黄芩总黄酮对金葡菌肺感染模式识别受体TLR2/Nod2及其相关炎性因子表达的影响

目的观察黄芩总黄酮对金葡菌感染后肺脏模式识别受体TLRs和Nods及其相关炎性因子表达的作用,探讨其抗炎药理可能的作用靶点和机制。方法通过构建体外金葡菌感染鼠肺上皮细胞和体内金葡菌急性小鼠肺感染模型,利用RT-PCR技术,通过多种给药形式观察TLR2/Nod2和下游相关炎性因子的mRNA的表达,金葡菌的增殖数量,以探讨其可能的作用靶点和机制。结果黄芩总黄酮不能减少侵入到胞内的活菌数目,但可以下调由于金葡菌侵入导致的TNF-α的大量合成。金葡菌侵入后Nod2表达大幅升高,黄芩总黄酮有明显的抑制作用,并且和TNF-α的变化呈现一定的相关性。TLR2/MyD88的表达无变化。结论黄芩总黄酮的抗炎作用可能与其下调Nod2受体表达进而抑制下游炎性因子表达相关。     

芍药苷对AGEs刺激下RAW264.7巨噬细胞TLR2/4通路的影响

目的探讨芍药苷(paeoniflorin,PF)对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)刺激下RAW264.7巨噬细胞TLR2/4通路的影响。方法 AGEs在不同时间点刺激RAW264.7巨噬细胞,使用不同浓度的PF预先孵育细胞干预刺激,以优化实验条件;后将巨噬细胞随机分为对照组(DMEM培养基)、牛血清白蛋白(BSA)组(200 mg·L~(-1)BSA)、AGEs组(200 mg·L~(-1)AGEs)、PF组(200 mg·L~(-1)AGEs+10~(-5)mol·L-1PF)及TLR2/4抑制剂组(200 mg·L~(-1)AGEs+30 mg·L~(-1)人氧化磷脂)。Western blot检测各组TLR2、TLR4、髓样分化因子(My D88)、p-IRAK1、β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)、干扰素调节因子3(IRF3)、p-IRF3、NF-κB p-p65、NF-κB p65、iNOS、TNF-α、IL-1β和MCP-1蛋白表达,RT-PCR检测各组TLR2和TLR4mRNA表达,ELISA法测定各组细胞上清液中TNF-α、IL-1β及MCP-1水平。结果与对照组相比,AGEs能明显上调TLR2、TLR4、My D88、p-IRAK1、TRIF、IRF3、p-IRF3、NF-κB pp65、NF-κB p65、i NOS、TNF-α、IL-1β、MCP-1蛋白表达(P<0.01)及TLR2、TLR4 mRNA表达(P<0.01),增加细胞上清液中TNF-α、IL-1β、MCP-1水平(P<0.01);PF和TLR2/4抑制剂能明显下调AGEs诱导产生的效应(P<0.01)。结论 PF可通过抑制巨噬细胞TLR2/4信号通路而发挥抗炎作用,这可能为糖尿病肾病的治疗提供新的理论基础。     

黄芩苷对H_2O_2诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其对Trx表达的影响

目的探讨黄芩苷对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法采用体外培养细胞的方法,建立SH-SY5Y细胞H2O2损伤模型。分设药物组(50,100,200μmol/L)、H2O2损伤组、阴性对照组。采用MTT法检测细胞活力,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞的Trx表达的变化。结果同H2O2损伤组比较,黄芩苷能明显减轻H2O2引起的SH-SY5Y细胞的损伤,同时Trx表达升高。结论黄芩苷对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能是黄芩苷通过上调Trx表达,起到抗氧化作用,继而起到抗凋亡的作用。     

黄芩苷下调沙眼衣原体感染小鼠TLR2和TLR4基因表达的研究

目的:研究黄芩苷对沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)感染小鼠宫颈组织Toll样受体2和Toll样受体4(TLR2,TLR4)基因表达的影响。方法:6~8周龄雌性C57BL/6小鼠,分为5组:阿奇霉素组,模型组,黄芩苷高、中、低剂量组。通过阴道接种Ct感染小鼠,建立Ct感染小鼠生殖道的动物模型。接种前7 d皮下注射黄体酮以增加小鼠对Ct感染的敏感性。通过比较各组小鼠阴道分泌物中的Ct数量,评价黄芩苷抗沙眼衣原体感染的能力。感染27 d之后,用RT-PCR法和Western Blot法检测宫颈组织TLR2和TLR4基因表达情况。结果:在阴道接种Ct后第3天和第6天,模型组小鼠阴道分泌物中Ct数量显著升高。通过黄芩苷治疗后,各药物组小鼠阴道分泌物中,Ct数量均明显少于模型组,黄芩苷高剂量组和阿奇霉素组显著性降低。同时,黄芩苷还可明显抑制各组宫颈组织内TLR2和TLR4基因的表达。结论:黄芩苷可有效地抑制Ct感染的小鼠宫颈组织TLR2和TLR4的高表达,这可能是黄芩苷抗Ct感染的作用机制之一。     

