饮水砷暴露对子代大鼠体内砷代谢的影响

目的 观察孕期和哺乳期砷暴露对子代大鼠脑、肝组织砷代谢与分布的影响,探讨砷在大鼠体内通过胎盘屏障、乳汁屏障以及血脑屏障的情况.方法 将Wistar雌性大鼠按体质量随机分为4组,每组12只,于妊娠第6天开始分别饮用含亚砷酸钠(NaAsO_2)0、10、50、100 ms/L的蒸馏水.于子代大鼠出生第0、15、28、42天,用氢化物发生-冷原子捕获-原子吸收分光光度法测定其体内肝、脑组织及母乳含砷量.结果 子代大鼠出生第0、42天,50、100 mg/L组仔鼠脑组织中iAs水平[(120.0±46.0)、(195.5±125.3),(216.5±278.4)、(176.6±151.8)ng/g]、MMA[(47.2±18.1)、(199.6±389.1),(47.4±55.2)、(82.7±79.2)ng/g]、DMA[(984.3±377.4)、(2222.1±1433.2),(998.1±368.3)、(1781.3±715.7)ng/g]均高于0 mg/L组[0、0、0,(7.3±6.6)、0、(44.2±27.4)ng/g,P均<0.05],在出生第15、28天,50、100mg/L组仔鼠脑组织中DMA水平[(270.3±73.1)、(323.9±72.7),(758.7±245.9)、(1020.6±383.6)ng/g]高于0 mg/L组[(13.9±18.1),(50.6±98.3)ns/g,P均<0.05).出生后第28、42天,10、50、100 mg/L组仔鼠肝组织中iAs[(37.5±28.1)、(268.8±246.4)、(307.2±339.9),(15.4±9.4)、(479.1±161.1)、(408.4±51.9)ng/g]、DMA水平[(594.5±148.8)、(3181.9±519.0)、(4834.2±2568.4),(1061.8±85.2)、(3697.1±553.7)、(4120.0±732.8)ng/g]明显高于0 mg/L组[(1.4±3.5)、(49.7±47.1),0、(100.4±30.2)ng/g,P均<0.05],而在出生第15天,10、50、100 mg/L组仔鼠肝组织DMA[(182.0±60.2)、(637.6±90.0)、(1458.7±196.3)ng/g]高于0 mg/L组[(13.2±20.5)ng/g,P均<0.05].脑、肝中各种形态砷化物均随饮水砷暴露浓度的增高而增加.第0、15天50、100 mg/L组母鼠乳汁中的DMA[(182.3±85.9)、(372.2±203.9),(124.2±33.1)、(244.4±196.5)ng/g]也明显高于0 mg/L组[(9.8±13.4),0ng/g,P均<0.05].且各组仔鼠脑、肝组织中各种形态砷化物均在出生后第15天出现一个降低的趋势,在第0、28、42天都旱现比较高的水平.结论 仔鼠脑、肝组织中砷及其甲基代谢物呈现剂量相关性分布.砷可通过胎盘屏障、血脑屏障对仔鼠产生不良影响,而乳汁屏障能够阻碍一定量的砷进入.     

不同剂量亚砷酸钠染毒大鼠唾液砷水平及其与血砷、尿砷间关系研究

目的 探讨不同剂量砷暴露大鼠唾液中含砷量变化及其与血砷、尿砷间的关系.方法 将32只雄性SD大鼠按体质量随机分为4组,分别为对照组(生理盐水)及低(0.2 mg/kg)、中(2.0 mg/kg)、高(20.0mg/kg)剂量亚砷酸钠染毒组,每组8只.采用经口灌胃染毒方法,隔日1次,连续2周后收集唾液、血液、尿液及脏器,计算脏器系数,应用原子荧光分光光度计(AFS-230)检测血砷、尿砷,应用电感耦合-等离子体质谱(ICP-MS)检测唾液砷.结果 亚砷酸钠染毒组大鼠体质量增长值均低于对照组,其中高剂量组[(76.13±17.19)g]与对照组[(103.00±12.31)g]比较,差异有统计学意义(P＜0.05).高剂量组大鼠肝脏及肾脏脏器系数[(3.92±0.54)％、(0.96±0.15)％]与对照组[(3.27±0.35)％、(0.76±0.05)％]比较,差异有统计学意义(P＜0.05或＜0.01).低、中、高染毒组大鼠唾液砷[(0.044±0.019)、(0.211±0.071)、(1.128±0.380)mg/L]、血砷[(11.832±1.887)、(45.032±7.216)、(121.839±17.323)mg/L]及尿砷[(0.138±0.085)、(0.874±0.328)、(8.843±1.754)mg/L]与对照组[(0.018±0.014)、(2.267±0.370)、(0.025±0.011)mg/L]比较,差异有统计学意义(P均＜ 0.05),且各染毒组之间比较差异有统计学意义(P均＜0.05).大鼠唾液砷与血砷、尿砷之间存在显著正相关,相关系数分别为0.934、0.960(P均＜0.01).结论 高砷暴露可抑制大鼠体质量增长,并对肝脏及肾脏有较强毒性.砷在唾液中存在良好的剂量-反应关系,且唾液砷与血砷、尿砷间存在明显的正相关关系,提示唾液砷也是一种良好的砷暴露标志物.     

