金纳多注射液对脑缺血/再灌注后caspase-3和caspase-9表达的影响

目的：观察金纳多注射液对大鼠局灶性脑缺血/再灌注后天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）和caspase-9蛋白及mRNA表达的影响。方法：40只Wistar雄性大鼠被随机分为假手术组、缺血组、金纳多小剂量治疗组及金纳多大剂量治疗组,每组10只。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型。应用原位末端缺刻标记法（TUNEL）检测神经元凋亡;应用免疫组化检测caspase-3和caspase-9的蛋白表达;应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测caspase-3和caspase-9的mRNA表达。结果：与假手术组比较,缺血组、金纳多小剂量治疗组和大剂量治疗组凋亡细胞数以及caspase-3和caspase-9的蛋白及mRNA表达均显著增高（P均〈0.01）;与缺血组比较,金纳多小剂量治疗组和大剂量治疗组凋亡细胞数、caspase-3和caspase-9的蛋白及mRNA表达均显著减少（P均〈0.01）;与金纳多小剂量治疗组比较,金纳多大剂量治疗组凋亡细胞数、caspase-3和caspase-9的蛋白及mRNA表达均明显减少（P均〈0.05）。结论：金纳多注射液能显著减少脑缺血/再灌注后神经元凋亡以及caspase-3、caspase-9的mRNA和蛋白表达,疗效表现为剂量依赖性。     

白藜芦醇对缺血再灌注心肌细胞凋亡及沉寂信息调节因子2表达的影响

目的：观察沉寂信息调节因子2激活剂-白藜芦醇干预对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及沉寂信息调节因子2表达的影响。 方法：实验于2005—03／10在汕头大学医学院细胞衰老实验室完成。选用雄性SD大鼠30只，按随机数字表法分为3组。即假手术组、缺血再灌注组和白藜芦醇组。每组10只。白藜芦醇组和缺血再灌注组大鼠结扎冠状动脉左前降支制备心肌缺血再灌注模型，30min后松开扎线，再灌注2h。假手术组只穿线不结扎。假手术组及缺血再灌注组给予二甲基亚砜-质量浓度为0．009的生理盐水1mL/kg，白藜芦醇组给予白藜芦醇10mg／kg，分别于缺血前15min及再灌注前1min以1mL／kg舌下静脉给药。实验结束取出心脏，应用免疫组织化学方法检测沉寂信息调节因子2同源物SIRT1及半胱氨酸蛋白酶3蛋白的表达。以背景灰度值进行标准校正，计算半胱氨酸蛋白酶3表达的相对量。其灰度值愈大则阳性强度愈大。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡情况，凋亡指数=（视野内凋亡细胞个数／视野内所有心肌细胞个数）&;#215;100％。 结果：30只大鼠全部进入结果分析，每组10只，无脱失。①白藜芦醇组大鼠心肌细胞的SIRT1阳性细胞率显著高于缺血再灌注组（P=0．008），但低于假手术组（P=-0．040）。②白藜芦醇组大鼠心肌细胞的凋亡指数显著低于缺血再灌注组（P=0．000），而缺血再灌注组则显著高于假手术组（P=0．000）。③白藜芦醇组灰度值为27．40&;#177;1．87；而缺血再灌注组灰度值为34．69&;#177;1．71，着色强度显著高于白藜芦醇组（t=9．098，P=0．000）。 结论：白藜芦醇可抑制缺血再灌注后心肌细胞凋亡，可能是通过增加沉寂信息调节因子2表达，抑制半胱氨酸蛋白酶3活性而发挥作用。     

