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1.
甲状腺激素对睾丸间质细胞睾酮分泌的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:观察甲状腺激素对睾丸间质细胞(Leydig细胞)睾酮分泌的影响。方法:以不同浓度(0μg/ml、0.1μg/ml、1和10μg/ml)三碘甲状腺原氨酸(T3)刺激培养大鼠睾丸间质细胞(Leydig细胞),观察细胞基础和应激状态时睾酮分泌的变化;同时测定不同甲状腺功能大鼠体外睾酮分泌水平。结果:直接用T3刺激培养的睾丸Leydig 细胞,睾酮分泌水平无显著变化;而将高甲状腺激素血症大鼠和低甲状腺激素血症大鼠Leydig细胞进行培养显示,无论在 基础还是在负荷情况下睾酮分泌能力均显著下降(P<0.01)。结论:体外培养的睾丸Leydig细胞对甲状腺激素的刺激无反应。高甲状腺激素和低甲状腺激素状态时睾丸Leydig细胞分泌睾酮的能力均降低。 相似文献
2.
目的探讨hCG刺激的Leydig细胞睾酮分泌与Atrn mRNA和Atrn蛋白表达的关系。方法将原代培养的Leydig细胞分为5组,分别在培养液中加入0、0.1、1、10、100ng/mLhCG,培养24h后吸取培养液用于测定睾酮分泌量。同时提取细胞mRNA和总蛋白,用实时定量RT—PCR和Westernblot方法分别检测Leydig细胞中AtrnmRNA和Atrn蛋白表达量。结果刺激24h后,与0ng/mLhCG剂量组相比较,0.1,1,10,100ng/mLhCG剂量组睾酮生成量都明显增加,统计学差异较大(P〈0.01)。Leydig细胞AtrnmRNA表达量增加(0.1ng/mLhCG组P〈0.05,其余剂量组P〈0.01)。睾酮生成量与Atrn蛋白表达量(r=0.987,P〈0.01)和AtrnmRNA表达量(r=0.982,P〈0.01)呈正相关。结论原代培养的Leydig细胞在hCG刺激下,睾酮生成量、AtrnmRNA和Atm蛋白表达量都呈现hCG剂量依赖性的增加。 相似文献
3.
去势大鼠睾丸间质细胞移植的实验研究 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:探讨对去势大鼠动物模型行睾丸间质细胞(Leydig细胞)移植的可行性。方法:随机选择SD大鼠离体睾丸进行Leydig细胞的体外培养及同种异体去势鼠大腿内侧肌群Leydig细胞移植,并进行绒毛膜促性腺激素(hCG)激发试验,监测其血清睾酮分泌情况的变化,结果:体外培养的Leydig细胞对hCG的刺激敏感,能分泌大量睾酮,而一旦进入机体后虽然短期内仍然成活,但分泌功能明显受阻,结论:通过施行同种异体睾丸Leydig细胞移植以提高血清睾酮含量的前景值得商榷。 相似文献
4.
用Percoll分离的大鼠睾丸间质细胞对绒毛膜促性腺激素刺激的反应 总被引:4,自引:0,他引:4
目的:了解用分离液Percoll分离的Leydig细胞对人绒毛膜促性腺激素刺激的反应规律。方法:将大鼠睾丸间质细胞混悬液用不连续梯度(20%~80%)Percoll分离液分离并进行为期5d的培养,观察不同培养时间Leydig对不同剂量hCG刺激的反应。结果:Percoll分离、纯化的Leydig细胞纯度可达80%~85%;随着培养时间的延长,Leydig细胞功能逐渐减低,对hCG刺激反应以培养d1和d2最大;小剂量hCG(1IU/ml)即可使睾酮分泌达到峰值,加大剂量则会抑制细胞分泌睾酮的功能。结论:Percoll分离液能明显的提高Leydig细胞纯度;培养的d1~2为最佳刺激时间,hCG用量以1IU/ml为宜 相似文献
5.
