山竹醇介导JAK2/STAT3信号通路发挥抗骨肉瘤作用

目的 探究山竹醇对骨肉瘤细胞活力、细胞周期分布和凋亡的影响及对裸鼠皮下骨肉瘤生长的影响并探究其作用机制。方法 采用CCK-8实验检测山竹醇对骨肉瘤细胞活力的影响;流式细胞术分析山竹醇对骨肉瘤细胞凋亡率及细胞周期分布的影响;构建裸鼠皮下骨肉瘤模型,检测山竹醇腹腔注射对裸鼠皮下骨肉瘤生长的影响;RNA测序分析检测山竹醇处理骨肉瘤细胞后改变的基因;Western blot法检测山竹醇对骨肉瘤细胞及肿瘤组织中JAK2/STAT3信号通路的影响。结果 CCK-8法检测结果表明,山竹醇能时间、浓度依耐性的抑制骨肉瘤U2OS细胞活力;流式细胞术检测结果表明,山竹醇能诱导U2OS细胞凋亡,并导致细胞周期阻滞于S期。并且,山竹醇能抑制裸鼠皮下骨肉瘤的生长。基因富集分析结果表明,山竹醇处理的骨肉瘤细胞中JAK/STAT信号通路显著富集。Western blot法检测结果表明,山竹醇处理骨肉瘤细胞及骨肉瘤组织中p-JAK2、p-STAT3、Bcl-xl水平明显降低,而Bax表达水平显著升高。结论 山竹醇能可在体内体外发挥抗骨肉瘤作用,可能与其抑制骨肉瘤中JAK2/STAT3信号通路活性有关。     

细胞周期调控和骨肉瘤的发生发展

骨肉瘤是一类细胞周期性疾病,其发生发展与细胞周期有关。细胞周期的正常运行依赖于许多调节因子,如细胞周期素依赖激酶(CDKs)、细胞周期素(cyclins)、细胞周期素依赖激酶抑制蛋白(CKIs)等的相互作用,通过各调节因子保持动态平衡来保证细胞周期的正常循环,若其中任一类调节因子过多或过少,非正常激活、灭活等都将破坏细胞周期的正常进行,从而异常细胞可逃离正常监测,形成独立的细胞周期,发生骨肉瘤。     

细胞周期调控和骨肉瘤的发生发展

骨肉瘤是一类细胞周期性疾病,其发生发展与细胞周期有关。细胞周期的正常运行依赖于许多调节因子,如细胞周期素依赖激酶（CDKs）、细胞周期素（cyclins)、细胞周期素依赖激酶抑制蛋白（CKIs）等的相互作用,通过各调节因子保持动态平衡来保证细胞周期的正常循环,若其中任何一类调节因子过多或过少,非正常激活、灭活等都将破坏细胞周期的正常进行,从而异常细胞可逃离正常监测,形成独立的细胞周期,发生骨肉瘤。     

虫草素对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响及其机制研究

目的 研究虫草素对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响及其机制。方法 采用CCK-8实验检测不同浓度虫草素作用于MG-63骨肉瘤细胞24h和48h后对癌细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞术分析虫草素对MG-63细胞周期分布及凋亡的影响;采用Western blot法检测虫草素对MG-63细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及NICD1、Hes1蛋白表达的影响。结果 虫草素对人骨肉瘤MG-63细胞有明显的增殖抑制作用,导致MG-63细胞周期阻滞于G₀/G₁期并诱导细胞凋亡;虫草素可上调Bax、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3蛋白的表达并下调Bcl-2,NICD1和Hes1蛋白的表达。结论 虫草素通过抑制骨肉瘤细胞增殖,诱导细胞周期阻滞于G₀/G₁期并通过线粒体凋亡途径诱导MG-63细胞凋亡从而发挥抗骨肉瘤作用,可能骨肉瘤细胞中Notch信号通路活性下调有关。     