缺血后适应对大鼠肾脏热缺血再灌注损伤凋亡相关基因bcl-2/bax表达的影响

目的探讨缺血后适应对大鼠肾脏热缺血再灌注损伤细胞凋亡相关基因bcl-2/bax表达的影响。方法将40只Wistar健康雄性大鼠随机分为对照组(C组)、缺血再灌注组(IR组)、缺血后适应组(IPo)和腺苷组(Ado组)4组。行右肾切除,左肾热缺血60min后再灌注24h建立大鼠肾脏急性热缺血再灌注损伤模型;C组仅右肾切除,左肾蒂游离;IPo组于再灌注前行6个10s无限制灌注加10s再缺血循环;Ado组于缺血前10min经静脉给予腺苷。采用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)和免疫组化法检测各组肾脏组织中细胞凋亡相关基因bcl-2/bax表达水平。结果与C组相比,缺血60min再灌注24h可以导致肾脏组织中bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达的相对丰度显著升高(P<0.05)。与IR组比较,经过后适应(Pos-Con)或腺苷(Ado)干预后bcl-2 mRNA表达水平升高更加显著,BaxmRNA表达水平显著降低(P<0.05),两种处理之间无显著差异(P>0.05)。比较各组bcl-2/Bax的比值,IR组较对照组显著降低(P<0.05),而Pos-Con和Ado干预后,与IR组比较bcl-2/Bax的比值显著升高(P均<0.05),两种处理之间无显著差异(P>0.05)。结论缺血再灌注可以上调大鼠肾脏促凋亡基因bax的表达,下调凋亡抑制基因bcl-2的表达,进而可能导致肾脏细胞过度凋亡;缺血后适应能够抑制促凋亡基因bax的过度上调,同时促进凋亡抑制基因bcl-2的表达,进而可能防止肾脏细胞过度凋亡。     

白藜芦醇对缺血再灌注心肌细胞凋亡及沉寂信息调节因子2表达的影响

目的:观察沉寂信息调节因子2激活剂-白藜芦醇干预对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及沉寂信息调节因子2表达的影响。方法:实验于2005-03/10在汕头大学医学院细胞衰老实验室完成。选用雄性SD大鼠30只,按随机数字表法分为3组,即假手术组、缺血再灌注组和白藜芦醇组,每组10只。白藜芦醇组和缺血再灌注组大鼠结扎冠状动脉左前降支制备心肌缺血再灌注模型,30min后松开扎线,再灌注2h。假手术组只穿线不结扎。假手术组及缺血再灌注组给予二甲基亚砜-质量浓度为0.009的生理盐水1mL/kg,白藜芦醇组给予白藜芦醇10mg/kg,分别于缺血前15min及再灌注前1min以1mL/kg舌下静脉给药。实验结束取出心脏,应用免疫组织化学方法检测沉寂信息调节因子2同源物SIRT1及半胱氨酸蛋白酶3蛋白的表达。以背景灰度值进行标准校正,计算半胱氨酸蛋白酶3表达的相对量,其灰度值愈大则阳性强度愈大。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡情况,凋亡指数=穴视野内凋亡细胞个数/视野内所有心肌细胞个数雪×100%。结果:30只大鼠全部进入结果分析,每组10只,无脱失。①白藜芦醇组大鼠心肌细胞的SIRT1阳性细胞率显著高于缺血再灌注组(P=0.008),但低于假手术组(P=0.040)。②白藜芦醇组大鼠心肌细胞的凋亡指数显著低于缺血再灌注组(P=0.000),而缺血再灌注组则显著高于假手术组(P=0.000)。③白藜芦醇组灰度值为27.40±1.87;而缺血再灌注组灰度值为34.69±1.71,着色强度显著高于白藜芦醇组(t=9.098,P=0.000)。结论:白藜芦醇可抑制缺血再灌注后心肌细胞凋亡,可能是通过增加沉寂信息调节因子2表达,抑制半胱氨酸蛋白酶3活性而发挥作用。     

