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相似文献
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1.
目的探讨糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)对体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增生及成骨分化的影响及可能机制。方法采用全骨髓法分离培养4周龄SD大鼠的BMSCs。将BMSCs随机分为成骨诱导液、BSA组、AGEs3组,Western blot法检测AGEs对BMSCs成骨分化过程中β-catenin、OSX、RUNX2、RAGE (AGE受体)蛋白表达量的影响,茜素红染色观察AGEs对BMSCs成骨分化过程中矿化的影响。抑制RAGE后实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)及Western blot法再次测定上述指标水平。结果 0. 2 g/L AGEs作用于体外培养SD大鼠BMSCs,上调RAGE蛋白表达(0. 88±0. 04),β-catenin、OSX、RUNX2蛋白表达降低(分别为0. 21±0. 02,0. 25±0. 03和0. 21±0. 01,P<0. 05)。RAGE中和抗体阻断RAGE作用后,AGE+RAGE中和抗体组RAGE蛋白表达下调(0. 30±0. 03),β-catenin、OSX、RUNX2蛋白表达增高(0. 90±0. 02,0. 84±0. 03和0. 88±0. 02,P<0. 05)。结论 AGEs通过Wnt/β-catenin信号通路抑制BMSCs成骨分化。  相似文献   

2.
目的探讨体外原代培养脐带基质间充质细胞(UMC)和人皮肤成纤维细胞(HSF)的方法。方法用Ⅳ型胶原蛋白酶、Ⅰ型脱氧核糖核酸酶和0.25%胰蛋白酶消化法原代分离培养UMC细胞,用组织块贴壁法原代分离培养HSF细胞,镜下观察细胞的培养过程和生长状态。结果脐带组织分离培养第3天,有少量UMC贴壁生长,细胞膜周围有折光性,形态类似于成纤维细胞;皮肤组织块贴壁培养第7天,有HSF爬出,呈长梭形、不规则三角形。随着细胞培养时间延长,UMC和HSF数量逐渐增多,细胞生长状态良好。结论应用酶消化法和组织块贴壁法可成功分离培养出UMC和HSF。  相似文献   

3.
目的:探讨Wnt/β-catenin基因和多发性骨髓瘤骨病的关系。方法:分离培养多发性骨髓瘤患者和正常人的骨髓间充质干细胞(MSCs),体外诱导分化成骨细胞,茜素红实验检测矿化物沉积、荧光定量RT-PCR方法检成骨指标(OPN、OC、ALP、Cbfal)和Wnt/β-catenin mRNA表达,分析MSCs细胞成骨能力变化及两组间Wnt/β-catenin mRNA表达差异。结果:骨髓MSCs体外成骨诱导后,茜素红染色阳性,呈现明显红色钙化结节;MSCs体外诱导成骨细胞,试验组与对照组比较,成骨指标OPN、OC、ALP、Cbfαl mRNA表达降低(P<0.05);骨髓MSCs体外成骨诱导后β-catenin mRNA表达降低(P<0.05)。结论:骨髓MSCs体外可成功诱导分化为成骨细胞;多发性骨髓瘤患者MSCs向成骨细胞分化潜能比正常人降低,Wnt/β-catenin可作为多发性骨髓瘤骨病潜在治疗靶点。  相似文献   

4.
目的探讨输入人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUMscs)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠ALI的治疗作用。方法将30只Wistar大鼠随机分为3组:正常对照组、ALI模型组和HUMSCs移植组,每组10只。健康大鼠LPS气管滴入方法建立ALI模型,尾静脉输入HUMSCs。输入7h后,处死各组大鼠,取肺组织行病理学观察,测定肺湿/干重比(W/D),ELISA法测定肺组织匀浆中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-1β的含量。结果肺组织病理学显示:ALI模型组大鼠肺组织呈现典型的炎症病理变化,包括肺泡充血、水肿、出血,肺泡腔和血管壁中性粒细胞浸润,肺泡壁增厚等肺损伤性病变;HUMSCs移植组大鼠肺组织损伤程度明显减轻。与正常对照组比较,ALI模型组W/D、TNF-α和IL-1β含量明显升高(P〈0.05)。与Au模型组比较,HUMSCs移植组W/D、TNF-α和IL-1β含量明显降低(P〈0.05)。结论输入HUMSCs能减轻ALI,并能降低肺W/D和肺组织TNF-α及IL-1β含量。  相似文献   

