桃红四物汤有效成分的交互作用及其对骨痂VEGF蛋白表达的影响

目的:探讨桃红四物汤主次要有效成分的交互作用及其对骨痂微血管新生调控因子VEGF蛋白表达的影响。方法:从桃红四物汤中提取了4类有效成分:总生物碱(A)、总苷(B)、总多糖(C)和总挥发油(D),按照前期实验所得结果(主要成分为A,次要成分为B、C、D),对清洁级小白鼠徒手定点折骨造模后进行实验。按照L8(27)正交设计方案分组,观察分析骨折断端骨痂微血管新生调控因子VEGF蛋白表达,探讨主次要成分之间是否存在交互作用。结果:骨折造模后断端局部出现VEGF蛋白高表达,提取物组表达量显著高于模型组(P0.01);动态观察结果,第2时相点(15 d)以内表达量逐渐升高,在第15天出现表达峰值,此后表达量开始下降;各组间比较,1～8组、10组3个时相点表达量均明显高于9组;在表达峰值(15 d)后VEGF表达量下降过程中,提取物及浓缩剂药物使表达量下降程度减缓,使其在第3时相点(25 d)断端骨痂组织内仍维持高量VEGF蛋白表达。正交实验表明,B药取水平1与水平2差异有统计学意义(P0.05),C药和D药取水平1与水平2差异无统计学意义(P0.05)。结论:有效成分总生物碱与总苷有交互作用,与总多糖和总挥发油无交互作用;总苷、总多糖与总挥发油之间也无交互作用。     

桃红四物汤有效成分的交互作用及其对骨痂微血管形态学的影响

目的:探讨桃红四物汤主次要有效成分的交互作用及其对骨痂组织及骨痂微血管形态的影响。方法:从桃红四物汤中提取了4类有效成分:总生物碱(A)、总苷(B)、总多糖(C)和总挥发油(D),按照前期实验所得结果(主要成分为A,次要部位为B、C、D),对清洁级小白鼠徒手定点折骨造模后进行实验。按照L8(27)正交设计方案分组,观察分析骨折断端骨痂组织形态、微血管新生形态,探讨主次要成分之间是否存在交互作用。结果:提取成分处方组与原方组药物能促进骨折后骨生成细胞、成骨细胞、骨痂微血管的生长,并能使骨新生和微血管新生提早进入塑形期,与模型组比较有统计学意义(P0.05)。其中第1组对骨细胞与微血管新生、重建的促进作用最强。另从L8(27)正交实验方差分析法分析,总苷类取水平1和水平2差异有统计学意义(P0.05),而总多糖和总挥发油类取水平1和水平2均无统计学意义(P0.05)。结论:有效成分总生物碱与总苷有交互作用,与总多糖和总挥发油无交互作用;总苷、总多糖与总挥发油之间也无交互作用。     

补骨脂对破骨细胞-成骨细胞耦联功能的影响*

目的:探讨补骨脂水提物在破骨细胞抑制情况下对破骨细胞-成骨细胞耦联功能的影响及其潜在的作用机理。方法:制备补骨脂水提物,利用MTT法测定补骨脂水提物对RAW264.7细胞的毒性;在RANKL诱导的BMMs破骨细胞分化模型中测定补骨脂水提物对破骨细胞分化的抑制作用,并收集上清液制备条件培养基(CM);采用补骨脂干预后的CM作用于MC3T3-E1前体成骨细胞的间接共培养模型评价补骨脂对破骨细胞-成骨细胞耦联功能的影响;利用RT-qPCR法测定破骨细胞分化关键基因以及破骨细胞源性耦联因子的mRNA表达水平。结果:结果显示,补骨脂水提物在无细胞毒性的浓度下剂量依赖性的抑制破骨细胞分化;破骨细胞-成骨细胞耦联功能研究显示补骨脂在破骨细胞分化抑制的情况下能够维持破骨细胞-成骨细胞耦联功能,其CM分化液不影响MC3T3-E1成骨细胞分化能力;RT-qPCR结果表明补骨脂水提物抑制破骨细胞关键基因DC-Stamp、Oscar和Trap的mRNA表达,促进破骨细胞源性耦联因子C3a mRNA的mRNA表达水平。结论:补骨脂水提物能够在抑制破骨细胞分化抑制的情况下维持正常的破骨细胞-成骨细胞耦联功能,其机...     