沉默piRNA-651抑制骨肉瘤细胞系U20S增殖和转移的影响

目的 研究非编码小RNA piRNA-651对骨肉瘤U20S细胞增殖、侵袭与转移的影响.方法 通过RNA干扰技术沉默U20S细胞中的piRNA-651,并应用实时定量PCR（qRT-PCR）检测骨肉瘤U20S细胞中piRNA-651的表达情况;流式细胞术检测细胞周期的变化,MTT实验检测沉默piRNA-651表达对细胞增殖的影响,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化,细胞划痕实验检测细胞转移能力的变化.结果 piRNA-651-siRNA可有效沉默piRNA-651在骨肉瘤细胞U20S的表达,敲低U20S细胞中piRNA-651的表达可以明显阻滞骨肉瘤细胞的细胞周期,抑制骨肉瘤细胞的增殖、侵袭与转移能力.结论 piRNA-651在骨肉瘤的发生发展及侵袭转移中发挥着重要作用.     

咖啡因在骨肉瘤顺铂化疗中增效作用的实验研究

目的探讨咖啡因在骨肉瘤细胞株(OS-732)顺铂化疗中的增效作用.方法骨肉瘤细胞株分别经咖啡因、顺铂、咖啡因 顺铂作用72h,采用MTT法体外细胞毒性试验观察三者的细胞毒性;应用流式细胞仪分析咖啡因、顺铂及两者配伍对骨肉瘤细胞株细胞周期的影响.结果骨肉瘤细胞株与浓度分别为0.2、2.0、5.0、10.0、20.0mmol/L的咖啡因作用时,细胞毒性指数(CI)分别为12.50%、27.88%、30.77%、56.73%、84.62%;与浓度为0.1、1.0、10.0、100.0μg/ml的顺铂作用时,CI分别为24.04%、54.80%、65.38%、88.46%;而与低浓度咖啡因与顺铂联合作用,其CI明显增加,随着各自浓度的升高,CI明显增加.流式细胞仪分析显示咖啡因对细胞周期也有明显的影响,使G0与G1期细胞比例明显增加,G2与M期细胞比例明显减少,S期细胞比例无明显改变.结论咖啡因在骨肉瘤细胞株顺铂化疗中有显著的增效作用,并能改变骨肉瘤细胞的细胞周期.     

髓锌指基因1对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的研究葡萄糖-6- 磷酸脱氢酶（G6PD）和髓锌指基因1（MZF -1）在骨肉瘤中的作用及其可能的作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测MZF -1 和G6PD在骨肉瘤细胞中的表达;MTT 法检测过表达MZF -1 对骨肉瘤细胞增殖的影响;流式细胞仪检测过表达MZF -1 对骨肉瘤细胞凋亡及细胞周期的影响;荧光素酶报告基因分析法验证MZF-1 与G6PD启动子区的相互作用关系。结果在骨肉瘤细胞中, MZF -1 的表达下降,G6PD表达上升。过表达MZF -1可抑制骨肉瘤细胞增殖,促进细胞凋亡,并且将细胞周期阻滞于G0/G1期。荧光素酶报告基因分析结果表明, MZF -1可靶向结合到G6PD 的启动子区域并负向调控G6PD 的表达。结论MZF -1 可通过负向调节G6PD的表达,在骨肉瘤的发生、发展过程中发挥抑癌的作用,为骨肉瘤治疗提供新的思路。     

CDK4在骨肉瘤中的研究进展

骨肉瘤是未成年人常见的原发性高度恶性骨肿瘤,转移性或复发性患者5年生存率仅为20％.因此,需要研究其转移和复发机制,制订新的治疗方案.细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,参与了细胞周期和转录活性的调节.染色体变异、DNA甲基化、非编码RNA及细胞因子和激素的改变促进了CDK4在骨肉瘤中的表达,并参与了骨肉瘤的发生和发展.利用CDK4在骨肉瘤中特异性表达可有助于临床诊断和分型.该文对骨肉瘤中CDK4作用机制及临床意义的研究进展进行了综述.     

