1,4,5,8-四甲氧基萘-2-甲醛的合成

对紫草素合成中间体1,4,5,8-四甲氧基萘-2-甲醛的制备工艺进行了改进,由萘茜在溴化四丁基铵催化下进行还原甲基化的收率由文献报道的44%提高到90%,标题化合物总收率72%(以对二甲氧基苯计).     

紫草的成份研究Ⅰ.三种新紫草素衍生物的结构及脱水紫草素的分离

已知紫草中的红色色素是紫草素(Shikonin)的衍生物。从紫草科和紫草(Lithospermum officinale L.var. erythrorhizon Maxim.)中曾分离出紫草素[Ia]、乙酰紫草素[Ib];从硬紫草(L.erythrorhizon Sieb.et Zucc.)中曾分离得β-β-二甲基丙烯酰紫草素[Ic]、异丁酰紫草素[Id]、β-羟基异戊酰紫草素[Ie];从软紫草(Macrotomia euchroma Pauls)中曾分离出3-异丙叉丁酰紫草素[If]。以上这些成分的结构均已确定。     

紫草素诱导A375-S2细胞凋亡的分子机制研究

目的　研究紫草素诱导人黑色素瘤A375 S2细胞凋亡的分子机制。方法　MTT法、Hoechst33258荧光染色、DNA片段化分析、Westernblot、流式细胞分析以及caspase活力分析等。结果　10μmol·L-1紫草素可明显地抑制A375 S2细胞的生长,其半数有效抑制浓度IC50为 (10 9±1 8)μmol·L-1。10μmol·L-1紫草素可诱导A375 S2细胞凋亡,并经历了caspase 9和caspase 3的激活。紫草素促进p53蛋白的积聚,Bax蛋白表达的上调和Bcl xL蛋白表达的下调,进而导致细胞色素C的释放,致使细胞凋亡。紫草素可使细胞周期停止在G1 期。结论　紫草素可诱导A375 S2细胞周期停止在G1 期,其诱导细胞凋亡的途径经过p53介导的Bax和caspase 9的激活。     

紫草中萘醌类化学成分的快速高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术分析

目的:对紫草中萘醌类化学成分进行快速分离与鉴别。方法:采用快速高效液相色谱-飞行时间质谱(RRLC/Q-TOF/MS)法。色谱柱为Agilent SB-C18(100 mm×4.6 mm,1.8μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液(梯度洗脱),流速为0.4 ml/min,柱温为30℃;使用甲喷雾离子源,正、负离子扫描模式,载气温度为450℃,质量扫描范围(m/z)为100¹ 000。结果:推断出紫草中可能含有紫草素、β-羟基异戊酰紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰紫草素、异丁酰紫草素、β,β-二甲基丙烯酰紫草素和α-甲基-正丁酰紫草素等10种化学成分。结论:该方法快速、高效,可为紫草的药效学和质量控制研究奠定基础。     

紫草素对膀胱癌细胞T24增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的:探讨紫草素抑制T24细胞生长的作用及其机制。方法:MTT法测定紫草素对T24细胞的生长抑制实验;用RT-PCR、westen-blot法检测不同浓度的紫草素作用于T24细胞时,对COX-2 mRNA和蛋白表达的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:25、50和75μmol/L紫草素均能抑制T24细胞生长,诱导凋亡,并呈明显的量效关系和时间依赖性,紫草素能够抑制COX-2 mRNA和蛋白的表达。结论:紫草素能明显抑制T24细胞增殖,促其凋亡,其机制可能与COX-2表达下调有关。     

3-氨基-2-羟基-4-苯基丁酸合成路线图解

3-氨基 - 2 -羟基 - 4-苯基丁酸 ( 3- amino- 2 - hydrox-y- 4- phenylbutyric acid,AHPA,1 )是一种重要的非天然氨基酸 ,具有多种潜在的生物活性 ,亦是合成免疫增强剂 bestatin[1]和强效抗 HIV蛋白酶活性化合物 kynostatins[2 ] (如 KNI- 2 72、KNI- 2 2 7、KNI- 5 77等 )以及某些肾素抑制剂 [3 ]的关键中间体。本文对其合成工艺路线作出简要评述 ,现归纳如下。1　苯丙氨酸法A[4] :苯丙氨酸 ( 2 )与苄氧羰酰氯 ( Z- Cl)反应生成 3,再与 3,5 -二甲基吡唑 ( DMP)缩合得 4,经Li Al H4还原生成醛 5 ,与 Na HSO3 和 KCN生成氰醇 6,…     

