胡黄连总苷对高糖诱导肾小球系膜细胞氧化应激的保护作用

胡黄连总苷(total glucosides of Picrorhiza scrophulariiflora，TGP)是具有抗氧化作用的活性组分。由于氧化应激在糖尿病肾病发病中起关键作用，因此本研究考察了TGP对高糖培养下系膜细胞病变和氧化应激损伤的影响。通过高糖(25 mmol·L^-1)刺激3周造成糖尿病系膜细胞损伤模型，分别以荧光素探针DCFH-DA，Rh123和Fluo-3/AM负载细胞，流式细胞仪法检测细胞内活性氧(ROS)、线粒体膜电位(MMP)和［Ca²⁺］_i，观察TGP对高糖引起系膜细胞肥大、细胞外基质分泌增加的保护作用。结果表明，高糖培养组系膜细胞肥大，胶原IV的分泌增加，细胞内ROS升高，MMP降低，［Ca²⁺］_i升高，TGP能明显改善高糖诱导的系膜细胞肥大和降低胶原IV的分泌，降低细胞内ROS含量，提高MMP的水平和降低［Ca²⁺］_i。因此TGP可以保护高糖诱导的肾小球系膜细胞氧化应激损伤。     

Apelin-13抑制高糖引起的肾小球系膜细胞炎症

目的:在高糖刺激的肾小球系膜细胞MES13和HBZY-1中研究Apelin-13抑制高糖引起的细胞炎症。方法:在高糖诱导的MES13和HBZY-1细胞中给予不同剂量的Apelin-13,通过real time-PCR技术检测各实验组2种系膜细胞中Icam-1和Mcp-1基因的mRNA水平变化。结果:(1)与空白对照组细胞相比,高糖组MES13和HBZY-1细胞中Icam-1和Mcp-1基因的mRNA水平显著性上升(P<0.05);给药Apelin-13(300 pmol·L^-1)能显著性抑制高糖刺激的MES13和HBZY-1细胞中Icam-1和Mcp-1基因的mRNA水平(P<0.05)。(2)与空白对照组细胞相比,通过免疫组化实验检测高糖组MES13和HBZY-1细胞中促炎蛋白p38的磷酸化水平上升(P<0.05);给药Apelin-13(300 pmol·L^-1)能显著性抑制高糖引起MES13和HBZY-1细胞中促炎症蛋白p38的磷酸化(P<0.05)。结论:Apelin-13抑制高糖引起的MES13和HBZY-1细胞中p38的激活,从而抑制高糖所引起的炎症反应(Icam-1和Mcp-1基因水平)。     

高糖对体外培养肾小球及肾小球系膜细胞分泌TNF的影响

采用酶联免疫吸附实验观察两种不同浓度的葡萄糖对体外培养的大鼠肾小球及ＧＭＣ分泌ＴＮＦ的影响，结果表明：分别２４，１６小时后，与对照组相比肾小球与ＧＭＣ分泌ＧＮＦ明显增加，Ｐ〈０．０１。不同浓度的葡萄糖环境对肾小球与ＧＭＳ分泌ＴＮＦ的影响无明显差异，Ｐ〉０．０５。     

晚期糖基化终产物对肾小球系膜细胞表达Fractalkine的诱导作用

目的探讨晚期糖基化终产物(AGE)对肾小球系膜细胞表达Fractalkine(Fkn)的影响。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,实验设AGE组:加入AGE-BSA(100mg·L-1);对照组:加入牛血清清蛋白(BSA)(100mg·L-1);PDTC组:先加入PDTC100μmol·L-1孵育1h,再加入AGE-BSA(100mg·L-1);AGE抗体组:先加入抗AGE抗体(100mg·L-1IgG)孵育2h后,再加入AGE-BSA(100mg·L-1)。培养所需时间收集细胞,检测FknmRNA及蛋白表达,激光共聚焦显微镜检测NF-κB活化。结果AGE诱导体外培养的大鼠系膜细胞大量表达Fkn-mRNA及蛋白,PDTC和AGE抗体显著抑制AGE诱导系膜细胞表达FknmRNA及蛋白。经AGE刺激后NF-κB/P65迅速核转位,30min达高峰。结论AGE通过活化NF-κB诱导肾小球系膜细胞表达Fkn。     

