拉米夫定耐药者体内乙型肝炎病毒水平与YMDD变异关系的研究

目的 :探讨拉米夫定耐药者 YMDD变异类型、变异率及与体内病毒水平的关系。方法 :荧光定量 PCR检测拉米夫定耐药者血清 HBV-DNA浓度 ,PCR产物直接测序检测 YMDD变异情况。结果 :5 2例拉米夫定耐药者 YMDD变异检测结果 ,其中有 2 4例发生 YMDD变异 ,占 46.1 5 % ,并且 YMDD(酪氨酸、蛋氨酸、天门冬氨酸、天门冬氨酸 )基序发生三种变异 ,第一种类型为 YVDD变异 ,共有 1 1例 (变异率 2 1 .1 5 % ) ,即核苷酸 A741→ G变异 ;第二种类型为 YIDD变异 ,共有 1 1例(变异率 2 1 .1 5 % ) ,即核苷酸 G743→ T变异 ,其中有 1例核苷酸 G743→ C变异也引起 YIDD变异 ;第三种类型为 YLDD变异 ,共有 2例 (变异率 3 .85 % ) ,即核苷酸 A741→ T变异。 YMDD野生型血清病毒浓度为 7.0× 1 0 6± 1 .3× 1 0 6 copies/ ml,YVDD、YIDD、YLDD变异型病毒浓度分别为 7.5×1 0 6 ± 1 .5× 1 0 6 copies/ ml、7.6× 1 0 6 ± 1 .7× 1 0 6 copies/ ml、6.9× 1 0 6 ± 1 .3× 1 0 6 copies/ ml;经 t检验 ,YMDD变异型与 YMDD野生型血清病毒浓度之间的差异无显著性意义 (P>0 .0 5 )。结论 :除已报道的拉米夫定耐药者 YMDD基序发生 YVDD和 YIDD变异外 ,还存在 YLDD变异 ;拉米夫定耐药者体内乙肝病毒水平与发生 YMDD变异及变异类型无     

214例慢性乙肝患者HBV YMDD变异检测及临床意义

目的：了解口服拉米夫定的慢性乙型肝炎患者HBV P区发生YMDD变异的情况,并探讨其相关影响因素。方法：应用实时荧光PCR法检测HBV YMDD变异株的方法,对214例用拉米夫定进行抗乙肝病毒治疗的慢性乙肝（CHB）患者血清进行HBV P区YMDD变异检测分析。结果：214例慢性乙肝患者YMDD变异率为32.7%,其中YIDD变异34例,YVDD变异30例,混合变异6例。YMDD未变异组治疗前谷丙转氨酶（ALT）水平显著高于变异组;而YMDD变异组治疗前HBV DNA含量显著高于未变异组;YMDD未变异组与变异组之间治疗前的患者性别、年龄和HBeAg状态等方面差异无统计学意义。结论：HBV YMDD变异可能与患者治疗前ALT水平和HBVDNA含量有一定关系,而与患者的性别、年龄和血清HBeAg状态无关。     

乙型肝炎病毒基因YMDD突变检测结果分析及临床意义

目的：检测乙型肝炎患者HBV基因突变，为临床治疗乙型肝炎联合用药或单一用药提供实验室依据。方法：采用BocheLightCycler^TM荧光PCR定量分析仪，应用FQ—PCR技术进行乙肝病毒基因突变(YMDD)及HBV—DNA的检测。结果：经半年以上的临床治疗观察，拉米夫定加胸腺肽联合用药组20例乙肝患者未检测出YMDD变异株，用药后HBV-DNA和ALT检测指标分别随治疗的进展拷贝数降低和恢复正常；而单一服用拉米夫定药物治疗组37例乙肝患者，检测出发生YMDD变异有8例，阳性率5．4％和8．1％。结论：乙型肝炎病毒耐药基因(YMDD)突变的检测有助于临床有效治疗。     

非抗病毒治疗相关的慢性乙型肝炎患者YMDD变异研究

目的：了解未经抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患乙型肝炎病毒基因YMDD变异及其与前C区变异、HBV基因型的相关性，HBV DNA水平与变异发生的关系。方法：从126例均未接受拉米夫定治疗和近一年内未经任何抗病毒治疗的慢性乙肝患随机抽取25例为研究对象。血清YMDD变异检测运用微板核酸杂交—核酸定量法，HBV基因型采用PCR微板核酸杂交—ELISA技术，HBVDNA定量采用荧光定量PCR分析系统，HBV—M采用ELISA法。结果：7例存在YMDD变异，变异HBeAg全部阳性，不同的HBV基因型形式存在不同的YMDD变异率，HBVDNA水平与YMDD变异的发生不呈正相关。结论：HBV存在YMDD野生变异株，并非完全由抗病毒治疗引起，变异株与前C区变异和HBV基因型的相关性以及HBV DNA水平和变异发生的关系有待进一步研究。     