紫草素调控转化生长因子β1/Smad信号通路抑制人非小细胞肺癌A549细胞上皮-间充质转化和迁移能力

目的 探讨紫草素对转化生长因子β₁(TGF-β₁)诱导的人非小细胞肺癌A549细胞迁移、上皮-间充质转化(EMT)的影响及机制。方法 (1)紫草素0.75,1.50和3.00μmol·L^-1作用A549细胞24 h,ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β₁水平。(2)设细胞对照组、TGF-β₁9 pmol·L^-1组、TGF-β₁+紫草素0.75,1.50和3.00μmol·L^-1组,作用A549细胞24 h,分别采用划痕和Transwell实验检测细胞划痕愈合百分率和迁移细胞数,Western印迹法检测N-钙黏蛋白、锌指转录因子Snail、E-钙黏蛋白、Smad4、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)蛋白水平及Smad2和Smad3蛋白磷酸化水平。结果 (1)与细胞对照组比较,紫草素0.75,1.50和3.00μmol·L^-1作用于A549细胞24 h后均未显著改变细胞培养上清液中TGF...     

β-羟基异戊酰基紫草素对高表达酪氨酸激酶肿瘤细胞系的生长抑制作用(英文)

目的验证 β 羟基异戊酰基紫草素对体外培养的肿瘤细胞的生长抑制作用。 方法XTT比色法。结果低浓度的 β 羟基异戊酰基紫草素抑制人类白血病细胞K5 6 2和U937的生长 ,半数抑制浓度分别是 0 12 μmol/L和 0 14 μmol/L。在较高剂量下 ,β 羟基异戊酰基紫草素抑制酪氨酸激酶高表达细胞系大鼠SR 3Y1和KDR/Flk 1 NIH3T3细胞以及人类表皮细胞癌细胞A4 31的生长。其半数抑制浓度分别是 1 2 μmol/L、2 5 μmol/L、11 0 μmol/L。结论 β 羟基异戊酰基紫草素对多种肿瘤细胞的生长均有抑制作用     

左旋紫草素联合顺铂对宫颈癌Hela细胞的抑制作用及其作用机制

目的探讨左旋紫草素(shikonin,SHK)联合顺铂(cisplatin,CDDP)对宫颈癌Hela细胞的抑制作用及作用机制。方法采用CCK-8法分别测定不同浓度的顺铂、紫草素和紫草素联合顺铂溶液对宫颈癌Hela细胞增殖的活性抑制作用;流式细胞仪测定紫草素联合顺铂后诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的情况;Western blot检测Caspase-3蛋白表达情况。结果左旋紫草素对宫颈癌Hela细胞有抑制作用,24 h与48 h的IC50分别为1.05和0.89 mg·L~(-1)。紫草素联合顺铂作用于Hela细胞48 h后,细胞数量明显变少,胞体变圆,缩小,出现明显的细胞凋亡现象;不同浓度的紫草素联合顺铂作用于Hela细胞,24 h/48 h的IC50值(0.15 mg·L~(-1)SHK+CDDP 2.82 mg·L~(-1)/1.87 mg·L~(-1);0.3 mg·L~(-1)SHK+CDDP 2.43 mg·L~(-1)/1.52 mg·L~(-1);0.6 mg·L~(-1)SHK+CDDP 2.01 mg·L~(-1)/1.23 mg·L~(-1))明显低于顺铂(CDDP 3.54 mg·L~(-1)/2.78 mg·L~(-1))的IC50值,具有显著性差异(P<0.05);用流式细胞仪检测细胞凋亡率显示,随着紫草素浓度的增大,紫草素联合顺铂(1.2 mg·L~(-1)SHK+CDDP总凋亡率15.6%)细胞凋亡比率增高,与对照组顺铂(CDDP总凋亡率3.7%)相比,具有显著性差异(P<0.05)。0.3、0.6、1.2 mg·L~(-1)紫草素+顺铂分别作用Hela细胞48 h后,Western blot结果显示,Caspase-3随着紫草素浓度的增加,出现了明显的裂解活化,促进了凋亡。结论紫草素联合顺铂对宫颈癌Hela细胞有明显的抑制作用,其抑制作用与促进Hela细胞凋亡有关。     

