胃癌中p16蛋白表达和p16基因启动子甲基化的研究

目的:探讨胃癌中p16基因的失活机制。方法:采用免疫组织化学SP方法检测40例胃癌组织和43例正常胃黏膜组织中p16蛋白的表达情况,采用甲基化特异性PCR(MSP)方法研究40例胃癌组织和35例正常胃黏膜组织p16基因启动子的甲基化状况。结果:23例胃癌组织的p16基因启动子发生了甲基化,甲基化发生率为58%,正常胃黏膜组织中未发现甲基化,两组间比较差异有显著性(P<0.01)。31例胃癌组织中的p16蛋白表达阴性,正常胃黏膜组织中6例表达阴性,两组间差异有显著性(P<0.01)。胃癌组织中,MSP方法和免疫组织化学方法结果间差异无显著性(P>0.05)。结论:胃癌的发生与p16基因失活关系密切,启动子甲基化可能抑制了蛋白的表达,这种途径可能是胃癌中p16基因失活的重要机制。     

p16基因甲基化对肺癌早期诊断的临床研究

目的检测肺癌患者支气管灌洗液及全DNA中p16基因甲基化,并探讨其在肺癌早期诊断中的作用。方法利用半巢式甲基化特异性PCR技术,检测26例肺癌患者支气管灌洗液及相应全血中DNA p16基因的异常甲基化状态。结果34.6%(9/26)肺癌组织出现p16基因甲基化,出现甲基化组织对应的血液标本中88.9%(8/9)出现p16基因甲基化。支气管灌洗液中p16基因的甲基化状况与全血中是否出现p16基因甲基化关系密切(P<0.01)。结论肺癌患者支气管灌洗液及血液标本中p16基因甲基化的检测可能有助于肺癌的早期诊断。     

p16基因甲基化对胃癌的早期诊断

目的:检测胃癌患者癌组织及全血DNAp16基因甲基化,并探讨其在胃癌早期诊断中的作用。方法:收集新鲜的胃癌组织及血液标本4 4例,胃溃疡等胃部良性疾病患者标本2 0例。采用甲基特异性PCR(MSP)技术分别检测肿瘤组织DNA和全血DNA中p16基因启动子甲基化。结果:38.6 % (17/ 4 4 )胃癌组织出现p16基因甲基化,出现甲基化组织对应的血液标本中88.2 % (15 / 17)出现p16基因甲基化。胃溃疡等胃部良性疾病患者标本中未发现甲基化。肿瘤组织中p16基因的甲基化状况与全血中出现p16基因甲基化关系密切(P<0 .0 1)。结论:胃癌组织及血液标本中p16基因甲基化的检测有助于胃癌的早期诊断。     

结直肠癌患者p16基因甲基化的检测

目的检测p16基因启动子区异常甲基化发生情况,探讨p16基因异常甲基化作为结直肠癌临床辅助诊断分子生物学标志物的可能性。方法选取2004年5月至2004年12月第三军医大学西南医院及贵州省人民医院普外科住院的结直肠癌患者53例,所有患者均经病理学诊断证实,并按Dukes病理分期分为四期,提取肿瘤组织DNA,分别应用巢式甲基化特异性PCR(nested methylation specific polymerase chain reaction,nested-MSP)及甲基化特异性PCR(methylation specific polvmerase chain reaction,MSP)方法,检测患者肿瘤组织中p16基冈的异常甲基化情况;比较MSP及nested-MSP两方法的灵敏度。结果应用MSP方法,Dukes A、B期患者和Dukes C、D期患者p16基因的甲基化率分别为23.8%和59.4%,两组比较有显著性差异(P<0.05);应用nested-MSP方法,Dukes A、B期患者和Dukes C、D期患者p16基因的甲基化率分别为52.4%和84.4%,两组比较有显著性差异(P<0.05)。应用MSP与nested-MSP方法检测肿瘤组织p16基因甲基化的阳性率分别为45.3%(24/53)、71.7%(38/53),两组比较有显著性差异(P<0.01)。结论应用nested-MSP方法检测肿瘤组织p16基因甲基化的灵敏度明显高于普通的MSP方法,分析患者DNA的p16基因异常甲基化有可能成为结直肠癌辅助诊断及预后评估的有效方法之一。     

