工频电磁场对体外培养的小鼠骨髓间充质干细胞增殖与分化的影响

目的　研究 5 0Hz工频电磁场对体外培养的小鼠骨髓间充质干细胞的增殖、分化及细胞内环磷酸腺苷 (cAMP)水平的影响。方法　体外培养小鼠骨髓间充质干细胞 ,取第 3代细胞 ,应用工频电磁场及成骨性诱导剂干预 ,并分别于第 3天和第 5天用MTT法检测其增殖活性 ,用放免法检测细胞内cAMP浓度 ,于第 7天检测细胞内碱性磷酸酶 (ALP)的活性。结果　频率 5 0Hz、强度 2mT的正弦波电磁场能抑制体外培养的小鼠骨髓间充质干细胞的增殖 (P <0 .0 5 ) ,使其ALP活性增高 (P <0 .0 5 ) ,在磁场作用的早期 ( 1～ 3d) ,细胞内的cAMP水平明显增高 (P <0 .0 1) ,继续暴磁至第 5天 ,cAMP水平不再发生变化 (P >0 .0 5 )。结论　 5 0Hz工频电磁场可能通过作用于cAMP 蛋白激酶A信号转导系统 ,从而调控体外培养的小鼠骨髓间充质干细胞的增殖与分化 ,此调控作用可能发生在细胞受电磁场作用的早期。     

cAMP的生理作用与临床

cAMP(环磷酸腺苷、3′5′环化腺苷一磷酸、c-3′5′AMP)是Suther Land于1968年发现的一种具有生物活性的物质.它既非是核酸的组成部分,变非是核酸的代谢产物.它在绝大多数动物的细胞中都可生成和分解.自cAMP问世以来,对于肽类及蛋白质类激素的作用机理有了进一步阐明,对于类固醇激素的作用机理也有了一定了解.多数激素都是通过cAMP发挥生理作用影响酶的生成或活性以实现对物质代谢的调节.因而也称之为激素作用中的第二信使.一、cAMP的分布、生成和分解cAMP的结构式如下,     

组胺H2受体激动剂4-甲基组胺对HL-60白血病细胞分化的作用

以往我们报道了组胺H_2受体激动剂4-甲基组胺具有抑制白血病HL-60细胞增殖的作用。在本实验中对4-甲基组胺诱导HL-60白血病细胞分化的作用进行了研究。采用体外细胞培养的方法,加入不同浓度的4-甲基组胺连续培养1—6天。以NBT还原及细胞形态判定细胞分化的程度,同时测定细胞内cAMP和[Ca~(2 )]i浓度的变化,以探索4-甲基组胺对HL-60白血病细胞可能的作用机理。研究结果表明,用不同浓度的4-甲基组胺处理1-6天,HL-60白血病细胞可被诱导分化为不同成熟程度的粒细胞。当用4-甲基组胺处理HL-60细胞30分钟后,细胞内的cAMP浓度呈浓度依赖性地升高。同样,细胞内钙离子浓度也呈现浓度依赖性升高。这表明4-甲基组胺诱导HL-60白血病细胞分化是通过升高细胞内。cAMP以及[Ca~(2 )]i浓度介导的。     

cAMP对B_(16)-黑色素瘤细胞生长的密度—依赖调节和酪氨酸酶活性的作用

本文用1-甲基3-异丁基黄嘌呤(MIX)作为环状核苷酸磷酸二酯酶的抑制剂,从而考察酪氨酸酶活性和细胞分裂与细胞内cAMP含量变化的关系,并观察细胞密度对细胞内cAMP浓度和酪氨酸酶活性的影响。用MIX与培养的黑色素瘤细胞共同保温,可使细胞内的cAMP持续升高。而cAMP的升高先于酪氨酸酶比活性的增加。培养的黑色素瘤细胞有两组集落,一组平均群系加倍时间比另一组的高二倍。生长都显示出密度依赖的抑制作用。在对数生     

