紫杉醇联合曲妥珠单抗对人乳腺癌SKBR-3细胞移植裸鼠的治疗作用

目的:观察紫杉醇联合曲妥珠单抗对人乳腺癌SKBR-3细胞移植裸鼠的治疗效果以及对瘤组织局部凋亡诱导因子程序性细胞死亡蛋白5(PDCD5)与凋亡抑制因子X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达的影响。方法:用高表达Her-2的人乳腺癌SKBR-3细胞制备裸鼠皮下移植瘤模型,成瘤后,将荷瘤小鼠随机分组分别给予紫杉醇联合曲妥珠单抗(联合治疗组)、紫杉醇单药(紫杉醇组)、曲妥珠单抗单药(曲妥珠单抗组)、生理盐水(对照组)治疗。每周用药1次,6次后处死小鼠,取移植瘤称重后,分别用qPCR与Western bolt检测瘤组织PDCD5和XIAP基因与表达。结果:与对照组比较,各治疗组移植瘤质量均明显减小,瘤组织PDCD5mRNA与蛋白表达量均明显升高,XIAPmRNA与蛋白表达量均明显降低,且联合治疗组以上变化较2个单药组更为明显(均P0.05)。单药组间比较,紫杉醇组降低XIAPmRNA与蛋白表达的作用强于曲妥珠单抗单组(均P0.05),其他指标无统计学差异(均P0.05)。结论:紫杉醇联合曲妥珠单抗化疗能有效抑制Her-2阳性乳腺癌移植瘤在裸鼠体内的生长,其作用可能与促进肿瘤PDCD5表达、同时降低XIAP表达有关。     

低剂量化疗联合西妥昔单抗治疗结肠癌的实验研究

目的 观察5氟尿嘧啶(5-Fu)持续低剂量给药联合西妥昔单抗化疗对小鼠结肠癌皮下移植瘤血管生成的影响,并观察其抑瘤效果和毒副作用.方法 建立荷CT-26结肠癌Balb/c小鼠模型,分别给予持续低剂量5-Fu、常规大剂量5-Fu、西妥昔单抗、持续低剂量5-Fu联合西妥昔单抗治疗以及生理盐水,观察肿瘤体积、小鼠体重和外周血白细胞计数及小鼠生存期.治疗8周结束后取皮下肿瘤组织,以免疫荧光法测定肿瘤微血管密度(MVD),以TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡. 结果 与常规大剂量5-Fu治疗组比较,持续低剂量5-FU治疗组以及联合治疗组无明显体重减轻或外周血白细胞计数下降等毒性迹象,小鼠生存期显著延长(P＜0.05).持续低剂量5-Fu治疗组以及联合治疗组抑瘤率分别达到55%及71%;肿瘤MVD值分别为4.13±1.85和3.52 4±45,较对照组降低73%及77%,明显优于常规大剂量5-Fu治疗组及西妥昔单抗治疗组.此外,采用TUNEL法检测肿瘤组织的细胞凋亡水平,各组之间相比差异无统计学意义. 结论低剂量5-FU联合西妥昔单抗的给药方式靶向于结肠癌血管生成,不易产生耐药,增加了抑瘤效果,毒副作用小,动物生存期明显延长.     

PPIB蛋白对结肠癌成瘤的影响和低氧机制

目的:研究肽酰脯氨基顺反异构酶B(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase,PPIB)蛋白对结肠癌细胞成瘤的影响,探讨结肠癌低氧发病的机制。方法:应用RNAi技术,构建下调PPIB蛋白表达的稳转结肠癌细胞株,移植到BALB/c裸鼠皮下,检测PPIB蛋白下调组与对照组的成瘤差异。TUNEL法检测两组移植瘤的细胞凋亡水平。低氧培养结肠癌细胞株,Western印迹法检测PPIB的表达水平与低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的关系。结果:下调PPIB蛋白表达后,在裸鼠皮下成瘤的能力显著减弱。SW480-si PPIB下调组的移植瘤体积显著小于SW480-NC对照组(P<0.01)。TUNEL检测显示下调组的癌细胞凋亡比例显著高于对照组(P<0.001)。在低氧环境下培养后,结肠癌细胞的PPIB蛋白表达水平随着低氧条件下HIF-1α的上调而升高(P<0.05)。结论:PPIB蛋白在结肠癌中因为低氧环境而表达升高,且在升高后通过抑制癌细胞的凋亡而发挥促进结肠癌形成和进展的作用,是一个极具临床应用价值的防治结肠癌的分子靶点。     