食管癌中p16基因甲基化的研究进展

食管癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,食管癌的发生是一个多步骤,多因素参与的复杂的生物学过程,涉及遗传学与表观遗传学信息的改变。DNA甲基化是最重要的一种表观遗传修饰方式,高甲基化所致基因转录失活,     

银屑病患者外周血中p16基因甲基化的检测

目的检测斑块型银屑病患者外周血单个核细胞（PMBCs）中p16基因启动子甲基化的状态，探讨p16基因甲基化的检测在斑块型银屑病发病中的作用和机制。方法收集2011年4月至2012年5月该院门诊和住院48例宽块型银屑病患者（实验组）和18例健康者（对照组）的外周血单个核细胞（PBMCs），采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测PBMCs中p16基因甲基化的状态，并分析p16基因甲基化与患者病程和银屑病皮损面积和严重程度指数（PASI）评分的关系。结果斑块型银屑病患者PBMCs中p16基因甲基化状态（31．3％）明显高于对照组（5．6％），差异具有统计学意义（Y。=4．71，P〈0．05），且与PASI评分之间差异具有统计学意义（t=2．63，P〈0．05），而与患病病程之间差异无统计学意义（t=0．55，P〉0．05）。结论斑块状银屑病患者PBMCs中p16基因呈高甲基化比例明显增高状态，可能参与斑块状银屑病的发病机制。     

血浆p16启动子异常甲基化在肝癌诊断中的应用价值

目的探讨p16启动子异常甲基化在肝癌分子诊断中的应用价值。方法用酚／氯仿抽提、乙醇沉淀法提取44例患者术后肝癌组织DNA。用血液微量DNA提取试剂提取术前外周血液中DNA。经重亚硫酸钠转换，将未甲基化的胞嘧啶转换成尿嘧啶，再经纯化，甲基化特异性聚合酶链反应（PCR）后，检测p16启动子甲基化产物，并将其敏感度、特异度等指标与甲胎蛋白（AFP）进行比较。结果经甲基化特异性PCR发现70．5％（31／44）的肝癌组织DNA存在p16启动子异常甲基化，其中有29例血浆DNA中也同时检出p16启动子异常甲基化产物，检出率为90．5％（29／31）。13例癌组织和血浆DNA中均未检测到p16甲基化产物。p16甲基化特异性PCR检测肝癌的敏感度为66％，特异度为94％，符合率为80％，阳性预测值96％，阴性预测值83％；AFP检测的敏感度为59％，特异度为84％，符合率为79．2％，阳性预测值68．4％，阴性预测值75％。p16甲基化的上述指标略优于AFP。结论血浆p16启动子甲基化的检测可能作为一种潜在的独立的非侵入性的肝癌分子诊断标志。     

子宫内膜癌中p16蛋白异常表达及基因缺失和甲基化的研究

目的:研究子宫内膜癌中p16蛋白与其基因缺失及CpG岛甲基化的关系。方法:对36例子宫内膜癌标本分别用免疫组化方法和PCR技术检测MTS1/p16蛋白表达和基因纯合性缺失及第一外显子异常甲基化情况。结果:36例癌组织中14例p16蛋白表达阳性,蛋白表达缺失率为61.11%(22/36);9例发生基因缺失,12例发生甲基化,未发现基因缺失与甲基化同时存在的病例,p16基因总失活率58.33%;22例p16蛋白表达缺失标本有19例基因失活。结论:p16蛋白缺失程度与子宫内膜癌组织学分级和临床分期呈正相关;p16蛋白缺失程度与p16基因缺失和甲基化有关。     

