硫化砷对白血病细胞的生长抑制及作用机制

 目的 研究硫化砷（As4S4）通过体外培养对白血病细胞HL-60细胞的生长抑制作用及其分子机制。方法 以不同浓度（7.5 ~ 60 mmol／L）的As4S4作用于体外培养HL-60细胞12 ~ 48 h,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪观察细胞凋亡率,免疫组化法检测bcl-2、p53蛋白表达,应用RT-PCR法检测HL-60细胞中p53 mRNA表达。结果 不同浓度的As4S4作用12 ~ 48 h后,可显著抑制HL-60细胞的生长,呈时间浓度依赖性,并诱导细胞发生凋亡,凋亡率为30.18 % ~ 70.98 %,不同作用时间、不同浓度间凋亡率差异有统计学意义（P＜0.01）,RT-PCR结果显示As4S4作用24 h后,下调p53 mRNA的表达。免疫组化结果显示,bcl-2、p53蛋白表达逐渐降低,并呈浓度依赖性。结论 As4S4能够显著抑制HL-60细胞的生长。诱导其凋亡,并下调bcl-2、p53的表达,可能是其重要机制。     

土贝母皂苷对HL-60细胞周期作用的研究

目的:应用土贝母皂苷(下称皂苷)作用于人早幼粒白血病细胞(HL -60),研究皂苷抗肿瘤作用的分子机制。方法:采用流式细胞术等方法分析细胞周期及凋亡;蛋白印迹免疫法检测细胞凋亡及周期相关基因 bcl- 2、cdc2 和 cy clinB1表达的变化。结果:15μmol/L皂苷作用 24 h 可将 HL -60 细胞阻滞于G2/M期,进而诱导凋亡,流式细胞仪检测肿瘤细胞出现典型的亚二倍体“凋亡小峰”。凋亡抑制基因bcl 2表达无明显变化,周期蛋白 cyclinB1 表达降低,而cdc2表达无明显改变。结论:皂苷导致HL- 60细胞 G2/M期阻滞,进而诱导凋亡;周期阻滞的分子机制与降低 cy clinB1蛋白水平有关,而凋亡的诱导与bcl- 2表达无关。     

三氧化二砷对HL-60细胞hTERT基因表达和端粒酶活性的影响

目的：探讨三氧化二砷（As2O3)处理HL－60细胞前后人类端粒酶逆转灵酶（hTERT)基因表达和端粒酶活性的改变。方法：采用姬姆萨染色及碘化丙锭染色置流式细胞仪检测来观察细胞的凋亡，以RT－PCR分析hTERT 基因的mRNA表达水平；应用间接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测hTERT蛋白含量；利用多聚酶链反应－酶联免疫反应（PCR－ELISA）方法检测As2O3处理HL－60前后端粒酶活性的改变。结果：2umol/L As2O3诱导HL－60细胞凋亡的过程中，hTERT mRNA表达水平显著下降，细胞内hTERT蛋白含量也相应降低，其端粒酶活性明显受到抑制，结论：As2O3可通过下调hTERT基因的表达而抑制HL－6细胞的端粒酶活性。     

熊果酸诱导人胃癌BGC823细胞凋亡及其作用机制初探

背景与目的：熊果酸（ursolic acid,UA）广泛存在于夏枯草、白花蛇舌草等清热解毒药中,可抑制多种肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡,具有广泛生物学活性。本研究将UA作用于人胃癌BGC823细胞,观察其对细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：MTT法检测UA对BGC823细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞周期与凋亡的变化;Realtime-PCR检测细胞bax、bcl-2mRNA表达的变化。结果：UA呈时间-剂量依赖性抑制BGC823细胞增殖,分别作用24、48、72h后半数抑制浓度依次为36.88、34.72、32.18μmol/L;UA能诱导BGC823细胞凋亡,并阻滞细胞于G2/M期;此外,其还可上调BGC823细胞bax及下调bc1-2mRNA表达,且作用随剂量的增加而加强。结论：UA呈时间-剂量依赖性抑制BGC823细胞增殖,并诱导其凋亡,阻滞细胞于G2/M期;其凋亡机制可能与上调bax及下调bcl-2基因的表达有关。     

