不同肝切量对肝硬化大鼠肝细胞凋亡及肝储备功能的影响

目的探讨肝硬化大鼠不同量的肝切与肝细胞凋亡、肝储备功能的关系.方法将40只雄性Wistar大白鼠随机分为实验组30只,对照组10只.实验组采用复合因素(CCL4,乙醇)制备肝硬化模型,于模型制成后(15周)再将实验组大白鼠随机分为A、B、C组,每组10只,各组分别作15%、30%和45%肝组织量的切除.切除前后抽血作常规肝功能检测;对切除的肝组织进行石蜡包埋,连续切片作常规病理、细胞凋亡检测.结果A、B、C组大白鼠细胞凋亡指数(AI)肝切前后分别为15%组(25.94±7.24)和(34.17±11.8)、30%组(26.58±8.92)和(44.57±15.49)、45%组(27.16±5.94)和(49.71±19.98),肝切后均较肝切前明显升高(P＜0.05或P＜0.01).结论肝细胞凋亡指数与肝切除量之间呈正相关关系,检测肝硬化患者的肝细胞凋亡程度对了解其肝储备功能具有重要的意义.     

肝硬化大鼠肝细胞凋亡与肝功能关系的研究

目的通过系统测定大鼠肝硬化发展过程中肝细胞凋亡的变化,与常规肝功能测定结果比较,了解上述指标与肝储备功能的关系。方法取Wistar大白鼠90只分为3组,分别为9周组、12周组、15周组,每组30只,采用复合因素(CCl4,乙醇)制备大鼠肝硬化模型;另取Wistar大白鼠30只随机分为3组,每组10只,作为与实验组相对应的对照组,代之等量生理盐水。分别于9周、12周、15周末处理9周组、12周组、15周组大鼠,同期处理相应对照组。血液标本作常规肝功检测;肝组织均作石蜡包埋,连续切片作HE染色、细胞凋亡检测。结果在大鼠肝硬化发展过程中HE染色显示9周组、12周组、15周组分别符合肝纤维化Ⅲ、Ⅳ期、肝硬化早期,肝细胞凋亡指数(AI)在9周组(7.38±1.71)、12周组(14.81±2.99)、15周组(26.55±7.94)时高于同期对照组(P<0.05)。结论①肝细胞凋亡指数随着肝硬化程度的加重而升高;②测定肝细胞凋亡指数对预测肝硬化患者的肝储备功能可能具有重要的意义。     

合并肝硬化的大肝癌解剖性肝切除疗效分析

目的:探讨合并肝硬化的大肝癌行解剖性肝切除的疗效分析。方法:将239例合并肝硬化的大肝癌根据手术方式不同分为解剖性肝切除组(n=148)和非解剖性肝切除组(n=91),观察两组间围手术期及预后情况。结果:解剖性肝切除组手术时间(221±58)min,较非解剖性肝切除组(187±64)min长(P<0.001);但是其术中出血量(450±216)ml明显少于非解剖性肝切除组(822±525)ml(P<0.001);术后住院时间解剖性肝切除组(15±4)d,较非解剖组(17±4)d短(P<0.001);术后肝功能恢复较非解剖性肝切除组快[术后7dALT、AST、TBIL分别为(102±57)U/L、(80±39)U/L、(42.7±21.4)μmol/L比(193±48)U/L、(117±34)U/L、(65.5±20.2)μmol/L;P<0.001];解剖性肝切除组并发症发生率为17.6%(26/148),明显低于非解剖组23.1%(21/91,P<0.05)。解剖性肝切除组术后3、6、12月生存率分别为88.7%、77.4%、66.0%;非解剖性肝切除组分别为86.8%、73.6%、63.1%,两组生存时间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:对于肝功能储备良好的合并肝硬化的大肝癌可以安全的实施解剖性肝切除,术后恢复快,疗效较好。     

