外周血钙卫蛋白、环氧化酶-2水平变化与动脉血栓性疾病的关系

目的 探讨外周血钙卫蛋白（S100A8/A9）、环氧化酶-2（COX-2）水平与动脉血栓性疾病的关系及其临床意义.方法 选取动脉血栓性疾病患者101例,其中急性心肌梗死患者50例,冠心病患者51例.25例健康体检者为对照组.采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组血清S100A8/A9、COX-2水平,并分析S100A8/A9、COX-2水平间的相关性.结果 （1）动脉血栓性疾病患者外周血S100A8/A9、COX-2水平明显高于对照组;（2）急性心肌梗死组患者S100A8/A9、COX-2水平明显高于冠心病组;（3）急性心肌梗死组和冠心病组S100A8/A9水平与COX-2水平均无明显相关性.结论 心血管病患者外周血S100A8/A9、COX-2水平明显升高可能与疾病的发生、发展相关;S100A8/A9、COX-2可作为判断动脉血栓性疾病严重程度的参考指标之一.     

Polymorphisms of alcohol dehydrogenase 2 and aldehyde dehydrogenase 2 and colorectal cancer risk in Chinese males

AIM： To evaluate the relationship between drinking and polymorphisms of alcohol dehydrogenase 2 （ADH2） and/or aldehyde dehydrogenase 2 （ALDH2） for risk of colorectal cancer （CRC） in Chinese males. METHODS： A case-control study was conducted in 190 cases and 223 population-based controls. ADH2 Arg47His （G-A） and ALDH2 Glu487Lys （G-A）genotypes were identified by PCR and denaturing high-performance liquid chromatography （DHPLC）. Information on smoking and drinking was collected and odds ratio （OR） was estimated. RESULTS= The ADH2 A/A and ALDH2 G/G genotypes showed moderately increased CRC risk. The age- and smoking-adjusted OR for ADH2 A/A relative to G/A and G/G was 1.60 （95% CI=1.08-2.36）, and the adjusted OR forALDH2 G/G relative to G/A and A/A was 1.79 （95% CI= 1.19-2.69）. Significant interactions between ADH2, ALDH2 and drinking were observed. As compared to the subjects with ADH2 G and ALDH2 A alleles, those with ADH2 A/A and ALDH2 G/G genotypes had a significantly increased OR （3.05, 95% CI= 1.67-5.57）. The OR for CRC among drinkers with the ADH2 A/A genotype was increased to 3.44 （95% CI= 1.84-6.42） compared with non-drinkers with the ADH2 G allele. The OR for CRC among drinkers with the ALDH2 G/G genotype was also increased to 2.70 （95% CI= 1.57-4.66） compared with non-drinkers with the ALDH2 A allele. CONCLUSION： Polymorphisms of the ADH2 and ALDH2 genes are significantly associated with CRC risk. There are also significant gene-gene and gene-environment interactions between drinking and ADH2 and ALDH2 polymorphisms regarding CRC risk in Chinese males.     

中国16个人群砷甲基转移酶AS3MT基因5'-UTR区VNTR多态性研究

目的 了解砷甲基转移酶AS3MT多态性在中国16个人群样本中的分布特征.方法 采集中国13个少数民族及3个汉族地区共1440个健康个体外周静脉血,按常规酚一氯仿法提取DNA.采用聚合酶链反应(PCR)并结合琼脂糖凝胶电泳技术,检测16个人群样本中AS3MT基因5'-UTR区VNTR位点的基因型分布.结果 在1440个样本中,共检测出5种基因型,其中V2/V3(AB/A2B)、V3/V3(A2B/A2B)、V2/V2(AB/AB)、V2/V4(AB/A3B)和V3/V4(A2B/A3B)基因型各检出771、426、221、16、16人,分别占总样本的53.5%、29.6%、14.7%、1.1%和1.1%.AB(V2)、A2B(V3)、A3B(V4)三种等位基因在总体人群中的分布频率分别为41.9%、57.0%、1.1%.北方与南方AB(V2)和A2B(V3)两种等位基因的分布频率比较,差异有统计学意义(χ2值分别为23.39、33.28,P＜0.007).结论 中国不同地区人群AS3MT基因具有多态性分布,AB(V2)和A2B(V3)两种等位基因分布频率差别较大,AS3MT基因5'-UTR区VNTR位点可用于评估高砷暴露人群砷中毒易感性研究.     