卵磷脂对砷染毒非洲绿猴肾细胞细胞膜损伤的作用

目的 观察卵磷脂对亚砷酸钠(NaAsO2)染毒非洲绿猴肾细胞(Vero)细胞膜损伤的作用.方法 将体外培养Vero细胞分为4组:对照组(生理盐水)、砷模型组(2.20 mg/L NaAsO2)、卵磷脂高剂量+砷干预组(53.33 mg/L卵磷脂+2.20 mg/L NaAsO2)、卵磷脂低剂量+砷干预组(13.32 mg/L卵磷脂+2.20 mg/L NaAsO2),每组6瓶细胞,每2天换液1次,培养120 h.采用分光光度法测定细胞膜Na+,K+-ATP酶活性,高效液相法测定细胞膜磷脂组分磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰胆碱(PC)和神经鞘磷脂(SM).结果 对照组、砷模型组、卵磷脂高剂量+砷干预组、卵磷脂低剂量+砷干预组细胞膜Na+,K+-ATP酶活性分别为(O.962 ±0.081)×106、(0.544±0.037)×106、(0.647±0.043)×106、(0.550±0.020)× 106 U·kg-1·h-1,各组间比较,差异有统计学意义(F=43.58,P<0.01).与对照组比较,其他3组细胞膜Na+,K+-ATP酶活性明显降低(P均<0.05);与砷模型组比较,卵磷脂高剂量+砷干预组明显增高(P<0.05),而卵磷脂低剂量+砷十预组未见明显改变(P>0.05).与对照组[(0.087±0.003)、(0.127±0.053)、(0.588±0.105)、(0.07l±0.029)g/L]比较,砷模型组PS、PE、PC、SM水平[(0.051±0.018)、(0.073±0.030)、(0.240 4-0.038)、(0.047±0.121)g/L]均明显降低(P均<0.05);卵磷脂高剂量+砷干预组PS、PE、PCI(0.084±0.011)、(0.109±0.363)、(0.591±0.476)g/L]未见明显改变(P均>0.05),而SM[(0.057±0.004)g/L]明显降低(P<0.05);卵磷脂低剂量+砷干预组PS、PE、SM[(0.058±0.020)、(0.086±0.177)、(0.048±0.103)g/L]明显降低(P均<0.05),而PCI(0.521±0.098)g/L]未见明显改变(P>0.05).与砷模型组比较,卵磷脂高剂量+砷干预组PS、PE、PC、SM明显增高(P均<0.05);卵磷脂低剂量+砷干预组PS、PE、SM未见明显改变(P均>0.05),PC明显增高(P<0.05).结论 高剂量卵磷脂对砷染毒Vero细胞膜损伤具有一定的保护作用.

Abstract：

Objective To observe the lecithin's effect on membrane of African green monkey kidney cells (Vero) exposed to sodium arsenite(NaAsO2). Methods Vero cells cultured in vitro were divided into 4 groups:control group (saline), model group (2.20 mg/L NaAsO2), high eoncentration of lecithin and arsenic group (53.33mg/L lecithin + 2.20 mg/L NaAsO2), low eoncentration of lecithin and arsenic group( 13.32 mg/L lecithin + 2.20 mg/L NaAsO2), 6 bottles of cells in each group, medium was changed every 2 days, cultured for 120 h. Na+ ,K+-ATPase activities of membrane were measured by spectrophotometry, and membrane phospholipids composition including phosphatidylserine (PS), phosphatidylethano-lamine (PE), phosphatidylcholine (PC) and sphingmyelin (SM) were measured by high performance liquid chromatography (HPLC). Results The Na~, K+-ATPase activities of membrane of control group, model group, high concentration of lecithin and arsenic group, low concentration of lecithin and arsenic group were (0.962 ± 0.081) × 106, (0.544 ± 0.037) × 106, (0.647 ± 0.043) x 106, (0.550±Compared with control group, the Na+ ,K+-ATPase activities of other 3 groups were significantly reduced (all P < 0.05). Compared with model group, the Na+ ,K+-ATPase activity in high concentration of lecithin and arsenic group was significantly higher (P < 0.05),but in low concentration of lecithin and arsenic group did not change significantly (P > 0.05). Compared with control group[(0.087 ± 0.003), (0.127 ± 0.053), (0.588 ± 0.105),(0.071 ± 0.029)g/L], PS, PE, PC, SM levels in model group[(0.051 ± 0.018), (0.073 + 0.030), (0.240 ±0.038), (0.047 ± 0.121 )g/L] were significantly lower(all P < 0.05) ;PS, PE, PC in high concentration of lecithin and arsenic group[(0.084 ± 0.011), (0.109 ± 0.363), (0.591 ± 0.476)g/L] did not change significantly(all P > 0.05), but SM[(0.057 ± 0.004)g/L] significantly decreased(P < 0.05) ;PS, PE, SM levels of low concentration of lecithin and arsenic group[(0.058 ± 0.020), (0.086 ± 0.177), (0.048 ± 0.103)g/L] significantly reduced (all P < 0.05), the PC did not change significantly [(0.521±0.098 )g/L, P > 0.05]. Compared with model group,the levels of PS, PE, PC, SM in high concentration of lecithin and arsenic group were significantly higher(all P <0.05);PS, PE, SM levels in low concentration of lecithin and arsenic group did not change significantly(all P > 0.05), and PC was significantly higher(P < 0.05). Conclusions High concentration lecithin has certain protective effect on Vero cell membrane exposured to sodium arsenite.     

