杜仲总黄酮对成骨细胞增殖及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

目的了解杜仲总黄酮对新生大鼠颅骨体外培养成骨细胞的增殖及合成胶原蛋白的影响。方法杜仲总黄酮以质量浓度10,100,200和400μg·mL-1分别加入从2 d的SD大鼠颅骨分离培养的成骨细胞中,用MTT法评价对成骨细胞增殖的影响;采用激光共聚焦扫描显微镜检测Ⅰ型骨胶原蛋白的表达情况。结果与对照组比较,质量浓度10~200μg·mL-1的杜仲总黄酮能明显促进成骨细胞的增殖(P<0.05),但并不能显著地促进成骨细胞合成Ⅰ型胶原蛋白。结论杜仲总黄酮能直接促进体外成骨细胞的增殖。     

碱性成纤维细胞生长因子对人牙龈成纤维细胞成骨分化与增殖的影响

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)对体外培养的人牙龈成纤维细胞(HGFs)成骨分化能力与细胞增殖的影响,探索b FGF在HGFs体外诱导成骨分化过程中的作用。方法 采用组织块贴壁法体外培养HGFs,取第3代细胞进行如下分组培养。1组为普通培养基组,2组为普通培养基+10μg/L b FGF组,3组为成骨诱导组,4组为成骨诱导+10μg/L b FGF组。应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测HGFs增殖状况;用碱性磷酸酶染色法及茜素红染色法检测HGFs的成骨分化能力。结果 在普通培养基和成骨诱导培养基中,10μg/L的b FGF均能促进HGFs的增殖(P<0.01);在成骨诱导培养基中HGFs具有骨向分化能力,形成钙结节;而10μg/L的b FGF对HGFs的碱性磷酸酶活性与矿化结节形成能力均无明显影响。结论 10μg/L的b FGF能促进HGFs的增殖能力,而对其骨向分化无明显影响。     

福莫特罗对雌激素刺激大鼠成骨细胞分化与增殖的影响

目的 研究β_2肾上腺素受体阻滞剂福莫特罗对雌激素刺激大鼠成骨细胞分化与增殖的影响.方法 将不同浓度的福莫特罗加入到含雌激素(17β-E_2)培养的第二代大鼠成竹细胞中,分别于培养3、6、9、12 d后,用PNPP法检测成骨细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性,采用ELISA方法检测骨钙素浓度,用MTT法检测成骨细胞的增殖率.结果 福莫特罗可降低雌激素刺激成骨细胞碱性磷酸酶活性,并抑制成骨细胞细胞增殖,尤其当其浓度为10~(-5)及10~(-5)mol/L时.并降低成骨细胞骨钙素.结论 福莫特罗能够显著抑制雌激素刺激大鼠成骨细胞的分化和增殖作用.     

大豆异黄酮对成骨细胞增殖活性的测定和BGP mRNA的表达

目的研究不同浓度的大豆异黄酮对体外培养大鼠成骨细胞增殖活性和骨钙素(BGP)基因表达的影响。方法采用新生大鼠颅骨分离培养成骨细胞,加入不同浓度的大豆异黄酮(20、40、60、80μg/μL),另设空白对照组。MTT法测成骨细胞增殖活性。提取细胞总RNA,RT-PCR半定量分析细胞BGP mRNA表达。结果 MTT结果显示,60和80μg/μL组成骨细胞增殖活性与对照组相比显示增高,有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果显示:60和80μg/μL组BGP mRNA表达增强,有统计学意义(P<0.01)。结论大豆异黄酮可以促进成骨细胞的增殖活性和BGP基因上调,并呈明显的剂量依赖关系。     

