RP-HPLC法测定精蛋白胰岛素注射液中硫酸鱼精蛋白的含量

建立RP HPLC测定精蛋白胰岛素注射液中硫酸鱼精蛋白含量的方法.采用C-18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相A为0.1 mol/L磷酸二氢钠溶液(用磷酸调至pH1.8),流动相B为乙腈-0.1 mol/L磷酸二氢钠溶液(用磷酸调至pH1.8)(35:65),采用梯度洗脱,柱温为55℃,总流速为1.0 ml/mim检测波长214 nm,进样量为100μl.结果:硫酸鱼精蛋白在0.101～1.013 mg/ml呈线性关系,回归方程为A=4.534×105 3.839×107C,r=0.999 8;平均回收率为101.01%,RSD%为1.05(n=9).此法快速、简便、准确,可测定各种胰岛素注射剂中硫酸鱼精蛋白的含量.     

大鼠排泄物中羟基红花黄色素A的高效液相色谱法测定

目的:建立一种简便、准确、改进的高效液相色谱(HPLC)方法,测定大鼠口服羟基红花黄色素A(HSYA)后粪便和尿液中HSYA的含量.方法:色谱条件:Dikma C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为:A泵,水相(0.5%三乙胺+1%冰醋酸);B泵,有机相(甲醇∶乙腈 ＝23∶2 );梯度洗脱A∶B为84∶16(0.01 min) → 54.7∶45.3 (17.00 min) → 84∶16 (17.01 min) → 84∶16 (22.01 min);平衡时间5 min;检测波长403 nm;代谢笼收集大鼠给药后24 h粪便和尿液.10%三氯乙酸沉淀蛋白及离心后取上清液进样.结果:粪便和尿液中HSYA分别在0.8 μg·mL-1～200 μg·mL-1、2.0 μg·mL-1～500 μg·mL-1范围内线性关系良好;最低检测限分别为0.0016、0.0032 μg·mL-1;提取回收率为82.5%～90.2%;日内精密度小于3.4%,日间精密度小于4.8%.大鼠灌胃给予HSYA水溶液后,HSYA从粪便和尿液中24 h累计排泄回收率分别为44.66%±8.0%、5.58%±1.3%.结论:本方法检测限低,分析简便、准确,适合于大鼠口服HSYA后的排泄研究.     

怀菊花HPLC指纹图谱的研究

目的:建立怀菊花 HPLC 指纹图谱分析方法。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为 Dikma Diamonsil C_(18)(200 mm×4.6mm,5μm)柱,以乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱,0～1.0 min 时乙腈0→10%,1.0～50 min 时乙腈10%→25%,50～100 min 时乙腈25%→60%;流速为1.0 mL·min~(-1);检测波长为351 nm,柱温30℃。结果:建立了怀菊花的指纹图谱,确定了15个共有峰,各怀菊花样品指纹图谱与对照指纹图谱相似度均在0.9以上,可以用于怀菊花药材的定性鉴别。结论:此方法简单、准确、重复性好,为怀菊花的质量控制标准提供了有效的方法。     

国内外精蛋白重组人胰岛素注射液的有关物质比较

目的 精蛋白重组人胰岛素适用于2型糖尿病患者的治疗,现行标准中仅对本品有关物质A₂₁脱氨人胰岛素进行控制,未进行B₃和B₃iso脱氨人胰岛素限度的控制。采用两种方法对精蛋白重组人胰岛素注射液中的有关物质进行测定并比较国内外共17批样品的质量。方法 采用高效液相色谱法梯度洗脱,色谱柱：Waters Xbridge C₁₈ 4.6 mm×250 mm(5μm),检测波长：214 nm,柱温：40℃,流速：1.0ml/min,进样体积：20μl;《中国药典》2020年版方法：流动相A为0.2 mol/L硫酸钠溶液(pH值2.3)-乙腈(82∶18),流动相B为乙腈-水(50∶50);某企业自拟方法：流动相A为0.2 mol/L硫酸钠溶液(pH值3.6)-乙腈(90∶10),流动相B为乙腈-水(50∶50)。结果 国内外样品的A₂₁脱氨人胰岛素含量差异不大、国内一家企业B₃和B₃iso脱氨人胰岛素含量低于其他企业,国内另一家企业有关物质总和高...     