不同质量浓度的血红蛋白液对血红蛋白-A2定量的影响

目的　探讨不同质量浓度的血红蛋白(Hb)液对血红蛋白A2 (Hb A2 )定量的影响。方法　2003-03~09广州红十字会医院用水和四氯化碳(CCl4 )溶血试剂制备Hb液,并分为4组(质量浓度分别为80g/L、16g/L、8g/L、4g/L)。同时用公司提供的REP溶血试剂制备Hb液,分别进行Hb电泳,测定Hb- A2定量,比较结果。结果　水和CCL4溶血试剂Hb- A2定量准确,REP溶血试剂Hb -A2定量不准。四组不同质量浓度Hb液Hb- A2体积分数分别为(8. 2±1 .2)%、(4 .4±0. 4)%、(3 .5±0 .4)%、(3 .3±0 .2)%。经方差分析,浓度约为8g/L、4g/L之间Hb -A2定量差异无显著性(P>0. 05),其它各组之间Hb A2体积分数差异有显著性(P<0 .05。结论　不同质量浓度的Hb液对Hb- A2定量有显著影响。     

中国华南地区慢性乙型肝炎患者HLA-A等位基因分布的初步调查及其意义

目的 了解中国华南地区慢性乙型肝炎(CHB)患者HLA-A11、A2、A24、A33等位基因的分布状况,并为筛选HBV特异性CTL新表位提供必要背景资料.方法 以267例CHB患者和300例健康献血员为研究对象,提取其外周血染色体基因组DNA,用PCR-SSP法进行HLA-A11、A2、A24、A33等位基因检测型,并进行统计学比较.结果 CHB组HLA-A11、A2、A24、A33的基因频率分别为57%、41%、21%、7%,以HLA-A11最常见,较HLA-A2的基因频率高16%.健康对照组四种HLA-A等位基因的频率分别为57%、46%、24%、14%,HLA-A11较HLA-A2的频率高¨%.HLA-A33的频率在两组间有显著差异(x2=7.556,P=0.006).CHB组HLA-A2/A11、A2/A24、A2/A33、A11/A24、A11/A33、A24/A33的基因频率分别为17%、4%、1%、16%、4%、0.4%,健康人群则为18%、8%、4%、11%、5%、1%,各种基因组合的出现率在两组间近似.HBeAg( )与HBeAg(-)CHB组比较,HLA-A11(x2=3.324,P=0.072)、A2(x2=0.324,P=0.569)、A24(x2=0.308,P=0.579)、A33(x2=1.159,P=0.282)等位基因的频率分布在两组间无显著性差异.结论 中国华南地区CHB患者和健康人群的主要HLA-A等位基因均为HLA-A11、A2、A24及A33,以HLA-A11最为多见,提示鉴定HLA-A11限制性HBV特异性CTL新表位具有十分重要的意义;此四种等位基因及其组合模式与CHB患者的HBeAg状态无明显相关,但与HBV感染的其他临床特点及抗病毒治疗应答之间的关系有待研究.     

室性期前收缩揭示一度-二度房室传导阻滞1例

患者男性,70岁.因心悸胸闷不适,常感心搏停歇现象1年入院.患者有高血压史18年,口服苯磺酸、氨氯地平、盐酸贝那普利等药物治疗.体检:HR58次/min,BP 170/70mmHg.心律不齐,可闻及期前收缩,A2亢进,且A2P2,A2带金属音.     

