Smad2/3信号分子在小鼠胚胎腭发育和腭裂形成中的表达

背景：部分学者通过体外器官培养研究认为全反式维甲酸干扰了Smad2/3在腭部的表达,具体机制尚不明确。目的：观察腭突Smad2/3信号分子在胚鼠腭部发育及腭裂形成过程中的表达变化。方法：54只C57BL/6J近交系孕鼠随机分为3组,在妊娠10d,实验组一次性灌胃全反式维甲酸100mg/kg诱导胚鼠两侧腭突不能在中线融合,建立腭裂畸形动物模型;植物油对照组灌胃10mL/kg橄榄油,空白对照组不做处理。结果与结论：在植物油对照组中,从妊娠13d18时到妊娠14d18时腭间充质细胞中Smad2/3免疫阳性表达逐步增高,至妊娠15d8时表达开始出现下降,实验组也表现为这一变化趋势,且同一组间表达较植物油对照组明显;在腭中嵴上皮细胞中,植物油对照组随着腭突的融合,腭中嵴上皮带消失,Smad2/3表达也明显下降,实验组始终未融合,未见明显的Smad2/3阳性细胞。在整个胚腭正常发育和腭裂形成过程中,空白对照组与植物油对照组Smad2/3阳性细胞表达几乎无差异。提示过量全反式维甲酸可能通过干扰腭中嵴上皮细胞及间充质细胞中Smad2/3信号分子的表达,从而影响小鼠胚腭上皮间充质转化,与腭裂形成密切相关。     

上皮型钙黏素E和β-连环蛋白在胰腺癌中的表达情况

目的：研究上皮型钙黏素E（E-cad）β-连环蛋白（β-cat）在胰腺癌中的表达情况及其临床意义。方法：采用免疫组织化学方法检测上皮型钙黏素E和β-连环蛋白在胰腺癌中及癌旁非肿瘤胰腺组织中的表达情况。并分析其与临床病理因素的关系。结果：上皮型钙黏素E和β-连环蛋白在胰腺癌组织中的表达明显低于癌旁非肿瘤胰腺组织。结论：上皮型钙黏素E和β-连环蛋白的低表达可能参与胰腺癌的转移,联合检测对判断胰腺癌的诊断和预后有一定价值。     

咖啡因对鼠牙胚发育的影响

背景：孕期饮用咖啡会导致孕妇钙吸收障碍,影响胎儿牙胚发育。目的：观察咖啡因对鼠牙胚发育的影响。方法：将Wistar孕鼠随机分为2组,在咖啡因组大鼠受孕7d后的饮水中添加咖啡因,对照组孕鼠饮水中不加咖啡因。孕20d时,两组各处死一半孕鼠取胎鼠,苏木精-伊红染色观察牙胚组织形态;另一半孕鼠连续用药至产仔后20d,测定仔鼠血清中钙离子水平,并取仔鼠第一磨牙进行扫描电镜观察。结果与结论：咖啡因组仔鼠血清中钙离子水平低于对照组（P〈0.05）。苏木精-伊红染色可见咖啡因组胎鼠与相同时期对照组胎鼠相比,牙胚组织体积减小,发育迟缓。电镜结果显示咖啡因组孕鼠所产仔鼠的第一磨牙酸蚀后表面空隙比对照组多。提示对孕鼠使用咖啡因可以影响其仔鼠牙胚的发育,导致牙胚发育迟缓,使釉质基质钙化不全,发育后的牙齿不耐酸蚀。     