锁核酸探针多重荧光定量PCR检测HBV基因变异

[摘要] 目的 描述并评价锁核酸（locked nucleic acid,LNA）探针实时荧光定量聚合酶链反应（Real-Time PCR）检测乙型肝炎病毒（HBV）204位基因突变的方法及特点。方法 分别用直接测序法、锁核酸（LNA）探针实时荧光定量PCR检测109例接受拉米夫定（LAM）治疗6个月以上的慢性乙型肝炎患者的血清样本。结果 LNA探针实时荧光定量PCR能检测HBV野生型YMDD和其突变型YVDD,YIDD。而且,这种方法还可以检测HBV野生型和变异型的混合。LNA探针相比普通探针在检测野生型和突变型混合样本方面,更敏感,区分度更好。结论 LNA探针实时荧光定量PCR检测YMDD变异具有快速,灵敏,等特点,可以用于大量临床样本的快速筛查,在监测拉米夫定治疗疗效及发现新耐药突变型等方面具有广泛的应用前景。     

214例慢性乙肝患者HBV YMDD变异检测

目的:了解口服拉米夫定的慢性乙型肝炎患者HBV P区发生YMDD 变异的情况,并探讨其相关影响因素.方法:应用实时荧光PCR法检测HBV YMDD变异株的方法,对214 例用拉米夫定进行抗乙肝病毒治疗的慢性乙肝(CHB)患者血清进行HBV P区YMDD变异检测分析.结果:214 例慢性乙肝患者 YMDD 变异率为 32.7 %,其中 YIDD 变异 34例,YVDD 变异30例,混合变异6例.YMDD 未变异组治疗前谷丙转氨酶(ALT) 水平显著高于变异组;而 YMDD 变异组治疗前 HBV DNA 含量显著高于未变异组;YMDD 未变异组与变异组之间治疗前的患者性别、年龄和 HBeAg 状态等方面差异无统计学意义.结论:HBV YMDD 变异可能与患者治疗前 ALT 水平和 HBVDNA 含量有一定关系,而与患者的性别、年龄和血清 HBeAg 状态无关.     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎不同病毒基因型患者的疗效

目的探讨慢性乙型肝炎病毒（HBV）基因型与拉米夫定疗效的关系。方法选用200例HBV DNA、HbeAg阳性,血清丙氨酸氨基转氨酶（ALT）异常的慢性乙型病毒性肝炎患者,口服拉米夫定（100mg／d）24个月。采用荧光探针定量PCR（FQ—PCR）检测HBVDNA,分析乙肝病毒野生型YMDD及突变耐药型YIDD／YVDD,HBV基因分型。结果200例慢性乙肝患者C基因型占39％,B基因型占26％,D基因型占22％,B＋C混合基因型占10％,其他占3％,包括1例出现YIDD耐药株。口服拉米夫定12个月后,YMDD变异发生率为6％（12／200）;口服拉米夫定24个月后,YMDD变异发生率为15％（30／200）。结论本研究中乙肝患者HBV基因型以C型为主,其次为B型及D型：服用拉米夫定后大多数患者的DNA水平明显降低,拉米夫定治疗可加速病毒YMDD变异发生,且与服药时间呈正相关;YMDD突变与乙肝病毒的基因型无关。     

HBV YMDD变异与HBV-DNA水平的关系

目的 观察拉米夫定治疗慢性乙型肝炎病毒YMDD变异的产生与血清HBV-DVA水平的关系.方法 拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患者106例,平均疗程32月(12～48月),治疗前及治疗中每4～6月采血,用荧光实时PCR定量检测HBV-DNA,采用错配聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析的方法检测HBVYMDD变异.分析出现YMDD变异组与非变异组治疗前HBV DNA水平差异.结果 YMDD变异组治疗前血清HBV DNA定量水平显著高于未产生YMDD变异(P＜0.01).结论 慢性乙型肝炎患者治疗前血清病毒载量水平越高,应用拉米夫定治疗越容易产生YMDD变异,且产生时间越早.血清病毒载量可作为应用拉米夫定治疗YMDD变异产生的早期预测指标.     