肝硬化患者血清和腹水激活素A的测定

目的　观察肝硬化患者血清和腹水激活素A浓度变化及其影响因素。方法　采用ELISA法分别测定 45例肝硬化患者 (Child PughA级 10例 ,B级 2 3例 ,C级 12例 )血清和腹水激活素A ,采用ELISA法测定 2 0名正常人血清激活素A。采用标准酶法测定血清门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、碱性磷酸酶 (ALP)及尿素氮。结果　肝硬化患者血清激活素A的水平 ( 2 .71ng/ml± 1.90ng/ml)较对照组 ( 0 .2 1ng/ml± 0 .15ng/ml)明显升高 (P <0 .0 1)。Child PughA、B、C级肝硬化患者血清激活素A分别为 ( 1.44± 0 .16)ng/ml、( 1.95± 0 .45 )ng/ml和 ( 3 .0 8± 0 .65 )ng/ml,各级间比较差异有显著性 (P <0 .0 1)。血清激活素A与Child Pugh分级 (r =0 .894,P =0 .0 41)、ALT(r =0 .64 7,P =0 .0 0 0 )、AST(r =0 .5 5 0 ,P =0 .0 0 0 )及ALP(r=0 .3 2 8,P =0 .0 2 8)具有正相关性。肝硬化患者腹水激活素A水平为 ( 0 .43± 0 .2 4)ng/ml,Child PughA、B、C级肝硬化患者腹水激活素A分别为 ( 0 .3 9± 0 .2 1)ng/ml、( 0 .48± 0 .2 7)ng/ml和 ( 0 .41± 0 .2 2 )ng/ml ,各级之间比较差异有显著性 (P <0 .0 1) ;腹水激活素A与血清激活素A无相关性 ;与肾功能呈负相关 (r =-0 .415 ,P =0 .0 0 3 )。结论　肝硬化     

人肺腺癌细胞A549的耐药性与放射敏感性的相关性研究

目的 研究肺腺癌细胞株A549及耐药株A549/DDP放射敏感性差异,探讨肺腺癌的耐药性与放射敏感性的关系.方法 对指数生长期的A549、A549/DDP细胞用6 mV直线加速器分成0、1、2、4、6、8、10、12 Gy 8个剂量点进行放射.倒置显微镜观察细胞的形态变化,并根据细胞克隆计数,计算SF2,绘制细胞存活曲线.结果 放疗后两种细胞株的细胞形态发生改变,部分细胞死亡、破碎.A549和A549/DDP细胞株的SF2分别为0.417和0.685.结论 肺腺癌肿瘤细胞产生耐药性后可以使其放射敏感性降低.     

抵抗素+299G/A基因多态性与2型糖尿病并大血管病变的相关性研究

目的 研究抵抗素基因+299G/A多态性与中国北方地区汉族中老年人群2型糖尿病(T2DM)并大血管病变的关系.方法 应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测汉族人群296例抵抗素基因内含子2区299G/A的突变.结果 与对照组相比,糖尿病组等位基因频率、基因型分布差异显著(P=0.012,P=0.025).糖尿病组A等位基因突变率明显低于对照组,并大血管病变发生率在三种基因型间差异不显著(P=0.149).A,B两组等位基因频率、基因型分布的比较均无显著性.B组G/A基因型亚组的FPG显著高于A/A基因型亚组(P=0.05);利用Logistic回归分析显示收缩压、舒张压、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、家族史是糖尿病大血管病变的独立危险因素.结论 抵抗素基因+299G/A多态性与T2DM有关,A等位基因可能是T2DM的微效保护因素;AA基因型者在糖尿病并大血管病变组中有较低的FPG.     