塞来昔布对裸鼠结肠癌移植瘤放疗增敏作用的实验研究

为探讨环氧化酶2（COX～2）抑制剂塞来昔布对裸鼠结肠癌移植瘤放疗的增敏作用,本研究应用人结肠癌SW480细胞建立裸鼠移植瘤模型,并将32只裸鼠随机分为A组（对照组）、B组（塞来昔布组）、C组（放疗组）和D组（塞来昔布＋放疗组）。观察各组裸鼠结肠癌移植瘤的生长情况。结果显示,B、C、D组移植瘤的生长明显受到抑制,干预后期移植瘤瘤体质量及体积均明显小于A组,P〈0．05;而D组移植瘤瘤体质量和体积显著小于B、C组,P〈0．05。结果表明,塞来昔布不仅能抑制裸鼠结肠癌移植瘤的生长,而且具有放疔增敏作用。     

贝伐单抗对裸鼠胃癌移植瘤血管内皮细胞生长因子和核转录因子Sp1表达的影响

目的 观察贝伐单抗对裸鼠胃癌移植瘤生长以及对肿瘤血管内皮细胞生长因子（VEGF）和核转录因子Sp1表达的影响.方法 建立SGC-7901胃癌细胞株裸鼠移植瘤模型,成瘤后分别使用贝伐单抗（BVZ组）和磷酸盐缓冲液（PBS组）治疗4周.绘制肿瘤生长曲线,免疫组织化学染色技术（IHC）检测移植瘤Ki-67、CD34、VEGF及Sp1表达情况,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡.结果 相比PBS组,BVZ组肿瘤生长速度明显减缓（P〈0.05）,肿瘤细胞增殖能力下降,凋亡指数明显增加[（5.3±1.8）％比（16.7±6.7）％,P＜0.01],肿瘤组织内微血管密度下降（4.0±1.0比16.3±1.5,P＜0.001）.贝伐单抗能减少肿瘤内VEGF表达,但对核转录因子Sp1表达水平没有明显影响.结论 贝伐单抗可有效抑制裸鼠胃癌移植瘤生长,减少肿瘤内微血管密度和VEGF表达,但不引起Sp1表达的明显改变.     

RhoC-siRNA 对裸鼠结肠癌移植瘤的生长抑制作用

目的 探讨小干扰RNA(siRNA)载体介导抑制RhoC表达对人结肠癌裸鼠移植瘤的抑制作用.方法 将人结肠癌细胞HT-29接种于裸鼠背部皮下,成功建立裸鼠移植瘤模型;成瘤后将RhoC-siRNA注射入裸鼠移植瘤瘤体,观察RhoC-siRNA对裸鼠移植瘤生长的影响,Western blot检测瘤体中RhoC、基质金属蛋白(MMP-2)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达.结果 RhoC-siRNA对结肠癌裸鼠移植瘤的生长有明显抑制作用,瘤体体积重量明显减轻; RhoC-siRNA治疗后瘤体内VEGF和MMP-2蛋白表达明显下降.结论 通过抑制裸鼠结肠癌移植瘤中RhoC的表达,可以抑制肿瘤的生长并下调VEGF和MMP-2的表达水平.     

靶向β-catenin短发夹RNA抑制人结肠癌裸鼠移植瘤的实验研究

目的探讨靶向β—catenin的短发夹RNA（shRNA）对人结肠癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用。方法构建两个靶向β—catenin的短发夹RNA的质粒载体CAT1、CAT2和阴性对照质粒Neg,并将其转入人结肠癌Colo205细胞,分组种植到裸鼠皮下以建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型。随后观察监测各组裸鼠的肿瘤生长情况。第8周裸鼠处死并剥离出肿瘤组织,HE染色观察肿瘤细胞的形态,免疫组化方法检测β—catenin蛋白的表达,TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡情况。结果各组裸鼠的内脏未受到明显的毒害和损伤。第8周CAT1、CAT2实验组裸鼠移植瘤的体积和质量与空白对照组相比均有显著性缩小（P〈0．05）,抑制率大约在50％左右。而且与空白对照组相比,CAT1、CAT2组移植瘤的β—catenin表达均有显著性下调,肿瘤细胞凋亡指数均有显著性的升高（P〈0．05）。阴性对照组的上述指标与空白对照组相比差异均无统计学意义。结论所构建的靶向β—catenin的短发夹shRNA能够抑制人结肠癌Colo205细胞裸鼠移植瘤的生长,为结肠癌基因治疗开辟新的思路。     