人骨肉瘤细胞系OS-9901的建立及其生物学特性

目的：建立人骨肉瘤细胞系,为骨肉瘤研究提供新的实验模型。方法：取经病理证实的新鲜骨肉瘤手术标本,进行体外原代组织块培养。对存活细胞进行形态学观察、组织化学梁 色、细胞周期检查、核型分析、电镝观察和异种移植等。结果：建成细胞系ＯＳ－９９１０,其形态学表现、组化染色、电镜观察和异种移植等均符合骨肉瘤细胞特征。经半年多体外培养,已连续传代７０余次,细胞倍增时间为３３h,细胞周期测定：Ｇ１期６０．２％、Ｔ     

高良姜素对人骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响及其机制的研究

目的观察高良姜素对人骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响并探讨其机制。方法体外培养人骨肉瘤MG-63细胞株,给予不同浓度的高良姜素处理24h,MTT法测定细胞活力,流式细胞仪分析细胞周期,Annexin V-FITC/PI双标记法测定细胞凋亡,Western blot分析Caspase-3、Cytochrome C及Bcl-2蛋白表达。结果高良姜素可导致人骨肉瘤MG-63细胞发生凋亡并抑制其增殖,其作用具有浓度依赖性,在80mM最为显著;同时可改变细胞周期分布。与对照组相比,80mM高良姜素处理24h后MG-63细胞活力降低、凋亡率增加（P〈0.01）;G0/G1期百分比增高,S＋G2＋M期百分比降低（P〈0.01）;Caspase-3、Cytochrome C表达增加,Bcl-2表达降低（P〈0.01）。结论高良姜素可诱导人骨肉瘤MG-63细胞发生凋亡、抑制其增殖,并改变细胞周期分布,其作用与线粒体途径相关。     

TRIM11对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

目的探讨TRIM11对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响及其可能的调节机制。方法采用Real-time PCR和Western blot法检测骨肉瘤细胞及正常成骨细胞TRIM11基因和蛋白的表达;采用GEO数据库分析TRIM11基因表达与骨肉瘤预后不良的关系;构建TRIM11基因干扰慢病毒载体的骨肉瘤细胞株Saos-2,采用CCK8法和流式细胞仪检测TRIM11-SiRNA骨肉瘤细胞株Saos-2的增殖活性和调亡情况;采用基因富集分析法检测数据库中的骨肉瘤表达谱芯片。结果与正常成骨细胞比较,TRIM11基因与蛋白在骨肉瘤细胞中表达明显上调,且TRIM11的表达与骨肉瘤预后不良呈正相关(均P<0.05);与正常骨肉瘤细胞相比,TRIM11-SiRNA骨肉瘤细胞株增殖能力显著下降,且细胞凋亡明显增多(均P<0.05)。基因富集分析表明骨肉瘤中TRIM11基因的高表达与Cell cycle和MAPK信号通路的激活相关。结论 TRIM11可以促进骨肉瘤的增殖,延长细胞周期,其机制可能与Cell cycle和MAPK信号通路的激活有关。     

硒酸酯多糖诱导人骨肉瘤细胞凋亡作用的有效成分

目的 探讨硒酸酯多糖诱导骨肉瘤细胞凋亡作用的有效成分。方法 MTT法检测细胞活力，荧光显微镜观察凋亡细胞形态，流式细胞仪分析凋亡峰及细胞周期，比较硒酸酯多糖和卡拉胶对骨肉瘤细胞的不同作用。结果 硒酸酯多糖组抑瘤率、癌细胞凋亡率明显强于卡拉胶组，且两者对细胞周期的调控不同。结论 硒酸酯多糖可诱导人骨肉瘤细胞凋亡，且主要是硒作用的结果。     