乙型肝炎病毒基本核心启动子及前C区突变对疾病进展的影响

目的　研究乙型肝炎病毒 (HBV)基本核心启动子 (BCP)T176 2 /A176 4双突变及前C区A1896突变与肝脏损伤程度的相关性。方法　 2 0 0 0～ 2 0 0 2年哈尔滨医科大学附属第二医院及广东省廉江市医院随机选取 113例慢性HBV感染者 ,采用INNO -LiPA法测定HBVBCPT176 2 /A176 4双突变及前C区A1896突变 ,同时测定HBVS基因序列明确基因型。结果　CHB组、LC组、HCC组BCPT176 2 /A176 4双突变率明显高于AsC组 (分别为 2 4 . 1%比 2. 8% ,χ2 =5 .93,P <0 . 0 5 ;71. 4 %比 2 .8% ,χ2 =2 3 .83,P <0 .0 1和 5 5 . 6 %比 2 .8% ,χ2 =13. 0 9,P <0 . 0 1) ,LC组BCPT176 2 /A176 4双突变率显著高于CHB组 (71 .4 %比 2 4 . 1% ,χ2 =9 .12 ,P <0 .0 1) ;单一C基因型感染者CHB、LC和HCC组BCPT176 2 /A176 4双突变率明显高于AsC组 (分别为 33 .3%比 5 . 3% ,χ2 =3 .89,P <0 .0 5 ;6 9 .2 %比5 . 3% ,P <0 . 0 1和 5 0 .0 %比 5. 3% ,P <0 . 0 5 )。各组前C区A1896突变率均较低 ,在CHB组和LC组无一例发生 ;HCC组前C区A1896突变率与AsC组比较差异无显著性 (11 .1%比 8. 3% ,χ2 =0 . 0 0 ,P >0 . 0 5 )。结论　在慢性HBV感染者中 ,BCPT176 2 /A176 4双突变与慢性肝病进展有关。     

人类真核翻译延长因子1A2过表达对胰腺癌SW1990细胞体外侵袭及体内转移的影响

目的 探讨人类真核翻译延长因子1A2(EEF1A2)过表达对人胰腺癌SW1990细胞体外侵袭和肺转移潜能的影响.方法 通过携带EEF1A2的慢病毒感染人胰腺癌SW1990细胞建立EEF1A2稳定过表达的SW1990/EEF1A2细胞株及空质粒对照的SW1990/GFP细胞株,并以亲本SW1990细胞作为空白对照.采用实时PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞EEF1A2mRAN和蛋白的表达.应用Transwell小室检测细胞的体外侵袭能力.通过裸鼠尾静脉注射癌细胞方法构建肺转移模型,8周后观察并计数肺表面的转移结节.结果 SW1990/EEF1A2细胞EEF1A2 mRNA相对表达量为3.252±0.344,显著高于SW1990/GFP细胞的1.000±0.060及亲本细胞的0.944±0.041(t值分别为2.255、2.305,P值均＜0.01);EEF1A2蛋白表达量为0.833±0.050,显著高于SW1990/GFP细胞的0.247±0.035及亲本细胞的0.273 ±0.041(t值分别为0.572、0.559,P值均＜0.01);穿膜细胞数为(60 ±4)个,显著多于SW1990/GFP细胞的(33 ±4)个和亲本细胞的(26 ±3)个(t值分别为31.33、34.78,P值均＜0.01);裸鼠肺转移结节显著多于SW1990/GFP细胞及亲本细胞组(5/5比1/5、1/5,P值均＜0.05).结论 EEF1A2过表达可以明显增强胰腺癌SW1990细胞的体外侵袭和肺转移能力.     

Regulating effect of Tong Xie-Yao Fang on colonic epithelial secretion via Cl- and HCO3- channel