肺缺血再灌注损伤模型大鼠肺组织细胞凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达的动态变化

背景:肺缺血再灌注损伤过程中肺组织细胞凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达的动态变化及其可能的作用机制有待观察。目的:观察大鼠肺缺血再灌注损伤中肺组织细胞凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达的动态变化,并分析细胞凋亡在肺缺血再灌注损伤中作用及可能机制。设计:随机对照动物实验。单位:南京医科大学附属南京第一医院急诊中心。材料:实验于2006-04/2006-09在南京医科大学附属南京第一医院动物实验室及南京市放射免疫检测中心完成。选用28只雄性健康清洁级SD大鼠,体质量250￣350g,鼠龄49￣76d,由南京医科大学实验动物中心提供。随机数字表法将大鼠分为实验组及对照组,每组14只。方法:①实验干预:实验组大鼠参照Eppinger等的方法进行建立肺缺血再灌注模型,大鼠给予阻断肺门45min(观察肺无舒缩为阻断标准),再开放3,6h(再灌注以肺恢复舒缩为标准)后取材,每次取7只,对照组仪行开胸术,于相同时间点同样方法分离肺组织。②实验评估:采用Annexin-V-PI双染法通过流式细胞仪检测肺组织凋亡细胞,计算凋亡率;采用免疫组织化学法及图像分析法观察肺脏天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的表达;计算2组大鼠左肺湿干质量比;计算肺泡损伤数比值进行肺组织损伤定量评价;光镜下苏木精-伊红染色观察肺脏的病理形态学变化。主要观察指标:①肺组织细胞凋亡率及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的表达。②肺湿干质量比及肺组织损伤定量评价结果。③肺组织病理形态学变化。结果:纳入大鼠28只均进入结果分析,无脱落。①实验组肺缺血再灌注3,6h肺组织细胞凋亡率较对照组有明显增加,差异有统计学意义(P<0.01),实验组缺血再灌注6h凋亡率较3h有所降低(P<0.05)。②实验组大鼠肺组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达3h达到最高,6h稍有下降,较对照组各时间点表达增加(P<0.01)。③实验组肺缺血再灌注3,6h肺泡损伤数比值及肺脏湿干质量比值较对照组均明显增加(P<0.01),实验组缺血再灌注6h两比值较3h有所增加(P<0.05)。④实验组肺泡结构破坏、塌陷、消失,肺泡间隔有大量的炎性细胞浸润,肺缺血再灌注6h较3h更严重。对照组无明显改变。结论:肺缺血再灌注早期可能通过天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达的改变,激活细胞的凋亡途径,诱导肺组织细胞凋亡的发生,从而导致肺损伤的发生。     

异丙酚对大鼠前脑缺血-再灌注后海马Caspase-3表达的影响

目的 探讨异丙酚对大鼠前脑缺血-再灌注(I/R)后海马Caspase-3表达的影响及在脑保护作用中的机制.方法 42只雄性Wistar大鼠随机分为3组,每组14只.双侧颈总动脉夹闭加放血降压再回输法建立前脑I/R模型,侧脑室内注射进行异丙酚干预.对照组(C组):仅暴露双侧颈总动脉,未放血降压及夹闭双侧颈总动脉;缺血损伤组(Ⅰ组):放血法使平均动脉压降到(40±5)mm Hg时,夹闭双侧颈总动脉10 min,侧脑室内注射生理盐水(1.0 mg/kg);异丙酚干预组(P组):放血降压、夹闭双侧颈总动脉与I组相同,不同的是侧脑室内注射异丙酚(1.0 mg/kg).于再灌注24 h后断头取脑组织,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测海马Caspase-3 mRNA表达(n=6),免疫组织化学(IH)法检测海马Caspase-3蛋白表达(n=8).结果 Ⅰ组和P组Caspase-3 mRNA表达明显高于C组(P＜0.05),但P组Caspase-3 mRNA表达明显低于Ⅰ组(P＜0.05);Ⅰ组和P组Caspase-3蛋白表达明显高于C组(P＜0.05),但P组Caspase-3蛋白表达明显低于Ⅰ组(P＜0.05).结论 异丙酚抑制大鼠前脑I/R后海马Caspase-3 mRNA和蛋白的表达,可能是其对脑缺血再灌注损伤保护作用的机制之一.     