塞来昔布对裸鼠结肠癌移植瘤放疗增敏作用的机制研究

为探讨环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对裸鼠结肠癌移植瘤放疗增敏作用的机制,本研究应用人结肠癌SW480细胞建立裸鼠移植瘤模型,并将32只裸鼠随机分为A组（对照组）、B组（塞来昔布组）、C组（放疗组）和D组（塞来昔布＋放疗组）,观察各组裸鼠结肠癌移植瘤的生长情况,并应用免疫组化法检测移植瘤组织中COX-2、8-catenin、血管内皮生长因子（VEGF）、CD34表达,并对CD34阳性血管进行计数,计算微血管密度（MVD）。结果显示,（1）干预30d后,B、C、D组移植瘤瘤体质量及体积均明显小于A组,P〈0．05;而D组移植瘤瘤体质量和体积明显小于B、C组,P〈0．05。（2）免疫组化检测显示,COX-2、β—catenin、VEGF及CD34在各组移植瘤组织中均呈阳性表达。B、c、D组COx-2、p—catenin、VEGF表达水平及MVD均明显低于A组,P〈0．05;而D组各指标明显低于B、c组,P〈0．05。（3）相关性分析显示,COX-2、VEGF、β-catenin及MVD,各指标两两之间均具有显著相关性,P〈O．05。结果表明,塞来昔布可能是通过抑制wnt信号通路来抑制肿瘤新生血管的生成,最终发挥放疗增敏作用。     

生长激素和生长抑素对人结肠癌裸鼠移植瘤模型的影响

目的观察外源性生长激素（GH）和生长抑素（SS）对人结肠癌细胞株HT-29裸鼠移植瘤模型肿瘤生长和裸鼠血清蛋白水平的影响。方法接种结肠癌细胞株HT-29建立裸鼠移植瘤模型。比较移植肿瘤体积、细胞周期分布、增殖指数（PI）、凋亡率、bcl-2和bax mRNA水平．以及裸鼠血清蛋白水平。结果生长抑素能够明显抑制移植瘤的生长（P〈0．05）、降低移植瘤PI（P〈0．05）、促进移植瘤细胞凋亡（P〈0．01）、降低移植瘤bcl-2mRNA表达（P〈0．05）、提高移植瘤baxmRNA表达（P〈0．05），生长激素则表现出相反的作用。生长激素能够改善移植瘤导致的低蛋白血症（P〈0．05）。结论外源性生长抑素能够显著抑制人结肠癌裸鼠移植瘤生长，外源性生长激素单独或联合生长抑素应用能够改善荷人结肠癌移植瘤裸鼠低蛋白血症，但具有潜在的促进肿瘤生长的作用。     

18F-FDG PET/CT成像观察西妥昔单抗对结直肠癌裸鼠移植肿瘤影响的实验研究

目的建立结直肠癌裸鼠移植肿瘤模型,用小动物¹⁸F-FDG PET/CT技术评价西妥昔单抗对人结直肠癌移植肿瘤的影响。 方法BALB/c裸鼠皮下分别接种人结直肠癌细胞HCT116、LIM1215,建立HCT116与LIM1215两种荷瘤裸鼠模型。将成瘤后的模型分为对照组和西妥昔单抗治疗组(n=5),并且全程观察肿瘤体积变化情况。给药1周后采用小动物¹⁸F-FDG PET/CT技术评价实体肿瘤模型,并测量各组织与器官的¹⁸F-FDG最大每克组织摄取率。 结果小动物¹⁸F-FDG PET/CT成像显示裸鼠接种部位肿瘤内放射性摄取值增高,LIM1215与HCT116肿瘤模型的治疗组与对照组相比,肿瘤/组织或器官¹⁸F-FDG摄取比率均普遍降低,其中肿瘤/颈肌、肿瘤/心脏与肿瘤/肝脏比值差异有统计学意义(P=0.047、0.008、0.024),但两种肿瘤模型的肿瘤体积测量结果均显示,治疗组与对照组的肿瘤生长趋势差异无统计学意义。 结论在西妥昔单抗对结直肠癌裸鼠移植肿瘤模型的治疗实验中,西妥昔单抗对肿瘤生长尚未有明显抑制作用时,小动物¹⁸F-FDG PET/CT可监测到肿瘤葡萄糖代谢的变化。     

