抗杜氏利什曼原虫保护性单克隆抗体研究

Kala-azar is increasing in incidence in some endemic areas of China, such as provinces of Sichuan and Gansu. Monoclonal antibodies have been shown to interfere with the cutaneous leishmaniasis infection in the experimental animals. We have now raised McAb against membrane antigen of promastigotes of L. donovani canine isolate (the pathogen of visceral leishmaniasis). In this paper we report 3 McAb which inhibit the growth of promastigotes in vitro culture by incorporation of 3H-thymine deoxyriboside, such as McAb 2B12-A8, 2H6-E3, in the presence of complement, showing strong inhibiting effects with a decrease in incorporation of 3H-TdR, 94-99.3% rate of inhibition, whereas the inhibition rate induced by McAb 1B1-C2 fluctuated in a range of 68-95%, which is identical with the results of macrophage infection inhibition test by the same McAb, 61-87%. The results of ultrastructural localization of L. donovani antigen by protective McAb 2H6-E3 with immunogold technique showed the gold particles, in clumps, widely distributed on the outer side of promastigotes membrane. According to the high density of localized gold particles, it is suggested that this antigen is abundant on the plasma membrane.     

抗杜氏利什曼原虫保护性单克隆抗体研究

作者用~3H-胸腺嘧啶核苷掺入法筛选出的3株单克隆抗体(McAb)对L.d.前鞭毛体具有抑制作用,并以2B12-A8及2H6-E3作用最强,在补体协同作用下,其抑制率稳定在94～99.3％的优异水平。而1B1-C2加补体的抑制率波动于68～95％.用McAb 1B1-C2对L.d.同株前鞭毛体分别进行~3H-胸腺嘧啶核苷掺入法及巨噬细胞吞噬抑制试验,两法所得抑制率极为相近,分别为68～95％及61～87％。经免疫金技术超微定位证实,抑制作用最强的McAb 2H6-E3识别的抗原较广泛地存在于前鞭毛体膜外沿。此保护性McAb的发现,为黑热病免疫预防的研究提供了重要基础。     

抗杜氏利什曼原虫单克隆抗体的研究——对新疆株保护性抗体的探索(摘要)

本文报道用杜氏利什曼新疆株前鞭毛体免疫BALB/C小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞系SP2/O融合,融合率为91.7％。经用ELlSA法检测抗体,获得9个分泌抗体的杂交瘤细胞孔(阳性率为26.5％)。选择其中一个稳定的分泌抗体的B细胞株进行再克隆后,用7个呈单个克隆细胞生长阳性孔获得的腹水作了进一步研究。7个McAbs的特异抗体滴度在1:12,800～1:839,200之间(ELISA),又经间接荧光法证实且进一步筛选发现,其中E_(12)、A_(11) McAbs具有一定保护性功能。     

抗杜氏利什曼原虫单克隆抗体识别抗原分子的检测

本文报道用SDS-PAGE、Western blot和ELISA方法,对杜氏利什曼原虫新疆株前鞭毛体中McAbs识别的抗原成分进行了检测。我们制备的抗杜氏利什曼原虫新疆株McAbs(A-9、A-11、C-11、E-12和H-10)共识别7条特异性抗原区带,抗原分子量分别为77000、74000、59000、54000、48000、43000和41000。     

抗绿脓杆菌Ⅰ群10115株单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选和检定

作者用SP2/0骨髓瘤细胞与绿脓杆菌Ⅰ群10115株免疫的BALB/c鼠脾细胞融合获得三株连续分泌抗绿脓杆菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株C_3、D_1和D_3,对其中C_3杂交瘤株作了PHA、ELISA、IFA检定分析,证明能分泌高效价特异的单克隆抗体。PAGE结果出现一特殊区带。单克隆抗体亚类检定结果为IgM及IgG_1。     

小鼠对杜氏利什曼原虫中国株易感性及受染小鼠免疫反应的观察

作者用杜氏利什曼原虫中国株感染BALB/c、DBA/1、ICR和615四个品系小鼠,发现此四品系小鼠对该病原体的易感性和受染后的免疫反应各不相同,各品系小鼠受染后分别呈现自愈、潜伏和发病状态,与人群对杜氏利什曼原虫感染的易感性和免疫反应类型相似。     

七株抗风疹病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

先天性风疹感染能引起胚胎发育的多种畸形和新生儿多器官、系统的病变。快速、早期诊断风疹感染对预防新生儿畸形的发生有重要意义。我们用风疹病毒Gos株免疫BALB/C小鼠5次,取其脾脏与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用HI和ELISA方法平行筛选,得出七株抗风疹杂交瘤细胞株,其染色体数为90左右。HI效价分别为512、512、256、256 256、128和128(见表)。     

抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体的研究——12株杂交瘤细胞的建立及其分泌抗体的分析

本文报道12株分泌抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体(HBsAg McAb)杂交瘤细胞的建株及其 McAb 性质的分析结果,用 ID、CEP、PHA 和 ELISA 等四种方法均测得较高水平的McAb。杂交瘤细胞培养液中 McAb 的 PHA 效价为1:80～1:320,由杂交瘤诱生的小鼠腹水 McAb的 ID 和 CEP 效价可高达1:3,200～6,400,PHA 和 ELISA 滴度分别为10~(-4)～10~(-5)和10~(-5)～5×10~(-7)。将这些腹水以 PBS 稀释到 10~(-5),分别与~(125)I-HBsAg(2×10~4cpm)结合,其结合率为52.8～68.4%.12个 McAb 的特异性均良好,其中1个为抗“HBs/d”亚型抗体,其余的均为抗“HBs/a”型特异性抗体。这些 McAb 均属小鼠 IgG_1亚类。选出其中3个 McAb 用于制备 HBsAg 诊断试剂,获得良好结果。     

产生抗人红细胞抗体的杂交瘤株建立

Kohler和Milstein首先报道抗绵羊红细胞的单克隆细胞株,1982年Anstee等制备了多株抗人红细胞杂交瘤株,并研究了红细胞表面的分子结构。1981年葛锡锐等建立了抗北京鸭红细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞株,嗣后又见国内实验室制成抗绵羊红细胞杂交瘤。我们应用细胞融合技术建立了产生抗人红细胞抗体的杂交瘤细胞株。     

抗黄疸出血群赖型017株钩端螺旋体单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选和检定

用黄疸出血群赖型017株钩端螺旋体免疫BALB/c/小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞系SP2/0融合,经克隆化获得分泌抗赖型017株钩端螺旋体的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用酶联免疫吸附试验和间接免疫荧光抗体法,证实该株杂交瘤细胞所分泌的是特异性抗体,注入同系小鼠腹腔可诱生合高效价单克隆抗体的腹水,与杂交瘤细胞培养上清效价相比,增高800倍。单克隆抗体亚类检定结果为IgM及IgG_(2b)。     

杜氏利什曼原虫假定蛋白PA5的原核表达与生物信息学分析

目的扩增杜氏利什曼原虫假定蛋白PA5基因,原核表达该假定蛋白并预测其结构与功能。方法以杜氏利什曼原虫前鞭毛体基因组DNA为模板,巢式PCR法扩增该基因,将其克隆入pQE30质粒构建pQE30-PA5重组质粒,经IPTG诱导表达目的蛋白。采用生物信息学方法对该蛋白进行同源性分析、信号肽及跨膜区预测、蛋白质结构与B细胞抗原肽位点分析。结果成功扩增出PA5基因,序列全长为765 bp,构建的pQE30-PA5重组质粒,经诱导后目的蛋白以包涵体形式表达。所获得的蛋白含254个氨基酸,相对分子质量为27 065,等电点为5.71的亲水性不稳定蛋白,不含信号肽及跨膜区。二级结构以α-螺旋及不规则卷曲为主,共含5个B细胞抗原肽片段。结论成功表达了杜氏利什曼原虫PA5蛋白,该亲水蛋白具有体液免疫刺激潜能,具有利什曼病潜在免疫诊断价值。     

抗人A型红细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞建株

SRBC-B_3单克隆杂交细胞株是用小鼠骨髓瘤细胞 SP2/0与经过 A 型红细胞免疫BALB/C 小鼠脾脏中的 B 淋巴细胞融合而成的细胞株。该株能分泌抗 A 抗体,与 A 型红细胞发生凝集,有高度专一性与特异性。无额外抗体,对 ABO 血型鉴定有一定可靠性。     

利什曼原虫免疫荧光试验检测血清抗双链DNA抗体的初步观察

抗双链DNA 抗体(抗—dsDNA)是一种对系统性红斑狼疮(SLE)具有较高特异性的自身抗体,对SLE 与其他结缔组织病的鉴别诊断有重要意义。检测抗(?)dsDNA 的方法较多,Aarden 等(1975)创用的青蝇短膜虫(Crithidia Luc-iliae)间接免疫荧光法比较简便可靠,由于该虫的动基体为浓缩的dsDNA 组成,是理想的抗原基质,阳性时在荧光显微镜     

一株抗重组人促红细胞生成素单克隆抗体杂交瘤的研制

目的　研制特异性识别人促红细胞生成素的单克隆抗体 ,并对其生物学特性作出初步鉴定。方法　采用重组人促红细胞生成素 (rhEPO)为抗原 ,常规免疫BALB/c小鼠 ,经细胞融合、ELISA筛选、有限稀释亚克隆获得抗人EPO杂交瘤 ,以免疫印迹和快速Ig亚型分类对所获单抗作出初步鉴定。结果　经筛选获得 1株稳定分泌的抗rhEPO单抗的杂交瘤细胞株 (1D1)。亚型鉴定为IgG2b ,轻链为κ链 ,用Westernblot分析证实该单抗对rhEPO特异性识别。结论　成功获得 1株可分泌特异性识别rhEPO的单克隆抗体的杂交瘤     