目的:研究胰岛素样生长因子I(IGF I)和人绒毛膜促性腺激素(hCG)对成年大鼠睾丸Leydig细胞中葡萄糖转运蛋白(GLUT)基因表达的影响,为进一步探讨Leydig细胞中睾酮的合成、分泌与葡萄糖代谢的关系提供依据。方法:采用改良的Klinefelter方法从成年大鼠睾丸中分离获得Leydig细胞;用反转录聚合酶链技术检测IGF I和hCG对原代培养的Leydig细胞中GLUT基因表达的调控作用。结果:分离得到纯度为98%的大鼠Leydig细胞,并与对照组比较,hCG可显著增加Leydig细胞中GLUT8基因mRNA的表达水平(P<0.001),且此作用具有剂量依赖性与时效性。当在试验组细胞中单独加入IGF I或IGF I和hCG作用于细胞后,发现IGF I(100ng mL)可显著增加Leydig细胞中GLUT8基因mRNA的表达(P<0.01),也可与hCG协同作用显著提高GLUT8基因的mRNA表达,该结果与IGF I(100ng mL)和hCG(10ng mL)能协同作用极显著增加睾酮合成水平(P<0.001)的结果是相吻合的。在大鼠Leydig细胞中,无论10ng mL或100ng mL还是两者同时作用于细胞,都不能影响GLUT1和GLUT3基因的mRNA水平。结论:在成年大鼠Leydig细胞中,IGF I和hCG对细胞中的GLUT8基因表达的调节作用具有特异性,其协同作用能显著提高细胞中GLUT8基因mRNA水平,增强细胞摄取葡萄糖的能力,给细胞提供更多的代谢能源,最终增加Leydig细胞睾酮的合成与分泌。 相似文献
6.
目的:研究ATP50在SD大鼠睾丸Leydig细胞中对生长激素(Growth hormone,GH)诱导睾酮合成及生长激素受体功能的影响。方法:采用离体细胞体外孵育法,观察反义ATP50寡脱氧核苷酸(Oligo deoxy nucletides,ODN)对GH诱导大鼠睾丸Leydig细胞分泌睾酮的影响及GH受体功能的影响,以睾酮放射免疫试剂盒测定睾酮合成的情况,cAMP放免试剂盒检测cAMP含量来评定GH受体的功能,免疫组织化学检测ATP50蛋白的表达。结果:反义ATP50ODN呈剂量依赖性抑制GH诱导睾丸Leydig细胞睾酮的分泌(P〈0.05),同时使Leydig细胞中ATP50蛋白表达下降,而无义tat ODN则没有相应的作用,免疫组织化学显示ATP50蛋白阳性颗粒在Leydig细胞中中呈密集性分布,表达强度明显高于GH组(P〈0.05)。结论:在SD大鼠睾丸Leydig细胞中,ATP50可能通过增强GH受体的功能,进而刺激GH诱导睾酮的合成。提示ATP50参与GH诱导大鼠睾丸Leydig细胞睾酮的分泌过程。 相似文献
7.
目的:探讨非酶糖基化终末产物(AGEs)对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的影响及其潜在机制。方法首先,原代培养大鼠睾丸间质细胞,采用3β-HSD免疫细胞化学方法对间质细胞进行鉴定;其次,MTT法测定不同浓度的AGEs (25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL)及200μg/mL BSA作用Leydig细胞后的细胞活力;最后,用不同浓度的AGEs及200μg/mL BSA预处理Leydig细胞12 h,之后更换含相应浓度AGEs或BSA的培养基并加入终浓度为4 U/mL的hCG,其中对照组不含AGEs和BSA,ELISA法和Western blot分别检测睾酮分泌量和p-ERK1/2的表达量。结果 MTT法表明AGEs (≤200μg/mL)对Leydig细胞的活力在本实验所研究的时间内没有影响;ELISA法和Western blot结果显示,不同浓度AGEs处理后,hCG诱导的Leydig细胞睾酮合成量和ERK1/2蛋白的磷酸化都呈现浓度依赖性下降,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 AGEs通过抑制ERK1/2的磷酸化降低大鼠Leydig cells睾酮的分泌。 相似文献
8.