p16基因甲基化联合脱落细胞检查在恶性胸腔积液诊断中价值

目的:探讨胸腔积液沉渣细胞p16基因甲基化状态检测联合脱落细胞检查在良、恶性胸腔积液鉴别诊断中意义.方法:66例胸腔积液患者,其中恶性胸腔积液36例(恶性组),良性胸腔积液30例(良性组).采用甲基化特异性PCR方法检测胸腔积液沉渣细胞p16基因的甲基化状态,同时进行胸腔积液脱落细胞检查,分析2种方法对胸腔积液诊断的意义.结果:p16基因甲基化、脱落细胞学检查和二者联合检查的阳性率恶性组分别为69.4%,41.7%和88.9%;良性组分别为13.3%,0,13.3%;2组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).联合检查的敏感性为88.9%,特异性为86.7%,准确性为87.9%,2种方法联合检查优于单项检查(P＜0.05).结论:胸腔积液p16基因甲基化联合脱落细胞学检查对良、恶性胸腔积液有鉴别诊断价值.     

结直肠锯齿状病变与p16基因甲基化的研究进展

结直肠锯齿状病变是一种新的癌前病变,可能通过无异型增生的畸形隐窝灶—增生性息肉/锯齿状腺瘤—癌变途径发展为癌,迫切需要更多分子水平的指标预测锯齿状息肉的癌变潜能。更多地了解结直肠癌癌变的分子学改变,可以提高对结直肠肿瘤的诊断和治疗水平。在锯齿状病变中经常检测到p16基因甲基化,因此,正确认识p16基因甲基化与锯齿状病变的关系对早期预防和诊断结直肠癌有重要意义。     

痰标本p16基因启动子区甲基化联合血清细胞角蛋白19片段和癌抗原15-3对非小细胞肺癌的诊断价值

目的 评价痰液标本中p16基因启动子区甲基化联合血清中细胞角蛋白19片段(cytokeratin 19 fragment,CYFRA 21-1)和癌抗原15-3(CA15-3)的检测对非小细胞肺癌(NSCLC)的诊断价值.方法 用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测100例NSCLC患者痰液p16基因启动子区甲基化联合化学发光法检测患者血清中CYFRA21-1和CA15-3的水平,评价3种肿瘤标志物联合检测对NSCLC的诊断价值.结果 NSCLC患者痰液中p16基因启动子区甲基化阳性率为61.0%;NZCLC患者血清中CYFRA21-1和CA15-3的实验敏感度分别为58.0%和38.0%;联合检测可明显提高NSCLC的检出率,敏感度79.0%,明显高于各种肿瘤标志物单项检测.结论 痰液标本中p16基因启动子区甲基化联合血清中CYFRA21-1和CA15-3的检测可明显提高NSCLC的检出率,为早期诊断NSCLC提供了依据.     

结直肠癌中p16基因的甲基化改变与蛋白表达的关系

目的 检测结直肠癌患者肿瘤组织中p16基因启动子区异常甲基化改变及蛋白表达情况,探讨其与结直肠癌发生发展与临床的关系。方法 采用甲基化特异PCR(MSP)和免疫组织化学链霉素过氧化物酶(SP)方法,对32份结直肠癌标本p16基因甲基化改变及蛋白表达情况进行检测分析。结果 p16甲基化阳性率为40.6％;p16蛋白表达阳性率75.0％;在病理分期中,DukesC、D期患者肿瘤组织中p16甲基化发生率63.0％,p16蛋白表达发生率为69.0％;DukesA、B期患者p16甲基化发生率为25.0％,p16蛋白表达阳性率为81.0％;在组织分化程度中,低分化癌中的p16甲基化阳性率为100.0％,p16蛋白表达阳性率为20.0％;在高、中分化癌中,p16甲基化的阳性率为30.0％,p16蛋13表达阳性率为85.0％;淋巴结转移癌患者肿瘤组织中p16基因甲基化阳性率为63.0％,淋巴结未转移的阳性率为25.0％;在肿瘤部位中,直肠癌p16蛋白表达阳性率为65.0％,结肠癌的阳性率为100.0％。结论 p16甲基化的改变可能影响p16蛋白的表达;p16甲基化、蛋白表达与结直肠癌的发生发展密切相关,p16甲基化和蛋白表达是结直肠癌患者诊断及预后的候选标志物之一。     