多西紫杉醇联合伽马刀对肝癌细胞裸鼠皮下移植瘤凋亡作用的影响

目的 探讨多西紫杉醇联合伽马刀对肝癌细胞株裸鼠皮下移植瘤细胞凋亡作用的影响.方法 成功建立:SMMC-7721肝癌细胞株裸鼠皮下移植瘤模型,分2组,每组各10只裸鼠,即多西紫杉醇联合伽马刀组及肿瘤对照组.实验组先用注射多西紫杉醇处,剂量为60[μg/(0.3 m L·只)],每3天注射1次,连续注射6次,隔天伽马刀照射1次,连续伽马刀照射6次.(室温下用137Cs放射源照射局部肿瘤,照射按分割照射每次分别给予5 Gy总剂量为10 Gy).对照组注射生理盐水,剂量同前.观察2组的肿瘤生长情况.30 d后切取瘤样组织,用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡率.结果 实验组的肿瘤生长速率明显减慢,实验组的凋亡指数(35.03±1.51)%明显高于对照组(0.87±0.39)%,两者间差异有统计学意义(P<0.05).结论 多西紫杉醇联合伽马刀具有促进肿瘤细胞凋亡进而抑制肝细胞癌裸鼠移植瘤生长作用.     

肝硬化大鼠肝缺血再灌注损伤肝细胞死亡方式

目的研究肝硬化大鼠肝缺血再灌注(I/R)损伤时肝细胞死亡的主要方式。方法采用四氯化碳复合法制作肝硬化大鼠模型,将肝硬化大鼠随机分为假手术(SO)组和I/R组,I/R组建立70%肝I/R模型,并于再灌注后0、1、6、24、48 h取材。比较各组的血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平,肝细胞钠钾ATP酶、钙ATP酶活性,流式细胞仪检测肝细胞胀亡和凋亡百分比,电镜观察肝细胞形态学改变。结果与SO组相比,I/R组再灌注后血清ALT、AST水平显著升高(P<0.05),6 h达高峰,后逐渐下降;肝细胞钠钾ATP酶、钙ATP酶活性显著下降(P<0.05),于再灌注1 h达低谷,后逐渐恢复;再灌注早期(6 h内)肝细胞死亡方式以胀亡为主,后期(24 h后)凋亡细胞逐渐增多;电镜下可见典型胀亡和凋亡改变。结论胀亡是肝硬化大鼠肝脏I/R损伤肝细胞死亡的主要方式,肝功能损伤与胀亡密切相关。     

肝缺血再灌注后HO-1 mRNA的表达及其与细胞凋亡关系的临床研究

目的 通过检测肝组织在缺血再灌注前后血红素氧合酶-1(HO-1)mRNA的表达及细胞凋亡情况,探讨肝组织在缺血再灌注时HO-1mRNA与细胞凋亡之间的关系.为临床选用有效的预处理方法、抑制细胞凋亡、减轻肝脏缺血再灌注损伤提供理论基础.方法 肝切手术中,分别在肝门阻断前、肝门阻断开放同时、手术结束关腹前取切缘旁肝组织10 g.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HO-1mRNA表达.脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术法测定肝细胞凋亡.结果 肝组织HO-1mRNA的表达,在肝门阻断前为(0.2313±0.0575),肝门开放时为(0.8168±0.1972),关腹前为(1.2447±0.4403).这三个组间的差异有显著性(P<0.05).肝门阻断前HO-1mRNA的表达比肝门开放时少,关腹前HO-1mRNA的表达要比肝门开放时多.肝门阻断前的凋亡指数为(9.590±0.959)‰,肝门开放时为(5.800±0.939)‰,关腹前为(4.690±1.738)‰,这三个时间点的差异有显著性(P<0.05).肝门阻断前的肝细胞凋亡指数高于肝门开放时和关腹前;而肝门开放时肝细胞凋亡指数高于关腹前.相关性分析:在肝门阻断前、肝门阻断开放同时、手术结束关腹前,肝组织HO-1mRNA的表达与肝细胞凋亡呈高度负相关.结论 HO-1作为细胞和组织应激过程中的关键因子,在肝缺血再灌注损伤过程,HO-1可能通过抑制细胞凋亡,减少缺血再灌注时的肝细胞损伤.     