目的:研究ATP50在SD大鼠睾丸Leydig细胞中对生长激素(Growth hormone,GH)诱导睾酮合成及生长激素受体功能的影响.方法:采用离体细胞体外孵育法,观察反义ATP50寡脱氧核苷酸(Oligo deoxy nucletides,ODN)对GH诱导大鼠睾丸Leydig细胞分泌睾酮的影响及GH受体功能的影响,以睾酮放射免疫试剂盒测定睾酮合成的情况,cAMP放免试剂盒检测cAMP含量来评定GH受体的功能,免疫组织化学检测ATP50蛋白的表达.结果:反义ATP50 ODN呈剂量依赖性抑制GH诱导睾丸Leydig细胞睾酮的分泌(P<0.05),同时使Leydig细胞中ATP50蛋白表达下降,而无义tat ODN则没有相应的作用,免疫组织化学显示ATP50蛋白阳性颗粒在Leydig细胞中中呈密集性分布,表达强度明显高于GH组(P<0.05).结论:在SD大鼠睾丸Leydig细胞中,ATP50可能通过增强GH受体的功能,进而刺激GH诱导睾酮的合成.提示ATP50参与GH诱导大鼠睾丸Leydig细胞睾酮的分泌过程. 相似文献
9.
10.
[目的]研究磨损颗粒刺激单核细胞thp-1后,细胞分泌TNF含量和刺激后条件培养基引起成骨细胞的凋亡。[方法]L929细胞测活和ELISA方法检测单核细胞TNF-α的分泌和分泌的量;TUNEL方法检测磨损颗粒条件培养基对成骨细胞的凋亡作用。[结果]不同种类磨损颗粒加入thp-1后TNF-α的结果用方差分析比较, 3组数据之间有显著性差异(P<0.05)。将不同颗粒的100 ng/ml组和10 ng/ml组分别两两比较,两组之间结果有显著性差异(P<0.05),100 ng/ml比10 ng/ml TNF值高。[结论]磨损颗粒PE、Co-Cr-Mo、Ti-6Al-4V刺激体外培养单核细胞thp-1分泌TNF-α,3种磨损颗粒之间有显著差异(P<0.05)。磨损颗粒PE、Co-Cr-Mo、Ti-6Al-4V刺激单核细胞thp-1的条件培养基可以引起体外培养成骨细胞凋亡。 相似文献
11.
目的:观察不同浓度肿瘤坏死因子-α( TNF-α)和不同TNF-α作用时间对人脐静脉内皮细胞( HUVEC )中组织蛋白酶K(Cat K)表达的影响。方法取对数生长期HUVEC进行实验。将HUVEC分为正常对照组、0.1 ng/ml TNF-α组、1 ng/ml TNF-α组、10 ng/ml TNF-α组、100 ng/ml TNF-α组,分别采用DMEM培养基、0.1 ng/ml TNF-α、1 ng/ml TNF-α、10 ng/ml TNF-α、100 ng/ml TNF-α作用24 h。另取HUVEC分为对照组、TNF-α6 h组、TNF-α12 h组、TNF-α24 h组、TNF-α48 h组,对照组DMEM培养基作用24 h,其他组采用10 ng/ml TNF-α作用相应时间。检测各组HUVEC 中的Cat K mRNA和蛋白的表达情况。结果与正常对照组比较,不同TNF-α浓度组的Cat K mRNA和Cat K蛋白表达水平均升高(P<0.05)。0.1 ng/ml TNF-α组、1 ng/ml TNF-α组、10 ng/ml TNF-α组 Cat K mRNA 和 Cat K 蛋白的表达水平依次增高(P<0.05),100 ng/ml TNF-α组Cat K mRNA和Cat K蛋白表达水平较10 ng/ml TNF-α组下降(P<0.05)。与对照组比较,TNF-α各作用时间组Cat K mRNA和Cat K蛋白的表达水平增高(P<0.05);TNF-α6 h组、TNF-α12 h组、TNF-α24 h组Cat K mRNA和Cat K蛋白的表达水平依次增高(P<0.05);TNF-α48 h组Cat K mRNA和Cat K蛋白的表达水平较TNF-α24 h组明显下降(P<0.05)。结论在一定作用浓度及作用时间内,TNF-α可以呈剂量和时间依赖性刺激HUVEC中Cat K表达。 TNF-α可能通过促进Cat K的表达促进动脉硬化的发生。 相似文献
12.