加味三根汤含药血清对成骨-破骨细胞共育体系中破骨细胞功能及IL-1β、TNF-α表达的影响

目的检测成骨-破骨细胞共育体系中应用加味三根汤含药血清后抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)以及白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的变化,探讨加味三根汤的作用机制。方法建立成骨-破骨细胞共育体系,制作SD大鼠含药血清,分为空白对照组,加味三根汤低、中、高剂量组,每组设6个复孔,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测共培养体系上清液中TRACP及IL-1β、TNF-α的含量。结果经鉴定成功培养成骨细胞和破骨细胞,并建立成骨-破骨细胞共育体系。加味三根汤含药血清中、高剂量组TRACP活性低于空白血清对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。与空白血清对照组比较,加味三根汤中、高剂量组IL-1β含量有所下降,加味三根汤高剂量组TNF-α含量降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论加味三根汤能够抑制共育体系中破骨细胞的功能,此作用可能是通过抑制IL-1β、TNF-α的分泌而达到。     

桃红四物汤治疗骨质疏松症的药效学研究

目的考察桃红四物汤对去卵巢骨质疏松模型大鼠骨密度、骨形态学和骨载荷能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、仙灵骨葆胶囊(0.4 g/kg)组以及桃红四物汤低、高剂量(0.2、0.4 g/kg)组,每组8只。除对照组外,其余各组大鼠去除双侧卵巢建立骨质疏松模型。各给药组ig相应药物,连续3个月。采用三点弯曲实验检测各组大鼠股骨荷载能力;采用苏木素-伊红(HE)和番红固绿染色观察各组大鼠胫骨病理变化;采用微计算机断层扫描技术(micro computed tomography,Micro-CT)分析各组大鼠胫骨骨密度、骨小梁宽度和分离度等形态学参数;采用抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色检测各组大鼠胫骨破骨细胞数量;采用免疫组化法检测各组大鼠胫骨骨保护素(osteoprotegerin,OPG)和核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)蛋白表达情况。结果与模型组比较,桃红四物汤组大鼠股骨最大载荷、最大应力和弹性载荷均显著升高(P0.05、0.01);胫骨骨丢失程度改善,骨小梁数量和连接增多;胫骨骨密度、骨小梁与骨组织面积比、骨小梁宽度和骨小梁数量显著升高(P0.05、0.01),骨小梁分离度显著降低(P0.01);胫骨破骨细胞数量减少,OPG表达增加,RANKL表达降低。结论桃红四物汤能够增加骨密度及荷载能力,促进成骨细胞功能,抑制破骨细胞功能亢进引起的骨吸收,从而发挥抗骨质疏松作用。     

基于Hippo-YAP信号通路探讨桃红四物汤对BMSCs增殖与成骨分化的影响

目的 分离培养大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）,运用桃红四物汤含药血清和Hippo信号通路抑制剂Verteporfin干预,进而观察BMSCs增殖和成骨分化的能力。方法 采用全骨髓贴壁法体外培养BMSCs,选用10倍等效剂量的桃红四物汤灌服大鼠制备桃红四物汤含药血清,采取0.9%氯化钠注射液灌胃大鼠制取空白组对照血清,将BMSCs分为3组：空白血清组、桃红四物汤含药血清组（THSWT组）以及桃红四物汤含药血清+Verteporfin组（THSWT+V组）,使用CCK-8分析法分析4个时相点0、1、3、7 d细胞增殖活力;干预7 d后,进行ALP测定,观察骨向分化程度;处理21 d后,进行茜素红染色,观察钙积累,Western blotting法检测各组细胞成骨关键因子及Hippo通路关键蛋白表达。结果 THSWT组BMSCs细胞增殖能力明显高于THSWT+V组及空白血清组（P <0.01）;THSWT组BMSCs成骨分化能力及钙盐沉积程度高于THSWT+V组及空白血清组;THSWT组中YAP蛋白表达低于空白血清组、TAZ蛋白表达高于空白血清组（P <0.05）;THSWT...     