巢式甲基化特异性聚合酶链反应在p16基因启动子过甲基化检测中的应用

目的　介绍巢式甲基化特异性聚合酶链反应 (nMSP)法 ,探讨了最佳PCR扩增条件 ,并用该法分析新鲜癌组织、石蜡包埋组织及肿瘤患者血清中p16基因启动子的甲基化状态。方法　将基因组DNA变性成为单链 ,用亚硫酸氢盐修饰单链DNA ,将所有未甲基化的胞嘧啶被转变为尿嘧啶 ,而甲基化的胞嘧啶则不变。设计针对甲基化和非甲基化等位基因特异引物 ,进行巢式聚合酶链反应扩增 ,最后经凝胶电泳检测目的片段。结果　在 3种类型的标本中都检测出了p16基因启动子甲基化。用甲基化特异性聚合酶链反应法 (MSP)和nMSP法分别检测 34例非小细胞肺癌 (NSCLC)患者血清 ,p16基因启动子甲基化阳性率分别为 5 3% (18/34)和 74 % (2 5 /34) ,nMSP法具有更高的灵敏度。结论　筑巢式甲基化特异性聚合酶链反应是一种灵敏度高、特异性强的甲基化检测方法 ,可广泛应用于不同类型标本基因启动子甲基化分析。     

错配杂交化学发光法定量检测p16基因过甲基化

目的建立一种基于错配杂交化学发光检测p16基因启动子区过甲基化的定量分析方法。方法用亚硫酸氢钠修饰基因组DNA,所有未甲基化的胞嘧啶都被转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不发生变化。设计合成1对不含CpG位点的引物,同时扩增甲基化或非甲基化目的DNA片段,用2条分别与甲基化及非甲基化CpG位点互补的寡核苷酸探针与扩增产物进行杂交及化学发光检测,通过探针杂交信号强度比确定样品DNA中甲基化的p16基因的比例。结果错配杂交化学发光法具有较好的精密度(CV=5·2%~6·4%)和灵敏度(2·5×10-4pmol),检测已知混合样品的p16基因甲基化率分别为0%、23%、52%、70%及93%,与实际结果一致。结论本研究建立的错配杂交化学发光法是一种检测快速、操作简便的p16基因甲基化的定量检测方法。     

p16基因甲基化与肝细胞癌易感性的荟萃分析

目的通过荟萃(Meta)分析系统评价抑癌基因p16启动子区异常甲基化与肝细胞癌易感性的关系。方法利用Pubmed、Embase、Ovid、Web of science、Cochrane Library等数据库,中国生物医学文献数据库(CBM)、中文科技期刊全文数据库(VIP)、中国期刊全文数据库(CNKI)、万方数据库检索2014年6月以前的相关文献,按纳入排除标准筛选文献并提取数据,用Rev Man5.2软件统计分析。结果共纳入研究23项累计病例2 245例,其中肝细胞癌组1 106例,对照组1 139例(包括癌旁组织402例、肝硬化239例、肝炎39例、正常组织141例,肝结节22例以及非癌组织296例)。p16基因甲基化阳性率在肝细胞癌组织中均显著高于正常肝组织[OR=21.18,95%CI(9.75~46.00),P0.05]、非癌组织[OR=7.97,95%CI(4.64~13.68),P0.05]及肝硬化组织[OR=6.18,95%CI(4.16~9.18),P0.05]。结论 p16基因高甲基化与肝细胞癌易感性密切相关。