全反式维甲酸诱导神经干细胞向神经元的分化

背景:目前研究证实全反式维甲酸在调控多种组织和细胞的增殖、生长发育、代谢以及维持内环境稳定等方面具有广泛生物学作用.目的:探讨全反式维甲酸诱导神经干细胞分化为神经元过程中的作用及其分子机制.设计、时间及地点:对照观察,体外细胞学实验,于2006-07/2007-06在上海同济大学附属医院实验室完成.材料:普通级孕13～14 d雌性SD大鼠6只,取胎鼠用于制备神经干细胞.诱导剂全反式维甲酸为Sigma公司产品.方法:取第3代神经干细胞,以2×108 L-1密度接种,分为全反式维甲酸诱导1 d,3 d,7d,10d组和空白对照组,各诱导组均加入1 μ mol/L全反式维甲酸,空白对照组仅加入等量生理盐水.主要观察指标:免疫荧光染色鉴定结果,计数分化为神经元的比例,应用半定量RT-PCR法检测维甲酸受体α mRNA的表达.结果:全反式维甲酸诱导后神经元特异性烯醇化酶染色呈阳性,细胞有多个细长突起,胞体呈绿色荧光,胞核呈蓝色荧光.与空白对照组比较,诱导3 d,7 d,10 d组神经元特异性烯醇化酶染色阳性细胞率均明显升高(P<0.05),且诱导7 d组达峰值.与空白对照组比较,各诱导组维甲酸受体α mRNA的表达量均明显升高(P<0.01).结论:全反式维甲酸能显著提高大鼠胚胎神经干细胞分化为神经元的比例,同时发现细胞维甲酸受体α mRNA的表达增加.     

维甲酸诱导BALB／C近交系小鼠产生腭裂的剂量研究

目的：研究维甲酸诱导BALB／C近交系小鼠产生腭裂所需的剂量。方法：将40只BALB／C近交系小鼠分成四组,每组10只,在妊娠10d时分别给予不同剂量的维甲酸,给药后观察所有孕鼠的反应,在妊娠15d时解剖部分孕鼠,取胎鼠头部,行冠状切片,苏木精一伊红染色法（HE染色）,进行观察。剩余孕鼠任其自然分娩,观察子鼠情况。结果：给予70mg／kg维甲酸后,孕鼠组绝大多数表现腭裂动物模型所需特征。结论：70mg／kg剂量维甲酸能够诱导BALB／c近交系小鼠产生可靠的腭裂动物模型。     

槲皮素对大鼠卵巢发育和卵巢寿命的影响

背景:研究发现一些植物雌激素可改变生殖系统发育,并可能最终影响生殖衰老的年龄.槲皮素是一种黄酮类物质,具有微弱的雌激素效应,但对卵巢卵泡发育和卵巢衰老进程究竟有无影响还不清楚.目的:观察槲皮素对大鼠卵巢卵泡发育和卵巢寿命的影响.方法:健康成年SD大鼠30只雌雄按2:1合笼所生的新生雌鼠,分为3组:母鼠灌胃组,对孕10.5 d母鼠槲皮素灌胃,1次/d,直至分娩,取1,2,4 d新生雌鼠;腹腔注射组,对正常出生后12 h内新生雌鼠槲皮素腹腔注射,1次/d,取2,4 d新生雌鼠:空白对照组:不进行任何干预的1,2,4 d新生雌鼠;观察新生鼠卵巢发育情况.另取12月龄雌性大鼠22只,以数字表法随机分为实验组和对照组:实验组用槲皮素灌胃4个月/1次/d.对照组灌胃给予生理盐水.对灌胃前和灌胃期间12月龄雌性大鼠行阴道涂片,观察大鼠动情周期模式:灌胃结束后,计算卵巢和子宫系数,苏木精一伊红染色观察各期卵泡发育情况和卵泡总擞变化.结果与结论:用槲皮索干预1,2 d龄新生大鼠未装配的卵泡均减少,而发育更晚期阶段的卵泡即原始卵泡或发育卵泡有所增加.灌胃前大部分大鼠动情周期已经不规则,用药后,随着大鼠年龄的增长,实验组与对照组显示了相似的动情周期变化:规则的动情逐渐消失,周期变得延长或不规则,灌胃结束时均以不规则动情为主.灌胃4个月后,实验组大鼠卵巢大部分由闭锁卵泡组成,另外可见少许原始卵泡、发育卵泡以及窦状卵泡和黄体,实验组窦状卵泡较对照组增加(P<0.05),两组卵巢和子宫系数及体质量增加无差异.提示槲皮素可能具有一定促进卵巢卵泡发育和成熟的作用,但不影响卵巢寿命.     