IFNγ/IL-4对人胎盘滋养层功能的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
【目的】研究γ干扰素(IFNγ)/白细胞介素4(IL-4)对人孕早期胎盘滋养层细胞活性及人绒毛膜促性腺激素(hCG)分泌的影响。【方法】胎盘滋养层细胞活性采用MTT法进行检测,胎盘滋养层组织分泌的hCG采用放免法进行分析测定。结果:IFNγ在一定浓度范围内(10~1000ng/ml)对胎盘滋养层细胞活性及其hCG分泌有明显的抑制作用(P<0.01);而IL-4(1~10ng/ml)则有明显的促进作用(P<0.01)。【结论】IFNγ/IL-4可能是通过影响胎盘滋养层细胞活性及hCG分泌而在早期妊娠中起重要的免疫调节作用。 相似文献
13.
本实验采用幼年雄性大鼠睾丸Leydig细胞离体单层培养法,研究hCG对Leydig细胞睾酮和cAMP生成的影响,并探讨了不同剂量X线对Leydig细胞辐射效应的发生机理。实验结果表明,hCG能明显促进Leydig细胞睾酮和cAMP生成。细胞预培养24h接受不同剂量X线照射,停照后加入外源性hLCG(0.05IU/ml)继续培养48h,小剂量辐射(25~250mGy,剂量率12.5mGy/min)在25,50mGy剂量组引起Leydig细胞对hCG反应性增高,睾酮生成量明显高于对照组,细胞内cAMP含量也发生相应变化;大剂量辐射后(0.5~8.0Gy,剂量率0.5Gy/min),Leydig细胞在各剂量组对hCG反应性均降低,睾酮生成量和cAMP含量变化一致,并与照射剂量呈线性负相关。 相似文献
14.
目的:探讨应用组织工程技术体内外构建具有一定形态和睾酮分泌功能组织的可行性。方法:雄性Wister大鼠,无菌切取双侧睾丸,制备去势及移植鼠动物模型。睾丸去包膜,剪碎,胶原酶消化,经差速贴壁或直接混合共培养方法,分别获取睾丸间质细胞(Leydig细胞)和共培养的睾丸多种体细胞,两类细胞分别与可降解生物材料聚羟基乙酸(PGA)纤维复合并进行体外培养,光、电镜观察体外组织形成过程,定期检测培养液内睾酮分泌水平。取体外培养7d细胞-材料复合物,分别移植于去势鼠睾丸鞘膜腔或大网膜内(n=6),不同时间点取材,通过大体观察、组织学染色和免疫细胞化学方法,检测移植鼠体内雄激素分泌组织的形成过程及血睾酮水平。结果:两类细胞均与PGA具有良好的亲和性,体外可形成具有一定睾酮分泌功能的细胞-材料复合物,体内移植2个月后,两类细胞-材料复合物在大网膜和睾丸鞘膜内均可形成具有一定形态的雄激素分泌组织,再生组织具有良好的血管化。血睾酮检测及统计分析结果表明,移植6周后,单纯Leydig细胞组血睾酮水平为(0.604±0.04)μg/L,共培养细胞组血睾酮水平为(0.854±0.03)μg/L,均明显高于单纯去势鼠血睾酮水平(0.564±0.05)μg/L(P〈0.01),两组移植鼠相比,共培养细胞移植组血睾酮水平明显高于单纯Leydig细胞移植组(P〈0.01)。结论:以共培养睾丸体细胞作为种子细胞在体内外构建雄激素分泌组织具有可行性,共培养睾丸内体细胞是雄激素分泌组织构建的良好种子细胞。 相似文献
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体外培养的人睾丸间质细胞对绒毛膜促性腺激素刺激的反应 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨体外培养的人睾九间质(Leydig)细胞对绒毛膜促性腺激素(hCG)刺激的反应。方法:随机选择人离体睾九20份进行Leydig细胞原代及传代培养,同一人份Leydig细胞分成4组,不同时间用hCG刺激,连续收集培养上清液,用磁性分离免疫酶联测定法测定睾酮含量。结果:原代细胞对首次hCG的刺激反应敏感,连续刺激则睾酮的分泌受抑制,间隔2天再次刺激时虽有反应,但明显减弱。传代后的Leydig细胞对hCG的刺激几乎无反应。结论:原代Leydig细胞对hCG刺激的反应受刺激时间、刺激次数的影响,临床使用hCG治疗时应注意。 相似文献
16.
