香椿果多酚对补体致内皮细胞活化和损伤的保护作用

目的评价香椿果多酚类化合物XCG-7对补体致内皮细胞活化和损伤的保护作用。方法采用能特异性激活补体替代途径的眼镜蛇毒因子激活血清补体,将激活的血清作用于血管内皮细胞,诱导其活化和损伤。通过测定内皮细胞P-selectin、E-selectin和IL-8的表达以及乳酸脱氢酶释放和Caspase-3/7活化的变化,评价XCG-7对补体刺激内皮细胞活化和损伤的抑制作用。结果 XCG-7能明显抑制补体刺激内皮细胞P-selectin、E-selectin和IL-8的表达上调,减少补体损伤内皮细胞导致乳酸脱氢酶的释放和Caspase-3/7的活化。结论香椿果多酚化合物XCG-7对补体导致内皮细胞活化和损伤具有明显的保护作用。     

补体旁路激活导致内皮细胞活化和损伤

目的研究补体替代途径的激活对血管内皮细胞活化和损伤的作用。方法采用眼镜蛇毒因子(CVF)与人血清孵育,特异激活补体替代途径。将孵育物作用于人微血管内皮细胞,采用ELISA检测内皮细胞P-selectin、E-selectin、ICAM-1、MCP-1和IL-8的表达,采用酶活性测定法检测乳酸脱氢酶(LDH)活性,化学发光法检测内皮细胞caspase-8活化信号,MTT法检测内皮细胞增殖活性,并检测内皮细胞释放NO的变化。结果补体旁路激活导致内皮细胞瞬时表达P-selectin,并进而使内皮细胞上调表达E-selectin、ICAM-1、MCP-1和IL-8。内皮细胞经补体激活物刺激后,LDH释放增加、凋亡信号caspase-8活化上调以及NO释放下调,同时,细胞增殖也受到抑制。结论补体旁路激活能诱导内皮细胞活化和损伤,介导血管内皮的生理结构与功能发生变化,从而可能导致相应的炎症和组织损伤。     

三种化学小分子对补体旁路激活致内皮细胞黏附分子表达的干预及机制研究

目的研究白藜芦醇(Res)、PDTC和AG490 3种化学小分子对补体旁路激活致人微血管内皮细胞炎症反应相关黏附分子表达的干预作用和可能的作用机制。方法采用补体旁路激活产物作用于人微血管内皮细胞(HMEC)。TBA法检测细胞培养上清中丙二醛(MDA)的浓度,ELISA方法检测细胞培养上清中可溶性黏附分子ICAM-1、VCAM-1、E-selectin的表达,并采用多个浓度的Res、NF-κB信号通路抑制剂PDTC和JAK2信号通路抑制剂AG490预处理内皮细胞,研究3种抑制剂对细胞氧化水平和黏附分子表达的干预作用。利用Western blot检测补体旁路激活产物作用于内皮细胞对NF-κB p65磷酸化的影响及3种抑制剂的干预作用。结果 HMEC受补体旁路激活产物刺激后,导致细胞培养上清中MDA浓度升高,NF-κB p65磷酸化和黏附分子ICAM-1、VCAM-1和E-selectin的表达上调。Res可降低细胞培养上清中MDA的浓度。Res、PDTC和AG490能抑制NF-κB p65的磷酸化。Res与PDTC能抑制内皮细胞黏附分子ICAM-1和VCAM-1的表达,对E-selectin的表达有一定的抑制作用,而AG490能够明显抑制上述3种黏附分子的表达。结论 Res、PDTC和AG490对补体旁路激活产物致内皮细胞黏附分子表达上调有不同程度的抑制作用,其作用机制与NF-κB信号通路的活化有关,而JAK2可能是一个更重要的调控位点。     

