端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸诱导人胃癌细胞凋亡模型构建的研究

目的：观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对胃癌细胞株的作用。方法：用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与胃癌细胞株共同孵育一定时间后,观察细胞形态变化,观察细胞DNA含量的分布,测定端粒酶活性。结果：端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导胃癌细胞凋亡,抑制端粒酶活性,在形态学上表现为细胞膜起泡,染色质固缩,核碎裂,凋亡及小体形成;电泳呈凋亡特征性Ladder带;流式细胞仪分析显示,在D1期前出现亚2倍体凋亡峰;端粒酶活性抑制。结论：端粒酶反义寡取脱氧核苷酸能诱导胃癌细胞凋亡,抑制端粒酶活性,抑制端粒合成,从而抑制胃癌细胞的生长。     

WT1反义寡核苷酸对白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的 了解ＷＴ１反义寡核苷酸对白血病细胞增殖和凋亡的影响。方法 应用ＷＴ１基因的反义寡核苷酸（ＷＴ１ＡＳＯ）处理Ｋ５６２、Ｕ９３７、ＨＬ－６０细胞系,白血病患以及正常人骨髓细胞,然后以台盼蓝拒染法、细胞集落法及流式细胞仪检测法确定白血病细胞的增殖和凋亡。结果 ＷＴ１ ＡＳＯ能够抑制ＷＴ１表达阳性的Ｋ５６２细胞生长,对ＷＴ１表达阴性的Ｕ９３７细胞则无抑制作用;ＷＴ１ ＡＳＯ对８例急性髓系白血病患     

c-myc小干扰RNA诱导人髓系白血病细胞系HL-60细胞凋亡

本研究探讨c-myc小干扰RNA对白血病细胞系HL-60诱导凋亡的作用。将体外合成的siRNA转染HL-60细胞,观察形态学变化,应用MTT法绘制细胞生长曲线,用细胞集落培养观察c-mycsiRNA对HL-60细胞增殖的影响;应用DNA片段化分析细胞的凋亡,RT—PCR及Western blot检测c-mycsiRNA作用前后Comyc基因mRNA及蛋白表达水平的变化。结果表明：ComycsiRNA能明显抑制HL-60细胞增殖,半数抑制浓度（IC50）约为150nmol／L;DNA片段化的检出证实C-mycsiRNA能有效诱导HL-60细胞调亡,凋亡率与药物作用时间呈正相关。C-mycsiRNA与HL-60细胞作用后C-myc基因和蛋白的表达水平与作用时间呈负相关。结论：C-mycsiRNA能有效抑制HL-60细胞增殖,降低C-myc基因和蛋白的表达,诱导其凋亡。     

WT1基因在急性髓系白血病的表达及临床意义

ＷＴ1基因 (Ｗｉｌｍｓ’ｔｕｍｏｒｇｅｎｅ)是最早发现的与Ｗｉｌｍｓ’肿瘤发生、发展有关的基因。近年来文献报道在部分白血病细胞系及白血病细胞 ,尤其是急性髓系白血病 (ＡＭＬ)中 ,ＷＴ1表达增高[1 4 ] 。我们应用逆转录 聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)方法测定了 30例ＡＭＬ患者化疗前后ＷＴ1ｍＲＮＡ的表达并对部分ＷＴ1 者进行了随访观察 ,探讨ＷＴ1基因在ＡＭＬ发病中的作用及其在检测微小残留病 (ＭＲＤ)方面的意义。对象和方法1　研究对象1.1　白血病细胞系 :Ｋ5 6 2细胞系 (慢性粒细胞白血病红白血病变细胞系 )作为阳性对照。1.…     

双氢青蒿素抑制PTEN/AKT通路诱导急性髓系白血病细胞凋亡

目的:研究双氢青蒿素对人急性髓系白血病细胞增殖抑制及凋亡的诱导作用。方法:采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖抑制率及Z-VAD-FMK抑制DHA诱导细胞凋亡的作用;用间接免疫荧光技术检测细胞内Cleavedcaspase3的表达;应用Western blot检测细胞凋亡相关蛋白C-PARP、Cleaved-caspase3、Caspase3及PTEN、p-Akt、AKT、β-Actin蛋白的表达。结果:DHA呈剂量依赖性诱导急性髓系白血病细胞的凋亡(r_(Kasumi-1)=-0.959,r_(KG-1)=-0.956)。DHA能诱导急性髓系白血病细胞内Cleaved-caspase3和C-PARP的累积。激活PTEN基因,抑制Akt蛋白磷酸化。凋亡抑制剂Z-VAD-FMK可部分恢复DHA抑制细胞增殖的活性。结论:双氢青蒿素抑制PTEN/AKT通路诱导急性髓系白血病细胞凋亡。双氢青蒿素有望成为安全有效的治疗急性髓系白血病药物。     