牛胆粉高效液相色谱法特征图谱研究

目的:探求比较黄牛胆粉和水牛胆粉的HPLC特征图谱,为建立牛胆粉的特征图谱提供依据。方法:采用梯度洗脱技术进行HPLC分离分析。色谱柱为Lichrospher C18(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.001 mol.L-1 KH2PO4溶液为流动相,梯度洗脱(0～20 min,乙腈30%→30%;20～40 min,乙腈30%→40%;40～70 min,乙腈40%→50%;70～80 min,乙腈50%→50%),流速1.0mL.min-1;柱温30℃;DAD检测器,检测波长210 nm。用聚类分析方法处理色谱特征信息,比较色谱以胆酸为参照色谱峰的22个特征峰的信息。结果:通过分析10批黄牛胆粉和水牛胆粉样品,确定了22个共有峰,建立了牛胆粉的HPLC特征图谱。结论:黄牛胆粉和水牛胆粉的色谱指纹特征比较相近,但特征成分含量有一定差异。     

HPLC法测定维生素B_2注射液的含量及有关物质

目的:建立高效液相色谱法测定维生素B2注射液的含量和有关物质。方法:采用C18色谱柱(250 mm×4.0 mm,5μm);以10 mmol·L-1庚烷磺酸钠的0.5%醋酸溶液-乙腈-甲醇(85∶10∶5)为流动相;流速:1.0 mL·min-1;检测波长:444nm。结果:在建立的色谱条件下,维生素B2与杂质能完全分离;维生素B2浓度在5.148～64.352μg·mL-1范围内线性关系良好,r=1.000;平均回收率为100.2%(n=9);测定维生素B2的最小检出量为2.2 ng。结论:本方法简便、准确,灵敏度高,专属性强,可用于维生素B2注射液的质量控制。     

柱前衍生化RP-HPLC法同时测定多肽类药物中7个生物胺的含量

目的:建立柱前衍生化RP-HPLC法测定注射用胸腺肽、骨肽注射液、鲑降钙素注射液、注射用谷胱甘肽、转移因子口服液和转移因子胶囊中色胺、2-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺7个生物胺含量。方法:样品经0.1mol·L^-1盐酸溶液溶解,以丹磺酰氯为衍生化试剂,用反相高效液相色谱法测定。采用C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),以含0.1%醋酸的0.01 mol·L^-1醋酸铵溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱(0～21 min, 70%A→50%A;21～25 min, 50%A→30%A;25～60 min, 30%A;60～70 min, 30%A→70%A),流速1.0 mL·min^-1,检测波长254 nm,柱温35℃。结果:色胺、2-苯乙胺、尸胺、酪胺和亚精胺的线性范围均为0.1～50 mg·L^-1(r>0.999),腐胺的线性范围为0.06～31.91 mg·L^-1(r>0.999),组胺的线性范围为0.10～...     

HPLC-CAD同时测定知母中芒果苷和知母皂苷BⅡ的含量

目的:建立HPLC-CAD方法同时测定知母中芒果苷和知母皂苷BⅡ的含量.方法:采用Acclaim-C18色谱柱(150 mm × 4.6 mm,3 μm),以乙腈(A )-0.2％醋酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0～10 min,15％A → 21％A;10～12 min,21％A → 23％A,12～30 min...     