5.
目的探讨糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)对体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增生及成骨分化的影响及可能机制.方法采用全骨髓法分离培养4周龄SD大鼠的BMSCs.将BMSCs随机分为成骨诱导液、BSA组、AGEs3组,Western blot法检测AGEs对BMSCs成骨分化过程中β-catenin、OSX、RUNX2、RAGE(AGE受体)蛋白表达量的影响,茜素红染色观察AGEs对BMSCs成骨分化过程中矿化的影响.抑制RAGE后实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluo-rescence quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)及Western blot法再次测定上述指标水平.结果0.2 g/L AGEs作用于体外培养SD大鼠BMSCs,上调RAGE蛋白表达(0.88±0.04),β-catenin、OSX、RUNX2蛋白表达降低(分别为0.21±0.02,0.25±0.03和0.21±0.01,P<0.05).RAGE中和抗体阻断RAGE作用后,AGE+RAGE中和抗体组RAGE蛋白表达下调(0.30±0.03),β-catenin、OSX、RUNX2蛋白表达增高(0.90±0.02,0.84±0.03和0.88±0.02,P<0.05).结论AGEs通过Wnt/β-catenin信号通路抑制BMSCs成骨分化.  相似文献   

6.
目的探讨体外2%氧条件下培养骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)培养液对成年大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成情况的影响。方法分离Wistar大鼠下肢骨获取MSCs进行培养,收集培养3、6、9、24h培养液,用其刺激成年Wistar大鼠的心肌成纤维细胞30h,采用MTT法和^3H-脯氨酸掺入法检测心肌成纤维细胞的增殖及胶原合成情况。结果经3、6、9h的MSCs条件培养液刺激后的心肌成纤维细胞^3H-脯氨酸掺入量与无血清对照组比较显著增加,分别增加23%(P〈0.01)、44%(P〈0.01)和31%(P〈0.01),而24h组与无血清对照组比较差异无显著性:MSCs条件培养液刺激后的心肌成纤维细胞MTT结果与对照组比较差异无显著性。结论MSCs低氧条件培养液可以促进心肌成纤维细胞胶原合成,改善心功能。  相似文献   

7.
目的:比较人脐带间充质干细胞(human amniotic membrane-derived mesenchymal stem cells,hAM-MSCs)和人羊膜间充质干细胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)对模型大鼠肝硬化的治疗效果.方法:分离培养hAM-MSCs和hUC-MSCs,流式检测CD29、CD44和CD34.CCl4诱导大鼠肝硬化模型,在第8周时,杀死5只大鼠做病理检测以确诊为肝硬化.30只成模大鼠随机分为脐带干细胞组(n=10)、羊膜干细胞组(n=10)和对照组(n=10),分别注入hAM-MSCs、hUC-MSCs2mL(细胞数量2×106)和等量生理盐水.细胞移植前和移植4wk后,检测大鼠肝功能;肝组织HE染色、Masson染色;免疫组织化学法检测α-SMA在肝脏中的表达.结果:2种细胞表达CD29、CD44,不表达CD34.移植后,与对照组相比,脐带干细胞组和羊膜干细胞组ALT和AST明显降低(204.6±16.4,195.6±21.2vs539.8±36.2;180.1±25.2,167.5±19.0vs337.4±23.4,P<0.05);胶原沉积减少;组织病理学评分有显著性差异(P<0.05);肝脏α-SMA表达量减少(130.6±3.0,127.0±2.6vs152.2±5.4,P<0.05).脐带干细胞组和羊膜干细胞组的肝功能、肝组织病理学评分及肝脏α-SMA表达量均无明显差异.结论:hAM-MSCs和hUC-MSCs能有效改善肝硬化大鼠模型的肝功能和肝硬化程度,两者治疗效果无明显差异.  相似文献   

8.
人胚肺间充质干细胞对放射性肺炎肺组织损伤的修复作用   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 研究人胚肺间充质干细胞(MSC)对放射性肺炎肺组织的修复作用.方法 取3~5个月的流产胎儿,按照人骨髓MSC的体外培养方法,获得贴壁的人胚肺细胞,观察其形态、细胞周期和体外诱导分化潜能.通过培养放射性肺炎肺泡上皮细胞,利用细胞培养技术体外测定人胚肺MSC修复放射损伤肺组织的能力,对比检测实验及对照组TGF-β_1的含量.结果 人胚肺MSC可在体外扩增培养,可传至17代以上,其形态及生长特点不发生明显改变,处于G_0/G_1期的细胞多,具有典型的干细胞增殖特点.其免疫表型与骨髓来源的MSC相似,并能有效调控放射性损伤后的肺泡上皮的生长.结论 人胚肺MSC能有效修促进肺泡上皮细胞的生长,且能对放射性损伤后肺上皮细胞进行修复.  相似文献   

