人巨细胞病毒感染对脐血淋巴系祖细胞增殖的影响

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)感染对脐血淋巴系祖细胞(CFU-TL)集落增殖能力的影响。方法采用甲基纤维素半固体培养CFU-TL集落,不同浓度HCMV-AD169持续攻击CFU-TL,观察计数CFU-TL集落数、抑制率、集落峰值时间及集落维持时间;用MTT法测量HCMV对宿主细胞增殖活性的影响;用流式细胞仪测定相应表面抗原阳性T-淋巴细胞百分率;并用聚合酶链反应(PCR)技术检测集落细胞内HCMV-AD169DNA。结果HCMV感染组CFU-TL集落数明显低于对照组(P<0.01),抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系;HCMV感染组CFU-TL集落维持时间明显缩短,而各组集落出现时间及集落维持时间无明显差异;HCMV感染组48h、72h宿主细胞增殖指数分别1.59、1.28,感染96h、120h的增殖指数分别为0.58、0.32.;CD3+细胞较培养前明显提高,占集落组成细胞的(90.4±5.6)%,表明集落组成细胞中绝大部分细胞为T淋巴细胞;通过PCR,在HCMV感染组CFU-TL集落细胞内检测到HCMV-AD169存在。结论HCMV在体外试验中能抑制CFU-TL的分化和增殖;淋巴系祖细胞是HCMV的宿主细胞之一,HCMV-AD169能直接感染淋巴系祖细胞。此作用可能是HCMV感染所致的免疫功能低下的主要原因之一。提示HCMV感染引起的细胞免疫功能紊乱与CFU-TL受该病毒抑制有关。     

人巨细胞病毒对红系祖细胞的影响

目的：探讨人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）对红系祖细胞（ＣＦＵ－Ｅ）的分化和增殖的影响,并初步探讨其作用机制。方法：取１５例脐血标本,用红系祖细胞单向半固体培养技术,观察３种不同浓度的ＨＣＭＶ ＡＤ１６９株对ＣＦＵ－Ｅ集落形成的影响,用ＰＣＲ和ＲＴ－ＰＣＲ检测集落中的ＨＣＭＶ ＤＮＡ与ｌａｔｅ ｍＲＮＡ。结果：３个感染组ＣＦＵ－Ｅ均减少,与正常对照组比较,分别为１１．４６％、２１．８８％、３４．４５％（Ｐ     

人巨细胞病毒对红系祖细胞的影响

【目的】探讨人巨细胞病毒 (HCMV)对红系祖细胞 (CFU E)的分化和增殖的影响 ,并初步探讨其作用机制。【方法】取 15例脐血标本 ,用红系祖细胞单向半固体培养技术 ,观察 3种不同浓度的HCMVAD16 9株对CFU E集落形成的影响 ,用PCR和RT PCR检测集落中的HCMVDNA与latemRNA。【结果】 3个感染组的CFU E均减少 ,与正常对照组比较 ,分别为 11 46 %、2 1 88%、34 45 % (P <0 0 5 ) ,显示CFU E集落数与HCMV感染浓度有关 ,病毒感染浓度越高 ,抑制程度越大。CFU E集落细胞中的HCMVDNA均为阳性 ,而latemRNA为阴性。【结论】HCMVAD16 9株可直接感染红系祖细胞 ,并抑制其分化与增殖 ,该抑制作用可出现于仅有病毒潜伏的细胞。     

人类巨细胞病毒对人胚肺细胞HOX基因表达的影响

应用半定量RT PCR技术研究人胚肺 (HEL)细胞HOX基因的表达状态及人类巨细胞病毒 (HCMV)感染对HEL细胞HOX基因表达的影响。结果发现 :HEL细胞表达HOXB7基因 ;HCMV感染后 ,其表达上调 ;用全反式维甲酸 (ATRA)处理HEL细胞 ,HCMV对HOXB7基因表达的上调作用更强。提示HCMV可能通过影响HOXB7基因的表达导致胚胎发育畸形。 更多还原     