透骨消痛颗粒对关节软骨细胞wnt/β-连环蛋白信号通路的调控

背景:由巴戟天、杭白芍、肿节风和川芎等组成的透骨消痛颗粒能有效延缓关节宏观形态、软骨基质及软骨细胞退变.目的:观察透骨消痛颗粒对软骨细胞wnt/β-连环蛋白信号通路中Wnt4、糖原合成酶3.及.-连环蛋白的影响.方法:将SD 大鼠关节软骨细胞分离培养成功后,人白细胞介素 1β诱导软骨细胞退变,取第2 代退变软骨细胞,随机分为对照组和透骨消痛颗粒组,后者加入透骨消痛颗粒醇提物,分别培养4,8 d 后,采用RT-PCR 检测2 组Wnt4、糖原合成酶3β、β-连环蛋白mRNA 表达,采用蛋白印迹法检测Wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白表达.结果与结论:采用人白细胞介素1β可诱导软骨细胞退变,软骨细胞退变早期均有Wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白表达,但随着时间推移Wnt4、β-连环蛋白表达下降,而糖原合成酶3β表达增高,采用透骨消痛颗粒醇提物干预后均可逆转上述现象.说明透骨消痛颗粒醇提物能诱导软骨细胞转录合成.-连环蛋白和Wnt4 蛋白,并抑制糖原合成酶3β表达.     

透骨消痛颗粒对关节软骨细胞wnt/β-连环蛋白信号通路的调控

背景：由巴戟天、杭白芍、肿节风和川芎等组成的透骨消痛颗粒能有效延缓关节宏观形态、软骨基质及软骨细胞退变。目的：观察透骨消痛颗粒对软骨细胞wnt/β-连环蛋白信号通路中Wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白的影响。方法：将SD大鼠关节软骨细胞分离培养成功后,人白细胞介素1β诱导软骨细胞退变,取第2代退变软骨细胞,随机分为对照组和透骨消痛颗粒组,后者加入透骨消痛颗粒醇提物,分别培养4,8d后,采用RT-PCR检测2组Wnt4、糖原合成酶3β、β-连环蛋白mRNA表达,采用蛋白印迹法检测Wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白表达。结果与结论：采用人白细胞介素1β可诱导软骨细胞退变,软骨细胞退变早期均有Wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白表达,但随着时间推移Wnt4、β-连环蛋白表达下降,而糖原合成酶3β表达增高,采用透骨消痛颗粒醇提物干预后均可逆转上述现象。说明透骨消痛颗粒醇提物能诱导软骨细胞转录合成β-连环蛋白和Wnt4蛋白,并抑制糖原合成酶3β表达。     

构建大鼠牙胚肾被膜下培养模型及其牙胚组织混合后的成牙能力

目的:通过取孕16d的大鼠牙胚,植入同种异体大鼠肾被膜下,建立牙胚发育、形成的研究模型,人为干预发育中的牙胚,对比、观察该干预对牙胚发育、成牙能力的影响。方法:实验2004-04/08在解放军第四军医大学口腔组织工程中心实验室进行。①牙胚的获取:取孕16d的SD胎鼠的下颌第一磨牙牙胚,随机取分离的磨牙胚4个样本,行常规组织学切片以确定牙胚发育期。其余牙胚分两组:正常组和混合组。混合组将组织剪成4小块,随意混合后组成一个混合牙胚,分别加入DMEM培养液置37℃孵箱中备用。②肾被膜下牙胚植入:取成年雄性SD大鼠10只,采用随机数字表法随机分为正常组和混合组,每组5只,于两组大鼠的肾被膜下分别植入上述两组牙胚。③8周时取植入物,常规进行大体及牙胚植入前、后组织学观察。结果:10只大鼠进入结果分析。①两组大鼠牙胚植入后大体观察:牙胚植入肾被膜下后可继续发育,8周时正常组形成类似于正常天然牙齿样的形态和组织结构,混合组则形成不完整的类牙样结构。②牙胚植入前及植入后组织学观察:植入前牙胚处于帽状发育期;植入后正常组形成类似于天然牙有序排列的组织结构;而混合组形成类牙样结构,与正常组有一定差别。结论:以肾被膜下为大鼠牙胚培养环境,成功建立了牙胚继续发育、牙齿形成的研究模型。该模型便于牙齿发育形成过程中人为干预的实施和观察。人为干扰后,牙胚能继续发育,形成类牙样结构。     