9.
目的探讨人真皮间充质干细胞(hDMSCS)对中老年增生性瘢痕形成早期成纤维细胞的防治机制。方法中老年增生性瘢痕患者12例,按瘢痕形成时间分为6个月组、1年组、2年组,每组各4例,术中留取瘢痕组织标本,分离瘢痕成纤维细胞。采用非接触Transwell共培养体系培养hDMSCS和瘢痕成纤维细胞21 d,瘢痕成纤维细胞用普通6孔板培养相同时间为对照,RT-PCR和Western印迹检测纤维化相关因子α-血管平滑肌肌动蛋白(SMA)、核心蛋白多糖(DCN)mRNA和蛋白表达情况。结果 hDMSCS经诱导成功向成脂、成软骨、成骨细胞分化,符合间充质干细胞最低鉴定标准。共培养21 d后,6个月组、1年组、2年组瘢痕成纤维细胞α-SMA、DCN mRNA及蛋白表达量与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),其中以增生性瘢痕形成早期(6个月组)α-SMA、DCN mRNA和蛋白变化最为明显。结论 hDMSCS可下调瘢痕成纤维细胞α-SMA mRNA和蛋白的表达,上调DCN mRNA和蛋白的表达,且对早期成纤维细胞作用明显。  相似文献   

10.
心力衰竭(HF)是各种心血管疾病的终末阶段,具有高患病率和病死率的流行病学特点.庞大的患者群体(我国约450万)和低生存率的预后特征给该疾病的治疗带来了巨大的挑战.目前HF的治疗包括药物治疗和非药物治疗.非药物治疗主要有心脏移植、左心室辅助装置置入术及细胞治疗等.近年来,包括间充质干细胞治疗在内的多种细胞疗法在修复受损...  相似文献   

11.
目的探讨Toll样受体(TLR)4激活后调控Wnt/β-catenin信号通路促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)的增殖及其相关机制。方法体外培养BMSCs,应用流式细胞术鉴定BMSCs,用脂多糖(LPS)剌激BMSCs,应用CCK-8法检测BMSCs的增殖能力;采用Western印迹检测大鼠BMSCs中TLR4蛋白表达;实验分为对照组、LPS组、TLR4阻断剂+LPS组、Wnt通路经典抑制剂(DKK-1)+LPS组。应用实时荧光定量PCR法检测BMSCs中β-catenin、c-myc及细胞周期蛋白(cyclin)D1 mRNA表达,应用Western印迹检测蛋白表达。结果与对照组相比,LPS组BMSCs的细胞增殖能力明显增强,TLR4呈高表达(均P<0.01);LPS组β-catenin、c-myc和cyclin D1表达显著增加(P<0.01)。与LPS组相比,加入TLR4阻断剂后,β-catenin、c-myc和cyclin D1表达显著下调(P<0.05,P<0.01),加入DDK-1后,β-catenin、c-myc和cyclin D1表达显著降低(均P<0.01)。结论 TLR4促进BMSCs的增殖,其机制可能与调节Wnt/β-catenin信号通路有关。  相似文献   

