IL-10在系统性红斑狼疮患者PBMC B细胞刺激因子表达中的作用

 【目的】探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)B细胞刺激因子(Blys)基因和蛋白在体外的表达及IL-10对其表达的影响。【方法】梯度密度离心法分离25例系统性红斑狼疮患者和20名女性健康志愿者外周血单个核细胞,分为2组,IL-10(100ng/mL)组和培养基组(仅含RPMI1640培养基),分别于培养0、6、12、24、72h离心收集PBMCs,RT-PCR法检测刺激后0～24h细胞Blys mRNA表达,流式细胞仪和直接免疫荧光法检测72h膜结合型Blys蛋白表达。【结果】①系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞Blys mRNA和蛋白表达体外高于健康对照(P<0.001)。②IL-10显著增强健康对照和系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞Blys mRNA表达,12h作用最强(0.487±0.058 vs 0.251±0.050,P<0.001;0.638±0.084 vs 0.392±0.059,P<0.001)。③IL-10显著增强健康对照和系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞膜结合型Blys蛋白表达(FACs,4.53±0.71 vs 3.24±0.57,P<0.001;5.79±0.91 vs 4.55±0.83,P<0.001)。④直接免疫荧光法检测外周血单个核细胞膜结合型Blys蛋白显示，IL-10刺激后Blys表达增强。【结论】IL-10可上调系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞Blys基因和蛋白表达。     

增殖诱导配体mRNA在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞的表达

目的 检测增殖诱导配体（APRIL）mRNA在系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMC）的表达水平，探讨APRIL在SLE发病中的意义。方法 采用半定量RT-PCR法检测36例SLE患者及17例正常人PBMC的APRILmRNA表达，并与SLE疾病活动指数（SLEDAI）进行相关性分析。结果 SLE患者活动期组和非活动期组APRIL mRNA表达水平均明显高于正常对照组（P〈0．05或P〈0．01），活动期组较非活动期组增高更明显（P〈0．01）；SLE患者APRILmRNA表达水平与SLEDAI评分呈正相关（r=0．6725，P〈0．01）。结论 SLE患者APRILmRNA表达水平的增高，可能在SLE的发病机制中具有重要作用。     

miR-203在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义

目的:探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单个核细胞中miR-203的表达水平与疾病活动度?肾脏受累情况等临床表现之间的关系,初步探讨miR-203在SLE中的临床意义?方法:收集31例SLE患者?16例健康志愿者外周血标本,根据肾脏受累分为狼疮肾炎21例和SLE无肾脏受累10例?采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quota polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中miR-203表达,比较各组间miR-203表达水平的差异,并分析其与SLE临床指标之间的关系?结果:SLE患者miR-203表达明显低于正常对照组,差异具有统计学意义(P < 0.05);狼疮肾炎组患者miR-203表达低于SLE无肾脏受累组和正常对照组,差异具有统计学意义(P < 0.01);SLE患者miR-203表达水平与24 h尿蛋白?肾脏急性指数呈明显负相关(P < 0.01)?结论:SLE患者PBMCs中miR-203的表达水平降低,表明miR-203在SLE发病机制中可能发挥一定作用;狼疮肾炎患者miR-203的表达降低,提示miR-203可能参与了狼疮肾炎的发病?     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中PDCD5 mRNA的表达及意义

目的 通过检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)凋亡相关基因程序化细胞死亡因子5(PDCD5)mRNA 表达变化,从而探讨PDCD5基因与SLE发生与发展的关系.方法 应用逆转录PCR(RT-PCR)半定量检测67例SLE患者和50例健康者PBMC中PDCD5 mRNA的表达.结果 SLE活动期患者PDCD5 mRNA 阳性表达率明显高于健康者(P＝0.00);SLE活动期患者PDCD5 mRNA表达水平明显高于稳定期患者和健康者(P<0.01),稳定期患者PDCD5 mRNA比健康者也明显升高(P<0.01).SLE活动期患者PBMC中PDCD5的表达与反应SLE疾病活动的指标如SLEDAI、补体C3、抗ds-DNA抗体等呈显著相关(P<0.05).狼疮性肾炎患者和非狼疮性肾炎患者PDCD5表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 SLE患者PBMC中PDCD5表达上调,且与SLE疾病活动相关,提示PDCD5通过增加表达量而导致异常淋巴细胞凋亡,参与SLE的发生、发展.     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞TNIP1基因表达

目的 探讨TNIP1 基因在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞中的表达情况,以及与SLE疾病活动指数(SLEDAI)、单核苷酸多态性(SNP)位点rs10036748的相关性.方法 收集61例SLE患者和66例正常对照的临床资料及血样,采用实时荧光定量PCR法检测外周血单个核细胞中TNIP1 mRNA表达量;应用Sequenom MassArray技术对所有病例对照SNP rs10036748位点进行基因分型.结果 SLE患者TNIP1基因 mRNA表达低于正常对照组(P=0.000 4);TNIP1基因 mRNA表达水平与SLEDAI和SNP rs10036748基因型之间无相关性.结论 TNIP1基因在SLE发生中可能起着某种作用.     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞单链DNA表达研究

目的 研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中单链DNA(ssDNA)表达情况.方法 流式细胞术检测26例SLE患者(SLE组)外周血ssDNA表达阳性的PBMC细胞百分比(ssDNA阳性率),设立正常对照组(n=17)和其他结缔组织病(CTD)对照组(n=7).结果 SLE组、正常对照组和CTD对照组外周血B淋巴细胞中ssDNA阳性率分别为(0.906±0.838)%、(0.216±0.371)%和(0.270±0.311)%.统计学分析表明,SLE组患者外周血B淋巴细胞中ssDNA阳性率显著高于两对照组(P<0.01, P<0.05);SLE组内有与无狼疮肾炎患者的外周血B淋巴细胞中ssDNA阳性率分别为(1.228±0.259)%和(0.510±0.436)%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 SLE和狼疮肾炎的发生和发展可能与患者外周血表达ssDNA的B淋巴细胞异常增多有关.     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞单链DNA表达研究

目的研究系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMC）中单链DNA（ssDNA）表达情况。方法流式细胞术检测26例SLE患者（SLE组）外周血ssDNA表达阳性的PBMC细胞百分比（ssDNA阳性率）,设立正常对照组（n=17）和其他结缔组织病（CTD）对照组（n=7）。结果 SLE组、正常对照组和CTD对照组外周血B淋巴细胞中ssDNA阳性率分别为（0.906±0.838）%、（0.216±0.371）%和（0.270±0.311）%。统计学分析表明,SLE组患者外周血B淋巴细胞中ssDNA阳性率显著高于两对照组（P〈0.01,P〈0.05）;SLE组内有与无狼疮肾炎患者的外周血B淋巴细胞中ssDNA阳性率分别为（1.228±0.259）%和（0.510±0.436）%,两者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 SLE和狼疮肾炎的发生和发展可能与患者外周血表达ssDNA的B淋巴细胞异常增多有关。     

IL-10在系统性红斑狼疮患者PBMCB细胞

【目的】探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMCs）B细胞刺激因子（Blys）基因和蛋白在体外的表达及IL-10对其表达的影响。【方法】梯度密度离心法分离25例系统性红斑狼疮患者和20名女性健康志愿者外周血单个核细胞，分为2组，IL-10（100ng/mL）组和培养基组（仅含RPM11640培养基），分别于培养0、6、12、24、72h离心收集PBMCs。RT-PCR法检测刺激后0—24h细胞Blys mRNA表达，流式细胞仪和直接免疫荧光法检测72h膜结合型Blys蛋白表达。【结果】①系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞Blys mBNA和蛋白表达体外高于健康对照（P〈0．001）。②IL-10显著增强健康对照和系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞BlysmBNA表达，12h作用最强（0．487±0．058vs0．251±0．050，P〈0．001；0．638±0．084vs0．392±0．059，P〈0．001）。③IL-10显著增强健康对照和系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞膜结合型Blys蛋白表达（FACs。4．53±0．71vs3．24±0．57，P〈0．001；5．79±0．91vs4．55±0．83，P〈0．001）。④直接免疫荧光法检测外周血单个核细胞膜结合型Blys蛋白显示，IL-10刺激后Blys表达增强。【结论】IL-10可上调系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞Blys基因和蛋白表达。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中微小RNA-146a的表达

目的 采用生物信息学和分子生物学技术相结合,寻找在系统性红斑狼疮(SLE)中特异性表达的微小RNA,为进一步研究微小RNA在SLE发病机制中的作用打下基础.方法 查找与SLE发病相关的基因,采用微小RNA靶基因预测数据库预测SLE相关基因上的可能微小RNA靶位点,选择其相对应的微小RNA-146a,即hsa-miR-146a,采用实时荧光定量PER方法检测SLE患者与正常人外周血单个核细胞(PBMCs)中微小RNA的表达差异.结果 SLE患者外周血PBMCs中hsa-miR-146a的循环阈值的差值高于正常对照组(4.52±1.18比2.76±1.38,P=0.02),hsa-miR-146a的表达量显著低于正常对照组.结论 SLE患者PBMCs中hsa-miR-146a的表达水平降低,表明hsa-miR-146a在SLE发病机制中可能发挥一定的作用.     