血清和肽素、Toll样受体2、Toll样受体4水平与肺炎支原体感染所致重症肺炎患儿的病情、预后的关系探讨

目的 探讨血清和肽素（copeptin）、Toll样受体2（TLR2）、Toll样受体4（TLR4）水平与小儿肺炎支原体感染所致重症肺炎病情、预后的关系。方法 选取2016年2月—2019年4月佛山市妇幼保健院收治的361例肺炎支原体感染所致重症肺炎患儿的临床资料进行回顾分析,另回顾同时间段体检中心接收的肺炎支原体感染所致的轻症肺炎患儿（105例）、健康婴幼儿童（82例）的资料,分别记为重症组、轻症组和健康组;并将重症组患儿根据小儿危重病例评分（PCIS）分为A组（小于70分）、B组（71~80分）、C组（大于80分）。对比各组患儿的血清和肽素、TLR2和TLR4水平;重症组患儿PCIS评分与血清和肽素、TLR2和TLR4水平的关系;重症组不同预后患儿血清和肽素、TLR2和TLR4水平;血清和肽素、TLR2和TLR4水平对重症组预后的预测效能。结果 A组、B组和C组、轻症组血清和肽素、TLR2和TLR4水平均高于健康组（P<0.05）;A组、B组和C组血清和肽素、TLR2和TLR4水平均高于轻症组（P<0.05）;且A、B、C 3组间的血清和肽素、TLR2和TLR4水平对比差异均有统计学意义（P<0.05）。重症组所选患儿PCIS评分与血清和肽素、TLR2和TLR4水平均呈负相关,相关系数分别为-0.831、-0.885、-0.907（P<0.05）。重症组死亡率为6.09%（22/361）,存活患儿血清和肽素、TLR2和TLR4水平均低于死亡患儿（P<0.05）。血清和肽素、TLR2和TLR4水平预测小儿重症肺炎的最佳截断点分别为1.85、11.55、7.18 ng/mL,三者联合的灵敏度、特异度、AUC分别为90.91%、97.87%、0.869。结论 小儿肺炎支原体感染所致的重症肺炎患儿血清和肽素、TLR2和TLR4水平普遍偏高,建议在肺炎支原体感染所致的重症肺炎患儿治疗中定期检测血清和肽素、TLR2和TLR4水平的动态变化,评估病情和生理状态,指导治疗,预测近期预后。     

NOD2和TLR9激动剂诱导胃癌细胞SGC-7901合成IL-8的研究

目的探讨TLR9和NOD2在胃癌细胞SGC-7901中表达及诱导IL-8合成过程中的相互作用及意义。方法用不同浓度的NOD2激动剂（MDP）和TLR9激动剂（未甲基化的CpG ODN）以不同时间间隔单独或联合作用于体外培养的胃癌细胞SGC-7901,用ELISA法测定上清中的IL-8,用RT-PCR和Western Blot测定TLR9和NOD2的表达。数据采用SPSS13.0进行统计分析。结果相对于未刺激组,MDP和未甲基化CpG ODN能使SGC-7901NOD2和TLR9mRNA和蛋白的表达增强;细胞培养上清中IL-8的分泌增强,并呈现时间依赖性和浓度依赖性,差异具有统计学意义（P〈0.05）,8h浓度差异无统计学意义,二者共同作用还能协同诱导SGC-7901合成IL-8,也呈现时间和浓度依赖性,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论 NOD2和TLR9在胃癌细胞SGC-7901中有所表达,二者在诱导SGC-7901分泌炎性因子的过程中有协同作用。     

变形链球菌对EAhy926细胞TLR2 mRNA表达的影响

目的:观察变形链球菌细胞壁及培养上清对人血管内皮细胞EAhy926细胞TLR2 mRNA表达影响.方法:不同剂量的变形链球菌细胞壁或培养上清作用于EAhy926细胞,RT-PCR法检测EAhy926细胞TLR2 mRNA的表达.结果:变形链球菌细胞壁作用于EAhy926细胞后,TLR2 mRNA的表达量随着作用时间延长而逐渐增高,于16～24 h达到高峰,以后又逐渐下降(P<0.01);变形链球菌培养上清作用于EAhy926细胞后,TLR2 mRNA的表达量不随着作用时间和作用浓度而发生变化.结论:变形链球菌细胞壁可明显上调EAhy926细胞TLR2 mRNA的表达,并呈时间和剂量依赖性;变形链球菌培养上清不能刺激EAhy926细胞TLR2 mRNA的表达.     