AIM To investigate the pharmacological effect of Tong XieYao Fang(TXYF) formula, a Chinese herbal formula, on Diarrhea-predominant irritable bowel syndrome(D-IBS) rats.METHODS In a neonatal maternal separation plus restraint stress(NMS + RS) model of D-IBS, male Sprague Dawley rats were randomly divided into two groups(NMS + RS group and TXYF-formula group) with no handlings were used as controls(NH group). Starting from postnatalday 60, rats in TXYF-formula group were administered TXYF-formula(4.92 g/100 g bodyweight) orally twice a day for 14 consecutive days while NH group and NMS + RS group were given distilled water. Using short-circuit current technology, we observed 5-HT-induced changes of current across ion channels, such as cystic fibrosis transmembrane conductance regulator(CFTR) Clchannel, epithelial Na+ channel(ENaC), Ca2+-dependent Cl- channel(CACC), Na+-K+-2Cl- co-transporter(NKCC), and Na+-HCO-3 co-transporter(NBC), in the colonic epithelium of three groups after exposure to drugs and specific blockers with a Power Lab System(AD Instruments International).RESULTS Under basal conditions, the changes of short-circuit current(?Isc, μA/cm2) induced by 5-HT were similar in NH group and TXYF-formula group, and both higher than NMS + RS group(70.86 μA/cm2 ± 12.32 μA/cm2, 67.67 μA/cm2 ± 11.68 μA/cm2 vs 38.8 μA/cm2 ± 7.25 μA/cm2, P 0.01, respectively). When CACC was blocked by 4,4′-diisothiocyanato-stilbene-2,2′-disulfonic acid, 5-HT-induced ?Isc was smaller in NMS + RS group than in NH group and TXYF-formula group, respectively(48.41 μA/cm2 ± 13.15 μA/cm2 vs 74.62 μA/cm2 ± 10.73 μA/cm2, 69.22 μA/cm2 ± 11.7 μA/cm2, P 0.05, respectively). The similar result could be obtained when ENaC was blocked by Amiloride(44.69 μA/cm2 ± 12.58 μA/cm2 vs 62.05 μA/cm2 ± 11.26 μA/cm2, 62.11 μA/cm2 ± 12.01 μA/cm2, P 0.05, respectively). However, when CFTR Cl- channel was blocked by 1,1-dimethyl piperidinium chloride(DPC), 5-HT-induced ?Isc did not significantly differ in three groups(42.28 μA/cm2 ± 10.61 μA/cm2 vs 51.48 μA/cm2 ± 6.56 μA/cm2 vs 47.75 μA/cm2 ± 7.99 μA/cm2, P 0.05, respectively). The similar results could also be obtained in three groups when NBC and NKCC were respectively blocked by their blockers.CONCLUSION TXYF-formula can regulate the Cl- and HCO-3 secretion of colonic mucosa via CFTR Cl- channel, Cl-/HCO-3 exchanger, NBC and NKCC co-transporters.     

抗膜联蛋白A2抗体在抗磷脂综合征中的作用

目的 研究抗膜联蛋白A2抗体在抗磷脂综合征(APS)、系统性红斑狼疮(SLE)的血栓/病态妊娠中的可能作用.方法 先用分子克隆方法表达纯化出重组膜联蛋白A2,然后以重组膜联蛋白A2为抗原,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法分别检测了,101例APS患者,41例SLE合并血栓患者,124例无血栓的SLE患者及120名健康人的血清中IgG型抗膜联蛋白A2抗体水平.结果 APS组和SLE合并血栓组的IgC型抗膜联蛋白A2抗体阳性率分别为21.8%,26.8%,均品著高于单纯SLE组(6.5%)(P值均<0.0.).IgG型抗膜联蛋白A2抗体与血栓/病态妊娠有关联(P<0.01).IgG型抗膜联蛋白A2抗体对血栓/病态妊娠诊断的敏感性、特异性、预测值分别为0.232、0.935、0.805.结论 IgG型抗膜联蛋白A2抗体与APS和SLE患者的血栓/病态妊娠表现相关,将有助于一些潜在的APS患者的诊断.     