二苯乙烯苷对H_2O_2诱导血管内皮细胞黏附分子表达的影响

目的研究二苯乙烯苷(TSG)对过氧化氢(H2O2)诱导损伤的人脐静脉内皮细胞P-selectin、E-selectin、ICAM-1、VCAM-1和MCP-1表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,实验分为空白对照组、H2O2组、辛伐他汀组、TSG组,运用逆转录聚合酶链式反应和酶联免疫吸附试验分别检测P-selectin、E-selectin、ICAM-1、VCAM-1和MCP-1 mRNA与蛋白的表达。结果 200μmol·L-1的H2O2作用内皮细胞24 h后,P-selectin、E-selectin、ICAM-1、VCAM-1和MCP-1的mRNA和蛋白表达水平均明显上调;经TSG预处理内皮细胞4 h后,再加200μmol·L-1的H2O2作用内皮细胞24 h,结果显示:TSG能抑制H2O2诱导的内皮细胞P-selnecti、E-se-lectin、ICAM-1、VCAM-1和MCP-1的mRNA和蛋白的表达。结论 TSG可抑制H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞黏附分子的表达。     

眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A诱导人内皮细胞释放炎症介质及凋亡

目的研究眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A对人内皮细胞的作用。方法采用MTT法、SRB法、形态学观察分别检测atrase A对人微血管内皮细胞生长的影响;内皮细胞经at-rase A处理后,ELISA法检测内皮细胞释放IL-8、ICAM-1、MCP-1、E-selectin的变化,萤光发光法检测各组caspase-8、caspase-3/7的表达情况。经尾静脉给予大鼠atrase A后,检测大鼠血清中ICAM-1、IL-8、TNF-α的变化情况。结果At-rase A(400、40 mg.L-1)对内皮细胞的生长具有明显的抑制作用。而MTT法结果显示,atrase A对高接种密度的内皮细胞基本上没有影响;镜检结果显示,atrase A(400、40 mg.L-1)可使贴壁生长的内皮细胞解离悬浮。而4 mg.L-1的atrase A对内皮细胞的生长没有影响。高剂量atrase A(400mg.L-1)可诱导内皮细胞IL-8、ICAM-1、MCP-1释放增加,而低剂量atrase A(4 mg.L-1)对各炎症介质的表达没有影响。Atrase A还可诱导内皮细胞caspase-8、caspase-3/7的表达,12 h达峰值。经尾静脉分别给予2 240μg.kg-1和400μg.kg-1的atrase A后,高剂量组SD大鼠血清中ICAM-1、IL-8、TNF-α表达增加;而低剂量组中没有明显变化。结论眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A可抑制内皮细胞生长,诱导内皮细胞释放炎症介质和凋亡。     

香椿果抗补体活性多酚对补体损伤神经细胞的保护作用研究

目的评价香椿果抗补体活性多酚XCG-7对补体损伤神经细胞的保护作用。方法采用眼镜蛇毒因子特异激活血清补体,诱导人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y损伤。通过测定乳酸脱氢酶释放量、细胞活力和Caspase-3/7活性等指标,评价XCG-7对补体损伤神经细胞的保护作用。结果 XCG-7对SH-SY5Y细胞的生长具有促进作用,明显抑制补体损伤导致的细胞活力下降,在一定程度上减轻乳酸脱氢酶的释放,抑制细胞凋亡的发生。结论香椿果抗补体活性多酚XCG-7能促进SH-SY5Y细胞的生长,对补体损伤神经细胞具有一定的保护作用。     

山楂叶含药血清对高脂血清诱导单核细胞与血管内皮细胞黏附能力的影响

目的研究山楂叶含药血清对高脂血清诱导的单核细胞与血管内皮细胞黏附能力及黏附分子表达的影响,并探讨其作用机制。方法采用虎红染色法检测药物血清对高脂诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cells,HUVEC)和单核细胞株THP-1黏附的作用;用细胞ELISA法检测HUVEC表面细胞间黏附分子-1(intercelluar adhesion molecule-1,ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(vascular cellular adhesion molecule-1,VCAM-1)、P-选择素(P-selectin)的表达。结果山楂叶能抑制高脂诱导的HUVEC与THP-1的黏附,并下调HUVEC表面ICAM-1、VCAM-1、P-se-lectin的表达。结论山楂叶防治高脂血症的机制之一可能是下调血管内皮细胞黏附分子的表达,减少单核细胞与内皮细胞的黏附,从而抑制单核细胞迁移至血管内膜形成泡沫细胞而实现。     

