和厚朴酚对人急性白血病细胞株U937细胞增殖及凋亡的影响

 目的 探讨和厚朴酚在体外对人急性白血病细胞株U937细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测和厚朴酚对细胞增殖的影响,Annexin V/PI双染检测细胞凋亡,RT-PCR检测Bcl-2、Bax、Caspase 3、Caspase 8 和 Caspase 9基因的表达。结果 5 μg/ml的和厚朴酚作用48 h对U937细胞增殖即可表现抑制作用,10 μg/ml的和厚朴酚作用48 h对细胞的增殖抑制率高达50%以上,作用120 h可完全抑制细胞增殖。经10 μg/ml和厚朴酚处理的U937细胞凋亡率达到26.8% (P＜0.01)。10 μg/ml的和厚朴酚处理U937细胞后48 h,Bcl-2基因表达降低（对照组：0.33±0.02,实验组：0.14±0.01,P＜0.01）,Bax基因表达升高（对照组：0.1±0.01,实验组：0.87±0.08,P＜0.01）。Caspase 3（对照组：0.48±0.01,实验组：0.87±0.06,P＜0.01）、Caspase 8（对照组：0.23±0.02,实验组：0.41±0.07,P＜0.01）和Caspase 9（对照组：0.44±0.05,实验组：0.76±0.06,P＜0.01）基因表达均升高。Caspase 3活性为0.325±0.089,较对照组有显著地升高(P＜0.01.结论 和厚朴酚能明显抑制人急性白血病细胞株U937细胞增殖并引起细胞凋亡。其机制在于上调凋亡促进基因Bax的表达,下调凋亡抑制基因Bcl 2的表达,并且内源性和外源性途径均参与了凋亡过程。     

RNA干扰HOXA9基因对人类急性单核细胞白血病U937细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨小干扰RNA（siRNA）沉默HOXA9基因对人类急性单核细胞白血病U937细胞株增殖、凋亡的影响。方法设计合成针对HOXA9的特异性siRNA寡核苷酸链,应用阳离子脂质体介导瞬时转染U937细胞。实验分为3组：实验组（脂质体转染靶向HOXA9的siRNA）、阴性对照组（脂质体转染阴性对照siRNA）和细胞对照组（仅加等量细胞及培养液）。利用反转录．聚合酶链反应法、Western blot法分别检测各组细胞HOXA9 mRNA、蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果转染靶向HOXA9的siRNA后,实验组、阴性对照组、细胞对照组mRNA相对表达水平分别为、（22.980±0．548）％、（82．371±1．517）％、（8d．637±2．252）％（P〈0．05）,蛋白相对表达水平分别为（50．377±2．773）％、（102．275±3．898）％、（107．510±3．905）％（P〈0．05）;siRNA转染后实验组U937细胞增殖明显受抑制且细胞凋亡率显著增高,24、48、72h增殖抑制率分别为（41．909±4．333）％、（54．470±3．756）％、（65．835±1．024）％,凋亡率为（26．800±2．081）％,与细胞对照组、阴性对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论靶向HOXA9的siRNA可有效沉默U937细胞HOXA9基因表达,明显抑制细胞的增殖并促进细胞凋亡,为临床白血病HOXA9基因靶向治疗提供了实验依据。     

罗格列酮对U937细胞生长抑制作用及其机制的探讨

目的:探讨过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPARγ)配体罗格列酮(ROS)对人急性单核细胞白血病U937细胞生长抑制作用及其作用机制.方法:体外培养人急性单核细胞白血病U937细胞,应用不同浓度的罗格列酮处理人急性单核细胞白血病U937细胞,采用MTT比色法测定药物对细胞增殖的抑制作用;用流式细胞术、AnnexinV/PI双染色法现察细胞凋亡率;并分析细胞周期改变;RT-PCR法分析PPARγ/mRNA表达.结果:ROS浓度>80#mol/L时,对U937细胞产生明显的增殖抑制作用,P<0.05;AnrlexinV/PI双染色法观察细胞凋亡率>50%,并将细胞周期阻滞在G1期,P<0.05;RT-PCR检测U937细胞中PPAR7 mRNA表达无明显变化.结论:ROS浓度>80 μmol/L时,对U937细胞产生明显的增殖抑制作用及诱导凋亡作用,同时将细胞周期阻滞在G1期,但是PPARγ mRNA表达无明显变化,推测可能与激活PPARγ表迭无明显相关,可能存在另外的信号转导途径.     