全反式维甲酸对人卵巢癌细胞株COC2中β-连环蛋白表达的影响

目的检测全反式维甲酸(ATRA)干预前后人卵巢上皮性癌细胞株COC2中β-连环蛋白(β-catenin)的表达情况,探讨ATRA对卵巢上皮性癌细胞β-catenin的作用。方法利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹(Westernblot)检测经1、5、10μmol/LATRA干预前后COC2细胞株中β-cateninmRNA及蛋白的表达水平。结果 (1)ATRA干预COC2细胞后影响细胞增殖,10μmol/LATRA组未见细胞增殖,并见少量细胞碎片。(2)β-catenin mRNA及蛋白的表达水平均有降低,并呈现ATRA浓度依赖性。结论 ATRA作用于卵巢上皮性癌细胞株COC2后可降低细胞中β-catenin的表达,进而抑制细胞增殖,达到抗卵巢上皮性癌的作用。     

免疫荧光动态监测急性早幼粒细胞白血病患者PML-RARα融合蛋白变化

背景：实时定量RT-PCR只能间接地反映融合基因表达量的变化,并不能在细胞原位直观反映急性早幼粒细胞白血病患者细胞内PML-RARα融合蛋白在全反式维甲酸治疗前后的相对表达量。目的：探讨免疫荧光技术检测融合蛋白PML-RARα表达的动态变化在判断急性早幼粒细胞白血病的全反式维甲酸早期治疗的效果。方法：应用免疫荧光技术检测全反式维甲酸干预的急性早幼粒细胞白血病经典细胞株NB4细胞或来源于急性早幼粒细胞白血病患者的NB4细胞PML-RARα蛋白的表达,以实时定量RT-PCR检测细胞PML-RARα mRNA的表达作为对照,以评价免疫荧光技术的可靠性。结果与结论：免疫荧光染色显示,无论是体外培养的NB4细胞,还是患者骨髓内的NB4细胞,在全反式维甲酸干预前细胞内均可见大量红色的融合蛋白PML-RARα,大小不均一、形状不规则,全反式维甲酸干预后,NB4细胞内红色的融合蛋白PML-RARα形状逐渐规则,弥散状态变为散在分布,且随着全反式维甲酸干预时间的延长,原有的弥散状态逐渐消失。实时定量RT-PCR测得的PML-RARα mRNA的变化趋势与免疫荧光相一致。说明免疫荧光技术检测PML-RARα能够更为直观地判断全反式维甲酸的治疗效果。     

川续断干预正畸力作用下兔牙周组织中血小板衍生生长因子BB的表达

背景：有研究发现一些中草药在骨折愈合过程中可从不同途径加速骨组织的改建,促进骨折愈合。目的：观察中药川续断水煎液对家兔正畸牙移动及牙移动过程中血小板衍生生长因子BB表达的影响。方法：将27只家兔随机分为实验组（n=12）、对照组（n=12）和空白对照组（n=3,不做任何处置）。实验组与对照组建立双侧下颌第一磨牙近中移动正畸加力模型后,实验组每日灌服3g/kg川续断水煎液,对照组每日灌服等量生理盐水,加力后1,7,14,21d在测量牙齿移动距离后行血小板衍生生长因子BB免疫组织化学分析。结果与结论：加力后7,14,21d,实验组牙移动距离大于对照组（P〈0.05）。正畸加力后,随天数增加实验组与对照组血小板衍生生长因子BB的表达均呈逐渐增强趋势,实验组加力后7,14,21d血小板衍生生长因子BB水平高于对照组（P〈0.05）。提示川续断水煎液可促进家兔正畸牙齿移动,并上调血小板衍生生长因子BB的表达。     