布地奈德治疗儿童哮喘40例

目的探讨哮喘患儿吸入布地奈德的疗效及布地奈德对哮喘患儿血液可溶性细胞间黏附分子-1(sicam-1)、P选择素(P-selectin)和E选择素(E-selectin)的影响。 方法将急性发作期哮喘患儿40例设为治疗组，给予布地奈德吸入治疗，采用ELISA法检测吸入布地奈德前后患儿血液中sicam-1、P-selectin和E-selectin。对照组40例为正常体检儿童，同法检测其血液中的以上各指标。 结果治疗组患儿吸入布地奈德后血液中sicam-1、P-selectin和E-selectin水平均明显下降(均P＜0.01)，但仍高于对照组(均P＜0.01)。 结论布地奈德可通过抑制哮喘患儿血液中多种黏附分子的表达发挥抗炎作用；sicam-1、P-selectin和E-selectin在哮喘患儿血液中的表达均上调，可作为儿童哮喘的诊断、病情判断和治疗的参考指标。     

补体旁路激活致内皮细胞纤溶凝血相关分子表达变化及干预研究

目的研究补体旁路激活致微血管内皮细胞纤溶凝血相关分子表达的变化及干预。方法采用眼镜蛇毒因子激活血清补体旁路途径。将旁路活化的血清作用于人微血管内皮细胞,通过ELISA检测多个时间点细胞培养上清中Pselectin、VWF、t-PA、PAI-1、TF、TM的表达,采用NO试剂盒检测NO水平,并进一步研究吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)、白藜芦醇对以上指标变化的影响。结果微血管内皮细胞经补体旁路活化产物刺激后,P-selectin、VWF的表达快速上调,其高峰时间为15 min,而纤溶功能分子t-PA、PAI-1也随后出现持续上调表达,与凝血功能相关的组织因子TF的表达水平持续上调,而血栓蛋白TM及NO的表达下降。PDTC、白藜芦醇对P-selectin、VWF、t-PA、PAI-1、TF上调表达具有抑制作用,对NO下调表达具有干预作用。而白藜芦醇能使TM的表达进一步下调。结论补体旁路活化产物会导致微血管内皮细胞纤溶凝血功能相关分子表达的变化,而PDTC、白藜芦醇对此种变化具有一定的影响。     

氢气促进人脐静脉内皮细胞增殖和抑制黏附分子释放的机制研究

目的 探究氢气对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中miR-126及其潜在靶点细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)和E-选择素(E-selectin)表达的影响。方法 分4组培养HUVEC,采用不同浓度(0、0.01、0.1、1.0μg·mL^-1)的脂多糖处理24 h;确定100 ng·mL^-1为最佳诱导浓度，建立动脉粥样硬化炎症细胞模型，将细胞分为正常组、模型组、模型+氢气组、模型+阿托伐他汀组；采用CCK-8法检测细胞的存活率，RT-qPCR检测miR-126和黏附分子ICAM-1、VCAM-1、E-selectin在HUVEC中的表达。结果 采用100 ng·mL^-1脂多糖可成功诱导动脉粥样硬化炎症细胞模型；与模型组比较，氢气可显著促进细胞增殖，上调miR-126的表达，下调ICAM-1、VCAM-1、E-selectin的表达，效果与阿托伐他汀相近。结论 氢气可能通过上调miR-126的表达来发挥促进HUVEC增殖和抑制黏附分子释放的作用。     