K-ras突变导致肺癌细胞对表皮生长因子受体抑制剂耐药的机制

目的 比较不同细胞株引入K-ras突变质粒前后对表皮生长因子受体(EGFR)信号传导通路活性的变化,探讨K-ras突变对于EGFR抑制剂耐药的机制.方法 通过噻唑蓝(MTF)比色法检测HCC827及H292细胞在转染K-ras基因前后的EGFR下游AKT及STAT通路抑制剂敏感性变化,免疫印迹法(Western blot)检测EGFR下游通路激活状态变化.结果 转染后HCC827细胞对于AKT和STAT通路抑制剂敏感性仅下降1.9和5.3倍,H292细胞对于AKT和STAT通路抑制剂敏感性仅下降3.0和2.5倍,远低于吉非替尼敏感性下降程度,转染K-ras的HCC827细胞AKT通路和STAT3通路持续激活,而转染K-ras的H292细胞AKT通路和STAT3通路的活性降低.结论 K-ras导致EGFR抑制剂耐药的原因可能还存在其他耐药机制,携带EGFR基因突变或野生型的肺癌细胞中,K-ras突变对于AKT和STAT通路的影响可能存在不同.

Abstract：

Objective By comparing the activity of signaling pathway in different cell lines affected by K-ras mutation, to investigate the resisitance to epidermal growth factor receptor (EGFR) inhibitors due to K-ras mutation. Methods Methyl thiazol tetrazolium (MTF) method was used to mensure the sensitivity and half maximal inhibitory concentration ( IC50 ) of AKT and STAT inhibitors after transfection of K-ras or blank plasmid into HCC827 and H292 cells. Western blotting was used to compare the activity of downstream signaling pathway in different cell lines. Results After transfection of mutant K-ras, the IC50 of AKT and STAT inhibitors in HCC827 cells was reduced by 1.9 and 5.3 times respectively, and that in H292 cells was reduced by 3.0 and 2. 0 times respectively. The activity of AKT and STAT pathways in HCC827 cells transfected with mutant K-ras was continuously activated, while that in H292 cells was suppressed. Conclusion K-ras-induced resistance to EGFR inhibitors may be related to other mechanisms. In the tumor cells bearing mutant or wild-type EGFR gene, there may exist different influences of K-ras mutations on AKT and STAT pathways.     

吉非替尼对结肠癌细胞的生长抑制作用与PTEN表达的关系

目的 观察表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼对人结肠癌细胞的生长抑制作用,探讨这种作用与结肠癌细胞PTEN表达的关系.方法 应用体外药物敏感实验检测吉非替尼对6种人结肠癌细胞系的生长抑制作用;应用RT-PCR检测不同结肠癌细胞中PTEN mRNA水平;应用Western blot 检测结肠癌细胞中PTEN蛋白表达水平.结果 吉非替尼在体外对6种结肠癌细胞系的生长抑制作用差异很大(F=325.51,P＜0.05).吉非替尼作用浓度为1 μmol/L时,Lovo细胞系抑制率达34%,对吉非替尼最为敏感,其半量抑制浓度(IC50)＜10 μmol/L;HT29和SW480为中度敏感(10μmol/L＜IC50＜100 μmol/L);而HCT116、LS174T和SW620不敏感,其IC50＞100 μmol/L.各个细胞系中PTEN mRNA和PTEN蛋白均有表达.结论 吉非替尼对结肠癌细胞的生长抑制作用与PTEN mRNA和PTEN蛋白表达水平无明显相关,即PTEN表达状态还不能作为预测结肠癌对吉非替尼敏感性的可靠生物学指标.     