不同价态染砷大鼠肝脏MRP2表达水平与砷甲基化产物关联性

目的 分析亚砷酸钠(iAs3+)和砷酸氢钠(iAs5+)染毒后,对大鼠多药耐药相关蛋白2(MRP2)表达的影响,及其与肝脏砷及甲基化产物的关联性,寻找不同价态砷体内代谢转运间的差异,为进一步阐明砷毒作用机制提供依据.方法 70只Wistar大鼠分成7组,第1组为正常对照组,给予饮用去离子水;第2～4组为染毒iAs3+高、中、低剂量组,分别给予20.0、6.7、2.2 mg/kg体质量亚砷酸钠溶液;第5～7组为染毒iAs5+高、中、低剂量组,分别给予20.0、6.7、2.2 mg/kg体质量砷酸氢钠溶液.各组大鼠于染毒90 d后处死,取肝脏组织,用蛋白印迹法(Western-blotting)测定MRP2表达的变化.采用高效液相-氢化物发生原子荧光光谱分析法(HPLC-HGAFS)分析各组肝脏中砷及甲基化产物含量,并运用Pearson相关法分析MRP2表达与砷及甲基化产物的相关性.结果 对照组、iAs3+和iAs5+高、中、低剂量组MRP2蛋白表达分别为1.21±0.13、1.85±0.09、1.65±0.19、1.61±0.18、1.69±0.04、1.42±0.19、1.27±0.10,iAs3+的高、中、低剂量组和iAs5+高、中剂量组MRP2蛋白表达均高于对照组(P均＜0.05);相同受试物比较,iAs3+和iA83+的高剂量组MRP2蛋白表达均高于低剂量组(P均＜ 0.05);不同受试物同一剂量组比较,iAs3+高、中、低剂量组的MRP2蛋白表达均强于iAs5+高、中、低剂量组(P均＜0.05).同时,iAs3+染毒组肝脏中MRP2蛋白表达量与iAs3+和砷甲基化代谢产物MMA和DMA的含量均呈正相关关系(r值分别为0.575、0.678、0.395,P均＜0.05);iAs5+染毒组肝脏中MRP2表达量与MMA和DMA的含量均呈正相关关系(r值分别为0.593、0.643,P均＜0.05),与iAs3+的含量无相关关系(P＞0.05).结论 随着砷染毒剂量的增加,MRP2表达逐渐上调,从而致使肝细胞膜上MRP2表达代偿性改变.MRP2外排通路可能在iAs3+代谢径路中发挥重要作用.肝脏MRP2与不同价态砷甲基化产物的负荷或水平密切相关.     

亚慢性砷暴露小鼠血和肝中砷形态及谷胱甘肽水平检测分析

目的 探讨亚慢性饮水砷暴露小鼠血和肝中砷形态的分布,评价砷对血和肝中还原型谷胱甘肽(GSH)水平的影响.方法 小鼠以自由饮水方式饮用含砷量为0(对照)、25、50、100mg/L的水溶液,连续染砷6周.采用氢化物发生-超低温捕集-原子吸收分光光度法,检测小鼠血和肝中无机砷(iAs)、一甲基砷酸(MMA)和二甲基砷酸(DMA)的水平,计算甲基化率.采用二硫双硝基苯甲酸(DTNB)法测定全血和肝组织中GSH的水平.结果 小鼠血和肝中iAs、MMA和DMA水平随染砷剂量的增加而升高.各染砷组小鼠血和肝中的砷一甲基化率(PMI)和二甲基化率(SMI)与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),其中50 mg/L染砷组小鼠肝中SMI[(50.45±2.94)%]明显高于25 mg/L组[(41.68±7.09)%]和100 mg/L组[(41.19±8.87)%],组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).各染砷组小鼠血和肝中砷形态的构成比(iAs:MMA:DMA)分别为2:3:5和4:3:3.有机砷(MMA+DMA)的水平分别约占总砷的80%和60%.各染砷组小鼠血和肝中GSH水平随染砷剂量的增加而下降,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),但各染砷组之间的小鼠血和肝中GSH水平比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 当砷暴露水平达到一定程度后,肝脏对iAs的甲基化代谢能力可达到饱和.血中砷形态变化不同于肝组织,提示机体内的其他组织器官也可能具有砷甲基化代谢能力.血和肝中GSH水平是反映砷毒性的较好指标.     