西罗莫司抑制急性髓系白血病细胞株Kasumi-1增殖的研究

目的探讨不同浓度西罗莫司对急性髓系白血病细胞株Kasumi-1增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法 MTT法检测西罗莫司对Kasumi-1细胞增殖的影响,流式细胞术检测西罗莫司对Kasumi-1细胞凋亡和细胞周期的变化,免疫荧光法观察西罗莫司处理前后Kasumi-1细胞核形态变化。结果不同浓度的西罗莫司均能抑制Kasumi-1细胞的增殖,促进其凋亡,并使细胞阻滞在G0/G1期。Kasumi-1细胞对西罗莫司表现为剂量依赖性,并在100 ng/mL左右达到最大效应。结论西罗莫司能够显著抑制Kasumi-1细胞增殖,并对凋亡起促进作用。     

抑制SDF-1活性对人急性髓性白血病HL-60细胞系增殖的影响

本研究通过观察抑制SDF-1活性对HL-60细胞增殖活性的影响，探讨趋化因子SDF-1在维持HL-60细胞生存能力中的作用。培养骨髓基质细胞，并与HL-60细胞共培养，采用SDF-1受体CXCR4单克隆抗体阻断SDF-1生物活性后，用MTT法检测HL-60细胞活力、用流式细胞术观察HL-60细胞增殖周期变化、检测细胞膜表面CXCR4表达，同时检测CXCR4单克隆抗体应用前后HL-60细胞内钙离子浓度变化。结果显示，抗CXCR4单克隆抗体可下调HL-60细胞膜表面CXCR4的表达，同时处于G0／G1期的细胞增多，处于S期的细胞减少，而白血病细胞存活率下调，细胞内钙离子浓度降低。结论：抑制SDF-1活性可在一定程度上抑制白血病细胞的增殖。     

三氧化二砷对骨髓瘤细胞系U266抑制增殖及诱导凋亡的机制研究

本研究探讨三氧化二砷(As2O3)在体外对骨髓瘤细胞系U266的生物学效应及其机制。用MTT法观察As2O3对U266细胞增殖的影响,用流式细胞术、DNA凝胶电泳法分析As2O3对U266细胞凋亡的影响,以RT-PCR法检测2μmol/LAs2O3不同处理时间对U266细胞人端粒酶逆转录酶蛋白催化亚单位(hTERT)mRNA的表达变化,用Western blot法检测As2O3不同处理时间对U266细胞procaspase-3、bcl-2及hTERT蛋白水平的表达变化。结果表明:As2O3能明显抑制U266细胞增殖,半数抑制浓度(IC50)为2μmol/L;As2O3能诱导U266细胞凋亡,呈现剂量和时间依赖性;2μmol/L As2O3不同时间处理U266细胞后procaspase-3蛋白及hTERT mRNA、蛋白表达呈时间依赖性降低,而bcl-2蛋白表达未发生变化。结论:As2O3通过改变线粒体跨膜电位,触发了U266细胞的线粒体凋亡途径,导致了caspase-3的活化,最终诱导U266细胞凋亡;hTERT表达下调也是As2O3诱导U266细胞凋亡的重要作用机制。     

急性髓系白血病患者白血病干细胞WT1基因表达水平及其临床意义

目的 探讨急性髓系白血病(AML)患者WT1基因高表达是否发生在白血病干细胞(LSC)阶段及其意义.方法 采用流式细胞术分选AML患者CD34~+ CD38~- CD123~+细胞,实时荧光定量RT-PCR方法 检测其总WT1、+17AA、+KTS异构体的表达,计算出WT1(+/+)、wT1(+/-)、WT1(-/+)、WT1(-/-)四种异构体的比例,并与来源于正常人和AML患者骨髓的CD34~+ CD38~- CD123~-干细胞比较;同时分析AML患者LSC WT1表达水平与缓解率、生存期的关系.结果 AML患者骨髓CD34~+CD38~-CD123~+细胞WT1相对表达水平最高(0.034±0.034),AML患者骨髓CD34~+CD38~-CD123~-细胞群表达次之,来源于正常人的骨髓CD34~+ CD38~- CD123~- 细胞表达最低,三组之间比较差异有统计学意义(P<0.05);三群细胞中均以+17AA为主,组间比较差异无统计学意义.+KTS异构体比例在正常干细胞中最高,为0.57±0.04,在AML患者CD34~+ CD38~- CD123~- 细胞群中所占比例最低,为0.50±0.12,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);三种细胞群中四种异构体的表达比例各组之间比较差异无统计学意义(P>0.05),均以WT1(+/+)为主,WT1(-/-)最少.CD34~+ CD38~- CD123~+ LSC中WT1表达水平与患者性别、年龄、FAB分型及骨髓中原始细胞比例无明显相关性,但AML患者WT1高表达组原始细胞群CD34~+ 细胞比例明显高于WT1低表达组(P<0.01).WT1高表达组患者CR率为21.1%,低表达组CR率为59.1%,差异有统计学意义(P<0.05).对41例患者跟踪随访118(3-290)d,WT1 mRNA高表达组中位生存时间77[95%可信区间(CI)45-108]d,较低表达组中位生存时间158(95% CI 100-215)d短,差异有统计学意义(P= 0.041).结论 AML患者WT1高表达发生于LSC阶段,其异构体比例与正常干细胞比较差异无统计学意义.干细胞阶段WT1高表达常导致患者缓解率低、生存期短.     