RP-HPLC法同时测定爵床药材中6’-羟基-爵床定B、新爵床脂定B和TaiwanE的含量

目的:建立爵床药材中6’-羟基-爵床定B、新爵床脂定B和Taiwan E 3个活性成分的HPLC含量测定方法。方法:采用Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为乙腈-水,梯度洗脱(0～9 min,40%乙腈;9～10 min,40%→45%乙腈;10～40 min,45%乙腈),流速0.8 mL·min-1,检测波长256 nm,柱温30℃。结果:6’-羟基-爵床定B、新爵床脂定B和Tai-wan E的线性范围分别为0.023～0.454μg(r=0.9999)、0.022～0.446μg(r=0.9999)和0.024～0.478μg(r=0.9998);平均回收率分别为101.7%(RSD=1.6%)、95.7%(RSD=0.30%)和99.4%(RSD=1.7%)。结论:本方法可用于爵床药材的质量控制。     

人胰岛素及其类似物UPLC-MS/MS全序列分析研究

目的:建立采用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定人胰岛素及其类似物全序列的方法。方法:该方法以人胰岛素为主要研究对象,首先对其进行还原烷基化前处理,后进行UPLC-MS/MS分析。采用ACQUITY UPLC peptide BEH C₁₈(100 mm×2.1 mm, 1.7μm, 300?)色谱柱,流动相A为0.1%甲酸/水溶液,流动相B为0.1%甲酸/乙腈溶液,梯度洗脱(0～10 min, 3%B→60%B;10～10.5 min, 60%B→95%B;10.5～14 min, 95%B;14～14.5 min, 95%B→3%B;14.5～20 min, 3%B),流速0.3 mL·min^-1,柱温50℃;采用电喷雾离子源正离子(ESI~+)扫描,通过优化质谱参数,对人胰岛素及其类似物进行“top-town”全序列的测定分析,并对人胰岛素的序列测定方法进行了深入的研究,同时考察该方法对门冬胰岛素和赖脯胰岛素的适用性。结果:该方法能够较好地覆盖人胰岛素A和B链的全序列,通过b/y离子分析,5个高强度b/y离子的离子强...     

肾上腺素原料药及盐酸肾上腺素注射液杂质的HPLC-QTOF MS分析

目的:建立HPLC-QTOF MS法测定肾上腺素原料药及盐酸肾上腺素注射液杂质。方法:采用Eclipse plus C18色谱柱(3.0 mm×100 mm,1.8μm),以5 mmol.L-1甲酸铵水溶液-0.1%甲酸水溶液(A)/乙腈(B)为流动相,流速为0.3 mL.min-1,梯度洗脱,梯度条件如下:0→4 min,2%B;4→10 min,2%～50%B;10→12 min,50%～90%B;12→15 min,90%B;柱温为30℃。采用正离子模式采集数据。结果:原料药和注射液中共检出3个杂质,分别为肾上腺酮、肾上腺素磺化物和4-[2-(丁基-2-基氨基)-1-羟乙基]苯酚。结论:本法简便、灵敏,准确,可用于肾上腺素原料药及制剂的杂质定性分析。     

藿香正气不同制剂中苍术素的含量测定

目的:建立藿香正气片、口服液和软胶囊中苍术素的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法,使用Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈为流动相A,水为流动相B,进行梯度洗脱(0～8 min,48%A;8～9 min,48%A～64%A;9～16 min,64%A;16～17 min,64%A～75%A;17～30 min,75%A;30～31 min,75%A～48%A;31～40 min,48%A);流速1.0 mL.min-1;检测波长为335 nm。结果:苍术素的质量浓度在0.00095～0.475μg范围内与峰面积线性关系良好,r=0.9999;精密度、重复性、稳定性及加样回收率结果均能满足分析要求。结论:该方法准确可行,为评价藿香正气药品的质量提供可靠的依据。     