亚砷酸钠对体外培养人淋巴细胞金属硫蛋白基因亚型表达的影响

目的 探讨不同剂量亚砷酸钠对体外培养人淋巴细胞金属硫蛋白(MT)基因表达的影响及MT表达与细胞存活率的相互关系.方法 无菌抽取健康人血液,分离出淋巴细胞,分别用0(对照)、2、5、10、15、30、60μmol/L亚砷酸钠作用于淋巴细胞,于24、48、72 h后,以四噻唑蓝比色法测定细胞存活率;染毒72 h后采用RT-PCR法检测MT-1、MT-2基因表达情况.结果 2、5μmol/L染毒组细胞存活率[(115.50±11.80)%、(130.49±8.28)%]高于对照组[(100.00±0.00)%,P均<0.05];10、15、30、60μmol/L染毒组细胞存活率[(78.12±9.33)%、(71.62±10.82)%、(52.06±3.05)%、(40.98±5.41)%]随染毒剂量增高而逐渐降低,与对照组及2、5μmol/L组比较差异有统计学意义(P均<0.05).不同剂量亚砷酸钠作用72 h,对照组及2、5、10、15、30、60μmol/L染毒组MT-1基因表达(0.925±0.123、1.082±0.504、1.103±0.170、0.927±0.056、0.730±0.307、0.604±0.173、0.540±0.075)组间比较差异无统计学意义(P均>0.05);2、5 μmol/L染毒组(1.503±0.212、1.557±0.377)与对照组(0.762±0.112)比较MT-2表达上调(P均<0.05),且较其他各组表达增加(P均<0.05),而10、15、30、60μmoL/L染毒组MT-2表达(0.814±0.139、0.679±0.201、0.607±0.229、0.533±0.102)呈下降趋势,但组间比较差异无统计学意义(P均>0.05).MT-1、MT-2表达水平与细胞存活率之间存在正相关关系(r值分别为0.955、0.909,P均<0.05).结论 10 μmol/L以上剂量的砷可能对淋巴细胞MT表达有抑制作用,而低剂量(2、5μmol/L)砷可能刺激淋巴细胞的MT-2表达上调,提高细胞MT水平,起到保护细胞、提高细胞存活率的作用.     

慢性砷暴露人骨髓间充质干细胞的生物学特性观察

目的 观察抗砷细胞模型慢性砷暴露人骨髓间充质干细胞(CAsE-hFBMSCs)的生物学特性,探讨长期低剂量砷暴露对人骨髓间充质干细胞(hFBMSCs)的影响.方法 常规条件培养hFBMSCs,48 h急性砷毒性实验MTS法检测不同剂量砷刺激条件下[0(对照)、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、8.00、20.00、40.00、80.00、120.00μmol/L]第2代(P2)hFBMSCs细胞生存率,根据检测结果用1.00μmol/L亚砷酸钠刺激hFBMSCs 14周,建立抗砷细胞模型CAsE-hFBMSCs,作为实验组,同时设立对照组,并采用荧光激活细胞分选术鉴定诱导前后细胞表型,流式细胞术检测第2、9、16代(P2、P9、P16)细胞周期,软琼脂克隆形成实验检测细胞是否发生恶性转化.结果 <10μmol/L时,急性砷刺激促进hFBMSCs增殖,而≥10μmol/L时,急性砷刺激则抑制细胞的生长.14周时实验组半数致死剂量(LC_(50))为(89.42±0.64)μmol/L,对照组为(52.48±0.71)μmol/L,组间比较差异有统计学意义(t=123.89,P<0.05);抗砷细胞模型CAsE-hFBMSCs的细胞表型CD34、CD45表达阴性,CD29、CD90、CD166表达阳性,与对照组比较细胞表型未见明显改变;CAsE-hFBMSCs的细胞周期变化较大,与对照组[(8.44±0.45)%、(9.14±0.14)%、(82.42±0.60)%]比较,P2实验组G2/M期[(17.72±5.47)%]和S期细胞[(25.34±3.36)%]增加,G0/G1期细胞减少[(56.96±8.83)%],P16细胞周期恢复至与对照组相近的水平:软琼脂克隆形成实验中,抗砷细胞CAsE-hFBMSCs未见克隆形成.结论 长期低剂量砷刺激对hFBMSCs生物学特性无明显影响.     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇致新西兰家兔关节损伤的实验观察

