阿司匹林抗高糖诱导内皮细胞衰老过程中对一氧化氮-一氧化氮合酶系统的影响

目的 探讨阿司匹林是否通过影响一氧化氮（NO）-一氧化氮合酶（NOS）系统发挥抗高糖诱导的内皮细胞衰老的作用. 方法 人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）分别于正常糖浓度培养液（5.5 mmol/L）、高糖培养液（33 mmol/L）、含阿司匹林（0.01～1mmol/L）培养液及含L-NAME（300 μmol/L）培养液中培养48 h.采用β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色鉴定衰老细胞,流式细胞仪检测细胞内活性氧簇（ROS）水平.Griess法检测细胞总NO水平,荧光酶标仪检测细胞内NOS活性.Westernblot分析eNOS蛋白及eNOS人丝氨酸（Ser-1177）蛋白表达. 结果 高糖作用内皮细胞48 h后与正常糖浓度相比,SA-β-gal阳性细胞数明显增多.阿司匹林剂量依赖性地减少SA-β-gal阳性细胞数,降低ROS的水平,升高NO的水平、总NOS活性和eNOS Ser-1177蛋白表达（P＜0.05）.L-NAME（NOS的抑制剂）能完全抑制高糖环境下阿司匹林的上述作用（P＜0.05）.各组间eNOS总蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）. 结论 高糖环境下阿司匹林通过提高细胞NOS活性而升高NO水平,降低氧化应激反应而发挥抗衰老作用.     

高糖诱导人脐静脉内皮细胞衰老

使用正常糖浓度培养液和高糖培养液处理人脐静脉血管内皮细胞48h后,观察细胞形态,β－半乳糖苷酶染色鉴定衰老细胞,PCR—ELISA法检测端粒酶的活性,流式细胞仪检测细胞周期和细胞内活性氧水平。结果发现,与正常糖浓度处理的内皮细胞比较,不同浓度高糖培养液作用48h后的内皮细胞β－半乳糖苷酶染色阳性细胞明显增多,细胞周期多停滞于G0／G1期,S期显著减少,端粒酶活性明显下降,细胞内活性氧水平明显升高（P〈0．05或P〈0．01）。认为高糖环境可加速内皮细胞衰老进程,其作用机制可能与氧化应激有关。     

虫草提取物对高糖诱导的脐静脉内皮细胞损伤模型的保护作用

目的研究虫草提取物对人脐静脉内皮细胞损伤模型的影响,探讨其保护内皮功能的机制。方法原代培养人脐静脉内皮细胞,高糖(40mmol/L)孵育,建立细胞损伤模型。实验分组:空白组、高糖组、冬虫夏草组、蛹虫草组。MTT法检测细胞增殖;SA-β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法检测SA-β-gal染色阳性率;流式细胞术测定细胞周期及细胞内活性氧;实时荧光定量PCR检测衰老相关的p16、p21、沉默信息调节因子1(SIRT1)、Bcl-2mRNA表达水平。结果与空白组比较,高糖组细胞增殖明显下降,细胞内活性氧增加(P<0.05)。与高糖组比较,蛹虫草组及冬虫夏草组细胞增殖增加,S期细胞明显增多,SIRT1mRNA水平显著升高,细胞内活性氧和p21mRNA水平均显著降低(P<0.05)。结论虫草提取物对损伤内皮具有保护作用,其机制可能与促进SIRT1mRNA表达,减轻细胞氧化应激损伤,抑制p21mRNA表达,促进内皮细胞生长增殖有关。     