重组人内皮抑素对裸鼠结肠癌移植瘤淋巴管生成及淋巴结转移的抑制作用

目的 观察重组人内皮抑素(恩度)对裸鼠结肠癌移植瘤淋巴管形成及淋巴结转移的影响.方法 将人结肠癌SW620细胞株接种于BALB/C-nu雄性裸鼠,建立动物模型.实验分为对照组(生理盐水组)和恩度组.结果 (1)恩度组和对照组淋巴结转移率分别为10%(1/10)和80%(8/10)(P<0.01).(2)恩度组肿瘤淋巴管密度(7.17±0.75)明显低于对照组(14.83±0.98)(P<0.05).(3)恩度在体内和体外均抑制肿瘤细胞血管内皮生长因子(VEGF)-C和VEGF-D的表达.结论 重组人内皮抑素通过降低结肠癌移植瘤VEGF-C,-D的表达而抑制淋巴管的生成,降低肿瘤向淋巴结的转移几率.     

CXCR3在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨CXCR3在结直肠癌组织中的表达及其临床意义.方法 应用SP免疫组织化学方法检测52例结直肠癌组织CXCR3的表达,Western印迹和体外迁移实验检测趋化因子受体CXCR3在大肠癌细胞株SW480、SW620、HT29细胞的表达及迁移能力.结果 CXCR3的阳性表达率为88%(46/52),CXCR3的高表达与结直肠癌患者的年龄、性别、结直肠癌组织类型、分化程度无关,而与临床转移(肝脏、淋巴结转移)有关(x2=12.1、21.5,P＜0.01).SW480、SW620及HT29的CXCR3表达均呈阳性,其中大肠癌细胞HT29和SW620 CXCR3高表达,大肠癌细胞SW480 CXCR3低表达.在体外迁移实验中,大肠癌细胞HT29和SW620发生体外迁移细胞明显增多(75±6比147±8、63±5比9l±6,P＜0.01),而大肠癌细胞SW480体外迁移无明显变化(47±4比45±3,P>0.05).结论 CXCR3上调表达与结直肠癌转移有关.     

化疗对CD133+结肠癌细胞的作用效果

目的 观察化疗前后结肠癌细胞株HT29、SW620中CD133+结肠癌细胞的数量变化,探讨化疗对CD133+结肠癌细胞的作用效果.方法 取对数生长的结肠癌细胞株HT29、SW620,采用80 mg/L 5-氟尿嘧啶(5-Fu)和25 mg/L奥沙利铂(Oxaliplatin)分别作用8 h,并设对照组,利用CD133抗体进行标记后再用流式细胞仪进行检测,观察化疗前后CD133+细胞的比例.结果 流式细胞仪检测结肠癌细胞株HT29,80 mg/L 5-Fu处理8 h组中CD133+肿瘤细胞为45.00%,与未处理组(32.80%)比较结果差异有统计学意义(P＜0.01);25 mg/L奥沙利铂处理8 h组中CD133+肿瘤细胞为55.30%,与未处理组和80 mg/L 5-Fu处理8 h组比较结果差异有统计学意义(P＜0.01).流式细胞仪检测结肠癌细胞株SW620,80 mg/L 5-Fu处理8 h组中CD133+肿瘤细胞为47.10%,与未处理组(33.90%)比较结果差异有统计学意义(P＜0.01);25 mg/L奥沙利铂处理8 h组中CD133+肿瘤细胞为56.50%,与未处理组和80 mg/L 5-Fu处理8 h组比较结果差异有统计学意义(P＜0.01).结论 CD133+结肠癌细胞能明显抵抗化疗.

Abstract：

Objective To observe the changes of quantity of CD133 + cells in HT29 and SW620 cell lines before and after chemotherapy, and detect the effect of chemotherapy on CD133 + cells. Methods HT29 and SW620 cells in logarithmic growth phase were separately treated with 80 mg/L 5-fluorouracil(5-Fu) and 25 mg/L oxaliplatin for 8 h, and analyzed by flow cytometry after being marked by CD133 antibody. The proportion of CD133 + cells before and after chemotherapy was measured. Results For HT29 cells, the proportion of CD133 + cancer cells in the group treated with 80 mg/L 5-Fu for 8 h was 45.00% with the difference being remarkable ( P ＜ 0. 01 ) compared to the non-treatment group ( 32. 80% ). The proportion of CD133 + cancer cells in the group treated with 25 mg/L oxaliplatin for 8 h was 55.30% with the difference being remarkable ( P ＜ 0. 01 ) compared with both the non-treatment group and the group treated with 80 mg/L 5-Fu for 8 h. For SW620 cells, the proportion of CD133 + cancer cells in the group treated with 80 mg/L 5-Fu for 8 h was 47. 10% with the difference being remarkable ( P ＜0. 01 ) compared with the non-treatment group (33.90%). The proportion of CD133 + cancer cells in the group treated with 25 mg/L oxaliplatin for 8 h was 56. 50% with the difference being remarkable ( P ＜ 0. 01 ) compared with both the non-treatment group and the group treated with 80 mg/L 5-Fu for 8 h. Conclusion CD133 positive colon cancer cells have anti-chemotherapy activity obviously.     