费莉 《南京医科大学学报(自然科学版)》2005,25(1):25-28,43
目的:探讨TNF-α对未分化及成熟3T3-L1脂肪细胞中TSG-6基因(tumor necrosis factor alpha-stimulated gene-6)表达水平的调节作用.方法:体外培养3T3-L1脂肪细胞.在3T3-L1细胞生长至完全融合后2天(第0天)或细胞诱导分化的第10天,应用重组TNF-α(0.1、1.0、10.0ng/ml)干预未分化(第0天)或已分化成熟(第10天)的脂肪细胞,采刖RT-PCR技术检测干预后不同时间(0、0.5、2.0、6、0、12、0、24.0h)脂肪细胞中TSG-6基因的表达水平。结果:①不同浓度TNF-α对未分化脂肪细胞中TSG-6基因的表达水平均具抑制作用。TNF-α浓度0.1ng/ml时,TSG-6基因表达水平2h内下降67.30%,24h时下降76.05%;TNF-α浓度1.0ng/ml时,TSG-6基因表达水平0.5h内下降52.79%,24h时下降99.20%:TNF-α浓度10.0ng/ml时,TSG-6基因表达水平0.5h内下降96.14%,其表达几乎被完全抑制:②不同浓度TNF-α均能显著抑制成熟脂肪细胞中TSG-6基因的表达。TNF-α浓度0.1ng/ml时,TSG-6基因表达水平6h内下降33.73%,12h内下降97.39%;TNF-α浓度1.0ng/ml时,TSG-6基因表达水平6h内下降78.68%,并持续至24h;TNF-α浓度10.0ng/ml时,TSG-6基因表达水平2h内下降96.27%.TSG-6基因的表达几乎被完全抑制。结论:TNF-α对脂肪细胞中TSG-6基因表达具有抑制作用.其抑制效应总体趋势上呈现剂量和时间依赖性特征. 相似文献
17.
