基于Hedgehog信号通路的野黄芩苷抑制HT-29细胞源性结肠肿瘤干细胞体外自我更新的研究

目的:研究半枝莲中主要成分野黄芩苷对结肠肿瘤干细胞(CSC)自我更新的影响,并从Hedgehog信号通路阐明其作用机制。方法:从HT-29人结肠腺癌上皮细胞株中分拣出结肠肿瘤干细胞(HT-29CSC),并对其进行无血清悬浮培养。用CCK-8试验研究野黄芩苷对HT-29CSC活性的影响;用干细胞球形成试验研究野黄芩苷对HT-29CSC体外自我更新的影响;用qRT-PCR研究野黄芩苷对结肠肿瘤干细胞标记物基因CD133和增殖基因ki-67表达的影响,和对结肠肿瘤干细胞中Hedgehog信号通路基因Ptch1和Gli1表达的影响。结果:终浓度为40μg/ml、80μg/ml和160μg/ml的野黄芩苷可以浓度依赖性地抑制HT-29CSC体外活性,抑制HT-29CSC体外自我更新,下调结肠肿瘤干细胞标记物基因CD133和增殖基因ki-67 mRNA水平,抑制结肠肿瘤干细胞中Hedgehog信号通路基因Ptch1和Gli1 mRNA转录。结论:野黄芩苷可以抑制结肠肿瘤干细胞活性和自我更新,其机制在于抑制Hedgehog信号通路的活性。     

黄芩苷抑制肝癌HepG-2细胞增殖的实验研究

目的观察黄芩苷对肝癌HepG-2细胞增殖的影响。方法采用MTT比色法观察黄芩苷抑制肝癌HepG-2细胞增殖；采用流式细胞仪检测黄芩苷对HepG-2细胞周期分布的影响。结果黄芩苷可抑制肝癌HepG-2细胞增殖，其作用具有时间和浓度依赖性；黄芩苷可诱导细胞凋亡，同时改变细胞周期分布，多数细胞阻滞于S期，与对照组比较，细胞凋亡率差异有显著性。结论黄芩苷可诱导肝癌HepG-2细胞凋亡，改变细胞周期分布，从而抑制细胞增殖。     

黄芩苷对前列腺癌细胞增殖和侵袭能力的抑制作用及其机制研究

目的:探究黄芩苷对人前列腺癌细胞(PC3)细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制。方法:通过CCK-8检测黄芩苷对PC3细胞增殖的作用,Transwell实验检测黄芩苷对PC3细胞侵袭能力的作用,Western blot检测黄芩苷处理后PC3细胞E-钙黏蛋白和促凋亡基因bax,caspase-3,抗凋亡基因bcl-xl以及自噬相关基因beclin-1和LC3B-Ⅱ的表达。结果:黄芩苷抑制PC3细胞的增殖和侵袭能力,且呈浓度依赖趋势;黄芩苷能促进PC3细胞E-钙黏蛋白表达;黄芩苷能上调PC细胞促凋亡基因bax和caspase-3的表达,抑制抗凋亡基因bcl-xl表达。黄芩苷能促进PC3细胞中自噬相关基因beclin-1和LC3B-Ⅱ的表达。结论:黄芩苷可以通过促进凋亡和自噬发生,增加E-钙黏蛋白的表达,抑制PC3细胞的增殖和侵袭能力。     