EKI-785对U937细胞系的生长调节作用

目的探讨erbB家族受体在急性单核细胞白血病细胞系U937中的表达及其对细胞生长的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测erbB家族成员在U937细胞中的表达情况,Western blot检测erbB2在蛋白水平的表达。以erbB受体抑制剂EKI-785处理细胞后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验并绘制细胞生长曲线,观察细胞的生长变化情况;应用Annexin V/PI双染和流式细胞仪计数,观察细胞是否发生凋亡;Western blot检测细胞增殖生长信号的变化。结果在U937细胞中,除了erbB1外,其他erbB受体均有表达,且erbB2有蛋白水平的表达。经过1、2、4和8μmoL/L EKI-785处理48h后,U937细胞的生长受到不同程度的抑制,抑制率分别为(10．49±3．69)%、(13．79±2．13)%、(31．42±3．90)%和(44．05±1．56)%,并呈现出比较明显的浓度依赖关系。EKI-785诱导U937细胞发生了早期凋亡,4μmol/L EKI-785处理U937细胞48和72h,Annexin- V~+/PI~-标记的早期凋亡细胞所占的比例分别为相应对照组的2．03倍和6．64倍。经4μmol/L EKI- 785作用24、48、72h后,磷酸化的MEK和Akt蛋白水平随着时间延长不断下降,72h时磷酸化的MEK和Akt几乎消失。结论erbB家族受体很可能在某些类型的白血病发生中发挥重要作用,有望成为这些白血病的新治疗靶点,EKI-785具有治疗白血病的应用前景。     

靶向HOXA9基因RNAi慢病毒载体增加人急性单核细胞白血病U937细胞的药物敏感性

目的:探讨慢病毒载体介导的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)沉默同源盒A9(homeobox A9,HOXA9)基因对人急性单核细胞白血病U937细胞药物敏感性的影响。方法:应用蛋白质印迹法从4条针对HOXA9基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体中筛选出1条敲减效率最高的包装成慢病毒HOXA9/GV118RNAi-LV#2。实验分成未感染对照组(control,CON)、阴性对照组(negative control,NC)及敲减组(knock down,KD)。HOXA9/GV118RNAi-LV#2感染U937细胞后,应用实时荧光定量PCR法检测HOXA9 mRNA的沉默效率,蛋白质印迹法检测HOXA9蛋白的表达,MTT法和FCM检测病毒感染前后U937细胞对长春新碱(vincristine,VCR)和柔红霉素(daunorubicin,DNR)的敏感性及细胞凋亡率变化,RT-PCR法检测DNR作用后各组细胞中MDR-1mRNA的表达。结果:KD组细胞中HOXA9mRNA的沉默效率在55%以上,HOXA9蛋白的表达量明显减少。VCR及DNR作用KD组细胞的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)值明显降低(P<0.01),药物敏感性明显增强;VCR和DNR作用后,KD组细胞的凋亡率明显增加(P<0.01);DNR作用后,KD组U937细胞中MDR-1mRNA的表达水平明显下调(P<0.01)。结论:靶向HOXA9基因的RNAi慢病毒可稳定沉默HOXA9基因的表达,在一定程度上提高U937细胞对化疗药物的敏感性。     