Nrf2活化正向调控紫草素诱导的HL-60细胞分化

目的探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)在紫草素诱导HL-60细胞分化中的作用。方法取对数生长期HL-60细胞,分别采用不同浓度紫草素、Nrf2激动剂叔丁基对苯二酚(t BHQ)、Nrf2抑制剂鸦胆子苦醇作用。通过Hoechst 33258染色、MTT法观察HL-60细胞形态和增殖情况,NBT试验检测HL-60细胞还原能力,流式细胞术检测HL-60细胞分化率。ELISA法测定HL-60细胞核内Nrf2含量,RT-PCR或real-time PCR法检测HL-60细胞Nrf2、CD11b、CD14 m RNA表达水平及Nrf2下游基因的表达水平。结果经紫草素(50~200μg·L-1)作用,HL-60细胞形态、还原能力均趋向成熟,与空白对照相比细胞抑制率、分化率、Nrf2含量及其下游基因GCLC、NQO1、GCLM m RNA的表达量均升高(P<0.05或P<0.01),且随紫草素浓度增高有上升的趋势。紫草素与t BHQ联合作用,HL-60细胞CD11b、CD14、NQO1、GCLM m RNA表达量高于紫草素组(P<0.05或P<0.01);紫草素与鸦胆子苦醇联合作用,HL-60细胞CD11b、CD14、GCLM m RNA表达量低于紫草素组(P<0.05或P<0.01)。结论 Nrf2活化正向调控紫草素诱导的HL-60细胞分化。     

Toxicarioside N induces apoptosis in human gastric cancer SGC-7901 cell by activating the p38MAPK pathway

Natural plant compounds with potent proliferation inhibition and apoptosis induction properties have been screened as novel anticancer drugs. Toxicarioside N (Tox N) was isolated from the seeds of the tropical plant Antiaris toxicaria in Hainan province, China. To our knowledge, the effects that Tox N has on the apoptosis of SGC-7901 cells and its potential mechanism have never been investigated. In this study, we detected the anticancer activities of Tox N and explored the potential mechanism in the human gastrointestinal cancer cell line SGC-7901. Here, we found that Tox N inhibited SGC-7901 cell growth in a dose- and time-dependent manner and induced apoptosis in cells based on cell morphology and flow cytometry analyses. Additionally, the SGC-7901 cell treated with Tox N up-regulated the expression level of cleaved caspase-3/9 and PARP, increased the Bax/Bcl-2 ratio, and led to the release of cytochrome c into the cytoplasm. In addition, Tox N treatment led to the phosphorylation of p38MAPK. SB203580, a p38MAPK inhibitor, partially attenuated Tox N induced apoptosis by preventing the activation of caspase-3/9 and PARP. Our results indicated for the first time that Tox N can induce SGC-7901 cells apoptosis by activating the p38MAPK pathway.     

告达庭对人胃癌细胞株SGC-7901细胞增殖和凋亡的调节作用

目的研究告达庭(caudatin)对SGC-7901胃癌细胞增殖与凋亡的调节作用及可能的分子机制。方法 MTT法检测告达庭对SGC-7901细胞增殖的影响;流式细胞术分析SGC-7901细胞周期的变化;细胞形态学、琼脂糖凝胶电泳及FITC-AnnexinⅤ/PI双标记检测对胃癌细胞凋亡的影响,免疫印迹实验检测细胞凋亡相关蛋白表达水平。结果可明显抑制SGC-7901细胞的增殖,且抑制作用呈时间和剂量依赖性;SGC-7901细胞经告达庭作用24h后,处于G1期的细胞数目增加,而G2期和S期的细胞数目明显减少,并发生明显的凋亡;调节Bcl-2家族相关因子的表达水平和活化caspase-9、caspase-3与告达庭诱导SGC-7901细胞凋亡相关。结论告达庭可抑制SGC-7901胃癌细胞的增殖并诱发凋亡,其分子机制可能与调节Bcl-2与Bax的平衡以及释放CytC,进而促进caspase-9、caspase-3和PARP的降解密切相关。     