某市5364名儿童骨碱性磷酸酶活性与血铅水平的相关性研究

目的研究儿童骨碱性磷酸酶活性与血铅水平的相关关系。方法采集2010年7月至2011年6月间我院儿保中心和儿科接诊的5364名儿童的静脉血4mL,用全血干化学免疫浓缩法测定骨碱性磷酸酶(BALP)的活性,用石墨炉原子吸收光谱法测定血铅含量。结果在5364名儿童中,BALP活性≤200U/L(正常)1296例,BALP活性在200～250U/L的(临界佝偻病)2592例,BALP活性≥250U/L(佝偻病活动期)1476例。按照血铅≥100μg/L为铅中毒的标准,对应的例数分别为21例、106例、161例。对上述儿童骨碱性磷酸酶活性(x)与血铅水平()之间进行相关性分析,发现BALP活性与其血铅之间存在着显著的正相关关系,回归方程为=46.38+0.76x,得出相关系数为r=0.4772,P<0.01,有显著性意义。结论儿童骨碱性磷酸酶活性与血铅水平之间存在显著相关性,因此加强对儿童的铅防护对于儿童的成长发育有着重要的意义。     

珠子参提取物促进大鼠成骨细胞增殖、分化、矿化及调节OPG/RANKL表达的作用

目的探讨珠子参对原代大鼠成骨细胞增殖、分化、矿化及对骨保护蛋白(OPG)和核因子-κβ受体活化因子配体(RANKL)表达的影响。方法离体培养大鼠原代成骨细胞;采用MTT法、Ed U染色法、测定碱性磷酸酶法、矿化结节染色法考察不同浓度珠子参提取物对成骨细胞活力、增殖、分化和矿化等作用的影响;采用Real time PCR法和Western blot法检测珠子参提取物对成骨细胞OPG及RANKL mRNA和蛋白表达的调节作用。结果珠子参提取物浓度在500μg·mL~(-1)时可提高成骨细胞活力;在300、400和500μg·mL~(-1)时可显著提高成骨细胞增殖、分化和矿化能力,提高OPG mRNA和蛋白的表达,降低RANKL mRNA和蛋白表达,且呈现剂量依赖性。结论珠子参提取物可在一定浓度范围内提高大鼠成骨细胞的活力、增殖、分化和矿化,同时可调节OPG/RANKL表达,这可能是其防治骨质疏松症的作用机制。     

骨生长肽羧基端5肽衍生物H13D联合阿仑膦酸钠对去卵巢模型大鼠骨代谢的影响

目的:探讨骨生长肽羧基端5肽衍生物H13D联合阿仑膦酸钠(Alen)对去卵巢模型大鼠骨代谢的影响。方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、H13D(10nmol/100g)组、Alen(10μg/100g)组及其联用组,每组8只,皮下注射相应药物,12周后检测各组大鼠腰椎骨(L1～L4)和股骨的骨密度(BMD)、血清生化指标[Ca、P、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)]、骨形态学变化。结果:各组大鼠血清中Ca、P水平比较均无明显变化。与假手术组比较,其余各组大鼠ALP、BGP水平均升高,仅模型组和联用组有统计学差异(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,其余各组大鼠ALP、BGP水平均降低,仅H13D组和Alen组有统计学差异(P<0.05);骨密度和骨形态学比较表明,联用组优于假手术组(P<0.05),假手术组优于Alen组(P<0.05),Alen组优于H13D组,H13D组优于模型组(P<0.05)。结论:H13D联合Alen治疗可明显增加去卵巢模型大鼠骨密度,改善骨微结构,具有明显的协同作用。     

柚皮苷对乳鼠成骨细胞增殖及c-fos、c-jun表达的影响

目的研究柚皮苷(naringin)对体外培养的小鼠成骨细胞增殖及c-fos和c-jun表达的影响。方法取第1代BALB/c小鼠颅盖骨成骨细胞,将柚皮苷以0.1、1、10μmol·L-1 3种浓度分别加入新生大鼠颅骨成骨细胞培养液中,MTT法观察各组对成骨细胞的增殖作用并绘制细胞生长曲线,用PNPP法测定成骨细胞内碱性磷酸酶(alkaliphos-phatase,ALP)活性,RT-PCR法检测成骨细胞c-fos和c-jun的转录水平。结果细胞生长曲线显示各组成骨细胞数量均随时间延长而增加,中、高浓度的柚皮苷能提高成骨细胞的ALP活性,促进c-fos mRNA表达(P<0.01),对成骨细胞c-jun mRNA表达增强作用不明显(P>0.05)。结论低浓度柚皮苷(0.1μmol·L-1)对骨更新作用不明显,而中、高浓度的柚皮苷(1、10μmol·L-1)能通过上调c-fos mRNA表达,促进成骨细胞的生成功能,增强骨更新。柚皮苷不是通过促进c-jun表达来促进成骨细胞增殖与分化的。     