JQ1对急性髓系白血病细胞株U937增殖抑制作用及其对STAT-5信号转导途径的影响

目的 探讨布罗莫结构域抑制剂JQ1抑制急性髓系白血病细胞株U937的作用机制及对STAT-5信号转导途径的影响.方法 各实验组取对数生长期U937细胞,分别加入0.2、1.0、4.0μmol/L JQ1,同时设置不加JQ1的空白对照组,培养48 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖情况,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测黏着斑激酶(FAK)、P21活化激酶(PAK1)mRNA的表达水平,蛋白质印迹法分析细胞STAT-5蛋白的表达.结果 不同浓度JQ1对U937细胞的增殖均有抑制作用,且呈时间-剂量依赖性;不同浓度JQ1可诱导U937细胞凋亡,且呈剂量依赖性.不同浓度(0.2、1.0、4.0μmol/L)JQ1处理U937细胞48 h后均能降低FAK mRNA和PAK1 mRNA表达,FAK mRNA的表达量分别为0.417±0.066、0.140±0.026、0.027±0.006(F=454.651,P=0.000),PAK1 mRNA的表达分别为0.533±0.045、0.080±0.010、0.010±0.001(F=2434.610,P=0.000);STAT-5蛋白表达也被明显地抑制,在48 h后对照组STAT-5蛋白相对含量为1.00±0.21,不同浓度(0.2、1.0、4.0μmol/L)JQ1组中STAT-5蛋白相对含量分别为0.71±0.19、0.62±0.16、0.53±0.14(F=263.135,P=0.000).结论 JQ1能有效地抑制急性髓系白血病细胞株U937增殖并诱导其凋亡,其机制可能是通过STAT-5信号转导途径来实现的.     

靶向miRNA-214反义核酸对白血病U937细胞的生长抑制作用

 【摘要】　目的　探讨以miRNA-214为靶点的反义核酸对白血病U937细胞的生长抑制作用及可能的作用机制。方法　人工合成miRNA-214的反义核酸序列,硫代修饰,以Lipofectamine 2000为介导转入U937细胞。MTT细胞毒性检测U937细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞的凋亡水平,荧光定量PCR检测miRNA-214的表达水平。结果　MTT检测结果显示,转染反义核酸后24 、48、72 h,U937细胞的增殖活性显著下降（0.812 ±0.001、0.770±0.002、0.541±0.001）,与随机对照组（1.011±0.002、1.112±0.003、1.111±0.003）、空白对照组（1.112±0.001、1.023±0.001、1.101±0.001）相比较差异均有统计学意义（F＝2.782、3.659、2.735,P＝0.021、0.018、0.036）。流式细胞术检测结果表明,在转染反义核酸48 h后细胞的凋亡水平随时间延长而提高（48、72 h分别为15.12±0.02、19.14±0.01）,与随机对照组（2.04±0.02、2.45±0.03）、空白对照组（1.19±0.02、2.02±0.01）相比较差异均有统计学意义（F＝3.683、3.762,P＝0.013、0.015）。荧光定量PCR结果证实,在反义核酸作用后,U937细胞内miRNA-214的相对表达水平明显下降（31.1±0.2）,与随机对照组、空白对照组的25.8±0.1、25.6±0.2相比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论　以miRNA-214为靶点的反义核酸可抑制U937细胞的增殖活性,并明显促进细胞的凋亡。     

靶向hoxa9 siRNA联合小剂量阿糖胞苷对U937细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨利用小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)沉默hoxa9基因联合小剂量阿糖胞苷(Ara-C)对U937细胞增殖、凋亡的影响.方法 设计合成针对hoxa9的特异性siRNA,应用脂质体介导转染U937细胞.利用RT-PCR法、Western blot法分别检测各组细胞hoxa9 mRNA、蛋白的表达;siRNA和(或)小剂量Ara-C分别作用U937细胞后,应用MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 靶向hoxa9的siRNA可有效沉默hoxa9的表达,hoxa9 mRNA及蛋白相对水平明显下降.RNAi联合小剂量Ara C作用于U937细胞后对细胞增殖抑制作用最强,48 h细胞凋亡率显著升高,与其余组比较均有统计学差异(P＜0.05).结论 靶向hoxa9的siRNA联合小剂量Ara-C能显著抑制U937细胞增殖并促进其凋亡,为研究hoxa9联合化疗治疗白血病的作用机制及应用于临床提供实验依据.     