葛根素在共育体系中对破骨细胞活性的影响

目的：观察葛根素在共育体系中对破骨细胞（OC）活性的影响。方法：选取1日龄SD大鼠分离培养成骨细胞（OB）,取5日龄SD大鼠分离培养破骨细胞,建立成骨-破骨细胞共育体系;在共育体系中,分别加入0．05ug/ml、0．5ug/ml、5ug/ml、50ug/ml的葛根素,与空白组对照;用重氮盐法检测抗酒石酸酸性磷酸酶（TRACP）和光镜观察骨吸收陷窝数。结果：0．5ug/ml～50ug/ml的葛根素组在48h、72h、96h对成骨-破骨细胞共育体系中OC分泌TRAP的活性均明显降低于对照组。结论：葛根素在共育体系中能够抑制OC活性。     

接骨方含药血清孵育体外培养骨痂中破骨细胞、成骨细胞和软骨细胞生长的影响

目的:观察接骨方含药血清对体外培养的破骨细胞、成骨细胞和软骨细胞生长的影响。方法:取新西兰家兔骨折造模骨痂进行体外培养,制备接骨方含药血清,用接骨方含药血清孵育新西兰家兔骨痂,进行破骨细胞、成骨细胞和软骨细胞镜下形态学观察,观察骨痂中软骨细胞、成骨细胞和破骨细胞的数目。结果:术后10 d的新西兰家兔骨痂镜下可见细胞开始从组织块周围爬出;染色后可见胞浆内出现黄褐色颗粒,胞核饱满,核仁清晰;术后17 d观察组骨痂可见成骨细胞和软骨细胞的增殖明显,破骨细胞增殖相对成骨细胞和软骨细胞较慢,术后24 d、31 d时可见骨痂中破骨细胞、成骨细胞和软骨细胞均增殖速度变缓,与对照组相比,术后10 d、17 d、24 d、31 d观察组骨痂中成骨细胞和软骨细胞的增殖情况明显优于对照组;与对照组相比,术后10 d、17 d、24 d、31 d观察组骨痂中破骨细胞数量少于对照组,2组间差异无统计学意义(P0.05);与对照组相比,术后10 d、17 d、24 d、31 d观察组骨痂中成骨细胞和软骨细胞数目均多于对照组,2组有统计学意义(P0.05)。结论:接骨方含药血清可促进新西兰家兔成骨细胞和软骨细胞增殖,具有促进骨组织的再生的功效。     

“肾主骨”理论与破骨细胞骨吸收

从骨的现代定义及“肾主骨”理论的内涵出发,结合实验研究分析肾主骨与抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)活性、骨吸收陷窝对破骨细胞骨吸收机制的影响作用,为中药防治破骨细胞骨吸收类疾病及其作用机制研究提供思路.     

桃红四物汤对胫骨平台骨折固定术后患者骨代谢的影响

目的研究桃红四物汤对胫骨平台骨折固定术后患者骨代谢的影响。方法将76例胫骨平台骨折患者随机分为对照组和观察组(各38例),并均行内外双钢板固定治疗;观察组同时加用桃红四物汤治疗,治疗2个疗程。观察两组临床疗效及治疗前后骨代谢指标变化情况。结果观察组临床总有效率为97.37%,对照组为81.59%;观察组的临床疗效优于对照组(P0.05)。治疗后两组骨形成指标血清ALP、IGF-Ⅰ、PINP和骨代谢指标血清MMP-1、MMP-2、sCTx表达水平均高于治疗前(P0.05),且观察组均高于对照组(P0.05)。结论桃红四物汤能够显著改善胫骨平台骨折固定术后患者膝关节功能和骨代谢以促进骨折愈合。     

骨稳态中成骨细胞与破骨细胞的阴阳属性

从成骨细胞和破骨细胞来源的同一性,其间存在的生、克、制、化关系,阳性、阴性调控因子,阴阳属性的相对性等方面,阐释骨稳态中成骨细胞、破骨细胞的阴阳属性。认为成骨细胞和破骨细胞在骨稳态内是典型的阴阳关系,成骨细胞及其主导的骨生成属于"阴",破骨细胞及其主导的骨吸收属于"阳",二者动态平衡发挥维持骨稳态的作用。     