两种抗补体蛋白对脂多糖致急性肺损伤的保护作用比较研究

目的通过比较两种不同的补体干预方式对脂多糖(LPS)致大鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用,进一步认识补体在LPS致ALI中的作用,并探讨补体不同成分在ALI中的作用。方法造模前将抗补体蛋白眼镜蛇毒因子(CVF)和Atrase A分别给予对应组别的大鼠,抑制补体。通过大鼠尾静脉注射LPS(5 mg.kg-1),造成ALI模型。在给予LPS后1、6、12 h采集标本,分别测定血清补体溶血活性、肺含水量、肺组织匀浆髓过氧化物酶(MPO)活性,取支气管肺泡灌洗液(BALF)测定细胞数、蛋白含量以及TNF-α和P-selectin的含量,取肺组织行病理切片检查。通过对实验结果的分析比较,评价两种抗补体蛋白对LPS致大鼠ALI的保护作用。结果在LPS致ALI的早期伴随有明显的血清补体活性下降。模型组的血清补体活性在给予LPS后的1 h内下降了47%。采用Atrase A抑制了50%补体活性的实验组其MPO、TNF-α、P-selectin水平未上调。完全去除补体活性的CVF组其MPO活力在1 h时与正常对照组相当,在6、12 h时则上升至与模型组相当,而TNF-α和P-selectin水平则介于模型组和正常组之间。病理切片检查表明两种抗补体蛋白均能有效减轻肺组织病理损伤,其中Atrase A明显优于CVF。结论补体明确参与了LPS致ALI的病理过程。采用抗补体干预能减轻ALI炎症和相关病理损伤,但两种抗补体蛋白的保护作用有明显区别。采用CVF完全去除补体C3、C5-C9仅在ALI早期有明显的保护作用,而仅部分抑制了补体活性的Atrase A则明显优于CVF,提示Atrase A作用的补体成分可能在ALI中具有重要作用。     

细胞间粘附分子-1抑制剂的高通量筛选

目的建立细胞间粘附分子-1（ICAM-1）抑制剂的高通量筛选方法。方法用脂多糖（LPS）激活原代培养的人脐带内皮细胞，用酶联免疫法（ELISA）测定内皮细胞激活后粘附分子ICAM-1的表达。用MTT法检测所筛化合物的毒性作用。结果LPS时间和剂量依赖性地激活内皮细胞表达ICAM-1, 以质量浓度为1 mg·Ｌ^-1和刺激时间为24 h为佳。在对2 000个化合物的初筛中，发现30个化合物可抑制ICAM-1的表达，入围率为1.5%，其中24个化合物有细胞毒作用。结论ELISA方法成本低、重复性好，效率高，适合ICAM-1抑制剂的高通量筛选。     

Inducer-specific bidirectional regulation of endothelial interleukin-8 production by thalidomide.

Interleukin-8 (IL-8) is a potent neutrophil chemotaxin, which can also be produced by endothelial cells to facilitate leukocyte emigration. The aim of this study was to determine the effects of the anti-inflammatory drug thalidomide (THD) on chemotaxin release from endothelial cells. Human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) were stimulated with tumor necrosis factor alpha (TNFalpha) or endotoxin (LPS) in the presence or absence of various concentrations of THD. Endothelium-derived interleukin-8 (eIL-8) in supernatants was measured using an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and biological activity of the harvested eIL-8 was tested in Boyden chamber chemotaxis assays on PMNL. THD itself had no effect on eIL-8 release. Upon stimulation with TNFalpha or LPS, HUVEC produced increased amounts of eIL-8 and THD affected this process in a bidirectional manner, with augmentation of TNFalpha- and inhibition of LPS-effects. Functionality of eIL-8 was confirmed in chemotaxis experiments and by inhibition of chemotactic effects of supernatants with anti-human IL-8 monoclonal antibodies. Results explain and emphasize immunomodulatory properties of THD in cytokine- and endotoxin-induced inflammation and regulation of transendothelial migration.     