三萜皂苷Saxifragifolin D抑制人肝癌耐药细胞HepG2/ADM生长并诱导细胞凋亡作用研究

目的研究Saxifragifolin D(SD)对人肝癌耐药细胞HepG2/ADM的生长抑制及诱导凋亡作用。方法采用MTT法观察SD对HepG2/ADM细胞的增殖抑制作用,应用流式细胞仪分析SD对细胞周期的影响,AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测凋亡细胞比率,JC-1染色观察SD对细胞内线粒体膜电位的影响,Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-9,caspase-3和PARP的激活及c-Raf,MEK和ERK蛋白的表达和磷酸化水平。结果 SD可以明显抑制人肝癌耐药细胞HepG2/ADM的增殖。细胞周期检测发现SD诱导细胞产生亚二倍体凋亡峰,同时细胞凋亡率也由对照组的5.3%增加到34.8%和47.8%。线粒体膜电位检测结果显示SD导致细胞内线粒体膜电位的明显降低。Western blot检测结果表明caspase-9,caspase-3被激活,PARP被剪切活化,cytochrome C由线粒体释放至胞质,c-Raf、MEK和ERK蛋白的磷酸化水平降低。结论 SD可以抑制人肝癌耐药细胞HepG2/ADM增殖并诱导其凋亡,作用机制可能与线粒体功能障碍及抑制c-Raf/MEK/ERK通路的活化有关。     

(±)2-(7,8,3,′4,′5′-五甲氧基)黄烷通过诱导周期阻滞和细胞凋亡抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖

目的研究(±)2-(7,8,3′,4′,5′-五甲氧基)黄烷(PMF)体外对人胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制作用及机制。方法MTT法检测不同浓度PMF体外对SGC-7901细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测PMF对细胞周期分布的影响;Western blot法检测PMF对凋亡相关蛋白PARP、caspase-3表达的影响。结果不同浓度的PMF作用72 h可剂量依赖性地抑制SGC-7901细胞增殖;PMF作用12 h可使SGC-7901细胞周期阻滞于G2/M期;PMF作用24 h细胞周期检测可见亚二倍体峰(SubG1),并可诱导细胞凋亡相关蛋白PARP、caspase-3的活化。结论PMF体外可抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,其增殖抑制作用与诱导G2/M周期阻滞和细胞凋亡有关。     

活性氧激活的ERK1/2通路在化学性缺氧损伤PC12细胞中的作用

目的探讨胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在化学性缺氧损伤PC12细胞中的作用。方法应用化学性低氧模拟剂氯化钴(CoCl2)处理PC12细胞建立化学性缺氧损伤模型。应用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)比色法检测细胞存活率;罗丹明123(Rh123)染色荧光显微镜照像检测线粒体膜电位(MMP);流式细胞术检测凋亡细胞百分比;Western blot法测定caspase-3、ERK1/2和p38MAPK蛋白的表达水平。结果应用600μmol.L-1处理PC12细胞60 min可使磷酸化(p)ERK1/2的表达明显升高;在600μmol.L-1CoCl2处理PC12细胞前,应用500μmol.L-1N-乙酰半胱氨酸(NAC,为活性氧的清除剂)预处理1 h可抑制CoCl2对p-ERK1/2表达的上调作用;在600μmol.L-1CoCl2处理PC12细胞前,应用10μmol.L-1U0126(ERK1/2抑制剂)预处理2 h可保护PC12细胞对抗CoCl2引起的损伤,使细胞存活率升高,凋亡细胞数目和cleaved caspase-3表达及线粒体膜电位(MMP)丢失均减少;10μmol.L-1U0126预处理还能抑制CoCl2对p-p38MAPK表达的上调作用。此外,应用20μmol.L-1SB203580(p38MAPK抑制剂)预处理能抑制CoCl2对p-ERK1/2表达的上调作用。结论活性氧激活的ERK1/2通路介导CoCl2对PC12细胞的损伤作用,并与p38MAPK通路存在相互的的激活作用。     