温阳补肾方含药血清对破骨细胞骨吸收功能的影响

目的:探讨温阳补肾方含药血清对破骨细胞骨吸收功能的影响。方法:体外诱导破骨前体细胞系RAW264.7细胞向破骨细胞分化,分别用温阳补肾方低、中、高剂量组含药血清和0.9%氯化钠溶液血清干预,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)酶动力法测定各组TRACP活性,实时荧光定量PCR检测温阳补肾方对破骨细胞组织蛋白酶K(Cts K)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA水平。结果:与对照组比较,温阳补肾方含药血清可显著抑制破骨细胞TRACP活性(P<0.01),显著降低破骨细胞骨Cts K、MMP-9 mRNA的表达(P<0.01)。结论:温阳补肾方含药血清可抑制破骨细胞的骨吸收功能,中剂量组效果最佳。     

骨碎补提取液对体外分离破骨细胞性骨吸收的作用

目的 :研究骨碎补对体外分离破骨细胞性骨吸收的作用。方法 :体外分离出破骨细胞 ,与牛骨磨片共同培养 ,通过 Leica图像分析仪观察破骨细胞所形成骨吸收陷窝的数目与面积 ,反映破骨细胞性骨吸收情况。结果用 SPSS软件包分析。结果 :与空白血清组相比 ,2 0 %骨碎补提取液使骨磨片上形成的吸收陷窝数和面积从 ( 2 8.0 5± 2 .75 )个 /片和 ( 1 2 3 9.45± 5 2 3 .2 1 ) μm2减少到 ( 1 3 .2 0± 1 .2 6)个 /片和 ( 683 .1 7± 3 41 .3 8) μm2 ,空白血清组与 2 0 %骨碎补血清组比较差异具有显著性意义 ( P<0 .0 1 ) ,而 1 0 %低浓度骨碎补提取液对破骨细胞在骨磨片上形成的吸收陷窝数和面积从 ( 2 8.0 5± 2 .75 )个 /片和 ( 1 2 3 9.45± 5 2 3 .2 1 )μm2 减少到 ( 2 4.1 5±1 .1 2 )个 /片和 ( 82 3 .5 2± 5 2 7.1 8) μm2 ,二者比较无显著性意义 ( P>0 .0 5 )。结论 :骨碎补提取液对破骨细胞性骨吸收有抑制作用 ,但与浓度有关     

桃红四物汤对骨搬移过程中骨质矿化影响的临床观察

目的观察桃红四物汤对骨搬移过程中骨质矿化的影响。方法将40例需要行骨搬移术的外伤性四肢骨缺损或四肢骨髓炎术后患者随机分为治疗组和对照组,每组各20例。两组均行骨搬移术,对照组予常规对症措施,治疗组在常规对症措施基础上加服桃红四物汤。两组疗程均为3个月,观察骨折临床愈合与骨质矿化所需时间,比较延长骨段的骨密度、患肢疼痛VAS评分的情况。结果 (1)搬移1个月与其后各时点组内比较,两组延长骨段BMD水平差异均有统计学意义,均明显升高(P0.05);组间搬移4个月、骨搬移结束及骨质矿化结束时比较,延长骨段BMD水平差异有统计学意义,治疗组明显高于对照组(P0.05)。(2)搬移第1天与其后各时点组内比较,两组疼痛VAS评分差异均有统计学意义,均明显降低(P0.05);组间搬移1周、搬移1个月、骨搬移结束及骨质矿化结束时比较,疼痛VAS评分差异有统计学意义,治疗组明显低于对照组(P0.05)。(3)两组骨折临床愈合时间、骨质矿化所需时间比较,差异有统计学意义,治疗组明显少于对照组(P0.05)。结论桃红四物汤可明显提高骨搬移过程中延长骨段的骨密度,减轻骨搬移及骨折愈合过程中的患肢疼痛症状,缩短骨折愈合及骨质矿化所需时间。     

补肾法对IL—1诱导的破骨细胞性骨吸收及破骨细胞MMP—9

用从出生２４小时的乳鼠长骨中分离出来的破骨细胞,从１月龄大鼠长骨中分离出来 的骨在质细胞,建破骨细胞培养和破骨细胞、骨髓基质细胞培养系。在白细胞介素－１（ＩＬ－１α）作用的同时,加入不同剂量的密骨片药液,分别与牛骨片共同培养２０小时。计数骨片形成的陷窝数及测算吸收陷窝面积。并采用原位杂交技术,研究密骨细胞基质金属蛋白酶９（ＭＭＰ－９）ｍＲＮＡ表达的调控。结果显示,在基质细胞存在的条件下,ＩＬ－１可     