目的 观察脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对新西兰家兔膝关节软骨和滑膜的损伤.方法 将15只成年雄性新西兰家兔随机分为3组,对照组正常饲养,高、低剂量组分别投予0.10、0.05 mg/kg剂量的DON,经耳缘静脉注射隔日染毒.20 d后处死家兔,取双侧膝关节,进行常规病理检查,测定关节冲洗液白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮(NO)水平.结果 光镜下,可见低、高剂量组家兔膝关节软骨细胞变性、坏死.滑膜组织炎细胞浸润.关节冲洗液IL-1β、TNF-α、NO,组间比较差异有统计学意义(F值分别为19.396、18.195、22.136,P＜0.05);与对照组[(0.113±0.043)、(0.138±0.087)μg/L、(23.56±9.35)μmol/L]比较,高剂量组[(0.451±0.091)、(0.575±0.122)μg/L,(70.27±11.53)μmol/L]和低剂量组[(0.295±0.107)、(0.387±0.131)μg/L,(45.32±12.24)μmol/L]明显增高(P＜0.05),且高剂量组高于低剂量组(P＜0.05).结论 DON可导致家兔关节软骨和滑膜损伤,其损伤类似于人骨关节炎病变.DON可能是骨关节炎的病因之一.     

低剂量亚慢性砷染毒家兔血清酶和生物化学指标的变化

目的 观察低剂量亚慢性砷染毒家兔在染毒不同时期血清酶和生物化学指标的变化,为筛选有意义的砷中毒早期诊断血液学指标提供依据.方法 成年家兔12只,体质量2.0～3.5kg,按体质量随机分为4组,每组3只,分别饮用含亚砷酸钠0(对照)、0.01、0.05、0.25 mg/L的水.染毒8周和12周后,采用SYSMEX-180型全自动生化分析仪测定各组家兔血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)和γ-谷氨酰基转移酶(γ-GT)的活性以及总蛋白、白蛋白、球蛋白和白蛋白/球蛋白比值(简称白球比).结果 染毒家兔0.05 mg/L剂量组第12周ALT水平[(60.00±4.14)U/L]较同期对照组[(41.50±2.12)U/L]升高(P＜0.05);0.25 mg/L剂量组第8周、第12周AST水平[(46.50±3.21)、(52.33±3.81)U/L]较同期对照组[(21.33±3.53)、(29.50±3.23)U/L]升高(P均＜0.05);0.05 mg/L剂量组和0.25 mg/L剂量组第12周ALP水平[(78.68±4.85)、(103.00±7.83)U/L]较同期对照组[(45.50±5.50)U/L]升高(P均＜0.05);0.05mg/L剂量组第12周γ-GT水平[(19.33±7.50)U/L]较同期对照组[(8.50±3.53)U/L]升高(P＜0.05).各剂量组第8周和第12周的血清总蛋白、白蛋白、球蛋白水平和白球比与同期对照组比较,差异无统计学意义(F值分别为0.77、0.02、0.16、3.14和0.51、0.29、0.41、0.52,P均＞0.05).结论 0.05 mg/L及以上剂量亚慢性砷染毒主要对肝脏有一定损伤.在肝脏的相关血清酶学中,AST是较为早期的反映砷中毒肝脏损伤的敏感指标.

Abstract：

Objective To observe the sub-chronic effects of low doses of arsenic poisoning in rabbits exposed to different periods on some of the serum enzymes and biochemical indicators, and to provide the basis for screening of meaningful hematologic indicators for early diagnosis of arsenic poisoning. Methods Twelve adult rabbits,weighing 2.0 - 3.5 kg, were randomly divided into four groups, 3 in each group, and they were fed with drinking water containing sodium arsenite 0(control),0.01,0.05,0.25 mg/L, respectively. Serum alanine aminotransferase (ALT), aspartate amino transferase (AST), alkaline phosphatase (ALP), γ-glutamyl transacylase (y-GT), total protein(TP), albumin(ALB), globulin(GLP), and ALB/GLP of rabbit were measured by SYSMEX-180 automated biochemistry analyzer after 8 weeks and 12 weeks exposure. Results The results showed that ALT in 0.05 mg/Lgroup of 12 week[(60.00 ± 4.14)U/L]increased significantly compared with the control[(41.50 ± 2.12)U/L, P ＜0.05];AST in 0.25 mg/L group of 8 week and 12 week[(46.50 ± 3.21 ), (52.33 ± 3.81 )U/L]increased significantly compared with the control[(21.33 ± 3.53), (29.50 ± 3.23 )U/L, all P ＜ 0.05];ALP in 0.05 mg/L and 0.25 mg/L group of 12 week [(78.68 ± 4.85 ), ( 103.00 ± 7.83 ) U / L]increased significantly compared with the control [(45.50 ± 5.50)U/L, all P ＜ 0.05];γ-GT in 0.05 mg/L group of 12 week[(19.33 ± 7.50)U/L]increased significantly compared with the contro1[(8.50 ± 3.53)U/L, P＜ 0.05]. TP, ALB, GLP, ALB/GLP of different groups of 8 week and 12 week were not significantly different statistically(F= 0.77,0.02,0.16,3.14 and 0.51,0.29,0.41,0.52, all P ＞ 0.05). Conclusions Zero point zero five mg/L and higher doses of sub-chronic arsenic exposure has some major damage to the liver. Compared with other serum enzymes and the biochemical indexes, serum AST is a early sensitive indicator of liver injury of the arsenic poisoning.     