辛伐他汀对体外成骨细胞、破骨细胞的影响

目的 探讨辛伐他汀对体外培养成骨细胞、破骨细胞的影响.方法 分离SD大鼠成骨细胞、破骨细胞,体外培养时给予辛伐他汀刺激,观察药物对成骨细胞增殖率和碱性磷酸酶以及骨细胞骨吸收的影响.结果 辛伐他汀10~(-6)～10~(-9)mol/L对碱性磷酸酶的分泌有明显促进作用,10~(-6)～10~(-8)mol/L的辛伐他汀既促进成骨细胞的增殖,又抑制破骨细胞的骨吸收.结论 辛伐他汀在体外促进骨形成、抑制骨吸收,有望成为治疗骨质疏松的约物.     

米诺环素对人牙龈上皮细胞的生物学作用

目的:通过检测米诺环素对体外培养的人牙龈上皮细胞增殖、蛋白合成、碱性磷酸酶活性的影响,探讨米诺环素局部给药的效应浓度范围.方法:将不同浓度的米诺环素(0,10,20,40,100,200 mg·L-1)分别作用于第5代(P5代)牙龈上皮细胞,孵育1,4,7,10,14 d后采用MTT法检测其对细胞增殖的影响及对细胞的碱性磷酸酶活性、蛋白合成的影响.实验结果采用SPSS13.0软件包进行分析.结果:10～200 mg·L-1米诺环素显著促进P5代人牙龈上皮细胞增殖活性(P＜0.05),100mg·L-1为最大效应浓度;20～200 mg·L-1明显促进P5代牙龈上皮细胞蛋白合成(P＜0.05);10 mg·L-1显著促进碱性磷酸酶活性(P＜0.05),20～200 mg·L-1显著抑制碱性磷酸酶活性(P＜0.05).在10～20 mg·L-1的浓度范围内,米诺环素刺激细胞增殖、促进细胞分化及蛋白合成.结论:10～20 mg·L-1可作为米诺环素局部给药的效应浓度范围.     

大黄素对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞的影响

目的　观察大黄素(emodin)对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化作用特点及量效关系,并观察大黄素对骨保护蛋白(Osteoprotegerin,OPG)mRNA表达的影响。方法　在新生大鼠颅骨成骨细胞体系中加入不同浓度的大黄素,加药后 1、2、3d用MTT法检测细胞增殖, 3、5、7、9d用PNPP法检测细胞内碱性磷酸酶含量,加药后 7d检测细胞内OPGmRNA表达的量, 24d检测细胞上清中钙和细胞内羟脯氨酸含量。结果　大黄素能促进大鼠颅骨成骨细胞ALP活性,实验中最佳作用浓度为 1×10-6 mol·L-1,最佳作用时间是 7d。大黄素能增加细胞内羟脯氨酸含量,促进OPGmRNA的表达。结论　大黄素可促进成骨细胞分化,增加OPGmRNA的表达。     

淫羊藿总黄酮对体外培养骨细胞功能的影响

目的 :观察淫羊藿总黄酮 (HEF)对体外培养成骨细胞以及破骨细胞功能的影响。方法 :分别用酶消化法和体外机械分离法获得新生SD大鼠成骨细胞、破骨细胞 ,在培养液中分别加入不同浓度的HEF ,观察成骨细胞的增殖功能、分化功能和矿化功能。以抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞数目、形态 ,Image ProPlus图像软件分析骨片上骨吸收陷窝的数目和面积。结果 :增殖率测定HEF浓度为 10 - 4mol·L- 1时与对照组比较差异有非常显著意义 (P <0 .0 1) ;碱性磷酸酶活性浓度≥ 10 - 8mol·L- 1,差异有显著意义 ;矿化结节面积/孔HEF 10 - 10mol·L- 1组和 10 - 4mol·L- 1组与对照组相比均增加(P <0 .0 1)。骨片培养 3d ,吸收陷窝计数的结果显示 ,各浓度对破骨细胞吸收功能均有抑制作用 ,仅10 - 4mol·L- 1组有统计学意义 (P <0 .0 5 )。陷窝面积 10 - 10 mol·L- 1组和 10 - 4mol·L- 1组与对照组相比 ,均无显著意义 (P >0 .0 5 )。结论 :HEF可以通过影响成骨细胞增殖、分化、矿化促进骨形成 ;而在体外减少破骨细胞数目 ,减弱破骨细胞吸收功能。     