榄香烯乳对HImeg细胞系增殖抑制和诱导凋亡作用

榄香烯乳对ＨＩｍｅｇ细胞系增殖抑制和诱导凋亡作用周锡建干祥生王立祥钱建美李川晟孟沛霖国内外已经发现众多的药物在体外可诱导白血病细胞凋亡。榄香烯乳是我国自行开发研制的抗癌新药。它是从中药莪术中提取的抗癌有效成分，初步临床应用显示有广谱抗肿瘤活性。我们从...     

bcl-2反义寡聚脱氧核苷酸抑制HL-60细胞生长的研究

在体外培养中研究了基因的反义寡聚脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleo-tide,ASON)对HL-60细胞生长增殖的影响。根据bcl-2基因cDNA的序列分析,以bcl-2mRNA翻译起始区域前15个核苷酸为作用靶序列,人工合成了15聚ASON片段,同时合成15聚无关寡聚核苷酸(ODN)片段,以作序列特异性对照。把上述ASON和无关ODN片段与HL-60细胞共培养,同时设置空白对照组,作用一定时间后分别测定细胞动力学和~3H-TdR掺入率。实验发现:从3.5—30.0μmol/L的ASON对细胞生长有不同程度抑制作用,低于10μmol/L时抑制作用小,大于10.0μmol/L时抑制作用显著,浓度愈大,抑制程度愈大,而无关ODN作用组的细胞生长状态与空白对照组无显著差别,作用48小时后浓度3.5μmol/L抑制率为6％,而20.0μmol/L时上升为40％;作用96小时后3.5μmol/L的ASON抑制率是5.1％,30μmol/L的抑制率高达67％。相同浓度的ASON作用不同时间后,细胞生长率各不相同,当浓度达到14.0μmol/L时,48小时的细胞生长抑制率达22％,72和96小时的抑制率分别为25％和29.3％。HL-60细胞被ASON处理后,培养体系中死细胞数随时间延长而增加,浓度在10—30μmol/L范围内,死细胞率由2％增到50％,但在无关ODN及空白对照组中未观察到这种现象。同时发现由于bcl-2的ASON作用使HL-60细胞的     

芒果甙诱导慢性髓系白血病K562细胞凋亡

本研究目的是探讨芒果甙对慢性髓系白血病细胞系K562细胞的作用及其作用机制。用噻唑蓝(MTT)法观察芒果甙时K562细胞生长的影响；应用细胞形态、DNA凝胶电泳和流式细胞术等观察芒果甙时K562细胞凋亡的诱导作用；用RT-PCR方法观察芒果甙作用K562细胞后ber／abl融合基因在转录水平的改变。结果发现。25—200μmol／L浓度的芒果甙均能显著抑制K562细胞的增殖，呈剂量和时间依赖性。并能诱导K562细胞凋亡。随着药物作用浓度的增加，ber/abl融合基因的转录下调。结论：芒果甙可抑制K562细胞的增殖。并可能通过抑制bcr／abl融合基因的表达诱导K562细胞凋亡。     

急性髓系白血病中HtrA2和WT1基因的表达

本研究通过检测HtrA2和WT1基因在急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞及细胞系中的表达,探讨其表达水平与临床变量的关系及二者之间的相关性。应用RQ-PCR方法检测104例初诊AML患者的HtrA2和WT1基因表达水平;比较其表达量与正常对照的差别,并分析与年龄、性别、白细胞计数、诊断分型、预后分型及治疗疗效的关系;比较治疗前后表达量的变化,分析HtrA2与WT1二者相关性。结果表明:AML患者骨髓细胞中HtrA2表达量显著低于正常对照组(P<0.01),而WT1则显著高于正常对照组(P<0.01);二者表达量与患者年龄、性别、白细胞计数无关;HtrA2在不同的NCCN预后分组中表达量无显著差异,而WT1在预后良好组表达量明显低于预后中等组(P=0.003);无论完全缓解(CR)组还是非完全缓解(non-CR)组HtrA2表达量在治疗后均显著高于治疗前(P<0.05),而WT1表达量只有在CR组治疗后才低于治疗前(P<0.01),non-CR组治疗后虽然也低于治疗前,但差异无统计学意义;HtrA2与WT1的表达水平呈弱负相关(r=-0.249,P=0.011)。结论:HtrA2和WT1表达与白血病的发生、发展密切相关,二者表达水平呈负相关,上调HtrA2基因的表达和干扰WT1基因的表达有望成为白血病治疗的靶点。     