淫羊藿甙诱导肿瘤细胞凋亡及其机制的研究

目的:采用淫羊藿苷icarrin(ICA,从朝鲜淫羊藿中提取的中药单体),作用于人急性早幼粒白血病细胞HL-60,较系统地对ICA诱导肿瘤细胞凋亡进行了观察,为ICA的开发应用提供实验依据.方法:采用电镜、流式细胞术、DNA片段化检测、RT-PCR等技术进行研究.结果:ICA在体外诱导HL-60细胞凋亡,呈典型的细胞凋亡形态学和生化特征,并具有时间剂量依赖性.ICA诱导肿瘤细胞凋亡的同时,下调相关基因bcl-2和c-myc基因mRNA和蛋白表达水平.结论:ICA体外诱导HL-60细胞凋亡,其机理可能与下调bcl-2和c-myc基因mRNA和蛋白表达水平密切相关.     

bcl-2 siRNA的设计、合成及其对HL-60 bcl-2基因表达的干扰作用

 目的 应用RNA干扰技术研究bcl-2 siRNA对白血病细胞HL-60 bcl-2基因表达的干扰作用。方法 扫描bcl-2 mRNA的全序列,记录从AUG启动子的AA及下游19个核苷酸肽作为潜在作用靶点。GC含量控制在30 % ~ 65 %之间。由BLAST分析排除与其他基因有高度同源性的序列。由体外转录合成法合成双链bcl-2 siRNA,将bcl-2 siRNA转染入HL-60细胞。收集转染48 h后的细胞,流式细胞术检测蛋白表达情况,筛选出最佳作用序列进一步作各项指标检测。从mRNA水平、蛋白质水平等观察bcl-2 siRNA对细胞HL-60 bcl-2基因表达的干扰作用。结果 收集转染48 h后的细胞,经细胞免疫荧光、RT-PCR、MTT及Hoechst33258荧光染色等指标检测,可见转染bcl-2 siRNA阳性组的细胞bcl-2基因表达降低及HL-60细胞凋亡等现象。而转染GAPDH siRNA组的细胞对bcl-2表达无影响。结论 采用生物信息学的方法设计出有效siRNA靶位点;bcl-2 siRNA可通过降低bcl-2 mRNA水平特异性抑制bcl-2蛋白质的表达。     

survivin抗肺癌细胞凋亡的分子机制

目的 研究survivin反义寡核苷酸（ASODN）诱导肺癌细胞凋亡的作用,探讨survivin抗肺癌细胞凋亡的分子机制。方法 在脂质体介导下,分别以100mmol／L、300mmol／L和500mmol／L浓度的survivin ASODN,作用于肺癌细胞株NCI-H44624h、48h和72h后,用RT-PCR和Western blot检测survivin mRNA及蛋白表达,流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡;Rh123染色法检测细胞线粒体膜电位（△ψm）变化;ELISA法检测胞浆细胞色素C（cyt C）浓度;比色法检测胞浆内天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9（caspase-9）、caspase-3的活性;Western blot检测caspase-8蛋白表达;加入环孢霉素A（CsA）后,以FCM检测细胞凋亡。结果 与各对照组相比,survivin ASODN显著下调了survivin mRNA表达,且呈时间和浓度依赖性,其中以500mmol／L作用72h时效果最佳,抑制率达62．7％,其蛋白表达也显著下调。NCI-H446细胞的凋亡指数（AI）为48．35％,明显高于对照组（3．75％）、空脂质体组（3．41％）、无义寡核苷酸（NSODN）组（4．69％）、100和300mmol／LASODN组（19．85％和34．39％）;增殖指数（PI）为24．38％,明显低于上述各组（75．54％、73．12％、71．76％、51．03％和38．94％,P均〈0．01）。survivin ASODN导致细胞△ψm逐渐下降,并相继引起cytc的释放、caspase-9和caspase-3的激活,而caspase-8酶原无变化。CsA显著抑制了survivin ASODN诱导的细胞凋亡。结论 survivin通过调控线粒体凋亡途径发挥抗肺癌细胞凋亡作用;survivin ASODN能够显著下调survivin mRNA及蛋白表达,诱导肺癌细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