白术内酯Ⅰ对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤生长及凋亡的影响

目的：研究白术内酯Ⅰ（atractylenolide Ⅰ）对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤生长及凋亡相关蛋白Bax、cleaved caspase-3、p53、Bcl-2表达的影响。方法：建立SGC-7901裸鼠移植瘤模型,观察白术内酯Ⅰ对肿瘤生长的影响;TUNEL法检测移植瘤组织中的细胞凋亡;Western blotting检测瘤组织中Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3及p53蛋白表达。结果：白术内酯Ⅰ不同程度抑制裸鼠SGC-7901移植瘤的生长,与对照组比较,给药后肿瘤体积（TV,tumor volume）、相对肿瘤体积（RTV,relative tumor volume）和相对肿瘤增殖率[T/C（%）,T_RTV/C_RTV]明显下降;移植瘤组织中凋亡细胞明显增多;白术内酯Ⅰ上调移植瘤组织中Bax、cleaved caspase-3及p53的蛋白表达,下调Bcl-2 的蛋白表达。结论：白术内酯Ⅰ能明显抑制人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤的生长,分子机制主要包括增加Bax、cleaved caspase-3、p53蛋白表达,减少Bcl-2蛋白表达,最终导致肿瘤细胞凋亡。     

A new bisphosphonate derivative,CP, induces gastric cancer cell apoptosis via activation of the ERK1/2 signaling pathway

Aim:

To investigate the effects of a new derivative of bisphosphonates, [2-(6-aminopurine-9-yl)-1-hydroxy-phosphine acyl ethyl] phosphonic acid (CP), on human gastric cancer.

Methods:

Human gastric cancer cell lines (SGC-7901, BGC-823, MKN-45, and MKN-28) and human colon carcinoma cell lines (LoVo and HT-29) were tested. Cell growth was determined using the MTT assay. Flow cytometry, Western blot, caspase activity assay and siRNA transfection were used to examine the mechanisms of anticancer action. Female BALB/c nude mice were implanted with SGC-7901 cells. From d6 after inoculation, the animals were injected with CP (200 μg/kg, ip) or vehicle daily for 24 d.

Results:

CP suppressed the growth of the 6 human cancer cell lines with similar IC₅₀ values (3239 μmol/L). In SGC-7901 cells, CP arrested cell cycle progression at the G₂/M phase. The compound activated caspase-9, increased the expression of pro-apoptotic proteins Bax and Bad, decreased the expression of anti-apoptotic protein Bcl-2. Furthermore, the compound selectively activated ERK1/2 without affecting JNK and p38 in SGC-7901 cells. Treatment of SGC-7901 cells with the specific ERK1/2 inhibitor PD98059 or ERK1/2 siRNA hampered CP-mediated apoptosis. In the human gastric cancer xenograft nude mouse model, chronic administration of CP significantly retarded the tumor growth.

Conclusion:

CP is a broad-spectrum inhibitor of human carcinoma cells in vitro, and it also exerts significant inhibition on gastric cancer cell growth in vivo. CP induces human gastric cancer apoptosis via activation of the ERK1/2 signaling pathway.     