浅蓝菌素阻遏骨肉瘤细胞增殖及诱导凋亡的实验研究

目的探讨脂肪酸合酶（FAS）抑制剂浅蓝菌素能否阻遏人骨肉瘤细胞增殖与诱发凋亡。方法采用人骨肉瘤细胞系U2-OS,在体外实验中应用噻唑蓝法（MTT法）观察浅蓝菌素对人骨肉瘤细胞U2-OS生长的抑制作用,并通过流式细胞仪对细胞凋亡和细胞周期变化进行检测。结果U2-OS细胞在浅蓝菌素作用下,细胞增殖被阻遏,并呈现剂量效应关系,2.5、5.0、10.0和20.0mg/L浅蓝菌素作用24h的抑制率分别为（18.58&#177;2.49）%、（35.11&#177;3.49）%、（56.60&#177;3.53）%和（79.69&#177;2.83）%,与对照组比较有显著性差异（P〈0.05）。流式细胞仪显示浅蓝菌素可诱发骨肉瘤细胞发生凋亡并且此作用呈剂量、时间依赖趋势;细胞周期分析浅蓝菌素能阻滞肿瘤细胞从S期进入G2/M期,并诱导其细胞凋亡。结论浅蓝菌素抑制FAS可阻遏骨肉瘤细胞增殖,其机制可能是诱导细胞发生S期阻滞和细胞凋亡。     

分化抑制因子Id1对骨肉瘤细胞增殖的影响

目的探讨分化抑制因子Id1对骨肉瘤细胞增殖的影响及可能的途径。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Id1表达调节后MG-63细胞增殖变化情况;采用流式细胞术检测Id1下调表达后,MG-63细胞凋亡及细胞周期变化情况;Western blotting技术检测Id1下调表达后对p-AKT水平的影响。结果本实验利用RNA干扰技术下调骨肉瘤细胞系Id1表达后,可以明显抑制MG-63细胞的增殖,p-AKT的水平也显示下降,流式细胞术证明下调后Id1的水平可以一定程度地调节细胞凋亡水平,而对细胞周期无明显影响,另外进一步构建了Id1的真核表达质粒,转染Id1过表达质粒后,并未见骨肉瘤细胞明显地增殖加速。结论分化抑制因子Id1可能通过影响AKT信号通路进而影响了骨肉瘤细胞的增殖。     

蜂毒素对骨肉瘤细胞系细胞增殖的影响

为了解蜂毒素对骨肉瘤细胞生长、增殖的作用。以骨肉瘤U2OS细胞体外培养，采用台盘蓝排染法观察蜂毒素对细胞生长的影响，MTT法测定细胞增殖抑制率，流式细胞仪检测细胞周期和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果：蜂毒素可明显抑制U2OS细胞生长、增殖，下调PCNA的表达，对细胞周期的影响表现为S期细胞的阻滞。提示蜂毒素具有抑制骨肉瘤U2OS细胞株生长、增殖的作用。     

大蒜素联合多西他赛对人骨肉瘤细胞MG-63增殖抑制作用的研究

目的观察大蒜素和多西他赛(DXT)单用及联合应用对人骨肉瘤细胞株MG-63增殖抑制作用。方法采用MTT法检测细胞毒性作用。倒置相差显微镜观察细胞形态改变,流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响,并检测凋亡率。结果大蒜素和DXT单用及联合用药,在一定浓度范围内均对骨肉瘤细胞MG-63有增殖抑制作用和诱导凋亡作用,其作用与剂量呈正相关。联合用药组作用明显强于单独用药组(P<0.05)。大蒜素和DXT单独及联合作用于人骨肉瘤细胞株MG-63,与细胞生长分裂关系较密切的G2/M期占细胞周期的比例有明显升高,且联合用药的升高作用更明显(P<0.01)。结论大蒜素和DXT均可将骨肉瘤细胞株阻滞于G2/M期,两药联合可能具有协同抗肿瘤作用。     