甲氧胺联合手霉素对白血病U937细胞凋亡的影响

背景与目的:DNA损伤修复对细胞生存很重要。我们既往的研究发现手霉素可诱导肿瘤细胞出现DNA损害反应。因此,碱基切除修复抑制剂甲氧胺(methoxyamine)有可能增强手霉素(manumycin)的抗肿瘤作用。为此,本实验研究甲氧胺对手霉素诱导白血病细胞凋亡的影响,探讨联合甲氧胺和手霉素诱导白血病细胞凋亡过程中线粒体凋亡途径的变化。方法:不同浓度手霉素和甲氧胺处理U937细胞48h后,MTT细胞毒性测定U937细胞存活率,软琼脂法检测细胞的克隆形成。应用流式细胞术检测细胞凋亡。免疫印迹技术检测细胞色素C、Caspase-9、聚腺苷核糖聚合酶(poly-adenosyl ribose polymerase,PARP)的表达。中位效应方法评价两药的相互作用。结果:甲氧胺使手霉素的剂量反应曲线向左边移动,结合指数(CI)<1(P<0.05)。1μmol/L手霉素、5mmol/L甲氧胺和联合两药处理U937细胞,相对于对照组的克隆形成分别是0.3641±0.0463,0.7541±0.0379,0.0473±0.0024(联合用药组与对照组、手霉素组或甲氧胺组相比,P<0.05);进一步发现,联合两药协同诱导细胞凋亡,引起Annexin V荧光值增加,阳性细胞增加,分别是(2.34±0.30)%、(8.80±0.95)%、(2.21±0.19)%、(13.37±0.91)%,联合用药组与对照组、手霉素组或甲氧胺组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。联合甲氧胺和手霉素增强细胞色素C从线粒体释放到细胞浆,Caspase-9激活,PARP特异性裂解。结论:甲氧胺增强手霉素通过线粒体凋亡途径诱导U937细胞凋亡,提示甲氧胺联合FTIs和DNA修复抑制剂治疗白血病的可能性。     

Molecular Mechanism of Differentiation and Apoptosis of U937 Cells Induced by 12-O-Tetradecanoylphorbol-13-Acetate

OBJECTIVE To explore the effects of 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA) on differentiation, apoptosis and related molecular mechanisms in U937 myelomonocytic leukemia cells.METHODS Morphological changes were analyzed by phase contrast and light microscopy, expression of the monocytic differentiation maker CD11b by direct immunofluorescence staining, cell cycle distribution and apoptosis by flow cytometry, and expression of bcl-2, Bax, survivin and p21Cip1/Waf1proteins by Western analysis.RESULTS Treatment of U937 cells with 10 nmol/L TPA induced cell adherence. The adherent cells showed G0/G1 cell cycle arrest (69.0% at 24h vs 52.1% control; P< 0.01),and morphologic changes and increased expression of the monocytic differentiation marker CD11b (63.0% at 72 h vs15.3% control; P< 0.01 ). In addition to these effects, about 20% of the cells still remained in suspension and exhibited a time-dependent increasing apoptosis, which reached 70.3% after 72 h of treatment ( P< 0.01 ). TPA treatment for 24 h induced expression of p21Cip1/Waf1 in the adherent cells, but not in the non-adherent cells. Furthermore, bcl-2 and survivin expression declined in 24 h-TPA-treated non-adherent cells compared with untreated control and adherent cells, whereas no change in the expression of Bax was detected.CONCLUSION TPA induces both differentiation and apoptosis in U937 cells,which may be related to the upregulation of p21Cip1/Waf1 and downregulation of bcl-2 and survivin expression.     

