DNA甲基转移酶在急性髓系白血病中作用的研究进展

急性髓系白血病(AML)的病因目前尚未完全阐明,研究发现其与异常的表观遗传学改变密切相关。DNA甲基化是由DNA甲基转移酶(DNMT)介导的表观遗传过程。DNMT由DNMT1、DNMT3A和DNMT3B组成,是高度保守的DNA修饰酶,其在表观遗传调控中发挥重要作用,并与AML的临床特征与治疗效果的关系十分密切。深入了解DNMT在AML中的作用,有助于阐明AML的发生机制,并为其临床治疗提供潜在的靶点。     

骨髓DNA甲基转移酶基因在急性髓系白血病患者的表达及意义

本研究旨在探讨DNMT1基因在急性髓系白血病(AML)患者骨髓中的表达及其意义。应用实时定量PCR方法检测30名正常人和126例AML患者骨髓中DNMT1基因的表达。结果表明,30例正常人骨髓中检测到较低水平的DNMT1基因表达;DNMT1基因在AML患者骨髓中的表达水平增高,AML缓解后DNMT1基因的表达水平较初诊时明显降低;DNMT1基因表达水平与AML患者的年龄、性别及初诊白细胞数等临床特征无关;治疗后DN-MT1基因高表达组完全缓解率高于低表达组。结论:骨髓DNMT1基因表达水平在AML发病中可能起重要作用,可作为判断AML预后的指标之一。     

DNA甲基转移酶在骨髓增生异常综合征与白血病细胞中的表达

我们用RT-PCR方法检测骨髓增生异常综合征(MDS)，急性白血病(AL)和慢性粒细胞白血病(CML)骨髓单个核细胞(MNC)甲基转移酶(DNMTs)的表达，并探讨DNMTs表达变化和血液肿瘤的关系     

DNA甲基转移酶2在乳腺癌患者中的表达及意义

目的检测DNA甲基转移酶2(DNMT 2)基因在乳腺癌患者外周血中的表达情况,并分析其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR检测60例乳腺癌患者(实验组)及50例体检健康女性(对照组)外周血中DNMT 2的表达情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测两组间DNMT 2蛋白表达,并分析DNMT 2与各临床特征之间的关系。结果实验组DNMT 2 mRNA在外周血中的表达(5.785±3.956)与对照组(4.739±2.359)比较,差异无统计学意义(t=1.642,P=0.103),DNMT 2蛋白表达在两组间差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论DNMT 2基因和蛋白在乳腺癌患者外周血中表达不明显。     

白血病细胞DNA甲基转移酶活性改变及其意义

为探讨急性白血病DNA甲基转移酶(MTase)活性改变的规律及其与降钙素(CT)基因甲基化发生率的关系,采用~3H标记同位素示踪微量分析法测定白血病细胞MTase的活性;应用甲基化敏感的限制性内切酶消化,结合设有内外参照的多聚酶链反应(PCR)技术检测CT基因甲基化率(CTMR);采用半定量反转录PCR法测定MTase的mRNA表达水平。发现29例急性白血病病人骨髓单个核细胞CTMR平均值为(47.2±22.O)％,明显高于正常人骨髓单个核细胞对照组。15例急性白血病MTase活性平均值为(9.1±4.6)％,较非恶性血液病对照组明显为高;11例缓解期白血病MTase活性平均值(4.1±2.6)％,与对照组无明显区别;3/4例急性白血病治疗缓解后MTase活性下降。5例急性白血病同时测定CTMR及MTase,发现其CTMR及MTase均显著高于对照组。4种白血病细胞系CTMR较对照分别高19-36倍,MTase活性高14-48倍,MTasemRNA表达高41-134倍。结果提示:MTase活性增高及CT基因高甲基化是急性白血病的高发现象。MTase活性增高可能是白血病细胞CT基因高甲基化的原因。MTase mRNA表达增高可能是白血病细胞MTase活性增高的原因。抑制MTase活性,开辟治疗白血病的新途径是值得探索的课题。     