桃红四物汤含药血清对离体细胞影响研究概况

血清药理学方法能在细胞水平揭示桃红四物汤含药血清对离体的骨细胞(骨髓间充质干细胞、巨噬细胞、成骨-破骨细胞)、血管内皮细胞、平滑肌细胞、肝星状细胞、角质形成细胞、大肠癌细胞等有不同程度影响。探索桃红四物汤有效成分对人体各细胞的干预作用及机制,对解释桃红四物汤治疗相关疾病具有重要深远的意义,也是有待解决的重要课题。     

桃红四物汤纳米微粒剂对跟骨骨折切口愈合的影响

目的:观察用桃红四物汤纳米微粒剂对跟骨骨折术后切口愈合的影响。方法:100例随机分成两组各50例,两组均行切开复位内固定术治疗,术后对照组用甘露醇及七叶皂甙钠治疗,实验组用桃红四物汤纳米微粒剂治疗。结果:切口愈合优良率实验组高于对照组(P<0.05)。术后3天、7天两组疼痛评分均较术后1天降低,实验组降低幅度大于对照组(P<0.05)。结论:桃红四物汤纳米微粒剂用于跟骨骨折术后可促进切口愈合。     

结合状态伊班膦酸盐对破骨细胞骨吸收作用的影响

 目的 观察伊班膦酸盐（ibandronate,Iba）与羟基磷灰石（hydroxyapatite,HA）结合后对破骨细胞骨吸收作用的影响。方法 将Iba与HA复合成伊班膦酸盐-羟基磷灰石（Iba-HA）作为实验组,未结合Iba的HA作为对照组。分离、培养、纯化大鼠破骨细胞,Giemsa染色和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色显示破骨细胞及其细胞核的形态和数目。用两组材料与破骨细胞复合培养,透射电镜观察细胞内结构变化,SNAFL染色测定破骨细胞内氢离子浓度,骨吸收陷窝面积测定并辅以上清液内胶原C端肽片段（CTx）的浓度测定观察破骨细胞骨吸收功能。结果 Gimsa染色标本可见多核的破骨细胞、细胞核染成蓝紫色,TRAP染色标本可见TRAP酶活性的部位被染成红色,分布于破骨细胞胞浆内。透射电镜观察发现,破骨细胞与Iba-HA复合培养后,较之与HA复合培养的破骨细胞生物活性下降。SNAFL染色显示Iba-HA组破骨细胞荧光强度小于HA组,统计学有差异（P<0.05）;骨吸收检测时面积显示,Iba-HA组小于HA组,统计学有差异（P<0.05）,上清液CTx浓度,Iba-HA组小于HA组,统计学有差异（P<0.05）。结论 与ＨＡ处于结合状态的Iba对破骨细胞的骨吸收作用仍有显著影响。     

桃红四物汤的实验研究(Ⅰ)——水与乙醇对桃红四物汤中芍药苷含量的影响

目的 :比较水提与醇提 (75 %乙醇 )对桃红四物汤中芍药苷的影响。方法 :采用高效液相色谱法测定桃红四物汤中单味药赤芍与复方中芍药苷的含量。结果 :复方所测成分含量显著高于单方 (P <0 0 1 ) ,复方醇提含量显著高于水提 (P <0 0 1 ) ,单方所测成分醇提与水提无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 :不同提取方法对复方成分溶出有显著影响     

桃红四物汤对大鼠背部随意皮瓣存活的影响

摘要：目的：探讨桃红四物汤对SD大鼠背部随意皮瓣存活的影响。方法：将40只SD大鼠随机分为桃红四物汤组和对照组各20只,背部制成2cm×8cm随意皮瓣,分别进行皮瓣存活率、微血管密度（MVD）的检测。结果：桃红四物汤组第7d皮瓣存活率高于对照组（P〈0．05）;桃红四物汤组皮瓣内见较多新生血管,高倍镜视野下单位MVD超过对照组（P〈0．05）。结论：桃红四物汤灌胃给药能促进大鼠背部随意皮瓣的存活比例,其机制可能与促进皮瓣血管新生有关。