表皮生长因子受体表达及其下游基因突变与结直肠癌细胞放射敏感性的关系

目的探讨表皮生长因子受体（EGFR）表达及其下游基因K-ras、B-rM和PIK3CA突变对结直肠癌细胞放射敏感性的影响。方法对9株人结直肠癌细胞株应用实时定量RT-PCR检测EGFR表达,并检测K-ras、B—raf和PIK3CA基因的突变状态;对各细胞株行梯度剂量射线照射后,行克隆形成实验明确其放射敏感性、行Hoechst33258染色凋亡形态学观察和流式细胞术检查细胞凋亡及细胞周期。结果人结直肠癌细胞株EGFR表达与放疗抵抗呈正相关（r=O．717．P=0．030）,~K3CA突变与放疗敏感性有关（t=2．401,P=0．047）,K—ras和B．raf突变与放疗敏感性无关（均P〉O．05）。放疗敏感细胞株（HCTll6）总凋亡率在低放射剂量（2Gy）时即显著增加,并随放射剂量增加而继续增加（P〈0．05）,而放疗抵抗细胞株（HT29）总凋亡率只有放射剂量较大时（6Gy）才明显增加。G1／G。期HCTll6细胞株比例随放疗剂量增加显著降低（P〈0．05）,而HT29细胞株G1／G。期比例在放疗剂量增加时无明显变化（P〉0．05）。结论EGFR通路中多个位点同时参与了结直肠癌细胞的放疗抵抗或敏感作用,EGFR高表达与放疗抵抗相关,PIK3CA突变与放疗敏感有关,放疗抵抗机制可能与抑制细胞凋亡和增加细胞在G1／Go期停顿相关。     

BH3-only在奥沙利铂诱导结肠癌细胞凋亡中的作用

目的研究BH3-only基因表达在奥沙利铂诱导人结肠癌细胞株凋亡中的作用及其机制。方法采用不同浓度（0．3、0．6、1．25、2,5、5、10和20mg／L）奥沙利铂处理人结肠癌细胞株SW480及HT29,应用MTT检测细胞生长抑制情况;流式细胞仪检测凋亡情况;荧光定量PCR检测BH3-only基Bim和PUMA表达。结果不同浓度奥沙利铂分别作用于结肠癌细胞SW480后,出现不同程度的细胞生长抑制作用,呈剂量依赖性。5mg／L和10mg／L浓度的奥沙利铂作用于SW480细胞24h后,细胞凋亡率分别为（4．87±0．55）％和（12．10±1．04）％,作用48h后分别为（11．47±0．85）％和（30．07±2．01）％,作用72h后分别为（28．99±2．12）％和（38．32±3．15）％,均显著高于相应时间点对照组细胞的凋亡率[（0．30±0．10）％、（0．40±0．10）％和（0．50±0．20）％,均P〈0．01]。同时Bim和PUMAmRNA表达水平也显著高于对照组（P〈0．05）。而同样处理的HT29细胞其生长抑制率、细胞凋亡率及Bim和PUMAmRNA表达水平与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论奥沙利铂具有抑制结肠癌细胞株SW480生长并诱导其凋亡的作用,其机制可能与促凋亡相关基因BH3-only（Bim和PUMA）表达增强有关。     