低分子牛骨多肽制备及对大鼠成骨细胞的影响

目的从牛骨制备低分子多肽,并观察其对体外培养新生大鼠的成骨细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性和Ⅰ型胶原mRNA表达的影响。方法采用冷冻离心、等电点沉淀方法去除骨胶原,超滤法得到相对分子质量(Mr)10000以下的牛骨多肽,经Sephadex G-10脱盐,浓缩后用Tricine-SDS-PAGE电泳对Mr进行检测。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定牛骨多肽对成骨细胞增殖的影响,ALP检测试剂盒测定细胞的ALP活性,RT-PCR法检测细胞中Ⅰ型胶原mRNA表达。结果建立了牛骨多肽的制备方法。低浓度牛骨多肽组与实验对照组相比对成骨细胞的增殖不显著(P>0.05),高浓度具有显著的增殖作用(P<0.05),并呈现出剂量依赖性;中、高浓度(50~400μg/mL)牛骨多肽组可提高成骨细胞ALP的活性(P<0.05),低浓度组(10μg/mL)提高ALP的活性不显著(P>0.05);牛骨多肽能提高Ⅰ型胶原mRNA表达。结论牛骨多肽的制备工艺简单,适合规模化生产;牛骨多肽能促进成骨细胞增殖、ALP活性和Ⅰ型胶原mRNA的表达。     

二苯乙烯苷对大鼠成骨细胞增殖及分化的影响

目的研究二苯乙烯苷（THSG）对大鼠成骨细胞增殖、分化的影响。方法体外分离、培养SD大鼠成骨细胞,M1rr法检测成骨细胞增殖活性;碱性磷酸酶（ALP）活性试剂盒检测成骨细胞AIJP活性比;Elisa方法检测成骨细胞c-fos和c—ju．蛋白表达水平。结果0．03—10rag／mr的THSG干预成骨细胞24h成骨细胞活性较对照组明显增强（P〈0．05或〈0．01）;在二苯乙烯苷干预细胞后第3天时,二苯乙烯苷组成骨细胞ALP活性较对照组明显增加（P〈0．05或〈0．01）,成骨细胞c-fos和c-jun表达均较对照组明显增强（P〈0．05或〈0．01）。结论二苯乙烯苷能显著促进成骨细胞发育成熟。     

盐酸二甲双胍对成骨细胞增殖、BMP-2及Cbfa-1基因表达的影响

目的初步研究二甲双胍（MF）在体外对小鼠颅盖骨成骨细胞增殖、骨形态发生蛋白一2（BMP一2）及核心结合因子（Cbfa一1）mRNA表达的影响,探讨二甲双胍对骨代谢的可能作用机制。方法（1）分离培养原代颅盖骨成骨细胞并对其进行鉴定。（2）以乳鼠成骨细胞为体外实验模型,不同浓度（0、50、100、200、400Ixmol／L）的MF干预体外培养的成骨细胞24h后,M1vr法检测成骨细胞的增殖能力,实时荧光定量PCR法检测成骨细胞BMP-2及Cbfa-1基因表达。结果二甲双胍干预成骨细胞24h后,可促进成骨细胞的增殖,在浓度400μxmol／L的OD值最大为0．298±0．047（P〈0．05）;可促进BMP-2及Cbfa-1mRNA的表达,呈剂量效应关系。结论二甲双胍可促进成骨细胞的增殖和分化,可能通过调节BMP-2及Cbfa-1的表达,从而促进骨的形成。     

Myricetin induces human osteoblast differentiation through bone morphogenetic protein-2/p38 mitogen-activated protein kinase pathway