DNA甲基化对TIG1基因在急性白血病中表达的影响

本研究探讨急性白血病细胞中抑癌基因T1G1的表达及其甲基化状态。应用实时荧光定量PCR（real—timeQuantitativePCR，RT—QT—PCR）的方法，检测53例急性白血病（acuteleukemia，AL）患者及20例正常对照者（nom—alcontrols，NC）的TIG1表达情况，并通过甲基化特异性PCR（methylation—sepecificPCR，MS—PCR）检测TIGl基因的甲基化状态。应用去甲基化试剂处理KG-1a、U937和I（562细胞株，观察其基因转录水平和甲基化状态之间的关系。结果表明，TIG1mRNA在NC中高表达，而在AL患者中低表达；AL患者中TIG1的异常甲基化率高达75％（40／53例），而在正常标本中不发生甲基化；在初治AL中，发生甲基化的患者TIGj的表达水平明显低于未甲基化的患者；Kg-1a、U937和K562细胞株TIG1基因启动子CpG岛均存在过甲基化，应用去甲基化试剂处理后，TIG1基因启动子CpG岛甲基化程度降低，T1G1的表达都得到了恢复，并且TIG1的表达随着5-Aza—CdR浓度增加而增高。结论：TIG1基因表达的减少与急性白血病的发病有关，而甲基化是导致TIG1基因转录沉默的重要机制之一。     

多囊卵巢综合征患者子宫内膜胰岛素受体基因甲基化及DNA甲基转移酶表达水平研究

目的分析多囊卵巢综合征(PCOS)患者子宫内膜胰岛素受体(INSR)基因甲基化及DNA甲基转移酶(DNMT)表达水平。方法随机选择本院2014年5月至2016年6月收治的PCOS患者80例,根据是否合并胰岛素抵抗(IR),分为IR组及非胰岛素抵抗(NIR)组,比较两组患者体质量指数(BMI)、腰臀比(WHR)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、HOMA稳态模型指数(HOMA指数)、性激素水平,以及子宫内膜组织INSR基因甲基化水平和DNMT1、DNMT3a、DNMT3b表达水平。结果 IR组BMI、WHR、FBG、FINS、HOMR指数均明显高于NIR组(P0.05)。两组均未检出INSR基因完全甲基化患者,但IR组部分甲基化检出率高于NIR组(P0.05)。DNMT1、DNMT3aH-score评分比较差异无统计学意义(P0.05),但IR组DNMT3b H-score评分明显高于NIR组(P0.05)。结论 POCS患者子宫内膜INSR基因部分甲基化检出率较高,POCS发病可能与DNA表观遗传学调控有关,合并IR的POCS患者子宫内膜DNMT3b表达水平较高,说明POCS属于表观遗传学疾病,且合并IR的POCS患者是子宫内膜癌的高发人群。     

巯嘌呤甲基转移酶基因的单核苷酸多态性与儿童急性白血病

巯嘌呤甲基转移酶（TPMT）催化巯嘌呤类药物的S－甲基化。TPMT具有遗传多态性，属常染色体共显性遗传，约1／300为TPMT缺乏。TPMT缺乏的急淋白血病（ALL）患儿，用标准剂量6－巯基嘌呤（6－MP）治疗，其血液组织中累积大量的巯嘌呤核苷酸（6－TGN），可导致严重的骨髓毒性。TPMT基因型与红细胞和肿瘤细胞内酶活性有关，而且与毒性反应密切相关。目前，TPMT的分子基础基本明确，绝大多数为异是序列上的单个革酸的不同，即单核苷酸多态性（SNPs）。6－MP的剂量强度是儿童ALL无病生存率的影响因素，而TPMT基因型也可能与继发性肿瘤有关。因此，进一步明确TPMT对巯嘌呤治疗效应的影响，以及毒性反应的危险性，有利于提高巯嘌呤类药物的有效性和安全性。     