阿司匹林抗高糖诱导的内皮细胞衰老的作用

目的 探讨阿司匹林是否具有抗高糖诱导的内皮细胞衰老的作用及其机制。方法 人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分别于正常糖浓度培养液 （5.5 mmol/L）、高糖培养液和高糖（33 mmol/L）＋阿司匹林（0.01、0.1、1及3 mmol/L）培养液中培养48 h,观察细胞形态、采用β-半乳糖苷酶染色鉴定衰老细胞,PCR-ELISA检测端粒酶活性,流式细胞仪检测细胞周期和细胞内活性氧水平。结果 高糖培养液作用HUVEC 48 h后,细胞呈现衰老状态,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数明显增加,端粒酶活性明显减低,细胞周期停滞于G0/G1期,S期显著减少,细胞内活性氧水平显著增加。0.01、0.1和1 mmol/L阿司匹林作用后细胞形态改善,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数显著减少,端粒酶活性增强,S期细胞显著增加,细胞内活性氧水平降低（P<0.05）。而3 mmol/L阿司匹林作用后与高糖组相比差异无显著性。结论 高糖环境下阿司匹林（0.01、0.1和1 mmol/L）具有抗内皮细胞衰老的作用,其作用机制可能与氧化应激有关。     

阿司匹林抗高糖诱导的内皮细胞衰老过程中对DDAH-ADMA系统及Caveolin-1蛋白的影响

目的观察阿司匹对高糖诱导的内皮细胞衰老模型二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH)-非对称性二甲基精氨酸(ADMA)系统和Caveolin-1蛋白表达的影响,探讨阿司匹林抗高糖诱导内皮细胞衰老的机制。方法人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分别培养于正常糖浓度培养液(5.5 mmol/L)、高糖培养液(33 mmol/L)、高糖+阿司匹林(0.01~1 mmol/L)培养液以及含L-NAME(300μmol/L)培养液,48 h后采用β-半乳糖苷酶(β-gal)染色鉴定衰老细胞,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平,Western blot分析Caveolin-1蛋白表达,液质联用仪检测细胞上清液中ADMA的含量并计算DDAH的活性。结果高糖作用内皮细胞48 h后,细胞β-gal染色阳性细胞数明显增多,ROS、ADMA水平以及Caveolin-1蛋白表达升高,DDAH活性降低。0.01~1 mmol/L阿司匹林剂量依赖性地降低β-gal染色阳性细胞数、ROS和ADMA水平以及Caveolin-1蛋白表达,同时升高细胞DDAH活性(P均0.05)。L-NAME(NOS的抑制剂)能完全抑制阿司匹林的上述作用(P0.05)。结论高糖环境下阿司匹林(0.01~1mmol/L)能抑制Caveolin-1表达,改善DDAH-ADMA系统的活性而进一步发挥抗氧化损伤、抗细胞衰老的作用。     

二甲双胍对波动性高糖诱导的内皮细胞功能障碍的逆转作用及其机制

目的探讨二甲双胍对波动性高糖诱导的内皮细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法以体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）作为研究对象,分为6组：正常葡萄糖对照组、高渗对照组、持续性高糖组、波动J生高糖组、波动性高糖＋二甲双胍组以及波动性高糖＋二甲双胍＋化合物C组,各组均干预72h。以硝酸还原酶法检测细胞上清液亚硝酸盐浓度代表一氧化氮（NO）产生水平;流式细胞仪分析测定细胞内活性氧簇（ROS）水平;Westernblotting检测单磷酸腺苷激活蛋白激酶（AMPK）、磷酸化AMPK（Thr-172,p-AMPK）及三磷酸鸟苷环化水解酶1（GTPCH1）的蛋白表达水平。组间比较采用单因素方差分析和Q检验。结果（1）与正常葡萄糖对照组（100％）相比,波动性高糖组细胞内ROS水平增加[（222．4±62．0）％],NO水平下降[（70．3±7．1）％];添加二甲双胍后ROS水平降低[（100．2±17．4）％],NO水平升高[（96．3±9．2）％];添加AMPK抑制剂化合物c后ROS水平增加[（167．2±19．6）％],NO水平降低[（83．3±8．7）％]。差异均有统计学意义（均P〈0．05）。（2）与正常葡萄糖对照组相比,波动性高糖组p-AMPK[（1．72±0．08）比（2．34±0．09）]和GTPCH1[（4．07±0．17）比（7．83±0．56）]表达水平降低;添加二甲双胍后p-AMPK（2．72±0．22）和GTPCH1（10．24±1．05）表达水平增高;添加化合物C后GTPCH1表达水平降低（2．39±0．34）。差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论二甲双胍可通过激活AMPK信号通路,上调GTPCH1表达,从而改善波动性高糖所致的内皮细胞功能障碍。     