金花茶抑制人食管鳞癌细胞的生长及其诱导凋亡

目的初步探讨金花茶花朵中的天然成分对人食管鳞癌细胞的生长抑制作用及其诱导细胞凋亡的情况。方法用不同浓度的金花茶花朵的水提取物作用于人食管鳞癌Eca109细胞。采用台盼蓝染色法检测金花茶花朵的水提取物对Eca109细胞活力的影响,应用透射电镜观察金花茶花朵的水提取物对癌细胞亚结构变化的作用。结果金花茶花朵的水提取物可抑制人食管鳞癌Eca109细胞的生长,其作用呈浓度和时间依赖性关系,并且能诱导细胞凋亡。结论金花茶花朵的水提取物能抑制人食管鳞癌细胞的增殖,并可诱导其凋亡,从而为金花茶作为食管癌的化学预防制剂提供实验依据。     

Induction of Apoptosis in the Human Leukemic U937 Cell Line by Kaempferia parviflora Wall.ex.Baker Extract and Effects of Paclitaxel and Camptothecin

Kaempferia parviflora Wall.ex.Baker is a Thai medicinal herb that has high antioxidant and anti-inflammatoryactivities. Apoptotic effects of the herbal extract alone and in combination with chemotherapeutic drugs, paclitaxeland camptothecin, were here studied in the human promonocytic leukemic U937 cell line. K. parviflora extractsuppressed cell proliferation and decreased cell viability in a dose- and time-dependent manner as assessedusing the trypan blue exclusion assay. Staining of extract-treated cells with propidium iodide and examinationunder a fluorescence microscope showed condensed nuclei and apoptotic bodies. Mitochondrial transmembranepotential (MTP) decreased after treatment and the number of cells with decreased MTP also increased.Furthermore, activation of caspase-3 was found in herbal extract-treated cells. When the extract was combinedwith paclitaxel, an additive effect on U937 cell apoptosis was obtained, whereas camptothecin exerted anantagonistic effect.     

Cytotoxic effect of radiolabeled C5a on U937 cells in vitro

We studied whether the receptor (R) for C5a could be exploited to deliver the radiolabeled ligand into U937 cells. A doseresponse for uptake of ¹²⁵I-C5a was demonstrated. Incorporation of [³H]leucine by unstimulated or γ-INF-stimulated U937 cells treated with ¹²⁵I-C5a, was significantly lower compared with cells treated with ¹²⁵I alone. Trypan blue exclusion experiments indicated that γ-INF stimulated cells incubated with ¹²⁵I-C5a were less viable than cells exposed to ¹²⁵I or C5a alone. The results suggest that ¹²⁵I-C5a is internalized into myeloid cells via C5a-R and is more cytotoxic in vitro than the radiolabel alone, but only at/above a specific activity of 4 μCi/μg.     

VEGF硫代反义寡核苷酸抑制U937细胞VEGF的表达

Objective： To study the effect of VEGF antisense oligodeoxynucleotide （VEGF ASODN） on VEGF expression in acute monocyte leukemic cell line U937 in vitro. Methods： U937 cells were incubated with VEGF ASODN （final concentration as follows： 10, 20 and 30 μmol/L respectively） or scrambled sequence, compared with negative control. The expression of VEGF mRNA was measured by semi-quantitative RT-PCR, VEGF protein was measured by Western blot. Results： VEGF ASODN obviously inhibited expression of VEGF mRNA in U937 cell, compared with scrambled sequence and negative control （P〈0.05）. And the inhibition effect was most remarkable after 24 h, which is related with the dose of VEGF ASODN （P〈0.05）. Scrambled sequence groups had no significant difference compared with negative control groups （P〉0.05）. VEGF ASODN obviously inhibited expression of VEGF protein, compared with scrambled sequence and negative control （P〈0.05）. Conclusion： The expressions of VEGF at mRNA and protein levels in leukemic cell line U937 are down-regulated after being treated with VEGF ASODN.