黄芩苷对人肺腺癌A549细胞的体内外研究

目的:探讨黄芩苷在体外对人肺癌A549细胞增殖、侵袭、迁移、对脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)新生血管形成的影响,在体内对A549细胞裸鼠移植瘤的作用.方法:调整细胞密度为1×104/mL,应用25,50,100,200,400 μmol·L-1黄芩苷作用于A549细胞24,48,72 h,采用MTT法检测黄芩苷对A549细胞的增殖抑制作用;Transwell小室法观察12.5,25,50μmol·L-1黄芩苷对A549细胞侵袭及迁移的影响;小管形成实验观察12.5,25,50μmol·L-1黄芩苷对HUVEC小管形成的影响;将A549细胞移植瘤裸鼠分为黄芩苷高剂量组(100 mg·kg-1)、黄芩苷低剂量组(50 mg·kg-1)、溶剂对照组、顺铂组(1 mg· kg-1),前3组通过ig方式给予,连续21 d;顺铂组ip连用10 d.观察黄芩苷对A549细胞裸鼠移植瘤的作用.结果:①黄芩苷能抑制A549细胞增殖,其增殖抑制率与药物浓度及作用时间呈依赖性,24,48,72 h的IC50分别为100.77,75.02,55.81 μmol·L-1.②25,50μmol·L-1黄芩苷能抑制A549细胞的侵袭及迁移,从而抑制癌细胞转移.③25,50μmol·L-1黄芩苷能抑制HUVEC小管生成,与对照组比较具有统计学意义(P＜0.05).④体内实验表明50 mg·kg-黄芩苷对A549细胞移植瘤具有一定的抑制作用.结论:黄芩苷体外可以抑制A549细胞的增殖、侵袭、迁移,抑制HUVEC小管形成,体内对A549细胞裸鼠移植瘤具有一定的抑制作用.     

野黄芩素降低MACC1表达抑制结直肠癌的研究

目的探究野黄芩素是否可通过降低MACC1的表达进而抑制结直肠癌(colorectal cancer, CRC)的恶性进展。方法分别应用MTT、划痕、Transwell小室及小鼠荷瘤实验检测野黄芩素处理对结肠癌细胞CaCo-2增殖、转移、侵袭及成瘤能力的影响;应用RT-PCR和Western Blot技术检测野黄芩素对细胞中MACC1 mRNA和蛋白表达的影响。结果野黄芩素处理可降低CaCo-2细胞的增殖活性、转移、侵袭及成瘤能力,降低MACC1的表达,且过表达MACC1后野黄芩素抑制CaCo-2细胞转移侵袭及成瘤能力的作用受到抑制,且以上差异均具有统计学意义(P0.05)。结论野黄芩素可通过降低MACC1的表达抑制CRC的转移、侵袭及肿瘤生成。     

野黄芩苷通过hedgehog信号通路抑制结肠肿瘤干细胞分化的研究

该文旨在研究野黄芩苷对结肠肿瘤干细胞体外和体内分化的影响,揭示野黄芩苷基于hedgehog信号通路的抑制结肠肿瘤干细胞分化的作用机制。用3D细胞培养法观察野黄芩苷对结肠肿瘤干细胞HT-29CSC体外生长的影响;用软琼脂克隆形成实验研究野黄芩苷对HT-29CSC细胞转化的影响;用胎牛血清诱导干细胞分化实验,研究野黄芩苷对HT-29CSC细胞体外分化的影响;用qRT-PCR法检测野黄芩苷对HT-29CSC细胞中Lgr5,c-Myc,CK20和Nanog mRNA表达的影响;用Western blot法检测野黄芩苷对HT-29CSC细胞中c-Myc,Gli1,Lgr5蛋白表达的影响。通过裸鼠皮下接种HT-29CSC细胞建立肿瘤干细胞体内分化成瘤模型,研究野黄芩苷对裸鼠体质量和HT-29CSC细胞分化成瘤的影响;用qRT-PCR法检测肿瘤组织中CD133,Lgr5,Gli1,Ptch1,c-Myc,Ki-67,CK20,Nanog mRNA表达水平;用Western blot法及免疫组织化学法检测肿瘤组织中c-Myc,Gli1,Lgr5,CD133,Ki-67蛋白表达水平。体外研究表明,野黄芩苷能够抑制HT-29CSC细胞生长、转化与分化,同时显著下调HT-29CSC细胞中Lgr5,c-Myc,CK20,Nanog mRNA水平和c-Myc,Gli1,Lgr5蛋白表达。动物实验表明,野黄芩苷显著抑制裸鼠皮下HT-29CSC细胞分化成瘤,并且下调肿瘤组织中CD133,Lgr5,Gli1,Ptch1,c-Myc,Ki-67,CK20,Nanog mRNA表达和c-Myc,Gli1,Lgr5,CD133,Ki-67蛋白表达。综上所述,野黄芩苷能够抑制结肠肿瘤干细胞的体外和体内分化,其作用机制在于下调hedgehog信号通路活性。     