胰升血糖素样肽-1改善波动性高糖诱导大鼠胰岛细胞增殖功能机制的研究

目的 研究胰升血糖素样肽-1 （GLP-1）对波动性高糖诱导大鼠胰岛细胞增殖功能的影响及机制. 方法 将获取的原代胰岛细胞分为5组,即正常葡萄糖（5.5 mmol/L）组、恒定高糖（30.0 mmol/L）组、波动高糖（每24 h轮换培养于5.5、30.0 mmol/L）组、恒定高糖＋GLP-1 （100 nmol/L）组和波动高糖＋GLP-1组.干预7d后检测细胞增殖活性、活性氧簇（ROS）、细胞周期及周期蛋白cyclinD1、p21、p27、Skp2的表达. 结果 GLP-1干预可降低波动性高糖诱导的细胞内ROS水平[（194.40±19.20）vs（406.78±18.40）,P＜0.05],上调促细胞周期cyclinD1、Skp2表达,下调周期抑制蛋白p21、p27表达,使停滞在G0/G1期的细胞比例减少,改善细胞增殖活性[（1.38±0.09）vs（0.44±0.10）,P＜0.05]. 结论 GLP-1可通过降低氧化应激水平及对不同细胞周期蛋白表达的调节改善波动性高糖抑制的胰岛细胞增殖活性.     

波动性葡萄糖对胰岛β细胞INS-1的影响

目的 探讨波动性葡萄糖对培养的胰岛β细胞株INS-1细胞的损伤机制.方法 实验分5组.对照组:葡萄糖浓度为5.5 mmol/L;持续高糖组:葡萄糖浓度为16.7 mmol/L;波动性高糖组:16.7mmo/L葡萄糖培养2 h后更换葡萄糖浓度为5.5 mmo/L,继续培养3 h,每天重复3次,夜间9 h维持在5.5 mmo/L匍萄糖的培养基中;N-乙酰半胱氨酸(NAC,1.0 mmo/L)+高糖组;NAC+波动性高糖组.流式细胞仪检测活性氧簇(ROS)的水平;四氮唑蓝定量检测细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)的活性;同时检测还原型辅酶Ⅱ(NADPH)的含量.结果 干预72 h后,对照组、高糖组、波动性高糖组、NAC+高糖组和NAC+波动性高糖组细胞的ROS活性分别为37.77±2.31、86.97±7.97、124.27±10.04、60.92±2.61和51.47±3.36;G6PD活性分别为1.25±0.03、1.09±0.02、1.03±0.01、1.12±0.02和1.21±0.01;NADPH含量分别为(0.123±0.003)mmoVmg prot、(0.112±0.004)mmol/mg prot、(0.099±0.002)mmol/mg prot、(0.116±0.005)mmol/mg prot和(0.120±0.002)mmol/mg prot.波动性高糖组细胞ROS活性较单纯高糖组显著增加(P＜0.01),G6PD活性和NADPH含量较单纯高糖组显著减少(P＜0.01);加NAC共孵育使细胞的变化程度减小.结论 波动性高浓度葡萄糖使培养的INS-1细胞氧化应激水平增高,其机制可能是由于抗氧化酶G6PD活性降低导致了氧化还原的失衡.     