钙在嗜铬细胞瘤细胞缺氧性脑损伤中的作用研究

目的观察缺氧后大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞内游离钙的浓度(犤Ca2+犦i)、环磷酸腺苷(cAMP)、钙调蛋白(CaM)和钙调蛋白激酶II(Ca2+/CaM-PKII)的变化。方法采用放免技术,从细胞水平进一步观察缺氧对PC12细胞的毒性、细胞内犤Ca2+犦i变化,cAMP、CaM和Ca2+/CaM-PKII的变化。结果缺氧组PC12细胞cAMP、CaM含量在缺氧后24h明显高于正常对照组;Ca2+/CaM-PKII活性明显低于正常对照组。结论犤Ca2+犦i、cAMP、CaM和Ca2+/CaM-PKII在缺氧PC12细胞损伤机制中起了重要的作用。     

胎球蛋白-a对3T3-L1脂肪细胞脂肪分解的影响

目的观察胎球蛋白-a(fetuin-a)对脂肪分解的影响并探讨其可能的机制。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞,分化成熟后用不同浓度的fetuin-a孵育。采用甘油检测试剂盒测定释放到上清液的甘油含量;采用Real-timePCR检测细胞中脂肪甘油三酯脂肪酶(Adipose triglyceride lipase,ATGL)的mRNA表达;采用western blot检测细胞内磷酸化激素敏感脂肪酶(Hormone Sensitive Lipase,HSL)和ATGL的蛋白表达;采用ELISA试剂盒检测细胞内环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)的含量。结果 Fetuin-a能够抑制成熟脂肪细胞的脂肪分解,具有剂量依赖关系。Fetuin-a能够降低细胞内cAMP及磷酸化的HSL含量,同时使脂肪细胞ATGL mRNA水平及蛋白表达降低。结论 Fetuin-a抑制3T3-L1脂肪细胞的脂肪分解,其机制可能是通过抑制cAMP-PKA-HSL通路以及降低细胞内ATGL的表达而发挥作用的。     

尿多酸肽联合环腺苷酸诱导维甲酸耐药急性早幼粒细胞白血病细胞凋亡的实验研究

目的 探讨尿多酸肽(CDA-Ⅱ)单独和联合环腺苷酸(cAMP)对维甲酸耐药的急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞的作用.方法 以维甲酸耐药的APL细胞株NB4-R2为体外模型,观察使用CDA-Ⅱ单独和联合cAMP处理前后细胞生长和形态的改变;同时利用流式细胞术检测细胞的凋亡特征,包括细胞内DNA含量的分布、亚二倍体(sub-G1)细胞群所占比例、凋亡相关蛋白Bcl-2的表达水平等;并通过电泳鉴定因基因组DNA非随机性降解导致的梯状DNA.结果 CDA-Ⅱ可以通过降低细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2的水平,诱导NB4-R2细胞发生凋亡;cAMP则能显著加强CDA-Ⅱ的这一促凋亡作用1 g/L CDA-Ⅱ联合100 μmol/L cAMP共同处理NB4-R2细胞48 h和72 h时Bcl-2阳性细胞比例分别下降至(15.1±4.8)%和(7.3±2.9)%.100 μmol/L cAMP单独作用可使MB4-R2细胞的Bcl-2阳性率由(92.0±0.6)%下降至(75.3±2.0)%.结论 尿多酸肽CDA-Ⅱ联合cAMP对于维甲酸耐药的APL细胞株具有强烈的诱导凋亡效应.     