拉米夫定联合苦参素治疗慢性乙型肝炎疗效及对YMDD变异的影响

目的:观察拉米夫定加苦参素联合治疗慢性乙型肝炎的疗效及对慢性乙型肝炎病毒P基因(YMDD)变异的影响。方法:收集乙型肝炎病毒(HBV)HBeAg、HBVDNA阳性的慢性乙型肝炎患者67例,分为拉米夫定加用苦参素组(A组)、单用拉米夫定组(B组)。分别检测血清HBeAg、抗-HBe、HBVDNA、肝脏生化指标和基因YMDD变异。结果:在治疗56周时,拉米夫定联合苦参素组HBeAg/抗-HBe转换率(39.4%)优于拉米夫定组(P<0.05)。HBVDNA阳性率及YMDD变异率都比拉夫米定组低(P<0.05)。结论:拉米夫定联合苦参素能在一定程度上提高治疗慢性乙型肝炎的疗效并可减少YMDD变异。     

拉米夫定联合苦参素治疗慢性乙型肝炎疗效及对YMDD变异的影响

目的：观察拉米夫定和苦参素联合治疗慢性乙型肝炎的疗效及对慢性乙型肝炎病毒P基因（YMDD）变异的影响。方法：将60例慢性乙型肝炎病例分为苦参素组、拉米夫定组和联合治疗组3组,每组20例。苦参素组口服苦参素胶囊,拉米夫定组口服拉米夫定,联合治疗组口服苦参素胶囊和拉米夫定,疗程为12个月。治疗结束后,分别检测血清HBeAg、抗-HBe、HBV DNA和基因YMDD变异。结果：在治疗12个月时,联合治疗组HBeAg、抗-HBe转换率及HBV DNA转阴率优于苦参素组和拉米夫定组,YMDD变异率较苦参组和拉米夫定组低,但差异比较无统计学意义（P〉0.05）。上述各指标苦参组和拉米夫定组组间比较均无统计学意义（P〉0.05）。结论：拉米夫定联合苦参素能在一定程度上提高治疗慢性乙型肝炎的疗效并可减少YMDD变异。     

胸腺肽联合干扰素对拉米夫定耐药的慢性乙型肝炎患者的疗效观察

目的 探讨胸腺肽联合干扰素治疗对拉米夫定耐药的慢性乙型肝炎患者的临床疗效.方法 将98例对拉米夫定耐药的慢性乙型病毒性肝炎患者随机分成3组,胸腺肽组、干扰素组及联合治疗组,观察3组治疗6个月至1年后血清HBeAg/抗HBe转换率,血HBVDNA的阴转率及治疗6个月后随访半年的HBVDNA的阳转率.结果 治疗6个月至1年后联合组的血清HBeAg/抗HBe转换率、HBVDNA的阴转率,YMDD变异复常率均高于单用胸腺肽组、干扰素组,随访半年的HBVDNA的阳转反跳率、谷丙转氨酶复常率比较差异有统计学意义.结论 胸腺肽联合干扰素对拉米夫定耐药的慢性乙型病毒性肝炎治疗效果较好,值得临床应用.     

阿德福韦酯联合拉米夫定治疗48周后再单用48周对YMDD变异慢性乙型肝炎的疗效分析

目的观察阿德福韦酯联合拉米夫定48周后再单用阿德福韦酯48周治疗YMDD变异慢性乙型肝炎的临床疗效。方法选择41例拉米夫定初始治疗失败的YMDD变异的慢性乙型肝炎患者作为观察对象,先予以阿德福韦酯联合拉米夫定治疗48周,而后24例患者纠其联合治疗方案48周（A组）,其余17例患者单用阿德福韦酯48周（B组）。2组总疗程均为96周,治疗过程中分别于48、72、96周行丙氨酸氨基转移酶（ALT）检测及乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（HBVDNA）定量检测以评价疗效。结果联合治疗48周时,41例慢性乙型肝炎患者ALT均恢复正常（P〈0．01）,HBVDNA水平明显下降（P〈0．01）。A组和B组患者在治疗结束时,ALT复常率及HBVDNA转阴率均达到了100％,2组比较差异无统计学意义（P〉0．05）,但B组较A组医疗费用降低42．9％。结论对拉米夫定治疗失败的YMDD变异慢性乙型肝炎患者,阿德福韦酯联合拉米夫定治疗48周后,阿德福韦酯单用或联合拉米夫定治疗48周均能显著抑制HBV病毒复制,疗效满意。但阿德福韦酯单用可显著降低医疗费用。     