WT1突变与急性髓系白血病预后关系的Meta分析

目的采用Meta分析的方法总结近十年WT1突变与急性髓系白血病(AML)预后的关系。方法检索PubMed数据库,英文检索词为WT1 mutation和Acute Myeloid Leukemia,检索中国知网(CNKI)、万方数据库(WanFang),中文检索词为WT1突变急性髓系白血病,检索时间为2006年1月1日至2015年12月31日。结果本研究共纳入5篇英文文献,样本量共计1 488例。Meta分析结果表明,在总体AML中WT1野生组与突变组相比完全缓解率(CR)(RR=0.91,95%CI:0.81~1.04,P=0.16)和复发率(RR)(RR=1.30,95%CI:0.74~2.26,P=0.36)差异无统计学意义,但在CK-AML中的CR(RR=0.86,95%CI:0.75~0.98,P=0.03)及总体AML中的总生存期(OS)(HR=1.77,95%CI:1.05~2.99,P=0.03)差异存在统计学意义。结论目前Meta分析结果表明WT1突变对AML患者尤其CK-AML患者的预后有一定的影响。由于受纳入文献数量的限制,仍需纳入更多的样本,以得到更加明确的WT1突变对于AML患者预后的影响。     

大鼠gp130反义寡核苷酸阻断rhIL-6对大鼠急性髓系白血病细胞系R2体外增殖的抑制效应

IL 6受体 (IL 6R) β链是分子量为 130kD的膜结合糖蛋白 (gp130 ) ,它是介导IL 6生物效应的信号转导子。我们的实验已经证实了重组人IL 6 (rhIL 6 )可作用于大鼠急性髓系白血病细胞系R2 ,rhIL 6与R2细胞表达的hIL 6R结合并与大鼠 gp130缔合而转导IL 6的信号 ,产生其生物效应。本文在体外液体培养中试验观察到 ,大鼠 gp130的反义寡核苷酸片段被摄入R2细胞后 ,对rhIL 6生物效应产生明显的影响。我们的研究结果表明 ,所合成的大鼠gp130反义寡核苷酸片段在细胞体外液体培养中可部分阻断rhIL 6对R2细胞的增殖抑制效应 ,在最适的终浓度 ,其阻断率可达 (45± 7) %。     

人髓系白血病细胞系的建立及其应用

各种重组生长因子的应用,使许多生长因子依赖性白血病细胞系得以建立。本文对白血病细胞系建立的方法及成系的标准进行了扼要介绍,汇列了近年建立的各种髓系白血病细胞系,并简介了这些细胞系在白血病细胞诱导分化、信息转导及白血病的发生等方面的应用。     

化疗药物体外诱导急性髓系白血病细胞凋亡的临床意义

我们采用ＴｄＴ介导的脱氧核苷酸切口和缺口末端标记法 (ＴＵＮＥＬ)及超微结构观察等方法 ,对 18例初治急性髓系白血病 (ＡＭＬ)患者骨髓白血病细胞进行体外化疗药物诱导凋亡与临床疗效关系的初步研究 ,以探讨体外化疗药物诱导白血病细胞凋亡在临床化疗疗效预测中的实际应用价值。病例和方法1　病例和标本　 18例初治ＡＭＬ患者来自第二军医大学长海医院血液科和上海医科大学华山医院血液科。其中男 8例 ,女 10例 ;中位年龄 46岁 (14～ 70岁 ) ;Ｍ1 1例 ,Ｍ2 9例 ,Ｍ31例 ,Ｍ44例 ,Ｍ5 2例 ,Ｍ71例。所有患者均经形态学、细胞化学 (Ｍ7经电…     

人髓系白血病细胞系的建立及其应用

各种重组生长因子的应用，使许多生长因子依赖性白血病细胞系得以建立，本文对白血病细胞系建立的方法及成系的标准进行了扼要介绍，汇列了近年建立的各种髓系白血病细胞系，并简介了这些细胞系在白血病胞透导分化，信息转导及白血病的发生等方面的应用。