PGC-1α对高糖诱导的血管内皮细胞内ROS生成的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体辅激活因子1α（PGC-1α）对高糖诱导的血管内皮细胞内活性氧簇（ROS）生成的影响。方法将人脐带静脉内皮细胞（HUVECs）分成对照组、空病毒Ad组、d-PGC-1α感染组、PGC-1αsiRNA转染组,分别将四组细胞置于正常糖及高糖环境中进行培养。用活性氧检测试剂盒处理标本,以酶标仪检测细胞内荧光强度,显示细胞内ROS浓度。结果高糖组HUVECs内ROS浓度明显高于正常糖组（P〈0.01）;与对照组及空病毒Ad组比较,d-PGC-1α感染组ROS浓度明显降低,PGC-1αsiRNA转染组明显升高（P均〈0.01）。结论与正常糖组比较,高糖组HUVECs内ROS浓度明显升高;过度表达PGC-1α蛋白后,HUVECs内ROS浓度明显降低;抑制细胞内PGC-1α蛋白表达,则HUVECs内ROS浓度明显升高。提示PGC-1α可作为防治糖尿病血管并发症的新靶点之一。     

红芪多糖对高糖条件下人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的研究红芪多糖（HPS）对高糖条件下人脐静脉内皮细胞（HUVEC）合成和释放一氧化氮（NO）和内皮素-1（ET-1）的影响及作用机制。方法从新鲜脐带中分离HUVEC进行鉴定、培养,细胞分为正常对照组、高糖组（30mmol／L葡萄糖）和HPS干预组。MTT比色法分析HPS对高糖诱导HUVEC增殖率的影响,流式细胞术Annexin—V／PI双染法检测细胞凋亡,硝酸盐还原酶法检测上清液中NO的水平,分光光度法检测细胞内一氧化氮合酶（NOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的浓度,酶联免疫吸附（ELISA）法检测上清液中ET-1的含量,实时荧光定量聚合酶链反应（RT—PCR）检测细胞内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、ET-1和c-Jun氨基末端激酶l（JNKl）mRNA的表达水平。组间差异显著性检验使用单因素方差分析,组间两两比较使用LSD法。结果高糖组在6h[（82．4±3．5）％]、24h[（68．2±1．4）％]、48h[（63．0±2．9）％]的细胞增殖率显著低于对照组（100％,P〈0．05）;HPS干预组细胞增殖率随浓度变化呈现先上升后下降的趋势,其中50mg／L[（85．34-4．6）％]、100mg／L[（89．6±1．1）％]、200mg／L[（88．8±3．6）％]HPS干预组较高糖组增加,差异具有统计学意义（均P〈0．05）;高糖组NO[（24．84±1．34）μmol／L]、NOS[（0．54±0．06）U／m1]含量较正常对照组呈现下降的趋势,iNOS[（0．133±0．015）U／m1]和ET_l[1（0．740±0．070）ng／m1]含量则在各时间点均高于对照组,HPS干预组升高不同时间点HUVEC内NO[（23．20±0．55）p．mol／L]、NOS[（0．46±0．10）U／m1]、以及降低iNOS[（0．08±0．020）U／m1]和ET-1[（0．710±0．030）μg/L]的变化,P〈0．05,使其趋向正常水平;HPS可提高高糖所致内皮细胞eNOSmRNA的水平[（0．33±0．02）比（0．23±0．04）],降低ET-1mRNA的水平（2．28±0．31比2．79±0．29）;高糖组细胞内JNK1mRNA水平表达（2．95±0．05）较正常对照组（1．00±0．00）显著增加（P〈0．05）,而HPS干预组（1．45±0．05）则较高糖组（2．95±0．05）明显减少（P〈0．05）。结论HPS对体外高糖诱导HUVEC损伤具有保护作用,这一作用可能与抑制JNK信号通路有关。     

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/核转录因子E2相关因子2信号通路对高糖状态下人甲状腺乳头状癌K1细胞增殖的作用及机制