自噬现象在肝纤维化和肝切除时的表现形式

目的了解肝纤维化和肝切除时同肝脏再生并行的自噬现象的表现和差别。方法雄性Wistar大鼠随机分成对照组、肝纤维化组和肝切除组;采用四氯化碳复合法制作肝纤维化大鼠模型,病理证实肝纤维化后,于诱导的第5周取材;采用改良70%肝切除法制作大鼠肝切除模型,于术后18 h取材。观察大鼠一般状况,定量比较血清肝功能指标的变化,用光镜、透射电镜观察肝细胞形态学改变及肝脏再生差别;利用透射电镜数据定量分析自噬现象的变化。结果肝纤维化组血清总蛋白、白蛋白较对照组显著降低(P<0.01),增殖细胞核抗原(PCNA)指数为85%~95%,自噬现象指数较对照组下降19%(P<0.05);肝切除组丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶较对照组显著升高(P<0.01),PCNA指数为20%~30%,自噬现象指数较对照组下降95%(P<0.01);肝纤维化组和肝切除组自噬体内容物及形态发生显著改变。结论自噬现象在肝切除和肝纤维化代偿过程中均有不同程度的削弱,但二者表现形式不同,进一步对自噬现象的调节有可能促进和帮助术后剩余肝脏功能的恢复。     

重症急性胰腺炎大鼠肝损伤机制及褪黑素保护

目的 观察重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肝组织核因子κB表达活性与肝脏损伤的关系,探讨褪黑素(Mel)在大鼠急性胰腺炎肝脏损伤中的保护作用.方法 SD大鼠随机分为重症急性胰腺炎(SAP)组,Mel干预(Mel)组及假手术(Sham)组,各32只.分别于造模成功后4、12、24、48 h处死大鼠,各时点各组8只.血样检测血清淀粉酶及丙氨酸氨基转移酶(ALT),ELISA法检测血清肿瘤坏死因子(TNF)α的含量,免疫组化evision二步法检测肝脏组织核因子κB的表达,缺口末端标记技术(TUNEL法)检测肝脏细胞凋亡情况,留取肝组织苏木精咿红染色下观察肝组织病理变化.结果 4 h点Sham组、SAP组、Mel组TNF-α表达量差异均无统计学意义(pg/ml:161±9、166±14、161±4、均P>0.05),SAP组淀粉酶、ALT、TNF-α表达量和核因子κB活性及肝细胞凋亡指数各时点均高于Sham组(均P<0.05),并随着时间推移逐渐升高,于24 h达高峰(24 h点SAP组和Sham组核因子κB活性和肝细胞凋亡指数分别为62.8±4.4 vs 7.8±0.6,22.33±2.43 vs 0.81±0.16,均P<0.05),此时肝组织病理损伤以肝细胞凋亡为主;至48 h,SAP组核因子κB活性和肝细胞凋亡指数(30.5±2.1、11.67±0.55)较24 h有所下降,而血清TNF-α、淀粉酶及ALT的含量[(342±10)pg/ml、(3357±117)U/L、(574±32)U/L]仍继续升高,同时肝组织病理出现大片出血坏死及炎细胞浸润.Mel组上述指标各时间点均低于SAP组(均P<0.05),但高于Sham组(均P<0.05);Mel组相应各时点病理损伤亦较SAP组轻.结论 肝组织核因子κB的活化介导了重症急性胰腺炎肝脏损伤.Mel可抑制核因子κB活性和TNF-α表达,减轻了肝细胞凋亡和坏死,减轻了急性胰腺炎的肝脏损伤.     

重建肝动脉血供大鼠部分肝移植模型的建立及其意义

目的:探讨重建肝动脉血供的大鼠部分肝移植模型的手术操作方法及其意义。方法:SD大鼠120只,采用重建肝动脉血供的大鼠部分肝移植60例(实验组),同期行不吻合肝动脉的经典“二袖套法”大鼠部分肝移植60例(对照组),分别于术后第1、2、4和7天处死后行肝功能、组织学检查,应用流式细胞仪检测移植肝细胞增殖活性。结果:两组肝功能ALT、TB第1天即开始明显增高,以后逐渐降低,第4天、第7天实验组ALT低于对照组,差异有显著性(P<0.05)。第4天实验组TB低于对照组,差异有显著性(P<0.05),组织学检查术后实验组可见更多的二倍体和多倍体肝细胞(P<0.05),第2天和第4天实验组增殖指数分别为(32.81±3.45)%和(36.33±2.52)%,较对照组(24.08±4.66)%和(29.75±1.82)%明显增高,差异有显著性(P<0.01)。结论:肝动脉重建可明显改善大鼠部分肝移植后移植肝的功能,促进移植肝的再生。     