shRNA介导的热休克蛋白70敲低对人结肠癌细胞在裸鼠体内生长的影响

目的:探讨热休克蛋白70(HSP70)敲低对结肠癌细胞在裸鼠体内生长的影响。方法:构建两种干扰HSP70的shRNA(HSP70 shRNA-1和HSP70 shRNA-2)质粒表达载体,分别转染到结肠癌HT29细胞,并以空质粒转染(阴性对照)和未转染的HT29细胞(空白对照)为对照,用RT-PCR和Western blot方法检测各组HT29细胞HSP70基因和蛋白的表达;将HSP70shRNA-2转染、空质粒转染及未转染的HT29细胞分别接种至裸鼠皮下建立移3组植瘤模型,观察肿瘤生长情况,3周后剥离瘤块,用HE染色、免疫组化和TUNEL法分别检测移植瘤组织形态学、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及细胞凋亡情况。结果:RT-PCR和Western blot结果显示HSP70 shRNA-1和HSP70 shRNA-2均能明显抑制HT29细胞HSP70基因和蛋白的表达,且HSP70 shRNA-2的抑制作用更为明显,空质粒转染对HSP70的表达无明显影响;与空白对照组比较,HSP70 shRNA-2转染组裸鼠移植瘤生长明显较明显减慢(P<0.01),瘤组织中心出现明显坏死,PCNA表达明显降低,细胞凋亡率明显增加(P<0.01),而空质粒转染组无明显上述改变(P>0.05)。结论:HSP70沉默能抑制结肠癌HT29细胞裸鼠移植瘤的生长,促进细胞凋亡,HSP70可能是治疗结肠癌有效靶点。     

CDX2基因干扰对人结肠癌细胞在裸鼠体内生长的影响

目的:探讨CDX2基因表达对结肠癌细胞生长的影响。方法:将体外转染CDX2-shRNA慢病毒、空慢病毒载体及无转染的人结肠癌细胞系SW480和HT29接种到裸鼠皮下,制备皮下移植瘤模型,观察各组移植瘤的生长情况,28d后处死裸鼠,剥取移植瘤称重,并分别用免疫组化、Westernblot检测各组移植瘤组织Ki-67与CDX2的表达。结果:与各自空白对照组(无转染的SW480或HT29细胞移植)比较,两个干扰组(转染CDX2-shRNA慢病毒的SW480或HT29细胞移植)移植瘤生长速度均明显加快、移植瘤质量明显增加(SW480:679.11mgvs.379.36mg;HT29:715.78mgvs.427.07mg),瘤组织Ki-67蛋白表达水平明显升高、CDX2蛋白表达明显下调(均P0.05)。两个阴性对照组(转染空慢病毒载体的SW480或HT29细胞移植)的各指标与各自空白对照组间均无明显差异(均P0.05)。结论:抑制CDX2基因的表达能促进人结肠癌细胞的裸鼠体内的生长,故CDX2可能是一种重要的抑癌基因。     

脂肪量和肥胖相关基因在结肠癌组织的表达及生物学功能

目的探讨脂肪量和肥胖相关基因(FTO)在结肠癌组织的表达及其生物学功能。方法采用实时定量聚合酶链反应检测并分析FTO在结肠癌组织与癌旁组织中的表达特征及临床意义。利用RNA干扰(RNAi)技术构建FTO稳定下调表达的结肠癌细胞株SW620和Caco-2,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞增殖实验、划痕实验进一步研究FTO下调表达对结肠癌细胞株生物学行为的影响。结果结肠癌组织中FTO的mRNA表达水平显著高于癌旁正常组织(t=10.310,P<0.01);FTO mRNA在肠癌细胞中的表达水平显著高于正常肠上皮细胞株(HT-29为,t=18.730,P<0.01;HCT-116为,t=3.700,P<0.05;SW620为,t=4.060,P<0.05;LoVo为,t=5.580,P<0.01;SW48为,t=16.640,P<0.01;DLD-1为,t=7.260,P<0.01;Caco-2为,t=9.640,P<0.01),差异均有统计学意义。CCK-8增殖实验结果显示,LV-FTO-shRNA组中结肠癌细胞的增殖能力低于shNC组(SW620,24 h为,t=4.660,P<0.01,48 h为,t=3.760,P<0.01,72 h为,t=3.370,P<0.05;Caco-2,24 h为,t=3.680,P<0.05,48 h为,t=3.630,P<0.05,72 h为,t=4.180,P<0.01),差异均有统计学意义;划痕试验结果显示,划痕24 h后,LV-FTO-shRNA组的无细胞区域显著宽于LV-NC组(SW620为,t=34.070,P<0.01;Caco-2为,t=31.680,P<0.01),差异均有统计学意义。结论FTO在结肠癌组织及结肠癌细胞株中高表达,FTO的下调表达显著抑制结肠癌细胞的增殖和迁移能力,提示FTO异常表达是促进结肠癌进展的重要因素。