hnRNP A2/B1、LN-R在非小细胞肺癌的表达及临床意义

目的　探讨异质性细胞核核糖蛋白 A2 / B1 ( hn RNP A2 / B1 )、层粘连蛋白受体 ( L N- R)表达对非小细胞肺癌 ( NSCL C)的诊断价值及与 NSCL C临床病期、淋巴结转移的关系。方法　采用免疫组织化学方法检测 83例原发性 NSCL C、 32例肺良性肿瘤及 2 0例正常肺组织的 hn RNP A2 / B1 、 L N- R表达。结果　 NSCL C组 hn-RNP A2 / B1 、L N- R表达阳性率分别为 79.5 % ( 6 6 / 83)和 6 7.5 % ( 5 6 / 83) ,明显高于肺良性肿瘤组及正常肺组 (P <0 .0 5 ) ,肺良性肿瘤组阳性率与正常肺组无差异 ( P >0 .0 5 )。有淋巴结转移者 hn RNP A2 / B1 、 L N- R阳性率分别为 88.0 %和 76 .0 % ,明显高于无淋巴结转移者 ( 6 6 .7%、 5 4 .5 % ) ( P <0 .0 5 ) ; ～ 期 hn RNP A2 / B1 、 L N-R阳性率 ( 89.1%、 80 .4 % )明显高于 ～ 期患者阳性率 ( 6 7.6 %、 5 1.4 % ) ,P <0 .0 5。结论　hn RNP A2 / B1 、L N- R表达对 NSCL C诊断、预测病情及判断淋巴结转移均具有重要的临床价值。     

尼氟灭酸对支气管哮喘小鼠模型气道高反应性的抑制作用

目的　观察钙激活Cl-通道 (ClCa)阻断剂尼氟灭酸 (NFA)对支气管哮喘 (简称哮喘 )气道高反应性的抑制作用。方法　BALB/c小鼠 4 5只 ,按随机数字表法分为哮喘组 (A组 )、吸入NFA预防组 (B组 )和正常对照组 (C组 ) ,每组 15只。检测各组小鼠气道压力峰值 时间指数 (APTI)的差异 ,并比较各组小鼠支气管肺泡灌洗液 (BALF)中内皮素 1(ET 1)和一氧化氮 (NO)的含量。制备A组、C组小鼠的离体完整上皮气管环 (A1、C1组 )和去上皮气管环 (A2 、C2 组 ) ,观察在梯度浓度乙酰甲胆碱(mACh)的激发下 ,5 0 μmol/LNFA预处理对气管环收缩张力的影响。 结果　A组APTI与B组 (mACh为 2 .0mg/kg时 ,两者分别为 1.6 2± 0 .14和 1.2 1± 0 .0 7)比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;A组BALF中ET 1和NO含量分别为 (10 3± 9)ng/L、(48.5± 3.2 ) μmol/L ,B组分别为 (5 3± 5 )ng/L和 (2 3.7± 2 .5 )μmol/L ,A组与B组比较差异有显著性(P <0 .0 1) ;离体气管环收缩张力实验显示 ,C1组完整上皮气管环的张力峰值比为 1.2 6± 0 .14 ,A1组完整上皮气管环的张力峰值比为 3.79± 0 .4 4 ,C2 组去上皮气管环的张力峰值比为 2 .0 6± 0 .18,A2 组去上皮气管环的张力峰值比为 2 .15± 0 .2 1,A1组与C1组、A1组与A2 组比较差异有显著性 (     

结核性胸膜炎胸液中纤维蛋白原含量对胸膜肥厚及粘连形成的影响

目的　探讨结核性渗出性胸膜炎胸腔积液纤维蛋白原含量与胸膜肥厚、粘连的关系。方法117例初治结核性渗出性胸膜炎患者按胸腔积液纤维蛋白原含量从低到高分为A、B、C 3组 ,治疗过程中和治疗后测定胸膜厚度 ,评估胸膜粘连发生率。结果 治疗过程中胸膜厚度 :A组与B组比较 (t=2 .5 7,P<0.05 )有显著性差异 ,A组与C组比较 (t=7.15 ,P<0 .0 1)有显著差异性 ,B组与C组比较 (t=2.46 ,P<0 .0 5 )有显著性差异 ;胸膜粘连发生率 :A组与B组比较 (χ²=3.5 1,P>0.05 )无显著性差异 ,A组与C组比较 (χ²=9.87,P<0 .01)有显著性差异 ,B组与C组比较 (χ²=4 .5 1,P<0 .0 5 )有显著性差异。治疗结束时胸膜厚度 :A组与B组比较 (t=1.4 5 ,P>0 .0 5 )无显著性差异 ,A组与C组比较 (t=3.4 6 ,P<0.01)有显著性差异 ,B组与C组比较 (t=2 .89,P<0 .0 1)有显著性差异 ;胸膜粘连发生率 :A组与B组比较 (χ²=0 .10 ,P>0 .0 5 )无显著性差异 ,A组与C组比较 (χ²=4 .36 ,P<0.05)有显著性差异 ,B组与C组比较 (χ²=7.4 9,P<0 .0 1)有显著性差异。结论 胸液纤维蛋白原含量可影响胸膜肥厚度与胸膜粘连发生率。     