长期应用拉米夫定诱发YMDD变异相关影响因素分析

目的:研究长期应用拉米夫定诱发YMDD变异的危险因素。方法:对应用拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者进行YMDD变异检测,并分析YMDDD变异的发生率及其影响因素。结果:随拉米夫定治疗时间延长YMDD变异发生率增加。基线血清ALT<5ULN、血清HBVDNA载量≥107copies/ml的慢性乙型肝炎患者及治疗前合并肝硬化失代偿期者YMDD变异发生率明显高于对照组,而YMDD变异发生率在治疗前不同HBeAg表达状况的两组患者间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:基线低ALT水平、高HBVDNA载量、合并失代偿期乙型肝炎肝硬化可作为评价拉米夫定诱发YMDD变异的危险因素。     

拉米夫定治疗引起HBVYMDD变异的检测及临床意义

目的 探讨拉米夫定治疗慢性乙型肝炎引起的HBVYMDD变异与HBVDNA病毒载量与血清谷丙转氨酶(ALT)之间的关系.方法 140例拉米夫定治疗48～96周的慢性乙型肝炎患者为研究对象.用荧光定量PCR法检测HBVDNA,基因序列分析检测HBVYMDD变异,全自动生化分析仪检测ALT水平.结果 140例检测标本46例存在YMDD变异,变异率为32.86%,其中29例(20.71%)为rtM204V/rtL180M变异,16例(11.43%)为rtM 204 I变异,1例(0.72%)为rtM204I/rtL180M变异.HBVDNA＞105拷贝/mL的发生率变异株组(40/46,86.96%)明显高于野生株组(6/94,6.38%)(χ2=90.889,P＜0.01).血清ALT水平变异株组(143.96±192.97)u/L明显高于野生株组(41.29±31.54)u/L(F=25.409,P＜0.01).结论 慢性乙型肝炎患者应用拉米夫定48～96周YMDD变异率为32.86%,变异类型以rtM204V/rtL180M为主,其次为rtM 204I.变异时HBV-DNA病毒载量及ALT水平升高.     

乙型肝炎病毒多聚酶基因YMDD变异与临床治疗反应

目的：了解深圳地区慢性乙型肝炎患者在长期拉米夫定治疗中HBV多聚酶基因YMDD变异的情况及其对治疗反应的影响。方法：对100例拉米夫定治疗中28例出现血清病毒核酸（HBV DNA）阳性的患者,采用限制性片段长度多态性分析法（PCR－RFLP）检测YMDD变异,并观察其血清HBV DNA及丙氨酸转氨酶（ALT）水平。结果：100例中有17例YMDD变异阳性，其中以YVDD（M550V）变异为主,占64．7％（11／17），YIDD（M550I）变异为35．3％（6／17）。发生YMDD变异的患者均伴有HBV DNA及ALT水平反跳，1例住院患者停用拉米夫定后出现病情加重。结论：深圳地区慢性乙型肝炎患者在长期拉米夫定治疗中（疗程1年，100md/d）HBV多聚酶基因YMDD变异率为17．0％（17／100）。发生变异者较无变异者疗效降低，检测YMDD变异有助于监测疗效。     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的病原学研究

目的观察拉米夫定治疗对慢性乙肝患者体内HBVDNA的影响.方法对拉米夫定治疗组31例(po,100mg/d,25周)和对照20例组进行HBV DNA的斑点杂交和PCR半定量检测;未阴转者扩增含YMDD编码区的基因片段测序.结果拉米夫定治疗组4周、8周、24周、52周HBVDNA阴转率分别为55%、68%、80%、73%,远高于对照组(P＜0.05);治疗组的YMDD变异株检出率亦高于对照组.结论拉米夫定对HBV有较强的抑制作用,但同时诱发较多的YMDD变异.     