穗花杉双黄酮对骨肉瘤细胞增殖及周期相关蛋白的影响

目的:研究穗花杉双黄酮(AF)对骨肉瘤细胞增殖的作用及其分子机制.方法:CCK-8法筛选AF抑制骨肉瘤细胞增殖的有效浓度,细胞周期流式法检测AF对骨肉瘤细胞G1期和S期分布的影响,免疫荧光法、荧光定量PCR法和Western blot法检测AF对骨肉瘤细胞增殖相关基因及蛋白表达的影响.结果:AF在浓度为75μmol/L...     

浅蓝菌素阻遏骨肉瘤细胞增及诱导凋亡的实验研究

目的 探讨脂肪酸合酶(FAS)抑制剂浅蓝菌素能否阻遏人骨肉瘤细胞增殖与诱发凋亡.方法 采用人骨肉瘤细胞系U2-OS,在体外实验中应用噻唑蓝法(MTT法)观察浅蓝菌素对人骨肉瘤细胞U2-OS生长的抑制作用,并通过流式细胞仪对细胞凋亡和细胞周期变化进行检测.结果 U2-OS细胞在浅蓝菌素作用下,细胞增殖被阻遏,并呈现剂量效应关系,2.5、5.0、10.0和20.0 mg/L浅蓝菌素作用24 h的抑制率分别为(18.58±2.49)%、(35.11±3.49)%、(56.60±3.53)%和(79.69±2.83)%,与对照组比较有显著性差异(P<0.05).流式细胞仪显示浅蓝菌素可诱发骨肉瘤细胞发生凋亡并且此作用呈剂量、时间依赖趋势;细胞周期分析浅蓝菌素能阻滞肿瘤细胞从S期进入G2/M期,并诱导其细胞凋亡.结论 浅蓝菌素抑制FAS可阻遏骨肉瘤细胞增殖,其机制可能是诱导细胞发生S期阻滞和细胞凋亡.     

薯蓣皂苷元对人骨肉瘤U-20S细胞增殖和周期的影响

目的 探讨薯蓣皂苷元对人骨肉瘤U-20S细胞的作用机制. 方法 采用四氮唑盐还原法观察薯蓣皂苷元对U-20S细胞体外生长的作用,流式细胞技术检测细胞周期DNA分布. 结果 薯蓣皂苷元对U-20S细胞的生长具有明显抑制作用,半抑制率为87μmoL/L;用药后细胞周期阻滞于G1期. 结论 著蓣皂苷元能使U-20S细胞阻滞于G1期,明显抑制U-20S细胞生长,对骨肉瘤的治疗有一定价值.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素（TSA）对骨肉瘤MG-63的诱导凋亡作用及其机制研究

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACIs）曲古抑菌素（TSA）对骨肉瘤细胞株MG-63的杀伤作用及机制。方法以不同浓度的TSA作用于体外培养的骨肉瘤细胞,采用MTF法检测细胞生长抑制率;以流式细胞技术（FCM）测不同浓度TSA作用前后骨肉瘤细胞周期变化情况;免疫细胞化学技术观察对Survivin基因和血管内皮生长因子（VEGF）的表达水平;RT—PCR分析TSA作用前后骨肉瘤细胞内P21^waf1/cip1mRNA的表达变化。结果TSA在纳摩尔浓度即可抑制细胞增殖;FCM检测到细胞周期发生改变,GJM期细胞较对照组增多。免疫组化结果表明,该药能明显抑制Survivin和VEGF蛋白的表达,RT—PCR结果表示TSA能显著诱导P21waf1／cip1 mRNA表达。上述结果都有明显的量一效关系。结论TSA作用于G州期并有效诱导体外培养的骨肉瘤细胞凋亡,其诱导凋亡机制之一可能是通过抑制Survivin和VEGF基因的表达并且上调P21蛋白水平实现的。