不同碘营养水平对哺乳期大鼠甲状腺和乳腺胰岛素样生长因子Ⅰ mRNA表达的影响

目的 观察不同碘营养水平对哺乳期大鼠甲状腺和乳腺胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-1)mRNA表达水平的影响.方法 30只雌性断乳1个月Wistar大鼠按体质量随机分成3组:低碘组、适碘组、高碘组,每组10只,食用合成饲料,分别饮用含碘0、150、3000 μg/L的去离子水.喂养3个月后,与雄鼠合笼交配,待母鼠哺乳5 d后将其处死、取母鼠乳腺、甲状腺及血清,温和酸消化法测定血清碘,放射免疫分析法测定T3、T4水平,实时荧光定量PCR法检测乳腺和甲状腺IGF-1 mRNA表达水平.结果 低碘组血清碘[(17.38±3.27)μg/L]低于适碘组[(43.42±6.92)μg/L,P<0.05],高碘组血清碘[(350.10±38.46)μg/L]高于适碘组(P<0.05);低碘组、高碘组T3水平[(1.11μ0.25)、(1.61±0.33)μg/L]低于适碘组[(2.18±0.46)μg/L,P均<0.05];低碘组、高碘组T4水平[(33.40±11.11)、(56.54±10.38)μg/L]与适碘组[(44.02±12.51)μg/L]比较差异无统计学意义(P>0.05),低碘组T4水平低于高碘组(P均<0.05);低碘组、高碘组甲状腺IGF-1 mRNA表达水平(0.34±0.08、0.23±0.08)均高于适碘组(0.15±0.03,P均<0.05);低碘组哺乳期乳腺IGF-1 mRNA表达水平(0.59±0.18)高于适碘组(0.40±0.10,P<0.05);3组甲状腺IGF-1 mRNA表达均低于同组的乳腺表达水平(t=3.54、6.44、2.62,P均<0.05).结论 碘能够影响哺乳期甲状腺和乳腺IGF-1 mRNA的表达,且哺乳期乳腺表达强于甲状腺.     

亚砷酸钠对大鼠外周血淋巴细胞DNA损伤的研究

目的 研究亚砷酸钠(NaAsO2)染毒对大鼠外周血淋巴细胞DNA的损伤作用.方法 Wistar大鼠32只,体质量180～200 g,雌雄各半,按体质量随机分为4组,分别为0(对照)、0.05、0.15、0.45 mg/L NaAsO2染毒组,每组8只.大鼠自由饮用含不同剂量NaAsO2的水,每天测量体质量并记录水消耗量.连续染毒30 d后,眼眶静脉采血,应用单细胞凝胶电泳试验评价大鼠外周血淋巴细胞的损伤程度.结果 0.05、0.15、0.45mg/L染砷组大鼠的体质量增长[(121.00±38.57)、(120.62±42.80)、(125.38±48.68)g]和饮水量[(36.9±6.2)、(37.9±5.8)、(39.3±4.2)ml/d]与对照组[(119.25±47.27)g、(38.4±5.1)ml/d]比较,差异无统计学意义(F值分别为0.040、0.828,P均＞0.05).0.05、0.15、0.45 mg/L染砷组大鼠的外周血淋巴细胞拖尾率[46.25%(185/400)、57.00%(228/400)、64.00%(256/400)]、彗星尾长[(32.89±17.18)、(58.74±36.28)、(77.55±35.73)μm]、尾矩[(6.29±3.74)、(11.20±9.64)、(17.30±12.60)μm]显著高于对照组[39.25%(157/400)、(18.73±15.83)、(2.61±1.05)μm,P均＜0.01];随着染砷剂量的增加,淋巴细胞拖尾率、彗星尾长和尾矩均呈上升趋势.结论 低剂量砷染毒可引起大鼠外周血淋巴细胞DNA的损伤.