乙酰半胱氨酸对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注后细胞凋亡的影响

目的：观察乙酰半胱氨酸对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注后导致的细胞凋亡的影响。方法：实验于2005—09／2006—05在华中科技大学协和医院麻醉学实验室完成。纳入SD大鼠81只，先以“随机数字表法”分为糖尿病组（链尿佐菌素55mg／kg腹腔注射诱导，45只大鼠诱导成功36只，成模率80％）和正常对照组（36只）。以穿线结扎左冠脉制备心肌缺血再灌注模型，两组大鼠再分别随机分为假手术组、缺血再灌注组和乙酰半胱氨酸治疗组，每组12只。乙酰半胱氨酸给药组：100mg／kg（用蒸馏水配成50g/L的溶液）灌胃，2次／d，连续1周，手术前1h再腹腔注射乙酰半胱氨酸150mg／kg；其他各组给予等量的蒸馏水。反转录-聚合酶链反应和免疫蛋白印迹分析法检测心肌半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3mRNA和蛋白的表达。原位末端标记法检测心肌凋亡细胞并计算凋亡指数。同时检测丙二醛含量和肌酸激酶同工酶活性。结果：去除诱导糖尿病模型失败的9只大鼠，最终有72只大鼠进入结果分析。①糖尿病与正常假手术组之间相比，丙二醛、肌酸激酶同工酶、凋亡指数、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3mRNA和蛋白的表达水平差异无显著性意义（P〉0．05）。（砻缺血再灌注后，糖尿病和正常乙酰半胱氨酸治疗组丙二醛、肌酸激酶同工酶、凋亡指数、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3mRNA和蛋白的表达水平均低于各自对应的缺血再灌注组（P〈0．01），高于各自假手术组（P〈0．01）。（固上述参数糖尿病缺血再灌注组高于正常缺血再灌注组（P〈0．01），糖尿病乙酰半胱氨酸干预组高于正常乙酰半胱氨酸干预组（P〈0．01）。结论：乙酰半胱氨酸可抑制缺血再灌注后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3mRNA和蛋白的表达，减少缺血再灌注引起的糖尿病和非糖尿病大鼠心肌细胞凋亡，对缺血再灌注心肌有保护作用，但糖尿病组的疗效低于正常组。     

尿酸影响大鼠脊髓损伤后半胱氨酸蛋白酶3的表达及神经细胞凋亡

目的:观察尿酸对大鼠脊髓损伤后损伤段半胱氨酸蛋白酶3的表达及神经细胞凋亡的影响。方法:实验于2005-07/12在同济医院矫形外科实验室完成。选用雌性SD大鼠55只,按随机数字表法分为3组,空白对照组5只,脊髓损伤组和尿酸处理组各25只。脊髓损伤组和尿酸处理组大鼠用改良的Allen’s打击法造脊髓损伤模型。空白对照组大鼠单纯切除椎板,不打击脊髓。脊髓损伤组和尿酸处理组大鼠分别于术后8h,24h,72h,7d,14d取材,每时点处死5只大鼠;空白对照组大鼠于术后8h处死取材。对损伤部位脊髓进行病理形态学观察;采用原位末端标记法标记凋亡细胞,计算凋亡细胞指数=凋亡细胞核数/总细胞核数;用免疫组化染色检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞。结果:纳入55只大鼠,全部进入结果分析,无脱失。①各组大鼠脊髓组织学检查结果比较:空白对照组大鼠脊髓未见出血、组织变性坏死等表现。与脊髓损伤组相比,尿酸处理组大鼠损伤脊髓出血坏死减少,炎性细胞浸润减轻。②各组大鼠脊髓组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞数及神经细胞凋亡指数比较:相同时点尿酸处理组大鼠的神经细胞凋亡指数和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞数均显著低于脊髓损伤组(t=3.057～6.965,P<0.05)。结论:尿酸可以抑制脊髓神经细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达,对损伤脊髓组织具有保护作用。     