目的 进一步明确天然糖皮质激素对巨噬细胞免疫功能的影响及其时效和量效关系.方法 收集大鼠腹腔巨噬细胞,分别用10~1 000 ng/ml的皮质酮(corticosterone,CORT)刺激,检测细胞的黏附、趋化和吞噬功能;使用ELISA试剂盒检测细胞培养上清中TNF-α的含量.结果 50 ng/ml的皮质酮显著增强巨噬细胞的黏附功能(P<0.05),10 ng/ml和50 ng/ml的皮质酮刺激细胞后,其趋化功能均显著增加(P<0.05).同时,50 ng/ml的皮质酮还可显著增强巨噬细胞的吞噬功能(P<0.05)和促进巨噬细胞分泌TNF-α(P<0.01),而使用高浓度皮质酮(500 ng/ml和1 000 ng/ml)处理时,巨噬细胞的上述功能增强趋势减弱或无增强;在0.5~5 h范围内,皮质酮处理1 h时细胞的吞噬功能和分泌TNF-α的功能增强最明显,刺激更长时间后其功能的增强趋势逐渐减弱.结论 一定剂量的天然糖皮质激素急性刺激可明显增强免疫功能. 相似文献
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目的观察双酚A(bisphenol A,BPA)对大鼠未成年Leydig细胞睾酮合成的影响,探讨糖皮质激素受体(GR)、11β羟类固醇脱氢酶(11β-HSD)及类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)蛋白表达的改变及意义。方法雄性SD大鼠24只,随机均分成4组:正常对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。低剂量组、中剂量组及高剂量组予出生后第21天起分别给予不同剂量[(2.4μg/(kg.d)、1mg/(kg.d)、200mg/(kg.d)]的双酚A灌胃至出生后第35天。正常对照组给予等容积的玉米油灌胃。实验结束时处死大鼠,测量大鼠体重、睾丸重量,光镜及电镜下观察睾丸Leydig细胞的形态学改变,酶联免疫吸附测定法检测血清睾酮浓度,Western-blotting法检测睾丸Leydig细胞GR、11β-HSD及StAR的蛋白表达。结果高剂量组Leydig细胞线粒体肿胀明显。低剂量组大鼠血清睾酮下降(P<0.05)。低剂量组大鼠睾丸Leydig细胞GR蛋白表达升高(P<0.05),中剂量和高剂量组大鼠睾丸Leydig细胞GR蛋白表达明显降低(P<0.01),高剂量组大鼠睾丸Leydig细胞11β-HSD蛋白及StAR蛋白表达降低(P<0.05)。结论双酚A可以干扰大鼠未成年Leydig细胞的睾酮合成,GR、11β-HSD及StAR的蛋白表达改变可能是其重要机制。 相似文献
19.
目的:研究糖尿病时睾丸的组织病理学变化及睾丸间质细胞(Leydig细胞)睾酮合成功能的改变。方法:雄性成年SD大鼠20只,随机分为正常对照组10只、糖尿病组10只。后一组给以高脂饮食加小剂量(25mg/kg)链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病大鼠模型,12周后处死。用光镜及电镜观察大鼠睾丸的组织形态学改变;逆转录-PCR法检测睾丸组织类固醇激素合成灵敏调节蛋白(steroidogenic acute regulatory proteins,StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)及17a-羟基化酶/17,20-裂解酶(P450c17)mRNA含量;酶联免疫吸附法测定血清中睾酮和黄体生成素(leutelnizing hormone,LH)含量。结果:糖尿病大鼠光镜下主要表现为Leydig细胞数量减少,体积变小:透射电镜下主要见到Leydig细胞萎缩:睾丸组织的StAR mRNA和P450scc mRNA含量糖尿病组低于正常对照组(P〈0.05),P450c17含量糖尿病组较正常对照组差异无显著性(P〉0.05);与正常对照组相比血清中睾酮和LH含量降低(P〈0.05)。结论:成年期2型糖尿病可以引起大鼠睾丸Leydig细胞功能降低,形态结构改变。 相似文献
20.
目的先前研究发现促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)刺激Leydig细胞后,膜联蛋白5(annexin 5)及睾酮水平同时增加,推测annexin 5和睾酮之间可能存在某种内在的联系,3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)是间质细胞的标记酶。文中旨在研究annexin 5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌及3β-HSD表达的影响。方法原代培养大鼠睾丸间质细胞,用不同浓度的annexin 5(0、10-10、10-9、10-8mol/L)处理间质细胞24h和用10-9mol/L的annexin 5处理细胞不同时间(6、12、24、36h),收集培养液,用化学发光法测定培养液中的睾酮含量;Western blotting方法分析睾丸间质细胞中3β-HSD的表达变化。结果不同浓度的annexin 5处理间质细胞24h后,与对照组比较,终浓度为10-10mol/L和10-9mol/L时,睾酮水平分别升高了18%[(14.38±0.30)nmol/Lvs(12.12±0.74)nmol/L](P<0.01)和26%[(15.25±0.47)nmol/Lvs(12.12±0... 相似文献