survivin 及bcl-2 基因表达在胃癌细胞株MGC803 顺铂耐药中的作用

 目的 探讨胃癌细胞株MGC803对顺铂（CDDP）耐药产生的有关机制。方法 观察不同浓度CDDP（0．1、1．0、10．0mg／L）对MGC803细胞增殖、凋亡及抗凋亡基因survivin，bcl-2 mRNA表达的影响，用MTT法检测细胞生长抑制率；荧光染色检测细胞凋亡率；流式细胞仪测定细胞周期的变化；RT-PCR检测survivin、bcl-2 mRNA的表达。结果 10mg／L的CDDP对MGC803细胞有较强的抑制增殖、促进凋亡作用，而0．1、1．0mg／L的CDDP干预24h后，其抑制细胞增殖，促进细胞凋亡的作用逐渐消失；CDDP作用于细胞48h后，细胞S期增加，G2／M期下降；MGC803细胞在1．0mg／L的CDDP作用下，survivin mRNA表达自24h后逐渐增高，bcl-2 mRNA表达逐渐下降（P〈0．05）。结论 CDDP可干扰MGC803细胞周期，但该细胞对低浓度CDDP易于产生耐药，survivin mRNA表达增高可能是MGC803细胞对CDDP产生耐药原因之一。     

全反式维甲酸抑制反义N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V转染的SMMC7721肝癌细胞蛋白激酶B的表达

目的 探讨全反式维甲酸（ATRA）诱导反义N－乙酰氨基葡萄糖转移酶V转染的SMMC 7721肝癌细胞（简称AS－GnT-V/7721)凋亡机制。方法 用Hoechst染色检测ATRA诱导细胞凋亡情况，并应用Northern Blot和Western Blot检测ATRA诱导AS－GnT-V/7721细胞凋亡过程中bcl-2及蛋白激酶B(PKB)的表达。结果 Hoechst 33258染色结果显示ATRA处理AS－GnT-V/7721细胞24h后，细胞发生凋亡。Western Blot检测发现，ATRA处理AS－GnT-V/7721细胞不改变bcl-2的表达，但抑制PKB蛋白表达。ATRA处理AS－GnT-V/7721细胞24h后PKB蛋白即明显降低（约为原来的32%)，处理48h后PKB蛋白几乎检测不到。Northern blot检测发现，ATRA处理AS－GnT/V7721细胞12h,PKB mRNA即有所下降，24h时PKB mRNA约为原来的48％,处理48h,PKB mRNA减少至原来的15％。而ATRA处理对照细胞，bcl-2及PKB表达均不变。结论 ATRA诱导AS－GnT-V/7721细胞凋亡过程中PKB的表达下降，而bcl-2表达不变。提示，ATRA诱导AS－GnT-V/7721细胞凋亡可能是由于抑制PKB表达，而与bcl-2无关。     

洛伐他汀对 HL-60、 KG-1、 K562白血病细胞体外作用的研究

目的：观察胆固醇合成抑制剂洛伐他汀（lovatatin,LOV)对HL－60、KG－1、K562白血病细胞增殖、凋亡的影响，并进一步探讨其作用机制。方法：首先利用MTT法、台盼蓝拒染法观察LOV对HL－60、KG－1、K562细胞增殖及活力的影响。再通过细胞形态观察，DNA凝胶电泳，流式细胞术分析，RT－PCR半定量测定bcl-2mRNA水平等技术，系统观察LOV对HL－60、KG－1、K562体外诱导凋亡的情况。结果：（1）LOV抑制HL－60、KG－1、K562细胞增殖，IC50分别为17．16、51．65、58．95μmol/L；(2)LOV诱导HL－60、KG－1、K562细胞凋亡，影响细胞周期进程，细胞阻滞于G1／S期；LOV在诱导HL－60细胞凋亡过程中随作用时间延长，bcl-2表达水平逐渐下降。结论：LOV抑制HL－60、KG－1、K562细胞增殖并诱导凋亡，阻滞细胞周期进程于G1／S期；bcl-2参与了LOV诱导凋亡的基因调控。     