异甘草酸镁对大鼠肝缺血—再灌注损伤后肝细胞凋亡及bcl-2表达的影响

目的探讨异甘草酸镁(MI)对大鼠肝缺血再灌注损伤(HIRI)后肝细胞凋亡和凋亡抑制基因bcl-2表达的影响。方法将40只SD大鼠随机分为I/R组20例和MI+I/R组20例,分别于HIRI后1、3、6、24 h测定血清SOD和MDA含量,并于HIRI后1h采用TUNEL法和免疫组化法分别检测2组大鼠肝细胞凋亡和bcl-2表达水平。结果 I/R组MDA含量逐渐升高,MI+I/R组MDA含量逐渐降低(P<0.05);2组SOD含量均逐渐升高,MI+I/R组SOD含量在HIRI后3 h、4 h时较I/R组显著升高(P<0.01)。HIRI后1 h,MI+I/R组阳性细胞核数量及其占总肝细胞核数的百分比均明显少于I/R组(P<0.01);而表达bcl-2蛋白阳性的肝细胞数及其占肝细胞总数的百分比均明显高于I/R组(P<0.01)。结论异甘草酸镁能显著清除氧自由基,减少大鼠HIRI后肝细胞凋亡,并能上调HIRI后肝细胞凋亡抑制基因bcl-2的蛋白表达水平,对HIRI有较好的治疗作用。     

脑缺血再灌注对大鼠不同组织细胞凋亡及凋亡调控基因表达的影响

目的探讨脑缺血再灌注(CI/RP)对大鼠不同组织细胞凋亡及凋亡调控基因表达的影响。方法应用TUNEL法和免疫组化法,分别测定CI/RP损伤后各组大鼠脑皮质、丘脑和胸腺组织细胞凋亡及凋亡调控基因bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果CI/RP损伤后大鼠脑皮质、丘脑和胸腺组织细胞凋亡率明显升高,凋亡调控基因bcl-2和Bax蛋白表达率也呈不同程度的升高,与对照组比较,差异非常显著(P<0.01)。电镜观察结果与之相似。结论CI/RP损伤后上述3种组织细胞凋亡率增高,凋亡调控基因bcl-2和Bax表达异常。该结果为临床早期防治CI/RP损伤提供了实验依据。     

局灶脑缺血再灌注期亚低温对神经元凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响

目的:研究再灌注期实施亚低温治疗对大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)后神经元细胞的凋亡及Bcl-2,Bax基因表达的影响。方法:采用Longa线栓法制作MCAO模型,模型成功后分别进行缺血期3h、再灌注期3h、缺血期至再灌注期6h的亚低温治疗。再灌注后24h断头取脑,连续切片作TUNEL染色及Bcl-2,Bax免疫组化染色。结果:①与对照组的Bcl-2阳性细胞百分率犤(19.79±0.92)%犦相比,缺血期亚低温3h组犤(23.04±3.76)%犦和缺血亚低温至再灌亚低温6h组犤(25.47±2.03)%犦的Bcl-2阳性细胞率增加(q=4.19,0.010.05)。③凋亡细胞阳性率与Bcl-2/Bax的比值呈负相关关系(r=-0.9759,P<0.01)。结论:①单纯于再灌注期实施亚低温3h不能明显抑制神经元细胞凋亡,对Bcl-2和Bax基因的表达也     

银杏内酯对大鼠局灶脑缺血再灌注后神经功能缺失评分、脑梗死体积及皮质神经元凋亡的影响

目的:观察银杏内酯对大鼠局灶脑缺血再灌注后神经功能缺失评分、脑梗死体积、皮质神经元凋亡的影响及其银杏内酯的脑保护作用。方法:实验于2004-01/09在福建医科大学解剖学研究所完成。将月龄3个月雄性SD大鼠96只随机分为实验组和对照组,采用改良线栓法制作大脑中动脉闭塞局灶缺血模型。实验组在缺血即刻腹腔注射银杏内酯20mg/kg,对照组腹腔注射等量的生理盐水。两组又随机分为再灌注6,24和48h组,每组16只,运用Zea-Longa法进行神经功能缺失评分。在再灌注6,24,48h时间点每组随机取8只采用2,3,5-三苯四氮唑染色法观察梗死灶范围,并计算梗死灶体积占半球体积的百分率。另每组8只大鼠应用原位细胞凋亡检测法计数神经元凋亡数目。结果:实验过程中有4只大鼠因未出现神经功能缺损体征予以剔除,补充4只造模成功大鼠,进入结果分析大鼠保持为96只。①再灌注6,24h实验组神经功能缺损评分明显低于对照组(1.69±0.6,1.25±0.45,2.56±0.51,2.06±0.77,U=37,41,P<0.001),再灌注48h实验组评分与对照组基本一致(0.62±0.50,0.69±0.48,U=120,P=0.714)。②再灌注6,24,48h实验组脑梗死体积占半球体积的百分率明显低于对照组犤(12.27±0.55)%,(15.28±0.45)%,(16.30±0.36)%,(19.06±0.80)%,(24.19±0.57)%,(29.27±1.09)%     