Myricetin (3,3',4',5,5',7-hexahydroxyflavone), a flavonoid compound, is present in vegetables and fruits. By means of alkaline phosphatase (ALP) activity, osteocalcin, and type I collagen enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), we have shown that myricetin exhibits a significant induction of differentiation in MG-63 and hFOB human osteoblasts. Alkaline phosphatase and osteocalcin are phenotypic markers for early-stage differentiated osteoblasts and terminally differentiated osteoblasts, respectively. Our results indicate that myricetin stimulates osteoblast differentiation at various stages, from maturation to terminally differentiated osteoblasts. Induction of differentiation by myricetin is associated with increased bone morphogenetic protein-2 (BMP-2) production. The BMP-2 antagonist noggin blocked myricetin-mediated ALP activity and osteocalcin secretion enhancement, indicating that BMP-2 production is required in myricetin-mediated osteoblast maturation and differentiation. Induction of differentiation by myricetin is associated with increased activation of SMAD1/5/8 and p38 mitogen-activated protein kinases. Cotreatment of p38 inhibitor SB203580 inhibited myricetin-mediated ALP upregulation and osteocalcin production. In conclusion, myricetin increased BMP-2 synthesis, and subsequently activated SMAD1/5/8 and p38 MAPK, and this effect may contribute to its action on the induction of osteoblast maturation and differentiation, followed by an increase of bone mass.     

Daidzein enhances osteoblast growth that may be mediated by increased bone morphogenetic protein (BMP) production

Daidzein, a natural isoflavonoid found in Leguminosae, has received increasing attention because of its possible role in the prevention of osteoporosis. In the present investigation, primary osteoblastic cells isolated from newborn Wistar rats were used to investigate the effect of this isoflavonoid on osteoblasts. Daidzein (2-50 microM) increased the viability (P<0.05) of osteoblasts by about 1.4-fold. In addition, daidzein (2-100 microM) increased the alkaline phosphatase activity and osteocalcin synthesis (P<0.05) of osteoblasts by about 1.4- and 2.0-fold, respectively. Alkaline phosphatase and osteocalcin are phenotypic markers for early-stage differentiated osteoblasts and terminally differentiated osteoblasts, respectively. Our results indicated that daidzein stimulated osteoblast differentiation at various stages (from osteoprogenitors to terminally differentiated osteoblasts). We also investigated the effect of daidzein on bone morphogenetic protein (BMP) production in osteoblasts that display the mature osteoblast phenotype. The results indicated that BMP2 synthesis was elevated significantly in response to daidzein (the mRNA increased 5.0-fold, and the protein increased 7.0-fold), suggesting that some of the effects of daidzein on the cell may be mediated by the increased production of BMPs by the osteoblasts. In conclusion, daidzein has a direct stimulatory effect on bone formation in cultured osteoblastic cells in vitro, which may be mediated by increased production of BMPs in osteoblasts.     

蛇床子素对体外培养骨髓基质干细胞增殖与成骨性分化的影响

目的研究蛇床子素对体外培养大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs)增殖与成骨性分化的影响。方法取大鼠股骨及胫骨全骨髓,利用全骨髓培养法培养单核层细胞,培养于含10%FBS的DMEM-F12培养液中,3d后首次换液,9d后传代培养。培养基中蛇床子素终浓度分别为1×10-4、1×10-5、1×10-6、1×10-7mol·L-1。增殖分析采用MTT法,于成骨性诱导培养d4、8、12、16测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量,d15进行钙化结节组织化学染色及计数。成骨性诱导后不同时间点提取Total RNA,RTReal-Time PCR法检测bFGF、IGF-1、Osterix与Runx-2的基因表达情况。结果蛇床子素剂量依赖性抑制BMSCs增殖,但能明显促进其向成骨性分化,表现为提高BMSCs的ALP活性、促进骨钙素分泌、钙盐沉积量、增加钙化结节数量、提高bFGF、IGF-1、Osterix和Runx-2的mRNA表达水平。结论终浓度为1×10-5mol·L-1蛇床子素能明显促进BMSCs的成骨性分化,证明蛇床子素是中药蛇床子抗骨质疏松的有效成分。