绞股蓝总皂苷对内毒素、氧自由基介导血管内皮细胞表达c-sis基因和调节平滑肌细胞增殖的影响

目的　研究绞股蓝总皂苷（ Ｇｙｐ） 对血管平滑肌细胞增殖的调节与内皮细胞ｃ ｓｉｓ 基因表达和一氧化氮（ Ｎ Ｏ） 合成／ 释放的关系。方法　采用原位杂交法检测内皮细胞ｃ ｓｉｓｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达,用 Ｇｒｉｅｓｓ 法测定内皮细胞 Ｎ Ｏ 释放量,用 Ｍ Ｔ Ｔ快速比色法检测平滑肌细胞（ Ｓ Ｍ Ｃ） 增殖。结果　内毒素（ Ｌ Ｐ Ｓ）１６ ｍｇ· Ｌ－ １ 促进牛主动脉内皮细胞ｃ ｓｉｓ 基因表达,明显降低内皮细胞培养液中一氧化氮含量,刺激 Ｓ Ｍ Ｃ 增殖;黄嘌呤－ 黄嘌呤氧化酶（ Ｘ Ｘ Ｏ） 系统产生的氧自由基（ Ｏ Ｆ Ｒ） 具有与 Ｌ Ｐ Ｓ 相似的作用。绞股蓝总皂苷对 Ｌ Ｐ Ｓ诱导的内皮细胞ｃ ｓｉｓ 基因表达具有明显抑制作用,并能对抗 Ｏ Ｆ Ｒ 诱导的 Ｅ Ｃ 损伤,保护内皮细胞释放 Ｎ Ｏ 的能力,抑制 Ｌ Ｐ Ｓ 和 Ｏ Ｆ Ｒ通过 Ｅ Ｃ 介导的 Ｓ Ｍ Ｃ 增殖。 Ｇｙｐ 的效应可被 Ｎ Ｏ 合成酶抑制剂硝基 左旋精氨酸部分取消。结论　绞股蓝总皂苷通过抑制内皮细胞ｃ ｓｉｓ 基因表达,促进内皮细胞合成（ 释放） Ｎ Ｏ抑制平滑肌细胞增殖     

Fructose-1,6-bisphosphate ameliorates lipopolysaccharide-induced dysfunction of blood–brain barrier

Fructose-1,6-bisphosphate (FBP), a glycolytic intermediate, has neuroprotective effects in various brain injury models. However, its effects on blood–brain barrier (BBB) are largely unknown. In this study, we investigated the effects of FBP on lipopolysaccharide (LPS)-induced BBB dysfunction in in vitro BBB model comprising co-culture of mouse brain endothelial cell line, bEnd.3 and mouse primary astrocyte and explored its action mechanism therein involved. LPS induced the impairment of endothelial permeability and transendothelial electrical resistance (TEER). The functional changes were confirmed by alterations in immunostaining for junctional proteins occludin, ZO-1 and VE-cadherin, such as the loss of cortical staining pattern and appearance of intercellular gaps in endothelial cells. Co-administration of FBP alleviated the deleterious effects of LPS on BBB permeability and TEER in a dose dependent manner. And also FBP inhibited the LPS-induced changes in the distribution of endothelial junctional proteins, resulting in the better preservation of monolayer integrity. FBP suppressed the production of reactive oxygen species (ROS) but did not affect cyclooxygenase-2 expression and prostaglandin E₂ production in endothelial cells stimulated with LPS. Taken together, these data suggest that FBP could ameliorate LPS-induced BBB dysfunction through the maintenance of junctional integrity, which might be mediated by downregulation of ROS production.     