Abstract：

Objective To explore the DNA damage in peripheral blood lymphocytes of rats exposed to sodium arsenite. Methods Thirty-two Wistar rats, weighing 180 - 200 g, equal male and female, were randomly divided into 4 groups, 8 in each group. Sodium arsenite 0(control) ,0.05,0.15,0.45 mg/L were given through drinking water for 30 days. Body weight and drinking water consumption were measured every day. Blood were collected and DNA damage in peripheral blood lymphocytes was examined by single cell gel electrophoresis.Results The increase of body mass[( 121.00 ± 38.57), ( 120.62 ± 42.80), ( 125.38 ± 48.68)g]and water intake [(36.9 ± 6.2), (37.9 ± 5.8), (39.3 ± 4.2)ml/d]in 0.05,0.15,0.45 mg/L sodium arsenite groups were compared with the control group[( 119.25 ± 47.27)g, (38.4 ± 5.1 )ml/d], and the difference were not significant (F = 0.040,0.828, all P ＞ 0.05). The tail ratios[46.25%(185/400) ,57.00%(228/400),64.00%(256/400)], tail lengths [(32.89 ± 17.18), (58.74 ± 36.28), (77.55 ± 35.73 ) μm]and tail moments [(6.29 ± 3.74), ( 11.20 ± 9.64),(17.30 ± 12.60)μm]in 0.05,0.15,0.45 mg/L sodium arsenite groups were significantly higher than those of the control group[39.25%(157/400), (18.73 ± 15.83),(2.61 ± 1.05)μm, all P ＜ 0.01], and the tail ratios,tail lengths and tail moments in lymphocytes increased with increased doses of arsenic concentration. Conclusions Low doses of arsenic exposure can induce DNA damage in peripheral blood lymphocytes of rats.     

亚砷酸钠诱导人膀胱上皮永生化细胞氧化损伤作用观察

目的 观察亚砷酸钠(NaAsO2)诱导人膀胱上皮永生化细胞(SV-HUC-1)氧化损伤作用.方法 以不同浓度NaAsO2[0(对照)、1、2、4、8、10μmol/L]对SV-HUC-1细胞染砷24 h,利用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平,采用酶联免疫吸附实验(EHSA法)检测细胞内硝基酪氨酸(NT)含量和细胞培养液中8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷(8-OHdG)水平.结果 1、2、4、8、10 μmol/L染砷组SV-HUC-1细胞ROS水平(81.76±4.91、95.23±2.17、126.61±17.95、126.74±27.77、114.18±9.65)明显高于对照组(69.84±1.28,P＜ 0.05或＜ 0.01),ROS水平与染砷剂量呈显著正相关(r=0.818,P＜ 0.01).10 μmol/L染砷组SV-HUC-1细胞内NT含量[ (919.66±206.33)μg/L]显著高于对照组[(238.19±38.28) μg/L,P＜ 0.01],NT含量与染砷剂量呈显著正相关(r=0.617,P＜0.01).各组细胞培养液中8-OHdG含量比较,差异无统计学意义(F=2.127,P＞0.05).结论 NaAsO2能够引起SV-HUC-1细胞氧化损伤.     

不同碘营养水平对哺乳期大鼠甲状腺和乳腺钠碘转运体mRNA表达的影响

目的 观察不同碘营养水平对哺乳期大鼠甲状腺和乳腺钠碘转运体(NIS)mRNA表达水平的影响.方法 Wistar大鼠30只,体质量40～60 g.按体质量将大鼠随机分成3组:低碘组(去离子水),适碘组(含碘150 μg/L的去离子水),高碘组(含碘3000μg/L的去离子水),3组均喂合成饲料.喂养3个月后,与雄鼠合笼交配,待母鼠哺乳5 d后处死,取母鼠乳腺、甲状腺及血清.采用温和酸消化法测定血清碘,放射免疫分析法测定血清T_3、T_4水平,实时荧光定量PCR法检测乳腺和甲状腺NIS mRNA表达.结果 哺乳期大鼠血清碘、T_3、T_4、NIS mRNA表达,组间比较差异有统计学意义(F值分别为499.94、16.67、8.49,H=7.58,P均<0.05).血清碘适碘组[(43.42±692)μg/L]高于低碘组[(17.38±3.27)μg/L,P<0.05],高碘组[(350.10±38.46)μg/L]高于适碘组(P<0.05).血清T_3水平,低碘组、高碘组[(1.11±0.25)、(1.61±0.33)μg/L]低于适碘组[(2.18±0.46)μg/L,P均<0.05].血清T_4水平,低碘组[(33.40±11.11)μg/L]低于高碘组[(56.54±10.38)μg/L,P<0.05].甲状腺NIS mRNA表达水平低碘组(0.280±0.030)高于适碘组(0.240±0.030,P<0.05).高碘组(0.069±0.037)低于适碘组(P<0.05).哺乳期乳腺NIS mRNA表达水平高碘组(0.027±0.007)低于适碘组(0.051±0.019,P<0.05).结论 轻度低碘能够提高甲状腺NIS mRNA表达,保护母体免受低碘的危害,但对下一代的保护作用不明显或没有保护作用;高碘抑制甲状腺和乳腺NIS mRNA表达,保护母体及下一代免受高碘的危害.     