β-连环蛋白保护肝缺血再灌注损伤的机制研究

目的 应用特异性基因敲除小鼠模型研究β-连环蛋白(β-catenin)对小鼠肝缺血再灌注损伤的保护机制.方法 建立β-catenin基因敲除小鼠(实验组,6只)和野生型小鼠(对照组,6只)肝缺血再灌注模型,采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)法检测两组小鼠肝组织细胞凋亡;应用实时定量聚合酶链反应(PCR)技术测定两组小鼠再灌注后0、6h时的肝细胞白细胞介素-6(IL-6) mRNA及肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA表达水平.结果 肝脏缺血再灌注0h时,实验组肝细胞凋亡数、TNF-α mRNA、IL-6 mRNA与对照组间的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).缺血再灌注6h时,实验组凋亡细胞数为(56±15)个/高倍视野,显著多于对照组的(27±8)个/高倍视野(P＜0.05);实验组TNF-α mRNA、IL-6 mRNA分别为2.5±0.3、7.8±2.6,均显著高于对照组的1.1±0.1、4.8±1.3,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).结论 β-catenin可通过抗凋亡和抗炎作用对肝脏缺血再灌注引起的细胞损伤起保护作用.     

血型不合肝移植治疗肝功能衰竭

目的探讨血型不合肝移植治疗肝功能衰竭的可行性和疗效。方法回顾性分析本中心包括21例血型不合在内的66例肝移植治疗肝功能衰竭的临床资料,包括终末期肝病模型（MELD）评分、生存率和主要并发症的发生率。结果血型相同组和血型不合组受体MELD评分分别为31．7±3．2和32．8±2．9,差异无统计学意义（P=0．154）。两组平均生存时间分别为（806．0±70．0）d和（720．3±118．5）d,术后3个月、1年、2年、3年生存率分别为84．2％、77．4％、67．6％、60．1％和75．6％、64．0％、58．2％、58．2％,两组累积生存率差异无统计学意义（P=0．417）。急性排斥反应发生率分别为8．9％（4／45）和19．0％（4／21）,差异无统计学意义（P=0．253）。血型不合组术后感染和胆道并发症发生率分别为76．2％（16／21）和28．6％（6／21）显著高于相同组的48．9％（22／45,P=0．037）和8．9％（4／45,P=0．038）。严重感染和肾功能衰竭是血型不合肝移植术后早期主要死亡原因。结论在血型相同供肝严重短缺的情况下,ABO血型不同肝移植是治疗肝功能衰竭的有效手段。感染和。肾功能衰竭是围手术期最主要死因。合理的免疫抑制治疗、有效控制感染、加强围手术期的管理是提高血型不合肝移植成功率的关键。     

肝移植术后免疫排斥反应和肝功能监测

肝移植早期,并发原发性移植肝无功能(PNF)的发生率为2%~23%,是肝移植患者的主要死亡原因,其影响因素复杂,但与急性免疫排斥反应所导致的移植肝异常病理改变密切相关。如何降低移植肝的病理损害,改善移植肝功能,提高肝移植的成功率是目前肝移植实验研究的焦点之一,现就有关这方面的研究进展作一综述。     

腹腔镜肝切除治疗肝脏良性肿瘤

目的探讨腹腔镜肝切除对肝脏良性肿瘤的治疗价值。方法不阻断肝脏血流的情况下,应用多功能手术解剖器(PMOD)进行完全腹腔镜下肝切除14例,其中肝海绵状血管瘤11例,肝脏局灶性结节性增生1例,肝脏肉芽肿性炎症1例,肝囊肿纤维化1例。结果14例腹腔镜肝切除术均获成功。无中转开腹,无术后死亡,无术后并发症发生。平均手术时间153．6min,术后平均住院时间6．4d。随访35．6个月(3～44个月)无一例复发。结论对于有症状或诊断不明的肝脏肿块,同时伴胆囊结石(需手术切除)的肝脏血管瘤患者,采用PMOD进行腹腔镜肝切除是一种安全有效的治疗手段。     

多层螺旋CT在肝硬化肝脏体积测量中的应用

目的探讨多层螺旋CT在肝硬化肝脏体积定量中的应用。方法选择2009～2011年肝硬化患者22例,采用螺旋CT中的Volume软件进行体积测量,比较不同肝功能分级患者体积的差异,并与正常对照组进行比较。结果不同肝功能组及正常对照组肝脏体积差异显著,其中肝功能越差,肝脏体积越小,ChildA级患者与正常对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）,而ChildB、C级与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论采用CTVolume软件进行影像后处理,可以测量肝硬化的肝脏体积,可以在一定程度上反映患者的肝功能情况。     