12.
目的:观察多次静脉输注人脐带间充质干细胞(hu MSCs)对大鼠的毒性反应。方法:1贴块法培养hu MSCs;流式细胞仪鉴定第4代hu MSCs特异性表面抗原;标准试剂盒鉴定第4代hu MSCs向脂肪细胞和成骨细胞分化的潜能;2182~203g的SD大鼠分为对照组、0.9%氯化钠组和干细胞组,各8只,雌雄各50%。3干细胞组分别于第1、4和15天时经尾静脉注射(2.5×106)个/kg体质量的第4代hu MSCs,0.9%氯化钠组于同等时间注射与细胞悬液等量0.9%氯化钠液。4第3次注射转染RFP基因(中文)的hu MSCs后11天,腹主动脉取血,检测和比较血常规和生化指标;取脑、心、肺、肝及肾进行病理学检查;荧光显微镜观察器官组织中表达RFP的hu MSCs细胞分布情况,流式细胞仪检测骨髓中表达RFP的hu MSCs;ELISA检测血清γ-IFN、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10及IL-12含量。结果:1第4代hu MSCs特异性表面抗原CD73、CD90和CD105表达强阳性,纯度分别为98.7%、99.6%和98.6%,而CD34、CD45、CD11b、CD19、CD79a和HLA-DR的表达水平为阴性,CD14表达水平为23.1%;hu MSCs分化成脂细胞和成骨细胞的比例均为99%;2注射3次干细胞后实验动物全部存活,干细胞组部分血常规和生化指标与0.9%氯化钠组相比有差异,但与对照组相比,只有PLT明显降低、CHOL明显升高;3干细胞组脑、心、肺、肝、肾的形态和组织病理学无明显改变;(4)干细胞组的器官组织和骨髓中未检测到表达RFP的hu MSCs;(5)干细胞组血清IL-8水平明显升高。结论:多次尾静脉注射hu MSCs对大鼠没有明显的毒性反应。  相似文献   

13.
目的 探讨Wnt/β-catenin信号通路在大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMMSCs)分化为心肌细胞过程中的作用。 方法 选BMMSCs为种子细胞培养到第3代,分为血管紧张素(Ang) Ⅱ+ 5-氮杂胞苷(5-aza)组及对照组,共诱导24 h,再用完全培养液共培养4周。用倒置显微镜、MTT法检测、流式细胞、免疫荧光染色、透射电镜依次检测细胞的形态变化、生长能力、诱导分化率、α肌动蛋白(α-actin)的表达以及超微结构,用Western blot法检测诱导后Wnt及其下游分子β-catenin的表达水平。 结果 BMMSCs原代培养时呈现多种形态,经过传代体积增大,诱导后呈长梭形且均匀一致生长。MTT结果表明AngⅡ + 5-aza组细胞的生长速度比对照组快。流式细胞检测示:AngⅡ + 5-aza组的心肌细胞诱导率是(31.2 ± 1.7)%,而对照组是(1.1± 0.2)%。免疫荧光染色结果示AngⅡ + 5-aza组诱导后的BMMSCs阳性表达α-actin。透射电镜观察可见肌丝和缝隙连接。Western blot提示AngⅡ + 5-aza组的Wnt以及β-catenin的表达明显高于对照组(P < 0.05)。 结论 AngⅡ+ 5-aza在诱导BMMSCs向心肌细胞的分化中有促进作用,其可能与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。  相似文献   

14.
人脐带间充质干细胞的分离培养及成脂成骨分化   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的建立小胎龄人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)的分离和培养方法,探讨hUCMSCs的成脂、成骨分化潜能。方法采用Ⅱ型胶原酶和透明质酸酶消化法从胎龄12~18w的流产胎儿脐带中分离hUCMSCs;流式细胞仪检测其免疫表型;应用不同因子诱导hUCMSCs向脂肪细胞及成骨细胞分化并进行鉴定。结果体外培养的hUCMSCs呈长梭形,细胞形态均一;表达CD29、CD44、CD73、CD105、CD166;不表达CD34、CD45、CD40、CD40L、CD80、CD86、HLA-DR;油红O、茜素红染色及RT-PCR证实hUCMSCs可分化为脂肪细胞和成骨细胞。结论建立了小胎龄hUCMSCs分离培养方法,证实其具有成脂、成骨分化潜能,有望成为细胞治疗及组织工程更为理想的种子细胞。  相似文献   

15.
马跃东  杜睛精  王盼  李德华 《山东医药》2011,51(12):64-66,F0003
目的研究血管内皮生长因子(VEGF)转染到人脐带源间充质干细胞(hUC-MSCs)后VEGF表达量变化及其向神经细胞诱导能力的变化。方法用Lipofectamin法,将克隆入真核表达载体pEGFP-N3中的VEGF基因转染入hUC-MSCs,观察VEGF基因的表达对hUC-MSCs的影响。结果 VEGF基因克隆入真核表达载体,转染后经Real-time PCR和Western blot证实,在mRNA和蛋白质水平均有VEGF基因的表达,不影响hUC-MSCs的生长。结论 VEGF基因导入hUC-MSCs可以稳定表达,不影响hUC-MSC的功能。  相似文献   