钙在嗜铬细胞瘤细胞缺氧性脑损伤中的作用研究

目的 观察缺氧后大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（PC12）细胞内游离钙的浓度（[Ca^2 ]i)，环磷酸腺苷（cAMP），钙调蛋白（CaM)和钙调蛋白激酶Ⅱ（Ca^2 /CaM-PKⅡ）。方法 采用放免技术，从细胞水平进一步观察缺氧对PC12细胞的毒性，细胞内[Ca^2 ]i变化，cAMP,CaM和Ca^2／CaM-PKⅡ的。结果 缺氧组PC12细胞cAMP,CaM含量在缺氧后24h明显高于正常对照组：Ca^2 /CaM-PKⅡ活性明显低于正常对照组。结论 [Ca^2 ]i,cAMP,CaM和Ca^2 /CaM-PKⅡ在缺氧PC12细胞损伤机制中起了重要的作用。     

人视网膜色素上皮细胞氧化应激损伤模型的建立以及维生素C保护作用的观察研究

目的研究氧化应激状态下维生素C作为抗氧化剂对视网膜色素上皮细胞的保护作用。方法外源性过氧化氢(H_2O_2)梯度浓度为0、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、250μmol/L作用于ARPE-19细胞,观察细胞形态变化。MTT方法检测细胞活力,2'7'-二氯荧光乙酰乙酸钠(DCFH-DA)荧光探针检测12 h或24 h细胞内活性氧(ROS)的生成,确定H_2O_2的适合作用浓度(100μmol/L)。梯度浓度(0、20μmol/L、100μmol/L、500μmol/L)的维生素C作用于氧化应激下的ARPE-19细胞,检测细胞存活率、细胞凋亡和细胞内ROS的改变。结果外源性H_2O_2作用下,ARPE-19细胞生存力下降且呈剂量依赖性及时间依赖性,同时ARPE-19细胞内ROS水平上升,提示H_2O_2处理后可诱导ARPE-19细胞的氧化应激损伤。考虑到人体自然状态下,RPE所受到的氧化应激损伤是低强度、长时间的累积效应,所以H_2O_2的适合作用浓度确定为100μmol/L。维生素C处理后,中等浓度(100μmol/L)的维生素C显著提高了ARPE-19细胞氧化应激下的生存率,同时显著降低细胞内ROS水平以及细胞凋亡率。而低浓度和高浓度的维生素C无此作用。结论外源性H_2O_2可诱导人视网膜色素上皮细胞ARPE-19细胞发生氧化应激反应,导致细胞损伤。适当浓度的维生素C可降低细胞内氧化应激水平,减少ARPE-19细胞损伤及凋亡,起到抗氧化损伤的保护作用。     

业务测验(59)答案和题解

题解1.氢甲苯咪酮是新型正性肌力作用的药物,其强心作用并非通过兴奋β受体,而可能与心脏磷酸二酯酶Ⅲ受抑制有关,使心肌细胞内环磷腺苷(cAMP)浓度增高,促进细胞外钙离子(Ca~(2 ))内流,肌浆网主动摄取Ca~(2 )及激活磷酸化酶而使糖原分解增加,三磷酸腺苷(ATP)生成增多使心肌收缩力增强。此外,高浓度时尚能抑制钠离子(Na~ )-钾离子(K~ )-     

细胞内钙与K562/A02细胞多药耐药相关性的研究

本研究旨在探讨白血病耐药细胞的发生及其逆转机制与细胞内钙离子浓度的关系。用甲基四唑蓝法(MTT)测定柔红霉素 (daunomycin ,DNR)的细胞毒性 ,用Fura 2 /AM方法测定耐药细胞株K5 6 2 /A0 2及其敏感株K5 6 2的静息 [Ca2 ]i水平 ,并观察了柔红霉素及耐药调节剂汉防己甲素 (Tetrandrine,Tet)、屈洛昔芬 (droloxifene,DRL)单独或联合应用后细胞内游离钙离子浓度的变化。结果表明 :1μmol/LTet,5 μmol/LDRL均能增加DNR对耐药细胞系K5 6 2 /A0 2的细胞毒作用 ,IC50 (半数抑制量 )分别为 ( 7.2 8± 2 .0 6 ) μg/ml,( 7.5 8± 3.4 4 ) μg/ml,逆转倍数为 2 .94和 2 .82倍。两药联合作用明显增强 ,IC50 为 ( 1.6 6± 0 .4 1) μg/ml,逆转倍数达 12 .9倍。静息状态下K5 6 2 /A0 2细胞的游离钙离子浓度显著高于K5 6 2细胞。 1μmol/LTet,5 μmol/LDRL单独作用于K5 6 2 /A0 2细胞引起 [Ca2 ]i的明显升高 ,两者联合应用有拮抗作用。结论 :K5 6 2 /A0 2细胞内Ca2 浓度的增高可能是导致其耐药的原因之一 ,但耐药调节剂Tet,DRL对耐药细胞 [Ca2 ]i的影响在其逆转耐药中的作用有待进一步研究     