目的研究核转录因子E2相关因子2(Nrf2)及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对高糖状态下人甲状腺乳头状癌K1细胞增殖的影响,并探讨糖代谢相关酶在Nrf2及PI3K/Akt影响K1细胞增殖中的作用。方法根据不同处理因素将K1细胞分为5组:正糖组(正糖5.5 mmol/L培养48 h)、高糖组(正糖5.5 mmol/L培养24 h后,换25 mmol/L高糖继续培养24 h)、Nrf2siRNA组(正糖条件下siRNA转染细胞24 h后,换高糖继续培养24 h)、NcsiRNA组(正糖条件下阴性转染细胞24 h后,换高糖继续培养24 h)、LY294002组(正糖条件下培养24 h后,加50μmol/L LY294002预孵育0.5 h再换用高糖培养24 h)。K1细胞按照上述分组处理后分别用以下方法检测相关指标:MTT法检测细胞增殖,细胞免疫荧光法检测Nrf2蛋白的分布,Western blot检测PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、核Nrf2、浆Nrf2、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、丙酮酸激酶M2(PKM2)蛋白的表达水平。两组数据比较采用独立样本t检验,多组数据比较采用单因素方差分析。结果与正糖组比较,高糖组K1细胞增殖率、PI3K、p-Akt/Akt、Nrf2、G6PD、PKM2表达显著升高[分别为(87.31±3.67)%比(126.64±5.41)%、0.272±0.039比0.425±0.019、0.168±0.035比0.446±0.021、0.308±0.026比0.597±0.014、0.421±0.024比0.626±0.026、0.198±0.023比0.314±0.023,t=6.109~16.951,均P<0.05],Nrf2在细胞核分布的比例显著升高[(21.6±4.5)%比(91.2±3.5)%,χ2=98.497,P<0.01];与高糖组比较,Nrf2siRNA组K1细胞增殖率明显下降,G6PD、PKM2的蛋白表达明显下调,差异有统计学意义(t=8.936、7.056、8.843,均P<0.01),LY294002组也呈现相似的趋势(t=7.228、6.351、7.910;均P<0.01);与高糖组比较,LY294002组K1细胞PI3K、Akt蛋白水平无明显改变,而p-PI3K、p-Akt、核Nrf2、浆Nrf2蛋白水平及Nrf2核浆蛋白比值均被显著抑制(t=5.748~23.572,均P<0.01)。结论高糖可激活PI3K/Akt信号通路,上调Nrf2表达与核转位,上调磷酸戊糖和糖酵解途径相关酶PKM2、G6PD的表达,促进K1细胞增殖。     

糖毒性对TC1-6细胞胰升糖素分泌的影响

目的 探讨长期糖毒性对胰岛α细胞胰升糖素分泌的影响及其与α细胞胰岛素抵抗的关系.方法 TC1-6细胞(α细胞株)分别培养于含低浓度(5.5 mmoL/L)、中浓度(11.1 mmol/L)和高浓度(25 mmoL/L)葡萄糖的培养基中1～5天,检测胰升糖素分泌及其mRNA表达;加入不同浓度胰岛素6 h后,观察对培养5天的TC1-6细胞胰升糖素分泌的影响并以Western印迹检测高糖对TC1-6细胞Akt磷酸化的影响.结果 (1)与低糖培养相比,中、高浓度葡萄糖培养1天和3天的TC1-6细胞胰升糖素分泌无明显改变,而高糖培养5天时TC1-6细胞的胰升糖素分泌明显增高[(136.80±10.94 vs 78.62±4.72)ng/106细胞,P<0.05];另外,培养5天时胰升糖素mRNA的表达较1天时明显升高(P<0.05);(2)10-7mol/L胰岛素抑制低糖组TC1-6细胞胰升糖素的分泌[(21.59±1.30 vs 55.12±3.86)ng/106细胞],但仅能轻微抑制高糖组胰升糖素的分泌[(106.58±8.53 vs 117.18±10.55)ng/106细胞];当胰岛素增至10-5mol/L时,高糖组胰升糖素的分泌也受到抑制[(46.55±3.72 vs 118.61±10.68)ng/106细胞];(3)加入10-5mol/L胰岛素2h后,两组TC1-6细胞磷酸化Akt水平分别升高180%和70%,但高糖组明显低于低糖组,给予磷脂酰肌醇3激酶抑制剂后两组TC1-6细胞磷酸化Akt水平在低糖组抑制率明显高于高糖组.结论 高糖可增加TC1-6细胞胰升糖素的分泌,其可能的机制与TC1-6细胞胰岛素抵抗有关.     