Pharmacogénétique des fluoropyrimidines. La méthylènetétrahydrofolate réductase

Résumé: Lefficacité optimale des fluoropyrimidines nécessite des concentrations élevées en 5-10 méthylènetétrahydrofolate (CH₂FH₄), contrôlées par la méthylènetétrahydrofolate réductase (MTHFR) qui convertit irréversiblement le CH₂FH₄ en 5-méthyltétrahydrofolate (CH₃FH₄). Les polymorphismes 677CT et 1298AC du gène MTHFR sont associés à une baisse dactivité de lenzyme. Les tumeurs «MTHFR mutées» devraient donc être plus sensibles aux fluoropyrimidines que les tumeurs «MTHFR sauvages». Les études expérimentales et cliniques publiées à ce jour tendent à montrer une plus grande sensibilité au 5-FU (associé ou non à lacide folinique) dans les tumeurs MTHFR mutées par rapport aux tumeurs sauvages. Ces résultats montrent la nécessité de poursuivre ces recherches afin de confirmer limpact de ces polymorphismes sur lefficacité des fluoropyrimidines.     

Oncogénétique et psycho-oncologie, une collaboration recommandée...

Résumé: La possibilité depuis 1994, de connaître la probabilité individuelle de développer certains cancers a permis de proposer de nouvelles modalités de prévention, de traitements et contribué au développement actuel de loncogénétique. Une meilleure connaissance des répercussions psychologiques tant pour les patients que pour les apparentés est désormais possible et limplication des psycho-oncologues dans ce cadre de la réalisation des tests prédictifs, recommandée. La mission de «messager» qui incombe au «cas-index» doit faire lobjet dune attention particulière. La complexité de linformation et la dimension paradoxale que peut avoir parfois la communication à propos des choix, rend difficile lévaluation de la qualité du consentement. La situation particulièrement délicate dune aide à la décision à légard de la chirurgie prophylactique, exige une collaboration étroite des généticiens et des psycho-oncologues.Les soins de support en oncologie     

The role of papillomaviruses in human cancers

This review comprehensively evaluates the influence of gene-gene, gene-environment and multiple interactions on the risk of colorectal cancer (CRC). Methods of studying these interactions and their limitations have been discussed herein. There is a need to develop biomarkers of exposure and of risk that are sensitive, specific, present in the pathway of the disease, and that have been clinically tested for routine use. The influence of inherited variation (polymorphism) in several genes has been discussed in this review; however, due to study limitations and confounders, it is difficult to conclude which ones are associated with the highest risk (either individually or in combination with environmental factors) to CRC. The majority of the sporadic cancer is believed to be due to modification of mutation risk by other genetic and/or environmental factors. Micronutrient deficiency may explain the association between low consumption of fruit/vegetables and CRC in human studies. Mitochondrial modulation by dietary factors influences the balance between cell renewal and death critical in colon mucosal homeostasis. Both genetic and epigenetic interactions are intricately dependent on each other, and collectively influence the process of colorectal tumorigenesis. The genetic and environmental interactions present a good prospect and a challenge for prevention strategies for CRC because they support the view that this highly prevalent cancer is preventable.     

裘法祖教授生平

Prof.Fazu Qiu,member of the Chinese Communist Party,surgery professor of Tongji Hospital,departed in Tongji Hospital,Wuhan,China,at fourteen to nine a.m,June 14,2008,after a disease.He turns 94 this year.He was the senior academician of the Academia Sinica,the illustrious medical scientist of China,and the Honorary Director of Tongji Medical College,as well as Huazhong University of Science & Technology.     

Antifungal combination therapy in localized candidosis

A mouse model of localized candidosis in air-filled subcutaneous cysts imitating thrush has been developed. We have now tested various antifungal combinations in this animal model. Flucytosine (5-FC) + amphotericin B (Amph B) showed the highest efficacy, a clear additive or even synergistic effect was seen. The combination of 5-FC + imidazole or triazole derivative was less efficacious, an additive effect was rare. The combination of 5-FC + Amph B was also tested against Candida albicans strains showing various degrees of 5-FC-resistance. A significant reduction in 5-FC-resistant mutants was seen after the treatment with the combination.     