常氧与缺氧状态下豚鼠心肌细胞内钙离子浓度与葛根素注射液的干预

目的：探讨在常氧、缺氧状态下，豚鼠心肌细胞内游离钙离子浓度与葛根素注射液干预的影响，并与硝苯地平的作用相比较。方法：采用离体豚鼠心脏Langendorff法灌注。Ⅰ型胶原酶分离心肌细胞．并调整细胞数为2&;#215;10^9L^-1。在细胞外钙含量为2mmol／L情况下，采用F-2000型荧光分光光度计进行心肌细胞内钙含量测定，计算细胞内游钙离子浓度。将心肌细胞悬液分为6组，分别为常氧及缺氧条件下的对照组、葛根素注射液组、硝苯地平组。在常氧条件下(氧分压=15．9kPa)，观察100s后，随机选择3组分别加入营养液10μL、葛根素注射液10μL(终浓度：0．1mmol／L)、硝苯地平10μL(终浓度：20mmol／L)观察100，200，300，400，500s。而另外3组在缺氧条件下(氮气：0．1cm^3／s)也分别给予同浓度的上述3种药物后，按上述5个时间点进行观察。采用荧光分光光度计动态测量不同条件下各组心肌细胞内游离钙离子浓度的变化。结果：①在静息(0～100s)常氧状态(氧分压=15．9kPa)及控制细胞外细胞内游离钙离子浓度为2mmol／L(生理情况)时，6组的心肌细胞内游离钙离子浓度无显著差异(P&;gt;0．05)，故知6组的组间一致性较好，具有可比性。②心肌细胞内游离钙离子浓度：葛根素注射液组和硝苯地平组给药后100，200，300，400，500s均明显低于对照组(P&;lt;0．05～0．01)。但葛根素注射液组下降远度较硝苯地平组慢(P&;lt;0．05～0．01)。③心肌细胞内游离钙离子浓度：缺氧状态下，葛根素注射液组缺氧后100，200，300，400，500s增加较对照组缓慢(163．7&;#177;19．7)，(224．2&;#177;20．7)，(309．7&;#177;15．1)，(424．7&;#177;14．0)，(477．5&;#177;21．5)nmol／L；(208．8&;#177;28．9)，(328．5&;#177;14．4)，(401．8&;#177;21．2)，(534．3&;#177;20．8)，(751．4&;#177;36．0)nmol／L，P&;lt;0．01]。硝苯地平组在缺氧后100，200，300，400，500s比对照组增加少(P&;lt;0．01)，且降低速率较葛根素注射液组高【硝本地平组：(109．4&;#177;19．6)，(140．8&;#177;16．2)．(203．1&;#177;15．2)，(265．4&;#177;17．3)，(301．7&;#177;24．1)nmol／L,P&;lt;0．01】。结论：在常氧条件下葛根素注射液使心肌细胞内游离钙离子浓度明显下降；缺氧条件下，葛根素注射液延缓缺氧所引起的心肌细胞内游离钙离子浓度增加，从而阻止心肌细胞内钙超载，对心肌起到保护作用。葛根素注射液的作用与经典的钙通道阻断剂硝苯地平相似，但与硝苯地平比较，具有相对缓慢的抑制缺氧后心肌细胞内游离钙离子浓度升高的特点。     

转录因子T-bet/GATA-3的表达与Th1/Th2分化的相关性研究

辅助性T淋巴细胞(Th)1/Th2细胞之间的相互平衡在免疫应答中起关键作用,两者均从Th0细胞分化而来.Th1/Th2细胞的分化受多种因素影响,如抗原类型和浓度、抗原提呈细胞类型、局部微环境、黏附分子、激素等,其中局部微环境的调节尤为重要.而转录因子即具有重要的调节功能.转录因子T-bet和GATA-3是2种细胞内的分子,分别特异性地表达于Th1细胞和Th2细胞,并最终决定Th0向Th1/Th2的分化[1].     