DNA甲基转移酶1、3b基因在肾癌的表达

肾细胞癌是我国泌尿系统常见的肿瘤之一。肿瘤的发生与抑癌基因的失活有关,研究发现,抑癌基因甲基化是其失活的重要机制之一。甲基化并不使基因序列发生改变,而是使抑癌基因转录失活,表达受抑制,导致肿瘤形成。DNA甲基化是由DNA甲基转移酶（Dnmt）催化,将胞嘧啶转化为5-甲基胞嘧啶。人类Dnmt在CpG岛甲基化过程中至少有Dnmtl、Dnmt3a和Dnmt3b参与。Dnmtl和Dnmt3b是DNA甲基化的关键酶,其表达直接影响着DNA甲基化状态。本研究采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测Dnmtl、Dnmt3bmRNA在肾细胞癌组织及正常肾组织中的表达,并探讨其表达的临床意义。     

Maf-b基因在初治白血病患者的表达及临床意义研究

本研究旨在检测白血病患者maf-b mRNA的表达水平并评估其临床意义。采用实时荧光定量PCR方法检测初治白血病患者maf-b mRNA的相对表达水平,分析其在不同类型白血病中的表达差异及其与实验室指标、化疗反应的关系。结果表明,初治白血病患者maf-b mRNA的表达低于正常对照组,差异有统计学意义(p0.01);分组分析的结果显示:急性髓系白血病(AML)患者maf-b mRNA的表达低于正常对照组,差异有统计学意义(p0.01),且maf-b mRNA的表达水平与外周血白细胞计数、CD34表达呈正相关(p0.01)。AML(除外急性早幼粒细胞白血病)患者中,maf-b mRNA的表达水平与AML患者的化疗反应无明显相关(p0.01)。急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性髓系白血病(CML)患者maf-b mRNA的表达亦低于正常对照组,差异有统计学意义(p0.01)。结论:AML患者maf-b基因表达降低,而maf-b基因的异常表达可能与AML细胞的异常增殖有关,并可能成为AML新的预后因子。     

急性早幼粒细胞白血病中常见白血病基因突变的检测及其临床意义

本研究旨在探讨多种常见白血病基因突变是否协同参与急性早幼粒细胞白血病(APL)的发病机制,探讨这些突变与APL患者的临床表现、细胞遗传学及分子危险度分层的关系。收集了2005年2月至2010年1月收治的84例初治APL患者标本,采用基因组DNA-PCR方法分析骨髓单个核细胞中各个基因的突变情况及突变阳性患者的临床特征。结果表明,84例APL患者中合并突变的患者51例(60.7%),其中FLT3-ITD突变发生率最高,达到27.4%(23/84);其次,WT1突变12例,FLT3-TKD突变9例,TET2突变7例,N-RAS突变5例,ASXL1突变4例,EZH2突变2例,MLL-PTD、IDH1及CBL各突变1例;而JAK1、DNMT3、c-Kit、NPM1、IDH2、RUNX1、JAK2(V617F)等常见白血病相关基因未发现突变。结合临床资料,FLT3-ITD突变阳性患者的白细胞计数较高,N-RAS突变阳性患者的血小板计数较低,与野生型患者相比差异均有统计学意义(P<0.05);具有FLT3-ITD突变或N-RAS突变的患者总体生存期较无相关突变组患者明显缩短,差异有统计学意义(P<0.05)。单纯t(15;17)易位(69/84)患者与附加其他染色体异常(13/84)患者的总体生存时间无明显差别。结论:FLT3-ITD突变是APL患者常见的分子突变类型,其与N-RAS突变均为APL患者的不良预后因素;APL中合并其他染色体异常不影响患者的总体生存期。     