甘肃省不同产地萱草花蕾中芦丁、槲皮素、山柰酚的测定

目的:建立HPLC法同时测定萱草花蕾中芦丁、槲皮素、山柰酚3个黄酮类化合物的含量,并比较不同产地萱草中这3个化合物的含量。方法:采用Agilent SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇(A)-pH 3磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0～10 min,20%A;10～10.5 min,20%A→45%A;10.5～27.5 min,45%A;27.5～28 min,45%A→60%A;28～45min,60%A→20%A),流速0.7 mL.min-1,检测波长360 nm,柱温33℃,进样量20μL。结果:芦丁、槲皮素及山柰酚浓度分别在32.6～326μg.mL-1(r=0.9999)、1.06～10.6μg.mL-1(r=0.9997)和0.32～3.2μg.mL-1(r=0.9997)范围内线性关系良好;平均加样回收率(n=6)分别为99.53%(RSD=1.8%),96.96%(RSD=1.7%),98.75%(RSD=1.9%)。结论:该方法简便,操作简单,结果准确,重复性好,为评价萱草药材的质量提供了可靠的分析方法,可作为萱草中黄酮类化合物的含量测定方法。     

HPLC法测定氧化樟脑注射液的有关物质

目的:建立高效液相色谱法测定氧化樟脑注射液的有关物质,并测定2个杂质的校正因子。方法:采用Kromasil 100-5C18(250 mm×4.6 mm,5"m)色谱柱,流动相为95%乙腈溶液(A)-0.2%磷酸溶液(B),线性梯度洗脱[0 min,20%A;0～20min,20%A→80%A,保持15 min],流速1 mL·min-1,检测波长286 nm。结果:样品中氧化樟脑峰与杂质峰分离良好;初步鉴定了2个主要杂质的结构,采用加校正因子的主成分自身对照法控制其质量。结论:所建立的方法简便、快速,可准确地测定氧化樟脑注射液中的有关物质。     

HPLC-QTOFMS法测定马来酸依那普利及中间体中的对甲苯磺酸乙酯

目的:建立HPLC-QTOF MS测定马来酸依那普利及中间体N-[1-(S)-乙氧甲酰基-3-苯丙基]-L-丙氨酸中对甲苯磺酸乙酯的方法。方法:采用Eclipse plus C18色谱柱(3.0 mm×100 mm,1.8μm),以20 mmol·L-1甲酸铵水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱(0～2 min,10%→50%B;2～4 min,50%→60%B;4～7 min,60%→90%B;7～8 min,90%B),流速1.0 mL·min-1,柱温50℃;采用正离子模式采集数据。结果:对甲苯磺酸乙酯浓度在0.20～5.01μg.mL-1范围内线性关系良好(r=0.9955);日内和日间精密度良好,RSD小于6.7%;定量限和检测限分别为0.4 ng、0.2 ng;马来酸依那普利及中间体回收率(n=9)分别为102.6%和90.8%。结论:本法简便、灵敏,可用于对甲苯磺酸乙酯的定量研究。     

HPLC法测定穿山龙中伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和延龄草苷的含量

目的:建立反相高效液相色谱法同时测定穿山龙中伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和延龄草苷的含量。方法:采用Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(0～18 min,25%A线性变为36%A;18～40min,36%A线性变为90%A;40～55 min,90%A保持不变),流速1.0 mL.min-1,检测波长210 nm,柱温30℃。结果:伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和延龄草苷的色谱峰面积与浓度呈良好的线性关系,线性范围分别为9.80～588.0μg.mL-1(r=0.9994),20.20～1212μg.mL-1(r=0.9995),5.330～319.8μg.mL-1(r=0.9999);平均回收率(n=9)分别为97.3%,99.4%,97.6%。结论:该方法简便、准确,为穿山龙药材的质量评价提供了方法。     