四环素抑制活化的内皮细胞表达粘附分子

目的　研究四环素对肿瘤坏死因子 α(TNF α)或细菌内毒素 (LPS)活化的内皮细胞表达粘附分子E 选择素和细胞间粘附分子 1(ICAM 1)的影响 ,为探讨四环素类药物的抗炎作用提供新的实验依据。方法　用TNF α(0 5～ 5 0 μg·L-1)或LPS(0 5～ 5 0mg·L-1)孵育培养的人脐静脉内皮细胞使其活化 ;用四环素 (10 -6～ 10 -4 mol·L-1)预孵育内皮细胞 1h再与TNF α(1μg·L-1)或LPS(5mg·L-1)共同孵育4h或 18h ;应用细胞 酶联免疫吸附分析方法检测E 选择素和ICAM 1的表达。结果　TNF α或LPS孵育内皮细胞 4h明显诱导E 选择素的表达 ,TNF α或LPS孵育内皮细胞 18h明显增加ICAM 1的构成表达 (P <0 0 1) ;用四环素处理后则明显抑制TNF α或LPS诱导的E 选择素和ICAM 1的表达 (P <0 0 1) ,并呈现剂量依赖性。结论　四环素可抑制TNF α或LPS活化的人脐静脉内皮细胞表达粘附分子E 选择素和细胞间粘附分子 1。     

小鼠血清补体替代途径溶血活性测定的新方法

目的针对现有补体溶血活性测定方法不适宜测定小鼠血清补体的缺点,构建一种血清用量少、灵敏度高的小鼠血清补体替代途径溶血活性测定的新方法。方法选用具有代表性的3个小鼠品系KM、BALB/c和C57BL/6小鼠的血清补体作为测定材料,以兔红细胞为溶血靶细胞,利用眼镜蛇毒因子(CVF)特异激活补体替代途径的特点,构建和优化小鼠血清补体替代途径溶血活性测定的方法,并采用该方法测定两种抗补体蛋白对小鼠体内血清补体活性的影响。结果以CVF作为激活剂成功构建了测定小鼠血清补体替代途径溶血活性的微量新方法。3个品系小鼠的血清在5～20μl的范围内即可分别达到合适的溶血度。该方法明显减少了血清用量,并能有效提高溶血度。结论基于CVF特异激活补体替代途径的特点而构建的小鼠血清补体替代途径溶血活性测定新方法,血清用量少、灵敏度高、稳定性好,适用于测定小鼠血清补体的溶血活性。     

Prevention of lipopolysaccharide-induced injury by 3,5-dicaffeoylquinic acid in endothelial cells

Aim： To investigate the effect of 3,5-dicaffeoylquinic acid （3,5-diCQA） on lipopolysaccharide （LPS）-induced injury in human dermal microvascular endothelial cells （HMEC-1）. Methods： The anti-oxidant effect was detected using the malondialdehyde （MDA） assay in a rat liver microsome model of lipid peroxidation. Cell viability was analyzed using the 3-（4,5-dimethylthiazol-2-yl）-2,5 diphenyltetrazolium bromide assay. Cell lipid peroxide injury was measured by lactate dehydrogenase （LDH） release. Apoptotic cells were detected by flow cytometry, and confirmed by DNA fragmentation analysis. Caspase-3 activity was measured using a specific assay kit. The level of intracellular reactive oxygen species （ROS） was determined by flow cytometry with a 2,7-dichlorodihydro-fluorescein diacetate fluorescence probe. Results： The exposure of microsomes to ascorbate-Fe^2＋ resulted in lipoperoxidation according to an increase in the level of MDA. MDA formation decreased in a dose-dependent manner on treatment with 5, 10, or 50 μmol/L 3,5-diCQA. Treatment with LPS for 16 h resulted in a 60% decrease in cell viability and an increase in LDH release from 47.6% to 61.5%. DNA laddering was observed by agarose gel electrophoresis. The level of apoptotic cells peaked at 27% after treatment with LPS for 12 h. Following treatment with LPS for 12 h, intracellular ROS and caspase-3 activity increased. Pretreatment with 3,5-diCQA at 5, 10, or 50 μmol/L for 1 h attenuated LPS-mediated endothelial cell injury. The anti-apoptotic action of 3,5-diCQA was partially dependent on its capacity for anti-oxidation and the suppression of caspase-3 activity. Conclusion： 3,5-diCQA displays anti-oxidative and anti-apoptotic activity in HMEC-1 due to scavenging of intracellular ROS induced by LPS, and the suppression of caspase-3 activity.