人巨细胞病毒对巨核细胞生长的影响及其反义寡核苷酸的抗病毒活性

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)对人巨核系祖细胞的抑制作用及其机制,初步研究HCMV反义寡核苷酸(ASON)的抗病毒感染作用。方法采用体外悬浮培养巨核系细胞,观察HCMV AD169株对巨核系祖细胞生长的影响。用流式细胞术检测HCMV感染巨核系细胞上HCMV pp65抗原的表达。用HCMV感染经ASON预处理的巨核细胞,计数存活巨核细胞数,用FACS检测巨核细胞上HCMV pp65蛋白表达,并用MTT法测定ASON的细胞毒性。结果HCMV AD169株在体外能明显抑制巨核系祖细胞的增殖,悬浮培养第12天,与对照组相比,HCMV感染组的巨核细胞数减少了67.86%(P<0.05)。HCMV感染的巨核系细胞有HCMV pp65抗原的表达,其表达率为(24.5±3.1)%。0.08μmol/L的UL36反义寡核苷酸(UL36Anti)能对抗HCMV的作用,使巨核细胞数保持在未被感染时的水平,与HCMV感染组巨核细胞数比较有显著差异(P<0.05)。UL36Anti组巨核细胞上几乎无HCMV pp65蛋白的表达。MTT结果表明UL36Anti显著影响细胞生长的浓度为90μmol/L。结论HCMV感染引起的血小板减少与其抑制巨核系祖细胞增殖有关。特异的ASON有一定的抗HCMV活性,有可能作为一种新的手段用于HCMV感染引起的血小板减少症的防治。     

人巨细胞病毒对人脐血巨核系祖细胞生长的影响及作用机制研究

[目的]探讨人巨细胞病毒(HCMV)对巨核系祖细胞生长的影响及其机制.[方法]采用造血祖细胞体外半固体培养技术,用HCMVAD169株分别感染去除T细胞和未去除T细胞的脐血单个核细胞.观察CFU-MK集落数;用原位聚合酶链反应(IS-PCR)检测集落细胞中的HCMVDNA.[结果]2个感染组的CFU-MK集落数均减少,与灭活病毒组比较,分别为29.5%和48.6%(P<0.05),未去除T细胞组CFU-MK集落数减少比去除T细胞组明显(P<0.05),经IS-PCR检测发现各病毒感染组CFU-MK细胞中有HCMVDNA存在.[结论]HCMV在体外能抑制CFU-MK的分化和增殖,HCMV感染引起的血小板减少可能与该病毒对巨核系祖细胞的直接抑制以及免疫因素有关.     

藏药独一味对粒系祖细胞影响的实验研究

藏药独一味[Lamloplomis Rotata(Benth)Kudo)系唇形科独一味属植物,具有补髓补气、止血止痛等功效。经现代研究和临床观察,独一味有止血镇痛、抗菌消炎、增强免疫力等作用。为了探讨其对骨髓粒系祖细胞(CFU—D)的影响、开发民族药材资源,本文观察了独一味Ⅰ(简称独Ⅰ)、独一味Ⅱ(简称独Ⅱ),对正常小鼠骨髓与马利兰诱导的衰竭小鼠骨髓CFU—D的影响,现报告如下。     