黄芩苷抑制胃癌细胞SGC-7901增殖及机制研究

目的:探讨黄芩苷对人胃癌细胞SGC-7901增殖抑制作用及机制研究。方法:MTT法检测黄芩苷对人胃癌细胞SGC-790活力的影响;细胞周期检测试剂盒检测黄芩苷对人胃癌细胞SGC-7901细胞周期的影响;Western blot分析细胞周期蛋白cyclin A1、cyclin D1含量变化,及AKT蛋白含量变化。结果:MTT法显示黄芩苷(50、100、200μmol·L-1)可显著抑制胃癌细胞SGC-7901的活力,在48 h抑制程度最高。黄芩苷使胃癌细胞SGC-7901细胞周期阻滞在G1期。Western blot结果显示黄芩苷能下调cyclin A1、cyclin D1表达;并且抑制AKT磷酸化。结论:黄芩苷可使胃癌细胞SGC-7901细胞周期阻滞在G1期,下调cyclin A1、cyclin D1表达,可能与AKT信号通路有关。     

野黄芩苷对LPS诱发巨噬细胞炎症模型中MAPK信号通路及细胞因子基因表达的影响

目的通过构建巨噬细胞炎症模型,研究中药单体野黄芩苷对MAPK信号通路及细胞因子基因表达的影响。方法培养巨噬细胞RAW264.7,利用脂多糖构建细胞炎症模型,并在不同时间收集细胞。Western blot与RT-PCR法分别检测野黄芩苷对MAPK信号通路及细胞因子基因表达的影响。结果野黄芩苷能够显著抑制细胞炎症模型中JNK/SAPK与p38 MAPK信号通路的磷酸化水平,并且能够降低炎症因子TNF-α的基因表达水平,及提高抗炎细胞因子IL-10、TGF-β的基因表达水平来发挥其抗炎作用。结论野黄芩苷主要是通过抑制JNK/SAPK与p38 MAPK信号通路的磷酸化水平及提高抗炎细胞因子的基因表达水平来发挥其抗炎作用。     

黄芩苷元对人大肠癌细胞WiDr的作用

方法:WiDr细胞在含有黄芩苷元的10% FCS/MEM培养基中培养3d,用alamar蓝检测抑制细胞增殖的作用。为了探讨增殖抑制时的细胞损害以及细胞凋亡,检测LDH活性,并经Hoechst 33342进行核染色,通过琼脂糖凝胶电泳法分析DNA片段。 结果与讨论:根据alamar蓝的荧光检测,计算IC50为6.7mg/mL,明确了黄芩苷元具有抑制细胞增殖的作用。LDH活性与对照组间无显著差异。在给予黄芩苷元后第2～3d出现核固缩,表明引起细胞凋亡,但未出现DNA梯形带。黄芩苷元究竟是作用于细胞周期抑制细胞增殖,还是诱导细胞凋亡,今后将进行进一步探讨。黄芩苷元对人大…     

野黄芩苷镇痛作用的实验研究

目的:研究野黄芩苷的镇痛作用.方法:采用小鼠热板和小鼠扭体试验模型,观察药物对疼痛反应的影响.结果:腹腔注射200mg/kg野黄芩苷30～90min,小鼠对热刺激的痛阈值明显升高(与溶媒组比较P＜0.01或0.05),镇痛强度与阿司匹林相近(P＞0.05),但弱于25mg/kg吗啡(P＜0.01).皮下注射50～200mg/kg 野黄芩苷皆可显著抑制醋酸所致小鼠的扭体反应(与溶媒组比较P＜0.01或0.05),各剂量组间差异不显著(P＞0.05),镇痛强度弱于5mg/kg吗啡(P＜0.01);1.5mg/kg野黄芩苷侧脑室给药亦可显著抑制小鼠的扭体反应(与溶媒组比较P＜0.05).结论:野黄芩苷具有显著的镇痛作用,其机制与中枢作用有关.     