不同浓度血管紧张素Ⅱ对人脐静脉血管内皮细胞衰老和P-选择素表达的影响

目的观察不同浓度血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对诱导人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）衰老和P-选择素表达的影响。方法体外培养HUVEC,随机分为对照组和含不同浓度AngⅡ组（10-8～10-5mmol/L）共5组,用含不同浓度AngⅡ的培养基诱导细胞衰老,β-半乳糖苷酶（β-gal）染色法鉴定内皮细胞衰老状态;流式细胞技术分析细胞周期变化;CCK-8法检测细胞存活率情况;ELISA检测各组培养基上清中P-选择素表达含量。结果 AngⅡ培养细胞48h后,β-gal阳性染色率随着AngⅡ浓度的增加逐渐增多（P均〈0.01）;细胞周期多停滞于G0/G1期,S期细胞逐渐减少,与对照组相比,10-8和10-7mmol/LAngⅡ组无明显差异（P〉0.05）,10-6和10-5mmol/LAngⅡ组有统计学差异（P〈0.05或P〈0.01）;细胞存活率与对照组相比明显下降;P-选择素表达含量随着AngⅡ浓度的增加明显增多（P均〈0.01）。结论 AngⅡ诱导HUVEC衰老,并呈剂量依赖性的抑制细胞增殖与增加P-选择素的表达。     

糖尿病肾病相关危险因素分析（英文）

目的：探讨影响糖尿病肾病的相关危险因素。方法：入选明确诊断2型糖尿病患者238例,根据尿微量白蛋白/尿肌酐的比值（UACR）分为糖尿病无肾病组（糖尿病1组,90例）,早期糖尿病肾病组（糖尿病2组,73例）,临床糖尿病肾病组（糖尿病3组,75例）,收集所有患者的临床资料,并检测餐前及餐后2h血糖（FBG、2hPB）,血脂、尿酸（UA）、纤维蛋白原（Fg）、糖化血红蛋白（HbA1c）等生化指标,并分析其与糖尿病肾病的相关性。结果：糖尿病1组、糖尿病2组、糖尿病3组的糖尿病病程[（7.25±6.29）年比（10.25±7.67）年比（13.53±7.82）年]、FBG[（8.46±2.52）mmol/L比（9.52±3.38）mmol/L比（10.82±3.30）mmol/L]、2hPB[（18.40±5.64）mmol/L比（20.27±5.94）mmol/L比（22.59±6.14）mmol/L]、HbA1c[（7.96±1.65）%比（8.60±1.76）%比（9.55±2.09）%]、甘油三酯[（1.72±0.86）mmol/L比（2.34±1.87）mmol/L比（3.16±1.85）mmol/L]、Fg[（3.49±0.93）g/L比（3.88±1.21）g/L比（4.99±2.10）g/L]、UA[（295.42±52.34）μmol/L比（324.18±96.29）μmol/L比（351.23±56.88）μmol/L]水平逐渐显著升高（P〈0.05～〈0.01）。Lo-gistic逐步回归分析显示,糖尿病病程、HbA1c、TG、Fg、UA是糖尿病肾病的危险因素（优势比=1.008～1.910,P〈0.01～〈0.001）。结论：糖尿病病程、血糖、血脂、血尿酸和纤维蛋白原是糖尿病肾病的危险因素;尿微量白蛋白/尿肌酐比值升高反映糖尿病人病情的进展,测定它有助于糖尿病的防治。     