硫辛酸对高糖诱导的肾小球系膜细胞NLRP3炎症小体表达的影响

目的 观察高血糖对培养的人肾小球系膜细胞（HMC）中NLRP3炎症小体表达的影响,并探讨硫辛酸（LA）对上述过程的干预机制,以探寻糖尿病肾病（DN）发病新机制和防治新策略。方法 传代培养人HMC,根据不同的干预因素分为正常对照（NG）组、高糖（HG）组、LA组、HG+LA组。采用CCK-8方法分别检测不同浓度的LA对HMC活性的影响,流式细胞仪检测活性氧（ROS）水平,RT-PCR检测NLRP3炎症小体mRNA的表达,Western-blot检测LA对HMC中NLRP3炎症小体的蛋白表达的影响。结果 CCK-8结果显示,LA的最佳保护浓度为200μmol/l;流式细胞仪检测结果显示,HG组ROS表达水平高于NG组,差异有统计学意义（P<0.05）。RT-PCR及Westernblot检测结果显示,HG组NLRP3炎症小体表达高于NG组,差异有统计学意义（P<0.05）;加入LA后,NLRP3炎症小体的表达均下降,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 高糖环境可促进人HMC的增殖,在一定浓度范围内,适当浓度的LA能抑制HMC的增殖;高血糖可通过氧化应激途径增加NLRP...     

罗格列酮对高糖培养肾小球系膜细胞胞外基质产生及降解的影响

目的:探讨罗格列酮(rosiglitazone maleate)对糖尿病肾病的保护机制。方法:大鼠肾小球系膜细胞分别培养在正常糖浓度(5.5mmol/L),高糖浓度(25mmol/L)及25mmol/L葡萄糖+20μmol/L罗格列酮的培养液中。CCK-8测定系膜细胞增殖;ELISA法检测培养上清液Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)、纤维连接蛋白(FN)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1);明胶酶谱法检测培养上清液基质金属蛋白酶-2,9(MMP-2,9)的活性。结果:高糖组系膜细胞较正常对照组出现增殖增加,合成基质蛋白Col-Ⅳ、FN增多;MMP-2及MMP-9活性下降;TIMP-1含量增加;TGF-β1分泌增加。与高糖组比较,罗格列酮干预后能逆转上述变化。结论:罗格列酮能抑制高糖培养的系膜细胞增殖,减少胞外基质合成,增加胞外基质的降解。     

晚期糖基化终产物对肾小球系膜细胞表达Fractalkine的诱导作用

目的 探讨晚期糖基化终产物（AGE）对肾小球系膜细胞表达Fractalkine（Fkn）的影响. 方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,实验设AGE组:加入AGE BSA ( 100 mg/L);对照组:加入牛血清清蛋白（BSA）（100 mg/L）;PDTC组:先加入PDTC100 μmol/L 孵育1 h,再加入AGE BSA ( 100 mg/L) ;AGE抗体组:先加入抗AGE 抗体(100 mg/L IgG) 孵育2 h后,再加入AGE BSA ( 100 mg/L).培养所需时间收集细胞,检测Fkn mRNA及蛋白表达,激光共聚焦显微镜检测NFκB活化. 结果 AGE诱导体外培养的大鼠系膜细胞大量表达Fkn mRNA及蛋白,PDTC和AGE抗体显著抑制AGE诱导系膜细胞表达Fkn mRNA及蛋白.经AGE刺激后NF κB/P65迅速核转位,30 min达高峰。 结论 AGE通过活化NF κB诱导肾小球系膜细胞表达Fkn.     

普伐他汀对高糖培养肾小球系膜细胞细胞外基质产生和氧化应激的影响

目的探讨普伐他汀对糖尿病肾病的保护机制。方法大鼠肾小球系膜细胞分别用正常浓度葡萄糖(5.5 mmo.lL-1),高浓度葡萄糖(25 mmo.lL-1)及葡萄糖25 mmo.lL-1+普伐他汀100μmo.lL-1培养。用CCK-8试剂盒测定细胞增殖,比色法检测培养液中超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量。ELISA法检测培养上清液Ⅳ型胶原(ColⅣ-)、纤连蛋白(FN)、转化生长因子β1(TGFβ-1)和基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)含量;明胶酶谱法检测培养上清明胶酶A及B的活性。结果与对照组比较,高糖组肾小球系膜细胞增殖增加,基质蛋白ColⅣ-和FN合成增多,明胶酶A及B活性下降,TIMP-1含量和TGFβ-1分泌增加,总SOD活性和Cu,Zn-SOD活性下降,GSH含量下降,MDA含量增加。与高糖组比较,普伐他汀干预后可逆转上述变化。结论普伐他汀可抑制高糖培养的肾小球系膜细胞增殖,减少胞外基质合成,增加胞外基质降解,并缓解高糖诱导的氧化应激。     

家兔肾小球系膜细胞培养

肾小球系膜细胞 (ＧＭＣ)是肾小球中功能最活跃的一类细胞 ,其具有多种功能 ,如分泌细胞基质 ,产生细胞因子 ,吞噬清除大分子物质及类似平滑肌细胞的收缩功能[1 ] 。因此ＧＭＣ的体外培养是研究肾小球疾病的发生、发展必不可少的手段之一[2 ] 。近年来我国多家实验室成功的培养了大鼠ＧＭＣ[3 ] 。本实验室在此基础上进行了技术改良 ,成功的培养了家兔ＧＭＣ ,现总结如下。1　材料与方法1.1　材料1.1.1　试剂　Ⅰ号培养液ＲＰＭＩ 16 40(ＧＩＢＣＯ公司 ) ,丙酮酸钠 2ｍｍｏｌ Ｌ ,ＨＥＰＥＳ15ｍｍｏｌ Ｌ ,Ｌ 谷氨酰胺 30 0ｍｇ Ｌ ,青霉…     