肝穿活检术在诊断早期肝硬化中的应用价值

目的探讨肝穿活检在诊断肝硬化中的应用价值。方法将2013年1月～2017年11月我院接诊的50例疑诊为肝硬化的患者纳入本研究。比较肝穿活检结果与临床诊断结果差异,以临床诊断结果为金标准,分析肝穿活检诊断早期肝硬化的灵敏度、特异度、准确率、阳性预测值以及阴性预测值,并记录肝穿活检的不良反应发生情况。结果肝穿活检结果和临床诊断结果对比,在代偿期肝硬化以及总肝硬化诊断率方面差异无统计学意义(P0.05);肝穿活检诊断早期肝硬化的灵敏度为97.06%、特异度为87.50%、准确率为94.00%、阳性预测值为94.29%、阴性预测值为93.33%;患者肝穿活检术后,出现局部疼痛10例(20.00%),血压一过性下降2例(4.00%),局部轻度红肿1例(2.00%)。结论肝穿活检在诊断肝硬化中,效果与临床诊断相似,且对于早期肝硬化的诊断灵敏度、准确率均较高,可作为肝硬化诊断的判断方法之一。     

肝硬化CT分级与肝切除术前后肝功能的相关性研究

目的:研究肝硬化CT分级与肝切除术前后肝功能恢复能力的相关性.方法:研究59例原发性肝癌手术病人及其CT图像.将术前非肿瘤区肝实质的肝硬化分级,与术前临床肝功能分级、术前、术后生化指标变化曲线进行对比研究.结果:CT分级之间各生化指标的术后峰值或谷底和20d后的时间区段内,ALT(丙氨酸氨基转移酶)、AST(门冬氨酸氨基转移酶)、ALB(白蛋白)和PAB(前白蛋白)水平有统计学意义;而TBIL(总胆红素)和DBIL(直接胆红素)在C-P分级的A、B级之间有统计学意义.结论:肝硬化CT分级与现有的临床常用的肝储备功能,如C-P分级有互补性,可以作为临床肝癌术前评估肝储备功能和判断预后的重要指标之一.     

肝病患者血清胱抑素C与肝纤维化的关系

目的通过测定肝病患者血清胱抑素C（Cys C）和透明质酸（HA）、Ⅲ型前胶原（PcⅢ）等肝纤维化的指标,探讨Cys C与肝纤维化的关系。方法收集肝病患者320例作为研究对象,并根据临床诊断指标将其分为慢性肝炎组、肝硬化代偿组、肝硬化失代偿组及肝肾综合征组,同时收集80例健康体检者作为对照组。测定各组的血清Cys C、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、HA、PcⅢ、Ⅳ型胶原（ⅣC）和层粘连蛋白（LN）的浓度;采用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,各患者组与对照者之间的比对采用方差分析,P〈0.05为差异有统计学意义。结果血清Cys C、HA、PcⅢ、ⅣC和LN水平随肝病的发展呈升高的趋势,与对照组之间差异有统计学意义（P〈0.01）,且血清Cys C水平与HA、PcⅢ、ⅣC、LN水平呈正相关,相关系数r分别是0.987 7、0.989 0、0.998 3、0.976 8（P〈0.01）;除肝肾综合征组外,血清Scr和BUN水平与对照组之间差异均无统计学意义。结论本研究表明血清Cys C水平随着肝病病程的进展而逐渐升高,可作为评价肝纤维化的潜在指标。     

由生物肝细胞构成的人工肝临床应用的伦理学体会

目的探讨应用生物型人工肝(猪肝细胞源)治疗重型肝炎患者的伦理学问题及相应的对策.方法针对2例经生物型人工肝治疗的重型肝炎肝衰竭患者出现的伦理学问题并结合国外关于异种移植的经验教训,制定相应的伦理学对策.结论遵循知情自愿原则,生命价值原则,利益风险并存原则,制定严格的规章制度,并用现代医学模式指导生物人工肝的临床应用,是规范和保证生物型人工肝发展的重要环节.     

肝移植发展简史

自20世纪50年代提出肝移植设想以来,经过动物实验阶段、临床试用及临床应用阶段,肝移植逐步发展成为一种临床广泛应用的外科技术,已被公认为终末期肝病常规而有效的治疗手段.近年来,肝移植技术在中国大陆和港台地区也取得较快的进展,中国成为仅次于美国的第二个肝移植大国.