RP-HPLC法测定曲安奈德氯霉素溶液的含量及有关物质

目的:建立高效液相色谱法测定曲安奈德氯霉素溶液中3种成分氯霉素、盐酸萘甲唑林和醋酸曲安奈德及有关物质(曲安奈德、氯霉素二醇物和对硝基苯甲醛)的含量。方法:用Dionex C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相为0.01 mol·L-1庚烷磺酸钠溶液(取磷酸二氢钾6.8g,用0.01 mol·L-1庚烷磺酸钠溶液并稀释至1000 mL,再加三乙胺5 mL,混匀,用磷酸调节pH至2.5)(A)-甲醇(B),梯度洗脱[0 min(66%A)→20 min(66%A)→30 min(35%A)→49 min(35%A)→50min(66%A)→60 min(66%A)];流速为1.0 mL·min-1;检测波长:0～20 min为277 nm,20～60 min为230 nm。结果:氯霉素、盐酸萘甲唑林、醋酸曲安奈德的线性范围分别为0.375～3.000 mg·mL-1(r=0.9990)、0.0127～0.1016 mg·mL-1(r=0.9989)和0.0262～0.2096 mg·mL-1(r=0.9992)。结论:本文建立的高效液相法结果准确可靠,专属性好,可作为曲安奈德氯霉素溶液含量和有关物质的控制方法。     

RP-HPLC同时测定大卫颗粒中绿原酸、黄芩苷、连翘苷、黄芩素和汉黄芩素的含量

目的:建立RP-HPLC法同时测定大卫颗粒中绿原酸、黄芩苷、连翘苷、黄芩素和汉黄芩素的含量。方法:采用Diamon-sil C18(200 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.05%磷酸溶液(B)为流动相进行梯度洗脱(0～10 min,10%A→15%A;10～15 min,15%A→25%A;15～25 min,25%A→28%A;25～35 min,28%A→35%A),柱温35℃,流速1.0 mL.min-1,检测波长230 nm,进样量20μL。结果:绿原酸、黄芩苷、连翘苷、黄芩素和汉黄芩素5个成分质量浓度分别在2.80～28.0μg.mL-1(r=0.9992)、25.71～257.1μg.mL-1(r=0.9994)、0.71～7.1μg.mL-1(r=0.9995)、0.81～8.1μg.mL-1(r=0.9990)、0.50～5.0μg.mL-1(r=0.9992)的范围内与峰面积呈良好的线性关系;方法的平均回收率(n=9)分别为100.0%,99.0%,99.0%,99.9%,99.4%。结论:所建立的高效液相色谱测定法简便、准确,重复性好,专属性强,可用于大卫颗粒的含量测定质量控制。     

超高效液相色谱-质谱法同时测定双黄连胶囊中的3种有效成分

目的 建立了同时测定双黄连胶囊中的绿原酸、黄芩苷和连翘苷3种有效成分的超高效液相色谱-电喷雾电离质谱(HPLC-ESI/MS)分析方法.方法 采用Waters BEH-C18色谱柱,以含0.2%甲酸的0.4mmol·L-1醋酸钠(A相)、甲醇(B相)为流动相进行梯度洗脱,在ESI正离子模式下,采用选择离子反应监测方法进行测定,用峰面积进行定量.结果 绿原酸、黄芩苷和连翘苷的线性范围分别0.05～50mg·L-1,0.10～500mg·L-1和0.01～25mg·L-1;检出限分别为0.010,0.020,0.002mg·L-1.3种成分的加样回收率为97.2%～101.6%,相对标准偏差小于2.3%.结论 该法快捷、准确、重复性好,可用于双黄连胶囊中的3种有效成分含量的同时测定.     

LC-MS/MS法测定比格犬血浆中红景天苷和酪醇的浓度及其药动学研究

目的:建立LC-MS/MS法测定比格犬血浆中红景天苷及其代谢物酪醇的浓度,并应用于药动学研究.方法:血浆样品经氯仿、苯酚和异戊醇混合溶剂萃取,Shimadzu Shim-pack Velox PFPP色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8 μm)分离,以水(A相)-含20％乙腈的甲醇溶液(B相)为流动相,梯度洗脱(...