3-硝基丙酸预处理对大鼠局灶性脑缺血神经元凋亡的抑制作用

目的　探讨小剂量线粒体毒素 3-硝基丙酸 (3-nitropropionicacid ,3-NPA)对大鼠局灶性脑缺血神经细胞凋亡和bcl- 2 /bax表达的影响。方法　大鼠腹腔注射 3-NPA 2 0mg·kg- 1 或生理盐水后 3d制作大脑中动脉闭塞模型 ,分别采用TTC染色、流式细胞术、免疫组织化学方法 ,观察 3-NPA预处理对脑缺血 2h再灌注 2 4h脑梗死体积、神经细胞凋亡率、bcl- 2和bax表达的影响。结果　 3-NPA预处理组较对照组脑梗死体积减小 ,神经细胞凋亡减少 ,bcl- 2表达增强 ,bax表达降低。结论　 3-NPA预处理可以诱导脑缺血耐受 ,增强bcl- 2的表达 ,降低bax的表达 ,从而抑制神经细胞凋亡可能是其机制之一     

α-黑素细胞刺激素对大鼠局灶脑缺血再灌注后炎症反应的影响

背景研究表明,神经免疫调节肽α-黑素细胞刺激素(α-melanophorestimulating hormone,α-MSH)可通过抑制促炎因子释放、改善淋巴细胞活力等途径发挥其抗炎、抗菌、退热和免疫调节作用,在防治全身炎性反应综合征中可能有良好的应用前景.目的研究α-MSH对缺血-再灌注后脑组织炎性细胞浸润及黏附分子(intercellular adhesion molecule,ICAM-1)表达的影响.设计随机双盲对照实验.单位解放军第三军医大学西南医院急救部.材料健康雄性Wistar大鼠60只,由第三军医大学实验动物中心提供.实验分3组,即假手术组、缺血组和α-MSH治疗组,每组根据缺血2 h后再灌注6,12,24,48,72 h 5个时相点分为5组,每组各时相点4只.干预制备大脑中动脉闭塞模型,在每个时间点取2只动物用免疫组织化学方法检测ICAM-1的表达情况.各时间点取2只动物用于检测髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性.在透射电镜下观察脑组织细胞超微结构.主要观察指标ICAM-1阳性表达,MPO活性,细胞超微结构.结果缺血再灌注后高倍镜下(×200)每平方毫米大鼠脑组织切片的ICAM-1阳性细胞数在假手术组中稳定于(1.02±0.14)～(1.15±0.16)个/mm2;缺血组6 h后ICAM-1开始上升,于12 h达高峰,由(2.82±0.07)个/mm2增至(7.08±0.09)个/mm2,24～72 h其表达水平仍明显高于假手术组;α-MSH治疗组ICAM-1表达明显下调,由(4.51±0.11)个/mm2降至(2.97±0.09)个/mm2.脑组织MPO活性在假手术组中稳定于(3.17±0.27)～(3.67±0.23)nkat;缺血组于12 h开始升高,24 h达高峰,由(5.83±0.15)nkat增至(9.00±0.25)nkat,到72h活性持续升高;α-MSH治疗组MPO活性较缺血组明显下降,24 h活性为(6.63±0.27)nkat.超微结构观察显示假手术组神经元结构完整;缺血组再灌注神经细胞膜和胶质细胞膜、核膜出现破坏,线粒体肿胀,12 h超微结构改变达高峰;治疗组早期同缺血组,12 h后并未随时间进一步加重.结论α-MSH能减轻缺血-再灌注后脑组织炎性细胞浸润及ICAM-1表达,对脑缺血再灌注损伤具有保护作用.     