血清TLR2、PGE2、IL-6对自发性早产的预测价值研究

目的　探讨血清TOLL样受体2（TLR2）、前列腺素E2（PGE2）、白细胞介素-6（IL-6）对自发性早产（SPB）的预测价值。方法　收集2019年3月至2020年3月于济南市妇幼保健院产检具有早产高危因素的孕妇289例,其中有21例SPB、263例足月产、3例治疗性早产、1例晚期流产、1例失访,最终纳入284例。研究组21例（SPB）,分娩孕周（34.08±2.16）周;对照组263例（足月产）,分娩孕周（39.25±1.11）周。比较两组临床资料,行TLR2、PGE2及IL-6检测。计量资料符合正态分布,以均值±标准差（x±s）描述,采用独立样本t检验,计数资料比较采用χ²检验,采用多因素logistic回归模型分析SPB的独立预测因子,应用受试者工作特征曲线（ROC）评估血清TLR2、PGE2及IL-6对SPB的预测价值。结果　研究组血清TLR2、PGE2、IL-6水平均高于对照组（t=8.971、5.813、5.228,均P<0.05）。logistic回归分析显示,TLR2、PGE2和IL-6的比值比分别为1.590、1.714、1.501,是SPB的独立预测因子（均P<0.05）。ROC分析显示,TLR2、PGE2和IL-6预测SPB的曲线下面积分别为0.895、0.807和0.900,以IL-6的预测价值最大（灵敏度为90.48%,特异度为77.78%）。结论　血清TLR2、PGE2、IL-6均是SPB的独立预测因子,以IL-6的预测价值较高。     

清开灵含药血清对小鼠巨噬细胞Toll样受体及其下游信号转导通路的影响

清开灵具有清热解毒、化痰开窍和镇静安神等作用。现代药理研究表明其主要有解热[1]、抗炎免疫、保肝等作用。聚肌胞(POLY I:C)是TLR3的特异性配体,能诱导NF-κB和MAPK的活化。TLR3介导的信号途径中存在着MyD88非依赖途径[2,3]。细菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)是G-菌细胞成分之一,是TLR4的特异性配体。本实验观察了清开灵含药血清对LPS和POLY I:C刺激的RAW264·7细胞分泌炎症因子及其TLR3、TLR4和下游信号转导通路的影响。1材料与方法1.1药品及试剂清开灵口服液,北京中医药大学药厂;LPS、POLY I:C,美国Sigma公…     

TLR4、p-Akt在哮喘大鼠气道平滑肌迁移的作用及小青龙汤对其影响

目的探讨Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)及p-Akt在哮喘发病中的作用及小青龙汤对气道平滑肌迁移的影响。方法 SPF级♂大鼠40只随机分为:正常对照组(A)、哮喘4周组(B)、哮喘8周组(C)、小青龙汤4周组(D)和小青龙汤8周组(E),每组8只。以卵清白蛋白(OVA)致敏与激发建立哮喘大鼠气道重塑模型。测定气道阻力;观察气道壁嗜酸性粒细胞侵润情况;图像分析软件测定支气管管壁面积、平滑肌面积和平滑肌至上皮下基底膜距离;免疫组织化学方法检测TLR4、p-Akt蛋白表达。结果 B组、C组、D组和E组大鼠的WAt/Pi、WAm/Pi较正常对照组均增加(P<0.01),间距/Pi减小(P<0.01);B组和C组大鼠的WAt/Pi高于E组,间距/Pi则较两组明显缩短(P<0.05);TLR4在B组和C组气道平滑肌上呈阳性或强阳性表达,表达量高于A组(P<0.01),C组亦高于B组(P<0.05),E组的表达量亦低于C组和D组(P<0.01)。p-Akt在B组、C组及D组的表达均高于A组(P<0.01),D组亦高于B组(P<0.05),E组低于B组和D组,与D组相比亦降低(P<0.05)。结论 TLR4和p-Akt参与哮喘气道平滑肌的迁移,小青龙汤可能通过抑制TLR4和p-Akt的表达在哮喘气道重塑方面发挥一定的作用。     

抗人TLR9抗体对CpG寡核苷酸介导的人外周血单核细胞肿瘤坏死因子-α释放的影响

目的：观察细胞膜上的TLR9在CpG寡核苷酸（ODN）激活的信号转导通路中的作用。方法：采用抗TLR9抗体阻断人外周血单个核细胞（hPBMCs）表面的TLR9，观察细胞膜表面的TLR9是否与CpG ODN的内化和肿瘤坏死因子-α（TNF—α）的释放直接相关。结果：虽然CpG ODN和GpC ODN都能被细胞吞噬，但只有CpG ODN能够引起TNF—α释放；氯喹作为内体成熟抑制剂，在抑制这两种寡核苷酸降解的过程中无显著性差别；当使用抗人TLR9抗体阻断细胞膜表面的TLR9，对CpG ODN的内化、CpG ODN诱导的TNF-α释放以及氯喹对CpG ODN诱导hPBMCs释放TNF-α的抑制作用均没有显著影响。结论：细胞膜上的TLR9对CpG ODN的内化和hPB—MCs释放TNF-α没有直接影响。     

TLR9在强直性脊柱炎患者外周血白细胞中的表达及意义

目的探讨TLR9在AS和健康人群中外周血白细胞的表达差异及意义。方法应用流式细胞术检测60例As患者及40例健康对照人群外周血淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞TLR9的表达。结果 TLR9在外周血淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞均有表达,以单核细胞表达为主;As患者外周血3种细胞TLR9的阳性表达率均明显高于对照组（P〈0.05）。结论 TLR9主要表达于外周血单核细胞,As患者外周血3种细胞表达均上调,提示TLR9信号通路的异常与AS的发病相关。