全反式维甲酸诱导急性早幼粒细胞白血病细胞分化为树突状细胞的实验研究

全反式维甲酸（ATRA）诱导APL细胞分化为成熟树突状细胞（dendritic cell，DC），目前国内外鲜见报道。本研究探讨全反式维甲酸与经典细胞因子共同作用诱导急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞分化为DC的可能性，为研制APL-DC疫苗提供新的方法。对初治APL患者骨髓单个核细胞及HL-60细胞株分别在完全培养液中培养，用经典细胞因子组合（GM—CSF、IL-4、TNF-α）共处理，ATRA只在实验组加用。观测细胞形态，检测DC免疫表型，测定上清液IL-12水平，观察MLR反应及CTL效应。结果表明：实验组所得细胞有较明显树突状突起，有APL遗传学特征，其CD1a、CD83、CD80、CD86、HLA—DR和CD1d表达及IL-12分泌水平明显增高，并具有明显的MLR反应及CTL效应，但在HL60-DC中，CD1a增加无统计学差异。结论：利用ATRA可以成功诱导APL细胞为成熟功能性DC，其介导的MLR及CTL效应明显。经ATRA组合诱导的树突状细胞CD1d表达明显增高，推测可能参与NKT细胞激活，具体机制需进一步研究。     

葛根素干预激素诱导骨髓间充质干细胞成脂分化的Wnt信号途径

背景：国内外学者研究证明,激素性股骨头缺血性坏死的发病机制与体内脂质代谢紊乱,尤其是大剂量激素诱导下骨髓间充质干细胞的成脂分化有关。目前葛根素抑制激素诱导骨髓间充质干细胞成脂分化的Wnt信号转导途径还未经证实。〈br〉 目的：观察葛根素干预激素诱导大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化过程中 Wnt 信号途径相关基因及关键蛋白β-catenin表达的变化。〈br〉 方法：第3代SD大鼠骨髓间充质干细胞随机分为空白组、激素组、葛根素低、中、高剂量组,5组干预6 d后RT-PCR法检测Wnt/β-catenin信号通路主要成员Wnt10b mRNA、GSK3β mRNA、β-catenin mRNA的表达,Western blot法对β-catenin蛋白的表达进行检测分析。〈br〉 结果与结论：与激素组比较,葛根素各干预组Wnt10b mRNA、β-catenin mRNA及β-catenin蛋白的表达水平均显著升高;GSK3βmRNA的表达水平显著降低。提示葛根素对激素诱导骨髓间充质干细胞成脂分化的抑制作用可能是通过调节信号通路的Wnt10b mRNA、GSK3βmRNA、β-catenin mRNA及β-catenin蛋白的表达来实现的。葛根素防治激素性股骨头缺血坏死的机制不仅是改善股骨头局部的微循环,同时还与其抑制激素诱导下骨髓间充质干细胞的成脂分化有关。     

小鼠囊胚细胞凋亡和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达与维甲酸的诱导作用

背景：细胞凋亡是维甲酸导致早期胚胎异常发育的原因之一,而半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3介导的细胞凋亡是细胞凋亡的主要途径。目的：观察维甲酸对体外培养小鼠囊胚细胞凋亡的影响,以及对囊胚细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的改变。方法：获取妊娠3.5d小鼠囊胚,分别在含0,1和10μmol/L维甲酸的M199培养基中培养24h,用带有荧光标记的原位末端标记法观察维甲酸对小鼠囊胚细胞凋亡的效应;并用免疫组织化学S-P法检测维甲酸对小鼠囊胚半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达。结果与结论：所有组均观察到囊胚细胞凋亡和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达,高剂量维甲酸组中囊胚细胞凋亡荧光值,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的平均吸光度值和阳性面积率均显著升高（P〈0.01）。结果提示维甲酸可促进体外培养小鼠囊胚细胞凋亡和及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达,证实了维甲酸对小鼠胚胎的发育的细胞毒性作用。