女性系统性红斑狼疮患者雌激素受体的表达

目的:检测外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中雌激素受体在基因和蛋白水平的表达,分析其表达类型与女性系统性红斑狼疮的相关性。方法:收集46例女性SLE患者和33例健康体检者空腹静脉血,分离PBMCs,采用RT-PCR法检测PBMCs中雌激素受体(estrogen receptor,ER)αmRNA、ERβmRNA的表达,荧光免疫技术检测ERα和ERβ在蛋白水平的表达。分析两组ER表达的差异。结果:SLE患者组PBMCs中ER亚型在基因和蛋白水平上的表达率与正常对照组无显著差异(P>0.05)。结论:ER的表达类型与女性SLE没有相关性。     

miR-383增强SLE患者外周血单个核细胞Foxp3mRNA的表达

目的初步探讨microRNA-383（miR-383）对IL-2信号介导的系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中Foxp3mRNA转录的影响。方法采用Westernblot方法检测14例SLE患者PBMCs中SOCS3蛋白表达水平,通过相关microRNA软件预测和Westernblot鉴定靶向SOCS3的microRNA,RT—PCR方法检测miR-383转染SLE患者的PBMCs中转录因子Foxp3mRNA的转录水平。结果Westernblot结果发现,SLE患者的PBMCs中SOCS3蛋白表达水平显著增加,miR-383抑制SOCS3蛋白表达。SLE患者PBMCs转染miR-383后Foxp3mRNA的转录水平显著增高。结论miR-383靶向抑制SOCS3,上调IL-2信号介导的SLE患者的PBMCs中Foxp3mRNA的转录水平。     

miR-155和miR-146a在系统性红斑狼疮患者中的表达

目的通过检测miR-155和miR-146a在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)和血浆中的表达,探讨miR-155和miR-146a的表达在SLE发病中的作用。方法 SLE患者20例,健康对照组15例。取外周血分离PBMC和血浆,提取和纯化miRNA,实时定量PCR检测miR-155和miR-146a的表达,以小分子RNAU6作为内对照,计算标准化后的2-△Ct值表示miRNA的相对表达含量。结果 SLE患者PBMC中miR-155和miR-146a的表达水平是健康对照组的3.07倍(P<0.01)和1.91倍(P=0.056);SLE患者血浆中miR-155和miR-146a的表达水平比对照组低,但差异无统计学意义;同时SLE患者中蛋白尿阳性组血浆中两种miRNAs表达水平有降低的趋势,活动组患者血浆中两种miRNAs表达水平也有降低的趋势,但差异无统计学意义。结论 SLE患者PBMC中miR-155和miR-146a异常高表达,但血浆miR-155和miR-146a的表达水平有下降的趋势。     

肺结核病患者颗粒溶素在外周血中表达水平降低

目的研究肺结核病患者外周血颗粒溶素的表达及其意义。方法收集肺结核患者112例（分为痰菌阳性57例,阴性55例）,分离外周血单个核细胞,抽提总RNA,荧光定量PCR方法检测其颗粒溶素mRNA的表达水平。分析抗结核治疗前后颗粒溶素表达水平的变化。结果治疗前菌阳组PBMC颗粒溶素表达水平显著低于菌阴组（P〈0.05）;治疗前后菌阳组PBMC颗粒溶素表达水平有统计学意义（P〈0.05）。结论肺结核患者外周血颗粒溶素表达水平降低。     

COX-2在系统性红斑狼疮病人PBMC中的表达及意义

目的：检测环氧全酶-2(Cyclooxygenase-2，COX-2)蛋白在系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus．SLE)患外周血单核细胞(Peripheral blood monoeytes，PBMC)中的表达情况。探讨COX-2蛋白表达水平与SLE病情活动程度之间的关系。方法：从外周血中分离PBMC后涂片，用免疫组化染色的方法测定COX-2蛋白的表达情况。结果：COX-2蛋白在SLE实验组呈高表达状态，与SLE疾病的活动性之间呈正相关。结论：COX-2的表达与SLE的发病有关，可作为今后辅助治疗措施的目标和病情变化和疗效评价的参考指标之-。     

无症状乙型肝炎病毒携带者外周血单个核细胞分泌细胞因子的研究

目的 通过分析乙型肝炎病毒无症状携带者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)分泌的细胞因子,探索乙肝病毒慢性感染的病理机制.方法 用不同的抗原物质及抗体刺激培养肝炎病毒无症状携带者PBMCs,ELISA检测细胞培养上清中不同的细胞因子水平.结果 HBV携带者PBMCs细胞分泌的IFN-γ、IL-12明显比健康对照组减少,而TGF-β和IL-10等细胞因子的水平则明显升高;用抗体同时中和TGF-β和IL-10才能恢复IFN-γ的表达水平,而低剂量的外源性IL-12协同乙肝抗原能促进PBMCs抗原特异性T细胞分泌IFN-γ.结论 PBMCs分泌IL-12减少可能是乙肝病毒携带者长期带毒的根本原因,联合使用IL-12和乙肝特异性抗原可促进乙肝病毒携带者PBMCs的细胞免疫功能.     