大鼠血中生姜泻心汤黄芩苷含量与胃运动关系研究

目的：探讨大鼠血中生姜泻心汤黄芩苷含量与胃运动关系。方法：采用高效液相色谱法（HPLC）测定大鼠血中生姜泻心汤黄芩苷的含量；通过测定大鼠胃内标记物葡聚糖篮的胃内残留率，观察生姜泻心汤对大鼠胃排空作用的影响，分析二者之间的相关性；体外实验观察黄芩苷对大鼠胃窦平滑肌细胞舒缩功能的影响。结果：生姜泻心汤对大鼠的胃排空有明显的抑制作用（P〈0．05）；相关分析结果表明，大鼠血中生姜泻心汤黄芩苷含量与生姜泻心汤的抑制胃排空作用之间存在着正相关（r=0．58，P〈0．05）；黄芩苷有促进大鼠胃窦平滑肌细胞舒张的作用。结论：黄芩苷可能是生姜泻心汤抑制胃运动的物质基础之一。     

淫羊藿苷对半胱氨酸刺激的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 研究淫羊藿苷对半胱氨酸刺激的兔血管平滑肌细胞增殖的影响,为探讨淫羊藿苷降血脂、预防动脉粥样硬化的作用机制及其药效提供实验依据.方法 兔血管平滑肌细胞增殖模型组给予不同剂量淫羊藿苷处理,采用MTT方法测定各组细胞OD值,用流式细胞术分析其细胞周期.并用TUNEL法镜下观察凋亡细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 半胱氨酸能显著促进VSMC的增殖(P<0.05),而淫羊藿苷对半胱氨酸刺激平滑肌细胞的增殖具有明显的抑制作用(P<0.05).淫羊藿苷影响了增殖平滑肌细胞的细胞周期,使S期细胞数量减少.淫羊藿苷对增殖的兔血管平滑肌细胞具有促凋亡作用,随药物浓度的增加,细胞的凋亡率增加.结论 淫羊藿苷对增殖的兔血管平滑肌细胞有明显的抑制生长及促凋亡作用,在心血管疾病的治疗方面具有重要的研究价值.     

黄芩苷对肝癌HepG-2细胞的体外抑制作用

目的:探讨黄芩苷对肝癌HepG-2细胞的体外抑制作用.方法:采用MTT比色法观察黄芩苷抑制肝癌HepD-2细胞增殖;采用流式细胞仪检测黄芩苷对HepG-2细胞细周期分布的影响,同时结合倒置显微镜、HE染色、透射电镜观察黄芩苷诱导肝癌HepG-2细胞凋亡的作用.结果:黄芩苷可抑制肝癌HepG-2细胞增殖,其作用具有时间和浓度依赖性;黄芩苷可诱导细胞凋亡,同时改变细胞周期分布,多数细胞阻滞于S期,与对照组比较,细胞凋亡率差异有显著性(P<0.01).结论:黄芩苷对肝癌HepG-2具有明显的体外抑制作用.     

高糖环境下不同浓度黄芩苷对人肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的:研究在高糖环境下不同浓度黄芩苷干预对人肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法:本研究通过体外实验,分别检测在高糖环境下不同浓度黄芩苷干预24h、48h、72h上皮细胞增殖及凋亡情况,并同时设立阴性对照组(低糖组)、阳性对照组(高糖组)和阳性药物对照组(RGZ)。结果:24h、48h时间点,黄芩苷干预下的上皮细胞以促进增殖、抑制凋亡为主要表现;72h时间点,低剂量黄芩苷(50、100μmol/L)干预下的上皮细胞仍以促进增殖、抑制凋亡为主要表现,但高剂量黄芩苷组别(200μmol/L)干预下的上皮细胞以抑制增殖、促进凋亡为主要表现。在高糖环境下黄芩苷可抑制上皮细胞凋亡,与阳性药物对照(RGZ)的趋势一致。结论:黄芩苷可能通过抑制细胞凋亡的药理作用,发挥对肾脏的保护作用。     