异丙酚对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤后nNOS表达的影响

目的探讨异丙酚对大鼠局灶性脑缺血．再灌注损伤后神经型一氧化氮合酶（nNOS）表达的影响及其可能的脑保护机制。方法78只雄性Wistar大鼠随机分为3组：假手术组（s组,n=6）;缺血．再灌注组（I-R组,n=36）;异丙酚干预组（P组,n=36）。I-R组和P组按不同再灌注时间又随机分为三个亚组：1h亚组、3h亚组、6h亚组（n=12）。采用右侧大脑中动脉线栓法（MCAO）建立大鼠局灶性脑缺血．再灌注模型。s组行假手术操作,但不行线栓法阻断血流及药物干预;I-R组于缺血2h后再灌注时即刻右侧侧脑室注射生理盐水（1mg／kg）;P组于缺血2h后再灌注时即刻右侧侧脑室注射1％异丙酚（1mg／kg）。所有大鼠于再灌注前进行神经学功能评分;分别于各再灌注时间点断头取脑组织,1Trc染色法测定脑梗死灶（n=6）;苏木精．伊红（HE）染色观察脑组织病理学变化（n=6）;免疫组织化学方法测定nNOS蛋白表达（n=6）。结果与I-R组比较,P组神经学功能评分降低（P〈0．05）。在I-R组内,与1h亚组比较,3h亚组和6h亚组脑梗死灶明显增大（P〈0．05）;P组3h亚组、6h亚组与I-R组同时间亚组比较．脑梗死灶减小（P〈0．05）。S组神经细胞结构完整;I-R组神经细胞结构破坏,有核分裂及核溶解;与I-R组比较．P组脑组织病理学改变减轻。s组仅有少量nNOS蛋白表达;在I．R组内,nNOS蛋白在1h亚组表达升高,在3h亚组表达到高峰,6h亚组与3h亚组比较表达降低（P〈0．05）;P组3h亚组、6h亚组与I—R组同时间亚组比较,nNOS蛋白表达减少（P〈0．05）。结论异丙酚抑制大鼠局灶性脑缺血．再灌注后nNOS蛋白的表达,可能是其脑保护作用机制之一。     

熊果酸诱导结肠癌HT-29细胞凋亡与凋亡相关基因的关系

目的：体外实验探讨熊果酸诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的可能性，揭示该凋亡发生与其相关基因之间的关系。方法：采用四甲基偶氮唑蓝比色、TUNEL法、流式细胞术检测熊果酸对结肠癌HT-29细胞的增殖抑制与杀伤作用；应用免疫组织化学SP法检测凋亡相关基因caspase-9、bcl-2、bax的表达。结果：熊果酸在体外对HT-29细胞有中度增殖抑制效应，在熊果酸作用下，HT-29细胞出现显著的细胞凋亡征象，TUNEL法显示细胞固缩，核染色质聚集或断裂，形成凋亡小体。流式细胞术检测在G1期之前出现sub-G1峰，凋亡率最高为11．63％，熊果酸的作用具有浓度和时间依赖性。在HT-29细胞凋亡过程中，凋亡相关基因caspase-9、bax的表达增强，bcl-2的表达减弱。结论：熊果酸在体外对结肠癌HT-29细胞有诱导凋亡作用，而caspase-9和bax的表达增强，bcl-2的表达减弱可能是其作用机制之一。     

低氧预处理对大鼠脑缺血再灌注B细胞淋巴瘤2、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 mRNA表达的影响