大医院急诊科室医护群体职业应激表现及对血糖、血脂影响

目的：观察大医院急诊科室从业医护群体职业应激表现及对血糖、血脂影响。方法：收集和分析2011年沈阳军区总医院和解放军第四六三医院医护人员体检资料,选择42例急诊科室医护人员（急诊科室组）和73例门诊科室人员（门诊科室组）为研究对象,进行职业紧张调查表[OSI-R,包括职业任务问卷（ORQ）,和个体紧张反应问卷（PSQ）]评估,分析血糖、血脂等项体检结果。结果：与门诊科室组比较,急诊科室组ORQ各因子分及问卷总分[（129.68±31.75）分比（140.37±34.62）分]、PSQ各因子分及总分[（83.29±17.60）分比（96.32±21.75）分]均明显升高（P〈0.01～〈0.05）;急诊科室组空腹血糖[（4.51±0.47）mmol/L比（4.89±0.62）mmol/L]、餐后2h血糖[（5.35±0.74）mmol/L比（5.96±0.90）mmol/L]和总胆固醇[（4.43±0.56）mmol/L比（4.92±0.71）mmol/L]水平亦明显升高,而高密度脂蛋白胆固醇[（1.59±0.27）mmol/L比（1.06±0.19）mmol/L]水平则显著降低（P均〈0.01～〈0.05）。结论：大医院急诊科室医护人员群体职业应激程度较大,血糖和血脂水平升高。     

活性氧诱导血管平滑肌细胞衰老及脱氢表雄酮的干预研究

目的 观察三丁基过氧化氢(tert-butyl hydroperoxide,t-BHP)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)衰老的诱导作用,及脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)的干预作用.方法 将VSMC分为4组:对照组、t-BHP刺激组(在80 μmol/L t-BHP的DMEM培养液中72 h);10 nmol/L DHEA干预组(给予t-BHP刺激前30 min先加用10 nmol/LDHEA);100 nmol/L DHEA干预组(给予t-BHP刺激前30 min先加用100 nmol/L DHEA).以衰老相关β-半乳糖苷酶活性和细胞的增殖能力两种衰老标志物为主要观察指标.其中衰老相关β-半乳糖苷酶活性采用免疫化学染色方法,流式细胞术检测细胞周期来反应细胞的增殖能力. 结果 经80 mmol/L的t-BHP持续作用72 h后,VSMC的G_0/G_1期细胞比例和SA-β半乳糖苷酶染色阳性细胞百分比增加[分别为(49.5±5.5)%和(89.4±3.4)%;(3.5±1.2)%和(75.3±4.3)%],差异有统计学意义(P<0.01).表明t-BHP成功诱导了VSMC衰老,而给予100 nmol/L DHEA干预后上述变化改善,为(71.3±3.9)%. 结论 随增龄,活性氧损害的累积可能是VSMC衰老的机制之一,DHEA可能通过抗氧化作用延缓VSMC的衰老.     

高糖对大鼠结肠平滑肌细胞表达内源性胰岛素样生长因子1的影响

目的:探讨高糖对大鼠结肠平滑肌细胞(SMCs)表达内源性胰岛素样生长因子1(IGF-1)的影响.方法:酶解法分离培养SD大鼠结肠SMCs,α-actin免疫荧光鉴定,然后将大鼠结肠SMCs随机给予葡萄糖不同浓度(5.5mmol/L和25mmol/L)组及甘露醇对照组(5.5mmol/L葡萄糖+19.5mmol/L甘露醇)刺激,CCK8实验检测SMCs增殖情况;流式细胞术检测SMCs细胞周期;ELISA检测培养液上清中IGF-1的含量;Western blot、Real-time PCR法检测SMCs合成内源性IGF-1的表达变化.结果:高糖(25mmol/L)抑制大鼠结肠SMCs的增殖,在24h与正常糖浓度间差异最大(0.494±0.003vs0.597±0.044,P<0.05);高糖使约90%的结肠SMCs停滞在G1期(90.850%±0.706%vs55.202%±3.807%,P<0.05),进入S期的SMCs明显减少(3.622%±0.156%vs30.780%±3.808%,P<0.05);高糖环境中,结肠SMCs合成分泌的IGF-1减少(208.000ng/L±31.443ng/Lvs265.750ng/L±26.538ng/L,P<0.05),SMCs表达内源性的IGF-1 mRNA和蛋白也均减少(2.037±0.196vs2.257±0.273;0.247±0.045vs0.906±0.103,P<0.05).结论:高糖抑制大鼠结肠SMCs增殖,使SMCs内源性IGF-1表达减少.     