黄芩苷对大鼠离体小肠及胃平滑肌条收缩性的影响

目的研究黄芩苷对大鼠离体小肠及胃平滑肌条收缩性的影响。方法以大鼠离体小肠及胃平滑肌条收缩性为研究模型,考察黄芩苷在高钙、低钙及正常克氏液中对平滑肌条收缩作用的影响;在正常克氏液中分别观察黄芩苷对新斯的明、乙酰胆碱、组胺及阿托品存在下平滑肌收缩性的影响。结果在高钙、正常钙及低钙不同条件下,黄芩苷在6.25~100μmol/L范围内均剂量依赖性抑制小肠、胃平滑肌收缩,拮抗新斯的明、乙酰胆碱及组胺引起的收缩作用,且相加阿托品引起的抑制收缩作用。结论黄芩苷对小肠、胃平滑肌收缩具有明显抑制作用。     

野黄芩苷和野黄芩素在Caco-2细胞模型中的吸收转运特性

目的:研究黄酮类化合物野黄芩苷(scutellarin)和野黄芩素(scutellarein)在Caco-2单层细胞模型中的吸收和转运特性。考察缓冲液、作用时间、P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)抑制剂、多药耐药蛋白2(multidrug resistance protein 2,MRP2)抑制剂、乳腺癌耐药蛋白(breast cancer drug resistance protein,BCRP)抑制剂对野黄芩苷和野黄芩素吸收转运的影响。方法:利用Caco-2单层模型研究从绒毛面(apical,AP)侧到基底面(basolateral,BL)侧以及从BL侧到AP侧两个方向的转运过程。应用高效液相色谱法定量分析,计算转运参数和表观渗透系数(apparent permeability coefficient,Papp)。结果:两化合物在磷酸盐缓冲液和Hanks缓冲液中的Papp有差异。在磷酸盐缓冲液中野黄芩苷AP→BL侧无转运,BL→AP侧的Papp为(0.74～1.58)×10-6cm/s;野黄芩素在AP→BL侧与BL→AP侧的Papp分别为(4.33～6.79)×10-6cm/s和(1.32～2.56)×10-6cm/s。随着时间延长,Papp逐渐下降,野黄芩素的吸收转运优于野黄芩苷。P-gp抑制剂维拉帕米、MRP2抑制剂MK-571钠盐及BCRP抑制剂利血平能够促进野黄芩苷的吸收转运,维拉帕米能促进野黄芩素的吸收转运,MK-571钠盐促进野黄芩素外排。结论:野黄芩苷属于难吸收的化合物,野黄芩素吸收优于野黄芩苷,野黄芩素可通过小肠上皮被动吸收进入体内。P-gp抑制剂能够促进野黄芩苷和野黄芩素的转运,MRP2抑制剂和BCRP抑制剂能够促进野黄芩苷的转运,MRP2抑制剂促进野黄芩素外排。野黄芩苷吸收不良和外排蛋白的作用是造成其生物利用度较低的原因。     