抗氧化肽SS-31对高糖诱导的小鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响

目的观察抗氧化肽SS-31对高糖诱导小鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响。方法将体外培养小鼠肾小球系膜细胞分为正常糖组、正常糖+甘露醇组、高糖组及高糖+SS-31组。采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)及流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞ROS水平;Western blot检测caspase-3、cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、p38 MAPK、p-p38 MAPK及细胞色素C的表达。结果与正常糖组相比,高糖组系膜细胞ROS产生和细胞凋亡明显增加,cleavedcaspase-3和p-p38 MAPK表达增高,Bax/Bcl-2比率明显升高以及细胞色素C易位。SS-31干预能够明显抑制高糖诱导的系膜细胞凋亡和ROS产生,下调cleaved caspase-3和p-p38 MAPK的表达,减少Bax/Bcl-2比率和细胞色素C易位。结论 SS-31能够抑制高糖诱导的系膜细胞凋亡可能是通过减少ROS产生,保护线粒体功能,抑制p38MAPK信号通路激活而实现的。     

泻心汤有效成分对高糖诱导的HK-2细胞迁移的抑制作用

目的研究泻心汤有效成分对高糖诱导的肾小管上皮（HK-2）细胞迁移作用的影响。方法体外高糖（30mmol·L-1）培养HK-2细胞,分别加入不同浓度的大黄酸、小檗碱和黄芩苷,孵育48h后采用Transwell法检测细胞迁移能力,荧光定量PCR法检测黏着斑激酶（FAK）mRNA表达,Westernblot法检测a-平滑肌肌动蛋白（a-SMA）表达;孵育24h后收集细胞上清,利用比色法检测丙二醛（MDA）的含量及超氧化物歧化酶（SOD）活力。结果高糖诱导IIK-2细胞迁移能力增强,大黄酸、小檗碱和黄芩苷均可不同程度地抑制细胞迁移能力,降低FAKmRNA表达、a-SMA蛋白表达和MDA产生,并提高SOD的酶活力。结论泻心汤有效成分具有抑制高糖诱导的HK-2细胞迁移作用。     

泻心汤在急性炎症动物模型上的抗炎效应

目的研究泻心汤的抗炎效应及抗炎作用的机制。方法采用4种急性炎症模型,包括大鼠角叉菜胶及蛋清足肿胀、2%冰醋酸小鼠腹腔渗出和小鼠内毒素急性肺损伤模型,观察泻心汤对动物实验性急性炎症模型的影响;并观察小鼠内毒素急性肺损伤模型中,泻心汤对血浆一氧化氮合成酶、一氧化氮、肿瘤坏死因子-α及自由基产物丙二醛的影响。结果泻心汤ig给药后对上述4种炎症模型都具有良好的抗炎效果;并可以抑制内毒素炎症过程中诱生型一氧化氮合成酶的活性,抑制一氧化氮、肿瘤坏死因子-α等炎症因子的产生,减少自由基产物丙二醛生成。结论泻心汤具有良好的抗炎效应,且可以通过多途径产生抗炎作用。     

黄连素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞FN及p38MAPK信号通路的影响

目的研究黄连素对高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞细胞外基质成分纤维连接蛋白及p38MAPK信号通路的影响,进一步探讨黄连素抗糖尿病肾病的作用机制。方法实验分组:正常对照组、甘露醇组、高糖组、高糖+SB203580组、高糖+黄连素低剂量组、高糖+黄连素高剂量组共6组,观察黄连素对高糖培养下的大鼠肾小球系膜细胞纤维连接蛋白以及p38MAPK信号通路蛋白表达的影响。结果与高糖组相比,黄连素降低系膜细胞纤维连接蛋白的蛋白表达水平,抑制p38MAPK及其下游核转录因子CREB的磷酸化。结论黄连素抗糖尿病肾病的作用可能与其减少细胞外基质成分FN的积聚,抑制p38MAPK信号通路激活密切相关。     