乙型肝炎病毒YMDD变异与HBV DNA、HBeAg定量值相关性分析

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者在服用拉米夫定后发生YMDD变异与否其HBV DNA与HBeAg定量值之间是否存在相关关系.方法 聚合酶链反应(PCR)荧光定量法测定CHB患者治疗前后的HBV DNA、YMDD变异,同时微粒子酶免疫分析法检测其HBeAg定量值.结果 218份标本同时检测HBV DNA和HBeAg定量值,对两指标前后两次的升降率进行相关性分析,发现无显著相关性(r=0.3153,P>0.05).12例发生YMDD变异(变异组)和25例YMDD野生型(野牛组)发生HBeAg血清转换者分别为3例和15例,差异有统计学意义(X2=3.976,P<0.05);变异组和野生组HBV DNA对数值分别为(4.15±1.78)和(2.72±1.58),差异有统计学意义(P<0.01);变异组和野生组HBV DNA、HBeAg定量值分别做相关性分析,发现变异组r=0.5552,有显著相关性(P<0.05),野生组r=0.2683,无显著相关性(P>0.05).结论 拉米夫定抗病毒治疗过程中HBV DNA和HBeAg滴度变化无显著相关性,YMDD变异组血清转换率和持续转换率明显低于无变异组,HBV DNA和HBeAg始终维持在较高水平.     

拉米夫定治疗中乙肝病毒多聚酶YMDD变异对患者临床经过的影响

研究乙肝病毒(HBV)多聚酶YMDD变异后HBVDNA复现对慢性HBV感染患者临床经过的影响。方法用mpPCR-RFLP技术检测24例拉米夫定治疗过程中出现HBVDNA复现的患者血清,对YMDD变异者的系列临床资料,应用SAS软件进行统计学分析。结果检出YMDD变异18例;YMDD变异后转氨酶水平较HBVDNA转阴时有显著升高,并反跳至治疗前水平。结论出现YMDD变异后,部分病例可有类似肝炎发作、甚至肝脏失代偿的表现。     

拉米夫定治疗50例慢性乙型肝炎患者自身前后对照试验

目的：探讨拉米夫定对慢性乙型肝炎病人的临床疗效。免疫学状态（HBeAg血清转换）、HBV DNA水平及YMDD耐药株（YIDD／YVDD）的影响。方法；观察50例乙肝病人口服拉米夫定治疗前和治疗后12周，24周，36周，48周的肝功能（ALT）及免疫学指标的变化，并采用荧光定量PCR技术检测HBV DNA含量和YMDD耐药变异株。结果：治疗前50例病人中有3例抗－HBe阳性，47例HBeAg阳性。治疗后12－24周有9例（19％，9／47）HBeAg转阴，其中3例出现抗－HBe，有1例HBeAg和HBsAg先后消失，治疗前病人血清YMDD变异检测结果为YMDD4例，YVDD22例，YMDD＋YVDD11例，其他尚不明确，在治疗后36－48周时，14例（14／50，28％）出现反跳，HBV DNA升高超过两个数量级，其中只有3例伴ALT升高但未超过治疗前的基线值，并在36周时由YMDD变异为YIDD，结论：拉米夫定用药9－12个月后28％出现HBV DNA升高，但不伴严重的临床改变，治疗前野生型YMDD仅是少数，而YVDD占多数，个别IDD诉出现常伴ALT的和HBV DNA的升高。     

应用实时荧光PCR方法检测乙型肝炎病毒基因YMDD变异

[目的]建立一种检测乙型肝炎患者YMDD变异株的方法,并且研究应用拉米夫定治疗及未用药治疗的乙型肝炎初发患者中YMDD变异株发生的情况。[方法]应用实时荧光聚合酶链反应（PCR）方法对30例未经过任何药物治疗的乙肝初发患者,50例使用拉米夫定治疗1年患者,50例使用拉米夫定治疗两年患者和20例使用拉米夫定与干扰素联合治疗两年的患者同时进行YMDD变异株的检测。[结果]通过对熔解曲线的分析,在未经任何治疗的乙肝初发患者中检出YMDD变异株2例,占6．67％;拉米夫定治疗1年的患者中检出YMDD变异株13例,占26.00％;拉米夫定治疗两年患者中检出YMDD变异株25例,占50．00％;拉米夫定和干扰素联合治疗的患者中检出YMDD变异株9例。占45．00％。[结论]在未经任何药物治疗的乙肝患者中即存在YMDD变异株,并且随着使用拉米夫定时间的延长在不断增加,且联合用药并不能减少变异株的发生,因此对乙肝患者在用药前,及用药过程中进行YMDD变异株的检测是非常必要的。而实时荧光PCR方法具有简便、快速、灵敏、经济的特点,特别适用于临床对YMDD变异株的检测,从而及时的指导临床用药。