脐血粒系祖细胞发育过程中HoxB8的表达及干预

目的：探讨人脐血造血干细胞（HSC）向粒系祖细胞（CFU-G）发育过程中,全反式维A酸（ATRA）和（或）三氧化二砷（As2O3）对HoxB8 mRNA/蛋白表达的影响,为ATRA和As2O3治疗提供依据。方法：12例脐带血样本采自胎盘段脐带血,在人脐血造血干细胞（HSC）向粒系祖细胞（CFU-G）增殖分化过程中,加入ATRA 10 nmol/L和（或）As2O310 nmol/L持续干扰培养的细胞。采用real-time PCR和Western Blotting方法分别测定HoxB8 mRNA/蛋白的表达水平。结果：人类造血干细胞向粒系祖细胞增殖分化过程中,对照组、ATRA组、As2O3组及ATRA＋As2O3组的HoxB8 mRNA/蛋白第3 d开始表达,第7 d表达较强烈,第12 d表达减弱;在real-time PCR方法中,与对照组比较,ATRA组、As2O3组及ATRA＋As2O3组HoxB8 mRNA的表达上调（P〈0.05）。在Western Blotting方法中,与对照组比较,ATRA组、As2O3组及ATRA＋As2O3组HoxB8蛋白的表达上调（P〈0.05）。结论：在人脐血造血干细胞（HSC）向粒系祖细胞（CFU-G）发育过程中,HoxB8基因与粒系造血密切相关。ATRA、As2O3及ATRA＋As2O3能显著上调HoxB8 mRNA及蛋白的表达。     

人巨细胞病毒重组基因表达质粒的构建

目的 用基因工程技术克隆人巨细胞病毒（Human cycomegalovirus,HCMV)中抗原性较强的蛋白片段-gp52C末端和pp150C末端的DNA序列，插入pPIC9K质粒，构建适于酵母表达系统的重组表达质粒，方法 根据人巨细胞病毒糖蛋白gp52和磷酸蛋白pp150C末端的cDNA序列，设计出2对引物，利用PCR的方法，以病毒培养液上清为模板，进行二轮PCR扩增，把两个目的基因串联在一起，将所得的DNA片段经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后用T4连接酶与pPIC9K质粒进行连接，然后导入大肠杆菌DH5α筛选出阳性转化子，并用PCR和双酶切鉴定阳性重组子，结果 从人巨细胞病毒培养液上清中扩增出目的基因，PCR反应和双酶切鉴定结果与预期相符。结论 重组表达质粒成功地克隆了目的基因片段。     

肝癌组织中HOXA9 mRNA的表达及其临床意义

目的研究肝癌病例癌组织、癌旁组织及非癌肝组织中HOXA9 mRNA的表达及其临床意义.方法标本经10%中性福尔马林固定后常规制作石蜡包埋切片,HOXA9 mRNA行原位杂交检测.结果临床分析发现术后血清AFP值、AFU值、Glo值、PAB值及SHCSP阳性率均有明显减少.癌组织HOXA9mRNA阳性表达评分(1.94±1.69)明显低于非癌肝组织(3.17±1.70),两者有显著差异;癌旁组织HOXA9mRNA阳性表达评分(2.54±1.20)与非癌肝组织及癌组织无显著差异.癌组织、癌旁组织及非癌肝组织三者HOXA9mRNA阳性表达率(54.84%、76.92%、83.33%)无显著差异.除HCC中HOXA9RNA阳性表达评分(1.81±1.78)显著低于MHC(2.75±0.50)外,HOXA9mRNA表达阳性率及阳性评分与癌分化程度、AFP值、SHCSP是否阳性、AFU值、肝硬化有无、转移情况、有无癌栓、大体形态及肿块最大径等临床病理特征均无明显关系.结论本研究结果显示HOXA9mRNA可能与肝癌的发生有密切关系.临床上检测HOXA9mRNA的表达情况对肝癌的早期发现和早期诊断可能有较重要的临床意义,值得深入研究.     