PLK-1在急性白血病细胞中的表达及意义

为了探讨急性白血病细胞中plk-1基因及其蛋白的表达情况和意义，并初步了解PLK-1蛋白在急性白血病细胞中的分布情况，通过抽取急性白血病患者、骨髓良性增生者及正常人的骨髓或外周血单个核细胞作为研究对象，应用RT-PCR技术及流式细胞术检测plk-1mRNA和PLK-1蛋白在急性白血病细胞中的表达，用荧光显微镜观察PLK-1蛋白在急性白血病细胞中的分布。结果表明：急性白血病细胞plk-1在基因水平及蛋白质水平上表达均明显增高；荧光显微镜检查显示细胞分裂间期PLK-1蛋白较高浓度地、均匀地散在分布于急性白血病细胞内，在有丝分裂过程中，姊妹染色单体拉开至细胞两极时PLK-1蛋白主要分布在姊妹染色单体之间。而正常骨髓细胞和良性增生骨髓细胞plk-1在基因水平和蛋白质水平几乎均不表达。结论：PLK-1蛋白对急性白血病细胞的异常增殖可能起重要作用，其表达的高低与恶性程度有关。PLK-1蛋白或其基因有可能作为抗瘤药物新的靶点，并可作为判断急性白血病疗效及预后的有效指标之一。     

凋亡抑制基因aven在急性髓系白血病的表达及其临床意义

本研究旨在探讨AML患者凋亡抑制基因avertmRNA的表达情况,分析其临床意义,为预后评估提供实验依据。应用实时荧光定量PCR方法检测69例初诊AML患者外周血白细胞avenmRNA的表达水平,分析avenmRNA的表达水平与患者的年龄、性别、白细胞数,血小板计数、血红蛋白和LDH水平、外周血和骨髓的原始细胞比例、FAB分型、患者的疗效和复发的关系,21名正常人的外周血作为对照。结果表明：69例初诊AML患者avenmRNA表达水平的中位值为37．2（11．72—178．93）％,正常人外周血白细胞aven mRNA表达水平中位值为28．81（10．81-50．98）％,AML患者avenmRNA表达水平明显高于正常人（p=0．006）。avenmRNA的表达水平与患者的年龄具有明显的相关性（r=0．25,P=0．039）,以AML患者中位年龄（44岁）为界分为2组,年龄大于／等于44岁组aven mRNA表达水平[中位值50．08％,（18．88—152．02）％]明显高于年龄小于44岁组[中位值32．41％,（11．72—178．93）％],（P=0．018）。aven mRNA的表达水平与患者Hb水平和FAB分型具有明显的相关性（r=0．29,P=0．019;r=0．253,P=0．036）。2个化疗疗程后avenmRNA表达水平低于中位值组的完全缓解率（25／30,83．33％）高于avenmRNA表达水平高于中位值组（21／30,70％）,但差别无统计学意义（P=0．22）。复发患者avenmRNA的表达水平与无复发者相比无明显升高（P=0．076）。结论：初诊AML患者凋亡抑制基因avenmRNA的表达水平明显升高,可能与AML的发病有关,但尚未发现基因avcilmRNA的表达情况与疾病的疗效和复发之间的关系。     

细胞周期蛋白G2 mRNA在急性白血病患者中的表达及临床意义

为了探讨急性白血病(AL)患者中细胞周期蛋白G2(cyclin G2)的mRNA表达及其临床意义,采用逆转录 聚合酶链反应(RT-PCR)法检测74例急性白血病患者及10例正常人骨髓细胞中的cyclin G2、G1和P53的mRNA 表达,对cyclin G2的阳性扩增产物进行序列分析。结果表明:①AL患者中cyclin G2的阳性率及mRNA表达水平 (52.7％,0.552±0.498)明显低于正常人(100％,1.953±0.675)(P<0.01)。②在初治的AL患者中,cyclin G2 阳性表达患者的完全缓解(CR)率高于阴性者(分别为69.2％和40％;P<0.05)。③耐药组AL患者cyclin G2的 阳性率(43.6％)明显低于敏感组(68.6％)(P<0.05)。④对初治28例CR的AL患者进行随访14.3个月(11- 18.5个月),11例cyclin G2低表达患者中有10例复发(90.9％),而17例cyclin G2高表达患者中有7例复发 (41.2％),两者之间有显著性差异(P<0.05)。结论:CyclinG2是影响AL患者CR的因素,其高表达可能是AL患 者良好预后的指标之一。     