泻心汤黄酮类成分在大鼠体内的药代动力学研究

研究泻心汤中黄酮类成分在大鼠体内药代动力学规律。大鼠灌胃给予泻心汤12 g·kg^-1，给药前及给药后不同时间采集血样或尿样，HPLC法测定黄酮类成分浓度，血药浓度-时间数据和尿药排泄量-时间数据用DAS软件进行动力学分析。采用大鼠肾匀浆温孵法，进行黄芩苷的体外代谢研究。结果显示,黄芩苷、汉黄芩苷血药浓度迅速达峰，药时曲线呈现双峰现象，消除T_1/2均为6 h左右；黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素在尿中均有排泄，尿中排泄量占给药量均<10%，尿排泄T_1/2在6～8 h；大鼠肾匀浆可将黄芩苷代谢生成黄芩素，酶动力学参数V_max＝702 nmol·min^-1·g^-1(protein)，K_m＝135 μmol·L^-1。可见，泻心汤中黄酮类成分可迅速吸收进入体内；黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素均可从尿排泄，但尿药排泄量较少；肾脏可将黄芩苷代谢成黄芩素。     

泻心汤及其有效成分组合物抗动脉粥样硬化作用的比较研究

目的：在抗动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）主要药理作用环节比较泻心汤（XXD）与有效成分组合物（CECs）的效应,为阐明泻心汤抗AS效应物质基础提供依据。方法：选用转基因Fli1：eGFP品系斑马鱼幼鱼,通过喂食高胆固醇饲料10 d建立AS模型,实验分为空白组、模型组、阳性对照组（辛伐他汀,0.1 μmol·L^-1）、泻心汤组（50,250,500 mg·L^-1）及有效成分组合物组（2.962、14.81、29.62 mg·L^-1）,实验结束后,测定斑马鱼甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-c）、丙二醛（MDA）及超氧化物岐化酶（SOD）的含量,观察斑马鱼血管中胆固醇积累的情况。结果：与模型组比较,泻心汤及有效成分组合物能够明显降低斑马鱼TG、TC、LDL-c水平,提高HDL-c水平（P<0.05或P<0.01）;降低MDA水平,提高SOD水平（P<0.05或P<0.01）;抑制血管中胆固醇的积累（P<0.05或P<0.01）,且有效成分组合物的效应强度可达到泻心汤的80%以上。结论：有效成分组合物在调节脂质水平、改善抗氧化能力及抑制血管中胆固醇积累等药理作用环节能较好的代表泻心汤发挥抗AS作用,可认为是泻心汤抗AS的主要效应物质。     

灯盏花素对高糖环境肾系膜细胞c-fos、c-jun蛋白表达的影响

目的　观察高葡萄糖环境中 ,蛋白激酶C(PKC)抑制剂灯盏花素对肾小球系膜细胞 (GMC)c fos、c jun蛋白表达和Ⅳ型胶原 (C Ⅳ )合成的影响 ,探索糖尿病肾病防治的新途径。方法　原代培养大鼠GMC ,分别置于正常葡萄糖 (对照组 )、高葡萄糖 (高糖组 )和高葡萄糖加灯盏花素 (高糖加灯盏花素组 )环境中 ,观察干预 2 4h、4 8h和 1wk后GMCc fos、c jun蛋白表达、C Ⅳ合成和PKC活性的变化。结果　与对照组比较 ,高糖组干预 2 4h后c fos、c jun蛋白表达同时明显增高 ,4 8h后c fos开始下降 ,而c jun 1wk后仍保持高水平 ,高糖组C Ⅳ合成 1wk后增加 ,各观察时点PKC活性均较对照组明显增高 ;而高糖加灯盏花素组各时点c fos、c jun蛋白表达、C Ⅳ合成和PKC活性均低于高糖组。结论　高葡萄糖可促使GMC中c fos、c jun蛋白表达和C Ⅳ合成增加 ,此可能为PKC活化所介导 ,灯盏花素可通过抑制PKC活化而有效阻止高葡萄糖引起的上述变化。     

半夏泻心汤治疗消化性疾病的理论基础及概述

大量研究表明,半夏泻心汤可有效治疗和改善消化系统疾病。本文就半夏泻心汤在该领域的临床进展和机制作一综述,旨在为临床提供必要的参考和指导,以及未来研究提供证据基础。     

大黄酸对人肾小球系膜细胞功能的影响

目的探讨大黄酸防治糖尿病肾病的作用机制。方法用细胞培养、ELISA、明胶酶谱及免疫沉淀、Western blot等技术,研究了大黄酸对肾小球系膜细胞转化生长因子(TGFβ₁)、基质金属蛋白酶-2,-9(MMP-2和MMP-9)及p38活化丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)活性的作用。结果大黄酸可显著抑制肾小球系膜细胞的增殖,对抗高糖诱导肾小球系膜细胞TGFβ₁活性升高的作用;对高糖诱导肾小球系膜细胞MMP-2,MMP-9,pro-MMP-2及pro-MMP-9的活性增加无明显影响,但可明显对抗高糖引起的肾小球系膜细胞p38MAPK活性增加。结论大黄酸减少FN的分泌可能与其降低p38MAPK及TGFβ₁活性有关。