^3，较对照抗体组[（405．5±35．2）mm^3]明显缩小（P〈0．05）。对于接种肿瘤细胞后第27天起每周注射1次BDNF单抗（100μg／次）的治疗组，肿瘤的生长亦受到部分抑制，相应对照抗体组与未治疗组相比肿瘤生长差异无统计学意义；同时在BDNF单抗治疗组瘤体的组织切片中，观察到部分瘤细胞出现凋亡的形态学表现，坏死区被纤维结缔组织浸润。未治疗组瘤块的MVD为38个／0．216mm^2，BDNF单抗治疗组（100μg／次）MVD为11个／0．216mm^2，与未治疗组相比对照抗体治疗组瘤块的MVD没有明显下降（35个／0．216mm^2）（P〉0．05）。在体外，BDNF单抗可显著抑制RPMI8226细胞的增殖和其诱导的内皮细胞网状结构形成（抑制率为68．2％），而相应的对照抗体却无此效应。结论BDNF单抗可抑制皮下浆细胞瘤的生长和血管新生，BDNF是治疗MM的潜在靶点。     

Serum levels of endostatin, vascular endothelial growth factor (VEGF) and hepatocyte growth factor (HGF) in patients with acute myocardial infarction undergoing early reperfusion therapy

Angiogenesis is controlled by anti-angiogenic factors as well as by angiogenic factors, such as VEGF (vascular endothelial growth factor) and HGF (hepatocyte growth factor). Endostatin, a potent endogenous angiogenesis inhibitor, is known to inhibit endothelial proliferation and suppress tumour growth. However, to date, little is known about the pathophysiology of endostatin in ischaemia/reperfusion. To investigate the mechanisms of angiogenesis induced by myocardial ischaemia/reperfusion in more detail, we studied the circulating levels of endostatin, VEGF and HGF in 17 patients with acute myocardial infarction, who underwent early reperfusion therapy. In all patients, serum endostatin, VEGF and HGF levels before reperfusion were increased significantly compared with those in 17 control subjects (endostatin, 49.2+/-11.7 ng/ml, but not detectable in controls; VEGF, 685.6+/-150.3 pg/ml compared with 173.7+/-33.6 pg/ml; HGF, 3638+/-1285 pg/ml compared with 59+/-13 pg/ml; values are means+/-S.E.M.). After reperfusion, the serum endostatin and VEGF levels decreased significantly, but still remained higher than those in control subjects (endostatin, 19.6+/-7.0 ng/ml; VEGF, 284.2+/-90.2 pg/ml). In contrast, serum HGF levels increased significantly (15 146+/-2230 pg/ml) after reperfusion. These data indicated that serum levels of endostatin changed in parallel with those of VEGF in response to myocardial ischaemia/reperfusion, and the marked increase in serum HGF levels after reperfusion seemed to be, at least in part, due to heparin administration. Our data offer a possible anti-endostatin therapy in patients with acute myocardial infarction to facilitate collateral vessel formation.