同源异型盒基因5在急性髓细胞性白血病中表达的研究

目的研究同源异型盒基因5（HOXA5）在急性髓细胞性白血病（AML）中表达情况。方法使用荧光定量聚合酶链式反应法检测108例 AML 中 HOXA5表达,分析 HOXA5表达与 AML 的相关性。结果 HOXA5在初诊 AML 与正常人群中,表达差异无统计学意义（P ＞0.05）;在原发性 AML 和继发性 AML 患者中,表达差异无统计学意义（P ＞0.05）;在初次诱导治疗完全缓解和未缓解患者中,表达差异有统计学意义（ P ＜0.05）;在年龄≥60岁和＜60岁患者中,差异无统计学意义（P ＞0.05）;男性与女性AML 患者相比,HOXA5表达差异有统计学意义（P ＜0.05）。HOXA5表达与 CD34、HLA-DR、CD33、WBC 计数、LDH 的无相关性（P ＞0.05）,与骨髓原始细胞数有相关性（P ＜0.05）。结论 HOXA5高表达可造成 AML 较差的治疗反应。     

多囊卵巢综合征患者子宫内膜组织中同源框基因A10蛋白的表达

目的:检测多囊卵巢综合征(PCOS)患者子宫内膜组织中同源框基因(HOX)A10的表达.方法:采集20例已婚PCOS患者和26例已婚正常育龄妇女子宫内膜组织标本,HE染色判定内膜分期,采用免疫组化SP法检测不同患者子宫内膜HOXA10的表达.结果:PCOS患者子宫内膜间质反应不良和PCOS分泌中期组的子宫内膜分泌反应欠...     

人巨细胞病毒部分抗原基因的克隆及表达

目的克隆表达人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）特异性强的抗原决定簇基因,制备特异性抗原。方法从感染HCMV的细胞上清液中提取病毒基因组DNA,用PCR扩增HCMVpp150（ppUL32）、gp52（UL44）、pp65（ppUL83）、ppUL80a蛋白IgM抗原决定簇编码区DNA序列,将其克隆至pMD-18T载体并测序,然后克隆至表达载体pGEX-4T-1诱导表达,采用免疫印迹法（Western blotting）检测表达产物的抗原性。结果经序列测定各基因片段序列正确,并在pGEX-4T-1表达载体中得到了高效表达,表达的融合蛋白经Western blotting和ELISA分析,具有良好的抗原性,能够与HCMV IgM阳性血清发生特异性反应。结论通过基因工程技术可以有效地获取纯度较高、特异性强的HCMV抗原。为HCMV感染者的早期诊断提供检测用抗原。     

儿童Hp相关性胃十二指肠疾病基质金属蛋白酶-9基因表达的研究

目的 探讨儿童幽门螺杆菌(Hp)相关性胃十二指肠疾病中胃黏膜基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达情况.方法 对具有上消化道不适主诉症状的儿童(包括66例慢性胃炎及30例十二指肠溃疡患儿)经上消化内镜检查获取胃黏膜活检标本.根据Sydney胃炎标准对HE染色的活检组织进行胃窦黏膜慢性炎症程度评价.血清Hp-IgG抗体检测、聚合酶链反应(PCR)、尿素酶试验及组织学检查作为确定Hp感染状态的依据.所有病例采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法及免疫组化法检测胃黏膜MMP-9的表达.结果 胃黏膜MMP-9 mRNA阳性表达率及表达水平在不同的Hp感染状态中无明显差异,其表达水平与胃窦黏膜慢性炎症程度无关.免疫组化染色显示MMP-9主要在炎症细胞中表达.结论 Hp感染对儿童胃十二指肠疾病的胃黏膜MMP-9的表达无影响.     

子痫前期患者胎盘组织中内皮分化基因2的表达

目的:探讨子痫前期患者胎盘组织中内皮分化基因(Edg)2蛋白和mRNA的表达及意义。方法:应用免疫组化SP和RT-PCR方法检测20例正常晚孕妇女、20例子痫前期轻度和20例子痫前期重度患者胎盘组织中Edg2蛋白和mRNA的表达。结果:3组胎盘绒毛滋养和蜕膜细胞中Edg2蛋白以及胎盘组织Edg2mRNA的表达差异有统计学意义(F/χ2=19.063、19.063和2232.999,P<0.001),子痫前期轻度和重度组高于正常晚孕组,子痫前期重度组高于子痫前期轻度组。结论:胎盘组织中Edg2的异常表达可能与子痫前期的发生和发展有关。     