Les génériques en cancérologie: à molécule identique, médicaments identiques? Les biosimilaires, des super-génériques?

Résumé: Les biosimilaires vont bientôt voir leur apparition en Europe. Comment un laboratoire peut-il aborder le développement de son dossier dAMM? Quelles sont les bases légales et les recommandations officielles? Comment la similarité et/ou le caractère générique peuvent-ils être démontrés? Les règles sont-elles identiques à celles des produits chimiques conventionnels pour lesquels, notamment en cancérologie, il existe des médicaments génériques? Comment faire pour que la sécurité et lefficacité des médicaments biosimilaires soient assurées pour les patients?     

PSA-Test zur Früherkennung des Prostatakarzinoms

Zusammenfassung Prostatakrebs ist hierzulande seit einigen Jahren die häufigste Krebserkrankung bei Männern. Da über die Ätiologie wenig gesichertes Wissen vorliegt und daher kaum Möglichkeiten zur primären Prävention bestehen, konzentrieren sich die Anstrengungen auf die Suche nach wirksamen Verfahren zur sekundären Prävention. Hierbei gilt die Verwendung des PSA-Tests zur Früherkennung des Prostatakarzinoms als derzeit aussichtsreichstes Verfahren. Bevor ein neues Früherkennungsverfahren zur breiten Anwendung empfohlen oder in das gesetzliche Früherkennungsprogramm aufgenommen wird, muss jedoch seine Wirksamkeit in hierfür geeigneten wissenschaftlichen Untersuchungen nachgewiesen werden. Bis jetzt gibt es bereits eine ganze Reihe epidemiologischer Studien zur Effektivität des PSA-Screenings, doch konnte ein Wirksamkeitsnachweis bisher nicht erbracht werden. Zwei große randomisierte Studien in Europa und den USA lassen für die Jahre 2005–08 erste Ergebnisse erwarten. Da epidemiologische Arbeiten belegen, dass durch PSA-Screening eine nicht unerhebliche Überdiagnostik und Übertherapie eintritt, d. h. Schaden angerichtet werden kann, ist das Ergebnis der genannten randomisierten Studien vor weitergehenden Entscheidungen unbedingt abzuwarten. Bis dahin sollte von der Anwendung des PSA-Tests zur Prostatakrebsfrüherkennung unmissverständlich abgeraten werden. Da für den Test bereits ausgiebig Werbung betrieben wurde, kommt einer gründlichen ärztlichen Aufklärung von an dem Test interessierten Personen eine Schlüsselrolle zu.     

Dermatomycosis in Dogs

During the routine examination of dogs for cutaneous lesions, 205 dogs were screened for fungi other than dermatophytes. Twenty-two dogs (10.8%) revealed the presence of non-dermatophytic fungi suspicious for representing the etiologic agents of the skin lesions. The fungi isolated were Alternaria sp. (2.9%), Penicillium sp. (2.4%), Aspergillus fumigatus (2.0%), Mucor sp. (1.5%), Cladosporium sp. (1.5%) and Fusarium sp. (0.5%). No dermatophyte was isolated in association with these fungi. The incidence of these infections was found to be greater in warm and humid climate.     

Cancer immunotherapy

Unprecedented progress has seen made in the last decade in the field of cancer immunotherapy. The recent approval of nivolumab （Opdivo）, the first anti-programmed cell death-1 （PD-1） antibody, for metastatic melanoma in Japan, marked a milestone in the rapidly advancing field of cancer immunotherapy. Nivolumab together with ipilimumab （Yervoy）, the anti-cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4 （CTLA-4） antibody, are the first 2 drugs in the class of ＂immune checkpoint inhibitors＂ that have delivered impressive responses in patients with metastatic melanoma and renal cell cancer （RCC） as well as a variety of solid tumors.