体外缺血缺氧条件下人主动脉平滑肌细胞中 1-磷酸鞘胺醇的表达变化

目的:探讨缺血缺氧条件下1-磷酸鞘胺醇(S1P)在人主动脉血管平滑肌细胞(T/G HA-VSMC)收缩中的作用机制。方法:将传代培养的T/G HA-VSMC分为正常对照组和缺血缺氧组。缺血缺氧组采用低氧条件培养T/G HA-VSMC细胞来模拟蛛网膜下腔出血(SAH)所致的缺血缺氧环境;采用QT-PCR检测人鞘胺醇激酶1(SphK1)基因的m RNA表达;Western-blot法检测人SphK1基因的蛋白表达;ELISA法测定T/G HAVSMC细胞上清液和细胞内S1P浓度;慢病毒载体shRNA介导的T/G HA-VSMC细胞内SphK1基因表达沉默;采用钙离子荧光探针Fluo-3/AM检测T/G HA-VSMC细胞内Ca~(2+)浓度。结果:与正常对照组相比,缺血缺氧条件下人T/G HA-VSMC细胞内SphK1基因表达上调,且缺血缺氧组细胞培养液和细胞裂解液中S1P浓度均显著升高。缺血缺氧可诱导T/G HA-VSMC细胞内Ca~(2+)离子浓度增加,并且外源性S1P显著上调T/G HA-VSMC细胞内Ca~(2+)浓度;与正常对照组相比,shRNA干扰技术沉默SphK1基因表达和SphK1特异性抑制剂二甲基鞘胺醇(DMS)均显著抑制低氧诱导的T/G HA-VSMC细胞内S1P和Ca~(2+)浓度上调。结论:缺血缺氧可导致T/G HA-VSMC细胞内SphK1基因表达上调,进而促进S1P的合成代谢,而高浓度的S1P通过某种机制导致细胞内Ca~(2+)浓度水平增加导致血管收缩。     

西罗莫司对人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖的影响及其机制

目的研究西罗莫司(SRL)对体外培养的人子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞的增殖及其可能的机制。方法用氯化钴(CoCl2)诱导细胞模拟缺氧微环境,并根据CoCl2浓度不同分为0、25、50、100、150μmol/L组;选择CoCl2浓度为100μmol/L来模拟肿瘤内缺氧微环境,同时分别联合不同浓度(0、10、100、500、1 000 nmol/L)SRL作用细胞48 h。应用CCK-8法测定SRL对各组细胞抑制效应和RT-PCR测定各组mTOR、HIF-1αmRNA的相对表达量。结果随着CoCl2作用浓度的增加,Ishikawa细胞中HIF-1αmRNA表达增强(P<0.05),其中100、150μmol/L两组比较差异无统计学意义(P>0.05);缺氧条件下不同浓度的SRL可抑制Ishikawa细胞,且抑制率随药物浓度的增加而上升(P<0.05);缺氧条件下SRL可使Ishikawa细胞中mTOR、HIF-1αmRNA的表达降低并呈剂量依赖性(P<0.05)。结论缺氧微环境可以促进Ishikawa细胞中的HIF-1αmRNA的表达,HIF-1α可能通过在细胞缺氧调控中起作用而参与了肿瘤的发生发展。在缺氧条件下,SRL可通过抑制mTOR而下调人子宫内膜癌Ishikawa细胞内HIF-1α基因表达。这可能是SRL抗肿瘤的机制之一,并有望成为子宫内膜癌分子治疗的有力途径。     