华蟾素联合多柔比星通过Fas/线粒体通路促进肺癌A549细胞凋亡

目的探究华蟾素联合多柔比星对肺癌A549细胞凋亡及Fas/线粒体通路的影响。方法用不同浓度华蟾素(0、0. 1、0. 2、0. 4、0. 8μg/m L)、不同浓度多柔比星(0、0. 25、0. 5、1. 0、2. 0μg/m L)或联合用药(多柔比星0. 5μg/m L分别与华蟾素0、0. 1、0. 2、0. 4、0. 8μg/m L联合使用)处理A549细胞。四甲基偶氮唑(MTT)法检测华蟾素联合多柔比星对A549细胞增殖的影响;流式细胞仪检测华蟾素联合多柔比星对A549细胞凋亡的影响;蛋白质印迹(Western blot)技术检测A549细胞Fas/线粒体凋亡通路相关蛋白的表达变化。结果 MTT结果显示,华蟾素和多柔比星对A549细胞均具有增殖抑制作用(P 0. 05),且呈时间-剂量依赖关系。0. 5μg/m L多柔比星分别与0. 1、0. 2、0. 4、0. 8μg/m L华蟾素联合处理下,A549细胞的增殖抑制率呈时间-剂量依赖性。(2)流式细胞仪结果显示,与空白对照组比较,单用0. 4μg/m L华蟾素或0. 5μg/m L多柔比星处理后A549细胞凋亡率显著上升(P 0. 05);与单独用药比较,两药联合处理后A549细胞凋亡率显著上升(P 0. 05)。(3)Western blot结果显示,与空白对照组比较,单用0. 4μg/m L华蟾素或0. 5μg/m L多柔比星处理后A549细胞Fas、Fas L、TNF-R1、Bax及Cyt-c表达显著上调、Bcl-2表达显著下调、裂解型Caspase-3/8/9显著增多(P 0. 05);与单独用药比较,两药联合处理后A549细胞Fas、Fas L、TNF-R1、Bax及Cyt-c表达显著上调、Bcl-2表达显著下调、裂解型Caspase-3/8/9显著增多(P 0. 05)。结论华蟾素联合多柔比星可显著促进肺癌A549细胞凋亡,其机制可能与Fas/线粒体凋亡通路强化有关。     

肽酰基精氨酸脱亚氨酶-4基因多态性与类风湿关节炎的相关性

目的 肽酰基精氨酸脱亚氨酶基因4-94位点(PADI4-94)和4-104位点(PADI4-104)基因的单核苷酸多态性(SNPs)与类风湿关节炎(RA)易感性的关系.方法 采用聚合酶链反应-连接酶检测反应(PCR-LDR)方法 鉴定116例RA患者和100名健康体检者基因及基因型,计算其频率,用X2检验统计分析.用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测RA外周血抗PADl4抗体及PADI4蛋白水平.结果①PADI4-94及PADI4-104位点存在A和G 2种等位基因,A/A,G/G和A/G 3种基因型,RA组/健康组PADI4-94等位基因A、G及其A/A、G/G和A/G基因型频率分别是0.460/0.392、0.540/0.608,0.204/0.186、0.283/0.402和0.513/0.412,2组差异无统计学意义(X2=1.996,P=0.157;X2=3.407,P=0.182);RA组/健康组PADI4-104等位基因A、G及其A/A、G/G和A/G基因型频率分别是0.412/0.345、0.588/0.655,0.150/0.144、0.32710.454和0.522/0.402,2组差异无统计学意义(X2=1.937,P=0.164;X2=3.780,P=0.151).③RA组PADI4-94/PADI4-104各基因型间红细胞沉降率(ESR),RA疾病活动关节评分28(DAS28)评分,C反应蛋白(CRP),抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体,PADI4蛋白量及抗PADI4抗体水平差异无统计学意义(P值分别为0.46/0.67,0.62/0.57,0.12/0.23,0.81/0.43,0.78/0.75,0.38/0.31).结论 我国人群PADI4-94和PADI4-104两位点存在多态性,但其与RA的易感性无关.     