血小板衍生生长因子和Ⅰ型胶原在饮水砷暴露小鼠肝组织中的表达

目的 探讨血小板衍生生长因子(PDGF)和Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)在饮水砷暴露小鼠肝组织中的表达及其意义.方法 50只昆明种雄性小鼠被分成对照组、iAs3+组、iAs5+组.分别饮用自来水,亚砷酸钠溶液(NaAsO2,含砷离子300 mg/L),砷酸钠溶液(Na2HAsO4·7H2O,含砷离子300 mg/L).10个月后处死小鼠,使用全自动生化分析仪检查肝功能,包括血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氧酶(AST)、球蛋白(GLB);Masson染色肝组织,检测单位视场内的纤维面积;免疫组化(SABC)法检测肝组织中PDGF和Col-Ⅰ的表达.结果 ①对照组、iAs3+组、iAs5+组,血清ALT水平分别为(36.67±3.51)、(61.46±13.85)、(43.31±4.21)U/L,组间比较差异有统计学意义(F=6.56,P<0.05),iAs3+组明显高于对照组(P<0.05);血清AST水平分别为(135.00±20.42)、(510.86±59.01)、(258.93±22.40)U/L,组间比较差异有统计学意义(F=83.33,P<0.05),iAs3+、iAs5+组均明显高于对照组(P<0.05),iA3+组明显高于iAs5+组(P<0.05);血清GLB水平分别为(20.86±0.61)、(26.94±3.73)、(24.59±5.27)g/L,组间比较差异无统计学意义(F=2.80,P>0.05).②光镜下染砷组小鼠肝组织出现明显的细胞变性、坏死、再生,汇管区炎细胞浸润,纤维增生.对照组(0.069±0.013)、iAs3+组(0.192±0.108)和iAs5+组(0.143±0.122)单位视场内的纤维面积组间比较,差异有统计学意义(F=1.91,P<0.05),iAs3+组明显高于对照组(P<0.05).③对照组、iAs3+组、iAs5+组PDGF、Col-Ⅰ光密度值分别为202.788±7.462、174.382±7.706、177.644±7.811,200.11±7.46、176.47±10.20、177.38±7.95,组间比较差异均有统计学意义(F值分别为102.91、78.51,P均<0.05),与对照组比较,iAg3+、iAs5+组PDGF、Col-Ⅰ光密度值明显降低(P<0.05).表明肝组织内PDGF、Col-Ⅰ表达明显增多.且PDGF在汇管区、间隔细胞、窦旁细胞内均有表达,而Col-Ⅰ表达广泛分布于血管及胆管周围,并自门管区向肝实质内延伸形成纤维间隔.结论 长期饮水砷暴露,可导致慢性肝脏损伤、肝纤维化形成.PDGF、Col-Ⅰ在砷敛小鼠肝纤维化形成中起重要作用.     

自身免疫性甲状腺疾病患者血清瘦素水平观察

目的 观察自身免疫性甲状腺疾病(AITD)中Graves病(GD)和桥本氏甲状腺炎(HT)患者血清瘦素水平,探讨瘦素在AITD发病机制中的免疫学作用.方法 102例体质量指数(BMI)和年龄等因素相匹配的女性AITD初诊患者,根据临床表现及实验室检查结果分为3组:GD甲亢组,HT甲低组,亚甲低组,另设性别、年龄、BMI匹配的对照组.免疫化学发光法检测血清FT3、FT4、sTSH,ELISA法检测血清瘦素水平.结果 GD甲亢组血清FT3、FT4水平[(19.74±15.39)、(78.25±58.68)pmol/L]明显高于对照组[(4.87±0.25)、(15.96±3.15)pmol/L],而sTSH[(0.15±0.08)mU/L]和瘦素水平[(8.73±1.92)μg/L]明显低于对照组[(3.81±0.19)mU/L、(12.38±3.51)μg/L].组间比较差异均有统计学意义(P＜0.01或＜0.05).而HT甲低组兀FT3、FT4水平[(3.36±0.26)、(6.95±3.29)pmol/L]均明显低于对照组(P＜0.05),而sTSH[45.48±35.83)mU/L]和瘦素水平[(17.17±3.82)μg/L]明显高于对照组(P＜0.01或＜0.05).亚甲低组FT3、FT4水平[(4.67±0.60)、(14.87±2.14)pmol/L]与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),而sTSH[(13.67土8.66)mU/L]和瘦素水平[(16.25±3.67)μg/L]均明显高于对照组(P＜0.01或＜0.05).结论 瘦素在AITD发病机制中可能具有一定的免疫调节作用,而AITD患者瘦素水平也可能受sTSH影响.