16.
目的体外模拟机体缺血环境,研究骨髓间充质干细胞(MSCs)旁分泌对心脏成纤维细胞胶原合成的影响,为MSCs移植机制提供实验依据。方法分离培养SD大鼠的MSCs,换以无血清培养液同时缺氧处理不同时间,然后收集MSCs的条件培养液,以此条件培养液作为刺激因子孵育 SD大鼠的心脏成纤维细胞,用MTT和3H-脯氨酸掺入观察心脏成纤维细胞的增殖及胶原合成。结果用MSCs条件培养液培养心脏成纤维细胞,3H-脯氨酸掺入明显高于对照组,缺氧6 h组的3H-脯氨酸掺入高于对照组约100%,提示MSCs条件培养液刺激心脏成纤维细胞胶原合成增加;MTT结果无显著差异,提示:MSCs条件培养液没有影响心脏成纤维细胞的增殖。结论大鼠骨髓间充质干细胞的缺氧和无血清条件培养液能够通过旁分泌刺激心脏成纤维细胞自身合成胶原能力的增强,提示移植到缺血心肌缺血区的骨髓间充质干细胞可能通过旁分泌作用影响心脏成纤维细胞的胶原合成,从而参与损伤心肌的修复。  相似文献   

17.
目的 研究人胚肺间充质干细胞(MSCs)对损伤肺组织的修复作用.方法 通过动物体内实验和细胞体外培养实验,观察人MSCs对肺上皮细胞的生长调控.结果 人胚肺MSCs能有效调控肺泡上皮的生长.结论 人胚肺MSCs及其条件培养液可以减轻人肺上皮损伤和加速修复,从而为临床治疗COPD、病毒性肺炎造成的肺损伤提供新的生物治疗方法.  相似文献   

18.
目的研究原代培养的人肺成纤维母细胞体外分化特性。方法于2006年3月至2006年10月在清华大学第一附属医院中心实验室,将原代培养的人肺成纤维母细胞分别在成骨细胞培养基(含地塞米松,维生素C和β-磷酸甘油)和成脂肪细胞培养基(含马血清,地塞米松和胰岛素)作用下进行分化诱导。组织化学方法行碱性磷酸酶和钙化斑块染色,Westernblotting法测定骨桥蛋白表达,油红染色鉴定脂肪细胞形成。结果在成骨细胞培养基诱导下,细胞内碱性磷酸酶表达增加,于第14天可见大量钙盐沉积和骨桥蛋白表达增加。在成脂肪细胞培养基作用第14天,部分细胞内出现脂肪小滴聚集。结论人肺成纤维母细胞具有多分化潜能,能够在一定条件下向成骨细胞和脂肪细胞分化,表现出骨髓间充质干细胞的特性。  相似文献   

19.
目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆的影响,检测Wnt通路相关蛋白β-catenin及细胞周期蛋白(Cyclin)D1的表达。方法模型组双侧海马区注射β-淀粉样蛋白(Aβ)_(23-35);模型对照组进行生理盐水注射;建立AD模型后,移植组进行BMSCs移植治疗;西药组造模后氢溴酸加兰他敏灌胃治疗;正常组常规鼠粮饲养。治疗30 d后Morris水迷宫测试大鼠逃避潜伏期;通过苏木素-伊红(HE)染色观察海马的神经元形态变化;免疫组化检测蛋白β-cateni及Cyclin D1的表达。结果模型组胞质游离的β-catenin表达有所降低,Wnt信号通路受到抑制,Cyclin D1的表达减少。BMSCs移植后缩短了AD模型大鼠的逃避潜伏期,其学习记忆能力有所增强;同时胞质内游离β-catenin表达增多,Wnt信号通路被激活,Cyclin D1的表达增强。结论 BMSCs移植治疗AD可能是通过激活了Wnt信号通路,从而调控细胞周期,发挥了对神经元的保护作用。  相似文献   

20.
目的 观察多囊肾致病基因2(PKD2)在骨髓间充质干细胞向脂肪细胞分化过程中的表达变化及作用.方法 培养骨髓间充质干细胞株ST2并进行成脂分化诱导,采用qRT-PCR法分别检测成脂分化诱导0、1、2、3、4、5 d时细胞中的PKD2基因.以pcDNA3.1为载体,构建PKD2过表达质粒.将ST2细胞分为对照组(转染pc...  相似文献   

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