同源异型盒基因MSX-2在SD大鼠颅缝闭合过程中的表达

目的研究同源异型盒基因Msx-2在SD大鼠颅缝闭合过程中的表达变化及意义。方法选择出生后1、2、5、8、12、15、18、22、30和45d的SD大鼠，采用免疫组化和Real—time PCR法分别检测颅缝不同位点的MSX-2表达。结果MSX-2表达于SD大鼠发育的颅骨成骨缘、颅缝间质及其下的硬脑膜组织。在后额缝和矢状缝均未闭合期（出生后1～8d），后额缝和矢状缝复合组织中均出现MSX-2少量表达；在活跃的后额缝闭合期（出生后12～22d），后额缝复合组织出现较多MSX-2表达，而矢状缝复合组织无明显的表达增加；在后额缝完全闭合期（出生后30～45d），MSX-2表达在后额缝减弱明显，并持续较低水平，此时矢状缝的表达略高于后额缝。结论同源异型盒基因MSX-2转录主要发生于颅缝闭合活跃阶段，在后额缝和矢状缝复合组织的表达有不同的时间趋势，提示可能参与颅骨发育和颅缝闭合的调控。     

同源异型盒基因MSX-2在SD大鼠颅缝闭合过程中的表达

目的 研究同源异型盒基因Msx-2在SD大鼠颅缝闭合过程中的表达变化及意义.方法 选择出生后1、2、5、8、12、15、18、22、30和45 d的SD大鼠,采用免疫组化和Real-time PCR法分别检测颅缝不同位点的MSX-2表达.结果 MSX-2表达于SD大鼠发育的颅骨成骨缘、颅缝间质及其下的硬脑膜组织.在后额缝和矢状缝均未闭合期(出生后1～8 d),后额缝和矢状缝复合组织中均出现MSX-2少量表达;在活跃的后额缝闭合期(出生后12～22 d),后额缝复合组织出现较多MSX-2表达,而矢状缝复合组织无明显的表达增加;在后额缝完全闭合期(出生后30～45 d),MSX-2表达在后额缝减弱明显,并持续较低水平,此时矢状缝的表达略高于后额缝.结论 同源异型盒基因MSX-2转录主要发生于颅缝闭合活跃阶段,在后额缝和矢状缝复合组织的表达有不同的时间趋势,提示可能参与颅骨发育和颅缝闭合的调控.     

同源异形盒A10及上皮性钙黏蛋白在人子宫内膜癌组织中的表达

目的：探讨同源异型盒基因A10(HOXA10)及上皮性钙黏蛋白(E-cad)在人子宫内膜癌组织中的表达及其相关性,探讨二者在子宫内膜癌发生发展及浸润转移中的作用。方法选取锦州市中心医院2012年1月~2013年1月手术切除的40例子宫内膜癌存档蜡块作为实验对象,选择同期因良性病变切除子宫的正常子宫内膜标本30例作为对照。免疫组化实验检测子宫内膜癌和正常子宫内膜标本中HOXA10和E-cad蛋白的表达。结果子宫内膜癌中HOXA10蛋白的阳性表达率低,E-cad蛋白的正常表达率低,与正常子宫内膜比较,差异有统计学意义(P<0.05);并与子宫内膜癌的组织学分级、临床分期、肌层浸润深度、有无淋巴结转移有关(P<0.05);二者在子宫内膜癌中的表达呈中度正相关(r=0.448,P<0.05)。结论子宫内膜癌组织HOXA10表达下降或缺失可能通过某种机制下调了E-cad的表达,通过上皮间质转化途径促进了肿瘤的转移和侵袭。联合检测HOXA10和E-cad在子宫内膜癌的表达,可能有助于了解子宫内膜癌的恶性程度。