Norcantharidin induces apoptosis in HeLa cells through caspase, MAPK, and mitochondrial pathways

AIM: To investigate the mechanism of norcantharidin (NCTD)-induced HeLa cell apoptosis. METHODS: HeLa cell growth inhibition was measured by MTT method. Apoptosis was detected by Hoechst 33258 staining and agarose gel electrophoresis. Caspase activities were assayed using caspase apoptosis detection kit. Western blot analysis was used to evaluate the level of ICAD, ERK/p-ERK, JNK/p-JNK, and Bcl-XL/Bax expression. RESULTS: Norcantharidin inhibited HeLa cell growth in a time- and dose-dependent manner. HeLa cells treated with norcantharidin showed typical characteristics of apoptosis including the morphological changes and DNA fragmentation. Caspase family inhibitor (z-VAD-fmk), caspase-8, -9 inhibitor (z-IETD-fmk, Ac-LEHD-CHO, respectively) and caspase-3 inhibitor (z-DEVD-fmk) partially prevent norcantharidin-induced apoptosis, but initiator caspase-1 inhibitor (Ac-YVAD-fmk) did not. The activities of caspase-3, -8, and -9 were up-regulated after norcantharidin treatment. Furthermore, NCTD-induced activat     

Key regulators in bee venom-induced apoptosis are Bcl-2 and caspase-3 in human leukemic U937 cells through downregulation of ERK and Akt

Bee venom (BV) has been known to inhibit proliferation and induce apoptosis in cancer cells. However, the molecular mechanisms involved in BV-induced apoptosis are still uncharacterized in human leukemic cells. In the present study, we report that BV induces apoptosis in leukemic U937 cells through downregulation of ERK and Akt signal pathway. Furthermore, BV-induced apoptosis was accompanied by downregulation of Bcl-2, activation of caspase-3 and a subsequent poly(ADP-ribose)polymerase (PARP) cleavages. The induction of apoptosis also was accompanied by the downregulation of the inhibitor of apoptosis protein (IAP) family proteins. Caspase-3 inhibitor, z-DEVD-fmk, was significantly capable of restoring cell viability and BV-induced apoptosis through caspase-3 activation was significantly attenuated in Bcl-2-overexpressing cells. These results indicate that downregulation of Bcl-2 plays a major role in the initiation as an activator of a caspase-3 involved with BV-induced apoptosis. BV also triggered the activation of p38 MAPK and JNK, and downregulation of ERK and Akt. PD98059 (an inhibitor of ERK) or LY294002 (an inhibitor of Akt), but not an inhibitor of p38 MAPK and JNK, significantly decreased cell viability and increased lactate dehydrogenase (LDH) release. The results indicated that key regulators in BV-induced apoptosis are Bcl-2 and caspase-3 in human leukemic U937 cells through downregulation of the ERK and Akt signal pathway.     

一种新的吲哚咔唑类化合物(ZWM233)的体外抗肿瘤作用及机制探讨

目的探讨ZWM233体外对多种肿瘤细胞株的增殖抑制及对K562细胞的凋亡诱导作用。方法采用MTT法检测ZWM233对K562、HL-60、A549、HeLa及HCT-116等10种肿瘤细胞株的增殖抑制作用;流式细胞仪检测对K562细胞周期的影响;AnnexinV/PI双染法考察对K562细胞的凋亡诱导作用;Western blot检测K562细胞中凋亡相关蛋白bax、bcl-2、Caspase-3、Caspase-9及PARP的变化,同时检测蛋白激酶C(PKC)各亚型、GSK-3β、ERK1/2、JNK及其磷酸化水平的变化。结果 ZWM233体外能有效抑制多种肿瘤细胞株的增殖,其中对K562细胞作用明显,IC50为2.81μmol.L-1;流式细胞仪检测K562细胞被明显阻滞在G2/M期,并诱导其凋亡;Western blot结果显示ZWM233作用K562细胞24 h后,可明显下调抗凋亡蛋白bcl-2的表达,引起Caspase-9、Caspase-3及下游底物PARP的剪切,诱导K562细胞凋亡。Western blot检测结果进一步显示药物作用24 h后PKCδ的表达有所降低,其下游分子p-GSK-3β及p-ERK的表达水平降低,而p-JNK蛋白的表达水平升高。结论ZWM233体外能有效抑制K562细胞生长,并通过激活线粒体途径诱导其凋亡,其机制可能是通过下调PKCδ,进一步抑制p-GSK-3β及p-ERK1/2的表达来发挥凋亡诱导作用。