目的:观察低氧预处理对大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型B细胞淋巴瘤2、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3mRNA表达的影响,探讨其脑保护作用及可能机制。方法:①实验于2004-10/2005-06在苏州大学附属第一医院神经内科完成。选用清洁级成年SD雄性大鼠55只,随机分为3组:假手术组,对照组(缺血再灌注组)和低氧预处理组。②采用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型,假手术组只手术不插线。低氧预处理组在低氧预处理后12h制备脑缺血再灌注模型。③假手术组在缺血3h再灌注24h、对照组和低氧预处理组在缺血3h再灌注3,6,12,24,48h不同时间点,进行脑切片的苏木精-伊红染色、原位末端标记法检测细胞凋亡,免疫组化法检测B细胞淋巴瘤2水平、原位杂交染法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3mRNA表达。结果:55只大鼠均进入结果分析。①假手术组无凋亡细胞,低氧预处理组的凋亡细胞较对照组明显减少(P<0.05)。②低氧预处理组大鼠缺血再灌注3h可见B细胞淋巴瘤2阳性细胞数开始表达,再灌注24h达高峰,缺血再灌注6,12,24,48h均较对照组增高(101.40±2.78,68.20±1.45;137.92±2.41,81.34±2.28;172.21±2.89,103.12±2.61;105.68±12.67,60.12±1.47;P<0.05)。③低氧预处理组和对照组缺血再灌注3h半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3mRNA阳性细胞数的表达逐渐增加,至24h达高峰;低氧预处理组缺血再灌注12,48h阳性细胞数的表达均较对照组减少(45.96±5.02,85.48±7.88;33.84±4.67,56.31±7.02;P<0.05)。结论:低氧预处理的脑保护作用与其抑制神经细胞凋亡有关;而上调B细胞淋巴瘤2及下调半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3mRNA的表达,可能是实现保护作用、抑制凋亡的机制之一。     

银杏叶提取物对大鼠局灶性脑缺血后梗死体积和Bcl-2,Caspase-3表达的影响

目的：探讨银杏叶提取物（ginkgo biloba extract，GBE）对脑缺血后梗死体积及神经元凋亡相关蛋白Bel-2，Caspase-3表达的影响。方法：将SD大鼠随机分为缺血对照组、小剂量GBE治疗组（小剂量组）、大剂量GBE治疗组（大剂量组）。采用大鼠大脑中动脉栓塞模型，应用光镜、TIC染色、免疫组织化学染色及TUNEL染色检测方法，在不同时间点观察各组大鼠脑梗死体积的变化以及Bcl-2，Caspase-3阳性细胞表达的不同和神经细胞凋亡的情况。结果：在不同时间点各给药组大鼠的脑梗死体积小于缺血对照组，差异有显著性（P〈0．01）；大剂量组脑梗死体积与小剂量组脑梗死体积相比差异亦有统计学意义（P〈0．05）。各给药组大鼠Bel-2阳性细胞表达数目均高于缺血对照组，而Caspase-3阳性细胞表达数目则低于缺血对照组（P〈0．01）；大剂量组阳性细胞表达数目与小剂量组阳性细胞表达数目相比差异亦有显著性（P〈0．05）。结论：银杏叶提取物可减少脑梗死体积，在脑缺血损伤急性期可增加Bcl-2的表达而减少Caspase-3的表达。     

深低温停循环下不同脑保护方法对海马区神经细胞凋亡及bcl-2、bax基因mRNA表达的影响

目的:观察深低温停循环下给予不同脑保护方法后犬海马组织中神经细胞凋亡情况,探讨其对凋亡相关基因bcl-2和bax的mRNA表达的影响。方法:健康成年杂种犬(18～22kg)18只,随机分成3组,深低温停循环(deephypothermiacirculatoryarrest,DHCA)组(A组,对照组);DHCA+间断选择性顺行脑灌注(intermittentselectiveantegradecerebralperfusion,ISACP)组(B组);DHCA+逆行脑灌注(retrogradecerebralperfusion,RCP)组(C组)。术后取出海马组织,分别采用电镜和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测海马组织神经细胞凋亡情况及凋亡相关基因bcl-2和bax的mRNA表达情况。结果:电镜下,A组可见明显神经细胞凋亡改变,B、C两组仅见少量神经细胞凋亡改变。bcl-2mRNA在B组表达最高(P<0.01),C组表达明显高于A组(P<0.01);baxmRNA在A组表达最强(P<0.01),B组和C组间差异无显著性(P>0.05)。结论:DHCA下,给予ISACP或PCR两种脑保护方法都可以上调bc...