系统性红斑狼疮患者CD19+ CD24hi CD38hi Breg细胞的研究

目的研究SLE患者外周血CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Breg细胞变化。方法选取2015年1月～2018年3月在广州医科大学附属第二医院确诊为系统性红斑狼疮56例患者和对照组体检健康者30例,分别抽取外周静脉血分离PBMC,加入FITC-单克隆鼠抗人CD19抗体、 PE-单克隆鼠抗人CD24抗体、 APC-单克隆鼠抗人CD38抗体,室温避光作用后,流式细胞仪检测CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Breg细胞。结果 SLE患者外周血CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Breg细胞为(2.86±1.39)%,对照组为(4.07±1.48)%,两组比较差异有统计学意义(t=3.781,P0.01)。活动期、非活动期SLE患者外周血CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Breg细胞分别为(2.10±1.09)%vs (3.62±1.25)%,两组比较差异有统计学意义(t=4.854,P0.01)。10例SLE患者治疗前、后外周血CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Breg细胞分别为(2.28±1.24)%vs (3.34±0.78)%,两组比较差异有统计学意义(t=4.386,P0.01)。结论 SLE患者外周血CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)Breg细胞减少,可能参与SLE发病,可能是观察疗效的指标。     

WHO-BREF量表用于系统性红斑狼疮患者生活质量的评价及影响因素分析

目的:评价我国系统性红斑狼疮患者的生活质量并探讨其影响因素。方法:用系统性红斑狼疮疾病活动指数计分(SLEDAI)和系统性红斑狼疮国际合作临床的系统性红斑狼疮损伤指数计分(SLICCACRDI)分别测定153例系统性红斑狼疮患者的活动指数和损伤指数,用世界卫生组织生活质量简表(WHOQOL鄄BREF)中文版对患者的生活质量进行自评。将患者按照临床诊断类型和临床分期进行分组,对不同分型和分期患者各个领域的生活质量得分进行方差分析,并对各领域得分与可能的影响因素进行相关分析和多元逐步回归分析。结果:SLE患者生活质量得分普遍较低,各领域得分从46.49±20.05到64.52±15.33不等。影响生活质量的主要因素有疾病的临床分期、活动指数、损伤指数、年龄、文化程度、家庭关系等。其中受疾病本身影响较明显的生活质量领域有生理、心理、总体健康感觉和量表总得分。结论:SLE患者生活质量较差,临床分期、活动度、损伤程度影响患者的生理功能和总体健康感觉;生理、心理、社会关系、环境领域的生活质量还受年龄、文化程度、家庭关系的影响。     

血细胞分离机大量采集实验猕猴外周血单核细胞方法探讨

目的 使用COBE Spectra血液成分分离机大量采集实验猕猴外周血单核细胞(PBMCs),继而可从中分离得到外周血造血干细胞(PBSC),为进一步利用猕猴开展免疫学研究、基因治疗提供足够的目的 细胞,探讨采集的关键技术,建立安全、有效的采集方法.方法 体重为4-5奴的实验猕猴5只,采集前一个月内分3次进行自体或异体血液于4℃储备共120 mL,用于采集时填充管路.5只猴采集前接受rhGM-CSF 20μg/ks皮下注射动员4～5 d,麻醉动物后行股动脉穿刺,选择自动外周血干细胞收集程序(Auto-PBSC)进行采集.采集结束后管路中血液以10 mL/min回输给动物3～5 min.结果 生长因子连续注射第4天外周血白细胞数增至最高,收获细胞数量随循环血量和采集次数增加而增多.经动员的所有猴能够采集到需要的PBMC,最多达9.9×108,采集次数1～3次,循环血量达750～1420 mL,实验结束后1只猕猴因心脏衰竭死亡.结论 人用血细胞分离机可用于4～5 kg实验猕猴PBMC的大量采集.由于动物不同于人体,为保证采集成功需要选用适合于猕猴的程序,采集前做好储血和生长因子动员准备,稳定的麻醉保定,提高抗凝剂比例,积极处理并发症是关键.