黄芩苷对人肺腺癌LTEP-A2细胞的抑制作用及机制研究

目的:研究观察黄芩苷对人肺腺癌LTEP-A2细胞株体外的抑制作用及相关机制。方法:采用不同浓度的黄芩苷干预人肺腺癌LTEP-A2细胞株,用CCK-8方法检测不同时间点不同浓度的黄芩苷对肺癌细胞增殖的抑制程度,接着用细胞划痕试验和Transwell小室侵袭试验观察黄芩苷对肺癌细胞体外迁移、侵袭能力的影响;用Western blot进一步检测黄芩苷干预后肺癌细胞MMP-2、MMP-9、TGF-β的表达的变化。结果:黄芩苷能明显抑制肺癌细胞增殖;能不同程度降低肺癌细胞的迁移、侵袭、体外划痕愈合能力,呈浓度依赖性;黄芩苷能不同程度下调MMP-2、MMP-9表达,其中以高浓度效果明显,中浓度居中,低浓度作用稍弱,与空白对照组比较,组间差异有统计学意义,P0.05;对肺癌细胞TGF-β的表达没有显著影响,与对照组比较,P0.05。结论:黄芩苷能不同程度地降低肺癌增殖迁移侵袭的能力,其机制可能是通过下调MMP-2、MMP-9的表达从而对肺癌细胞的增殖、迁移、侵袭发挥抑制作用。     

田蓟苷对TNF-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的:通过观察田蓟苷对TNF-α诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响,探讨其治疗动脉粥样硬化的可能药效机制。方法:体外培养大鼠主动脉VSMC,采用SABC-Cy3荧光免疫组化技术鉴定其纯度;以TNF-α刺激VSMC建立细胞增殖和迁移模型;采用MTT法检测细胞的增殖,Transwell小室法检测细胞的迁移,免疫酶组化法检测细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平。结果:2.5～10μg/ml田蓟苷可不同程度抑制TNF-α诱导的VSMC增殖、迁移以及细胞内PCNA的表达,且呈现一定剂量依赖关系的趋势。结论:田蓟苷通过抑制TNF-α对VSMC的增殖和迁移作用,可能是其治疗动脉粥样硬化的药效机制之一。     

黄芩苷联合TRAIL对人肺癌细胞株A549增殖、凋亡的影响

目的:观察黄芩苷联合TRAIL对人肺癌细胞株A549增殖、凋亡的影响。方法:采用2mg/L、4mg/L、8mg/L黄芩苷和100ng/mLTRAIL单用或联用处理肺癌细胞株A549。利用MTT法检测各组细胞增殖,倒置荧光显微镜观察细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR法及Western blot法检测Survivin、X连锁凋亡抑制蛋白基因(XIAP)、死亡受体4(DR4)及死亡受体(DR5)mRNA及蛋白相对表达量。结果:相比较于对照组,黄芩苷和TRAIL单用或联用均能呈浓度依赖性抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡(P0.05),而黄芩苷和TRAIL联用比单用时细胞抑制率及凋亡率更高(P0.05)。相比较于对照组,黄芩苷组和TRAIL组A549细胞数明显降低,漂浮细胞数增多,Survivin及XIAP mRNA及蛋白表达量显著降低,DR5mRNA及蛋白表达量显著升高(P均0.05),而DR4mRNA及蛋白表达无明显差异。与黄芩苷组或TRAIL组比较,联用组A549细胞数明显降低,漂浮细胞数增多,Survivin及XIAP mRNA及蛋白表达量显著降低,DR5mRNA及蛋白表达量显著升高(P均0.05),而DR4mRNA及蛋白表达无明显差异。结论:黄芩苷联合TRAIL可协同抑制肺癌细胞株A549增殖,并促进凋亡,其作用机制可能与两者联用能增加死亡受体DR5的表达,进而抑制Survivin和XIAP蛋白表达有关。     

黄芩苷诱导结肠癌细胞株SW-1116凋亡的研究

目的：探讨黄芩苷诱导结肠癌细胞株SW-1116凋亡的作用机制，为黄芩苷在抗肿瘤方面的应用提供理论依据。方法：采用不同浓度的黄芩苷处理细胞后，用流式细胞仪检测结肠癌细胞株SW-116凋亡,结果：50，100，200μmol／L黄芩苷能够诱导结肠癌细胞SW-1116凋亡，凋亡率与剂量呈正相关，SW-1116的凋亡随药物浓度及作用时间变化，细胞周期分布呈现G1期细胞比例逐渐增高，并出现典型的凋亡峰。结论：黄芩苷能诱导结肠癌细胞凋亡，并明显抑制癌细胞增殖，具有抗肿瘤作用。