整合素αvβ3在血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞衰老中的变化

目的观察整合素αvβ3在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老中的变化。方法体外培养HUVECs,采用CCK-8法检测细胞存活率,用AngⅡ(终浓度10-6mol/L)干预,分为实验对照组、AngⅡ诱导组。以衰老相关β-半乳糖苷酶活性和细胞增殖能力两种衰老标志物为主要观察指标。其中衰老相关β-半乳糖苷酶活性采用免疫化学染色方法,流式细胞术检测细胞周期来反应细胞的增殖能力;利用Western印迹法分析AngⅡ诱导HUVECs 0、12、24、36、48 h的整合素αvβ3表达的时间效应关系。结果与对照组相比,10-6 mol/L AngⅡ诱导组存活的细胞数为对照组的(77.15±6.83)%;(81.80±0.92)%的细胞呈现β-半乳糖苷酶阳性染色,流式细胞仪检测细胞周期停滞于G0～G1,证实细胞衰老;AngⅡ呈时间依赖性上调整合素αvβ3表达。结论 AngⅡ可以诱导HUVECs衰老,其机制可能与上调衰老细胞整合素αvβ3表达有关。     

氯化锂通过上调焦磷酸水平抑制血管平滑肌细胞钙化

目的探讨氯化锂对血管平滑肌细胞钙化的影响及其可能的作用机制。方法体外培养人主动脉血管平滑肌细胞,用钙化培养基(无机磷浓度为3 mmol/L)建立平滑肌细胞钙化模型。药物处理组用氯化锂(10 mmol/L)预处理细胞4 h后加入3 mmol/L的无机磷,继续培养细胞数天后用茜素红染色检测细胞钙盐沉积水平,同时应用焦磷酸偶联酶反应底物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)消耗法,酶标仪(OD340)检测细胞外焦磷酸的分泌;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测细胞中ankh基因的表达;采用慢病毒感染人主动脉平滑肌细胞的方法,建立对照细胞组和ankh敲低的实验细胞组,并观察其对细胞钙化的影响。结果高磷细胞组钙化检测值为(65.00±2.11)ng/g,较对照细胞组(12.39±0.38)ng/g钙化水平明显升高(P<0.01)。氯化锂预处理细胞的钙化检测值为(24.92±1.87)ng/g,与高磷对照组(60.94±4.51)ng/g比较能显著抑制高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化(P<0.01);氯化锂预处理明显上调细胞外液中焦磷酸的含量,基础条件下预处理组为(51.70±7.26)×10^-3 mmol/g,对照组为(28.71±2.55)×10^-3mmol/g(P<0.01);高磷刺激下预处理组为(34.35±4.27)×10^-3mmol/g,对照组为(20.89±4.93)×10^-3mmol/g(P<0.05),同时氯化锂预处理显著升高细胞ankh表达水平(P<0.01);而敲低ankh使无机磷诱导的血管平滑肌细胞钙化程度显著加重,敲低ankh细胞钙化检测值为(71.73±2.45)ng/g,对照组为(56.19±3.59)ng/g(P<0.01)。结论氯化锂通过上调平滑肌ANKH的表达,升高细胞外液中的焦磷酸水平,抑制高磷诱导下血管平滑肌细胞的钙化。