一氧化氮对培养乳鼠心肌细胞低氧复氧损伤的影响

目的 :研究 NO对乳鼠心肌细胞低氧 /复氧 （A/R）损伤的影响。方法 :建立心肌细胞 A/R损伤模型 ,随机分为6组 :A组 ,正常对照组 ;B组 ,单纯低氧 /复氧 （A/R低氧 2 h,复氧 1h） ;C组 ,低氧预处理 ,低氧 2 0 m in后复氧 2 0min,然后 A/R;D、E、F组为 NO预处理组 ,加入 S-亚硝基 -已酰青酶胺 （SNAP）分别使其终浓度为 0 .5、1、2 mm ol/L,预处理 4 0 min后 A/R。于复氧后测定各组培养液中肌酸激酶 （CK）、蛋白漏出量的变化及细胞内丙二醛 （MDA）含量和细胞存活率。结果 :单纯低氧 /复氧组和 2 m mol/L SNAP组 CK、蛋白漏出量、MDA水平显著升高 （P<0 .0 1vs正常组 ） ,细胞存活率显著降低 （P<0 .0 1vs正常组 ）。0 .5和 1mmol/L SNAP预处理组和低氧预处理组上述变化明显减轻 （P<0 .0 1vs低氧复氧组 ）。结论 :NO预处理对乳鼠心肌细胞 A/R损伤具有保护作用 ,并具有浓度依赖性。     

肺泡微石症患者磷酸钠协同转运蛋白基因的检测及其变异

目的 检测3例肺泡微石症患者的磷酸钠协同转运蛋白基因(SLC34A2)基因变异情况,探讨该基因对人肺泡上皮细胞A549系(简称A549细胞)中钙、磷转运的影响.方法 采用分段PCR和基因测序的方法对3例肺泡微石症患者的SLC34A2基因进行检测,用Trizol法从新鲜肺组织中获得RNA,逆转录-PCR调取目的 基因,构建该基因真核表达载体,质脂体方法转染A549细胞,逆转录-PCR检测SLC34A2 mRNA的表达,检测细胞上清液中钙、磷含量.细胞实验分为转染组(5×105/孔,4孔)、对照组(5×105/孔,1孔)和空白组(5×105/孔,1孔),实验重复6次.计量资料采用单因素方差分析,多组问两两比较采用SNK-q检验.结果 3例肺泡微石症患者中未发现变异的外显子.获得完整的SLC34A2 cDNA,成功构建peDNA3.1(+)-SLC34A2真核表达载体,并转染A549细胞.转染组SLC34A2 mRNA的吸光度值(2.48.±0.45)明显高于对照组(0.55±0.07)和空白组(0.60±0.06),差异均有统计学意义(q值分别为16.25和15.78,均P＜0.01);转染组细胞上清液中钙、磷含量[(0.110±0.016)mmol/L和(3.8±0.4)mmol/L]明显低于对照组[(0.254±0.047)mmol/L和(7.3±0.8)mmol/L]和空白组[(0.262±0.041)mmoL/L和(7.1±0.4)mmol/L],差异均有统计学意义(q值为8.657～13.892,均P＜0.01).结论 随着SLC34A2基因的表达量增加,细胞外液钙、磷含量随之下降.SLC34A2的变异可能未发生在基因组水平.