抗凋亡基因livin在急性非淋巴细胞白血病细胞中的表达及临床意义

为了探讨急性非淋巴细胞白血病（ANLL）原代细胞livin基因表达及临床意义,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测46例急性非淋巴细胞白血病患者livin基因mRNA表达水平,以10名健康人为正常对照,以HL-60细胞株为阳性对照。结果表明,livin mRNA在初治ANLL患者中的表达较正常对照组明显升高（p〈0.05）;治疗缓解后表达明显下降（p〈0.05）;复发后其表达又升高。在初治ANLL患者中,livin mRNA表达阳性的患者完全缓解率（CR）低于表达阴性的患者（p〈0.05）。结论：livin基因过度表达和ANLL的发病呈正相关;livin基因高表达的患者完全缓解率低,预后不良;livin可作为急性非淋巴细胞白血病的发病、复发及预后判断的指标之一。     

同源盒基因HoxA10在急性白血病中的表达及相关研究

本研究探讨HoxA10基因在急性白血病患者中的表达及其临床意义.运用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法,检测50例急性白血病患者和10例对照者（7例正常人、3例ITP）中HoxA10mRNA的表达水平;分析其在急性白血病中的表达规律及与临床预后的关系.结果表明：HoxA1o在各型急性髓系白血病中均表达,在急性淋巴细胞白血病和部分对照者中低表达.3例正常人不表达HoxA10.HoxA10 mRNA表达水平在急性髓系白血病明显高于急性淋巴细胞白血病患者和对照组（P＜0.01）,在急性髓系白血病中,M1型和M2型表达水平高于M4型和M5型,在M3型有显著高表达.骨髓中原、幼细胞比例和HoxA10mRNA表达水平呈正相关关系（r=0.635,P＜0.01）.未缓解组9例患者HoxA10表达水平高于缓解组8例患者,但无显著差异（P=0.258）.1例M2患者和1例M5患者缓解后HoxA10不表达.结论：HoxA10在急性髓系白血病中有异常高表达,具有髓系特异性,可作为区别淋系和髓系的标志性基因,但不是肿瘤细胞特有的基因,而是一类调控造血的转录因子,能与多种协同因子共同影响白血病的发生和发展.HoxA10的表达水平与肿瘤细胞负荷有关,与急性白血病的疗效有一定关系.     

SET-NUP214融合基因在急性T淋巴细胞白血病患者中的表达及临床意义

本研究旨在探讨SET-NUP214融合基因在急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)中的表达,分析伴有SET-NUP214的T-ALL的临床及分子生物学特征。运用RT-PCR检测58例T-ALL患者骨髓标本中SET-NUP214的表达,以间期荧光原位杂交(FISH)及微阵列比较基因组杂交(Array-CGH)检测9q34缺失,基因测序法检测PHF6和NOTCH1基因突变。结果表明,仅在6例T-ALL患者中检测到SET-NUP214融合基因的表达。除T系抗原标记外,这些患者均表达髓系抗原CD13和(或)CD33,其中4例患者经FISH检测到9q34缺失,3例患者经Array-CGH检测到del(9)(q34.11q34.33)。6例SET-NUP214阳性的T-ALL患者中有4例检测到PHF6基因突变,5例检测到NOTCH1基因突变。结论:SET-NUP214融合基因多由染色体9q34的缺失所致,SET-NUP214阳性的T-ALL常伴有PHF6及NOTCH1基因突变。     

c-cbl在急性非淋巴细胞白血病细胞中的表达及临床意义

目的 探讨急性非淋巴细胞白血病(ANLL)细胞c-chl基冈表达及临床意义.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测47例ANLL患者c-cbl基因mRNA表达水甲,以20名健康人为正常对照.结果 c-cbl mRNA在初发ANLL患者中的表达较正常对照组明显降低(P<0.05);治疗缓解后表达明显升高(P<0.05).在初治ANLL患者中,c-cbl mRNA表达阳性的患告完全缓解率低于表达阴性的患者(P<0.05).结论 在ANLL的细胞中,c-cbl基因表达降低;c-chl基因低表达患者治疗后的完全缓解率低,预后不良.