一株抗重组人促红细胞生成素单克隆抗体杂交瘤的研制

目的 研制特异性识别人促红细胞生成素的单克隆抗体,并对其生物学特性作出初步鉴定。方法 采用重组人促红细胞生存素（ｒｈＥＰＯ）为抗原,常规免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,经细胞融合、ＥＬＩＳＡ筛选、有妻稀释亚克隆获得抗人ＥＰＯ杂交瘤,以免疫印迹和快速Ｉｇ亚型分类对所获单抗作出初步鉴定。结果 经筛选获得１株稳定分泌的抗ｒｈＥＰＯ单抗的杂交瘤细胞株（１Ｄ１）。亚型鉴定为ＩｇＧ２ｂ,轻链为ｋ链,用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析证实该单抗为ｒｈＥＰＯ特异性识别。结论 成功获得１株可分泌特异性识别ｒｈＥＰＯ的单克隆抗体的杂交瘤。     

分泌抗——HBe单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用ＨＢｅＡｇ阳性血清纯化ＨＢｅＡｇ，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合，反复克隆化培养，最终获得４株分泌抗－ＨＢｅ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对其中两株进行了鉴定。其细胞培养上清中的ＥＬＩＳＡ效价的分别为１：８００和１：５００，诱生同属小鼠腹水中的ＥＬＩＳＡ效价均为１：１０００，特异性试验表明，两株杂交瘤分泌的抗体为特异性抗体，小鼠Ｉｇ亚类鉴定，两株抗体均为ＩｇＧ１亚类球蛋白。细胞染     

抗Mac-1单克隆抗体和细胞因子对利什曼原虫入侵和细胞内生存的抑制作用

目的：探索细胞内利什曼原虫的入侵、生存机制,为研制阻断利什曼原虫与巨噬细胞结合的新型抗利什曼药物以及利什曼病免疫预防和免疫治疗的研究提供理论基础。方法：采用抗Ｍａｃ １单克隆抗体（Ｍ１／７０和Ｍ１８／２）和重组的ＩＦＮ γ,ＴＮＦ α和ＩＬ ３处理巨噬细胞,观察经上述因子处理后的巨噬细胞对杜氏利什曼原虫前鞭毛体入侵和无鞭毛体在细胞内生存的影响。结果：经Ｍ１／７０和Ｍ１８／２单抗处理后巨噬细胞对杜氏利什曼原虫的易感性明显降低,其原虫感染率和受染巨噬细胞内入侵的原虫数量减低,原虫对巨噬细胞的入侵过程和速度也减慢。Ｍ１／７０和Ｍ１８／２两种单抗同时应用,则对原虫入侵巨噬细胞的抑制作用更为显著。通过对实验中所用的三种细胞因子活化巨噬细胞能力的观察发现,重组的ＩＦＮ γ或ＴＮＦ α均可激活巨噬细胞,提高巨噬细胞的杀原虫活性,且上述两种细胞因子联合对巨噬细胞的活化具有协同增强作用。但重组的ＩＬ ３不仅不能激活巨噬细胞而且尚抑制ＩＦＮ γ对巨噬细胞的活化作用。通过测定活化巨噬细胞内氧化氮产物（ＮＯ２）的生成量,观察ＮＯ２生成与巨噬细胞对原虫杀伤活性的关系,进一步探索了活化巨噬细胞对细胞内原虫的杀伤机制。结论：作用于巨噬细?     

抗囊虫单克隆抗体杂交瘤株建立过程中几种方法的比较

囊虫病是人猪共患的寄生虫病,制备抗囊虫单克隆抗体有助于囊虫病的诊断和治疗。1983年R.J.We-sterwoudt等报导,人脐带血清(HUCS)在用于细胞克隆和细胞融合方面具有比胎牛血清(FCS)优越之处。如能用HUCS代替FCS,可提高细胞的融合率,并能促进细胞的增殖。我们在本工作中,比较了HUCS和FCS以及一次和二次PEG融合对结果的影响,为其他杂交瘤方面的工作提供经验。     

一株能分泌抗人A型红细胞的单克隆抗体杂交瘤细胞株已建立

浙江医科大学免疫研究室和附属二院血库,应用淋巴细胞杂交瘤技术,以人A型Rh( )红细胞免疫的小鼠脾细胞与NSI骨髓瘤细胞融合,经HAT选择性培养基培养,用血凝试验方法筛选出分泌抗体的杂交瘤细胞,经过三次有限稀释克隆化,建立了一株能持续分泌抗人A型红细胞的单克隆抗体杂交瘤细胞株,定名为ZMC_9,于7月25日在杭州通过鉴定。     

分泌抗HLA Class Ⅰ单态性单克隆抗体杂交瘤细胞的建株和鉴定

本文报道了应用杂交瘤技术制备抗 HLA-I 类抗原单态性单克隆抗体,命名为CJH-F6,经流式细胞间接免疫荧光分析,放射免疫沉淀 SDS-PAGE 测定,微量淋巴细胞毒实验和血小板吸收试验均证明为抗 HLA-I 类抗原单态性单克隆抗体,Ig 类别为 IgM,文内讨论了此单抗的应用。