维生素C保护视网膜色素上皮细胞的相关机制研究

目的研究氧化应激状态下维生素C作为抗氧化剂对视网膜色素上皮细胞的保护作用以及维生素C和SIRT1之间的调节机制。方法以人视网膜色素上皮细胞-19(ARPE-19)细胞为研究对象,分为空白对照组,无维生素C组(0μmol),低浓度维生素C组(20μmol),中等浓度维生素C组(100μmol)和高浓度维生素C组(500μmol)。培养过程中添加不同浓度维生素C之后对细胞加以H2O2(100μmol)处理12 h或24 h建立氧化应激模型。利用MTT法检测ARPE-19细胞存活率,膜联蛋白V-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡以及活性氧(ROS)试剂盒测定细胞内活性氧的改变。使用SIRT1靶向siRNA进行SIRT1敲除,细胞使用预定浓度的维生素C进行孵育,并分为空白对照组,阴性对照组,siRNA干扰组。先用10 m M SIRT1激动剂白藜芦醇(RSV)和5 m M SIRT1抑制剂烟酰胺(NA)对细胞进行孵育,然后加入H2O2(100μmol)处理12 h或24 h,RT-PCR及Western blot方法检测SIRT1、p53和Foxo3基因表达水平。结果经过H2O212 h处理后,较高浓度的维生素C(500μmol)与较低浓度(20μmol)的维生素C无明显保护作用,而中等浓度的维生素C(100μmol)能够显著提高细胞的生存能力(P0.05),减少ARPE-19细胞的凋亡数量(P0.05),降低细胞内ROS水平(P0.05),差异有统计学意义。维生素C的作用可上调H2O2作用后SIRT1转录因子和应激反应因子(p53和Foxo3)的表达。RSV及NA可分别上调及下调维生素C对H2O2刺激的ARPE-19细胞存活力,细胞凋亡和细胞内ROS水平的影响。RT-PCR及Western blot结果表明:维生素C浓度增加时,SIRT1表达增加,p53和Foxo3基因表达水平升高。敲除或上调SIRT1表达,可相应明显地增加或减少p53和Foxo3转录和蛋白水平的表达。结论维生素C可降低细胞内ROS水平,减少ARPE-19细胞凋亡,起到抗氧化损伤保护作用,有望成为年龄相关性黄斑变性的有效治疗方法。     

2-甲氧基雌二醇对MUTZ-1细胞内活性氧和线粒体膜电位的影响

目的探讨在2-甲氧基雌二醇(2-ME)诱导骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)MUTZ-1细胞凋亡中活性氧(ROS)和线粒体膜电位(Δψm)的作用及其作用机制。方法MUTZ-1细胞与不同浓度2-ME共育,FCM分析荧光探针DCFH-DA标记后细胞内ROS和荧光探针JC-1标记后细胞Δψm的变化。加入抗氧化剂过氧化氢酶(CAT)后,MUTZ-1细胞内相应指标的变化。结果经1~4μmol/L 2-ME作用MUTZ-1细胞12 h,与对照组相比,细胞内ROS升高(F=102.56,P<0.05)和细胞Δψm下调(F=108.02,P<0.05),且MUTZ-1细胞Δψm下降与细胞内ROS升高成正相关(r=0.981,P=0.019)。CAT能够明显抑制2-ME诱导MUTZ-1细胞内ROS升高(F=68.26,P<0.01)和细胞Δψm下调(F=55.29,P<0.01)。结论2-ME诱导MUTZ-1细胞凋亡,可能与2-ME刺激细胞内ROS积聚过多、损伤线粒体结构的完整性以及降低细胞线粒体膜电位有关。     

常氧与缺氧状态下豚鼠心肌细胞内钙离子浓度与葛根素注射液的干预

目的:探讨在常氧、缺氧状态下,豚鼠心肌细胞内游离钙离子浓度与葛根素注射液干预的影响,并与硝苯地平的作用相比较。方法:采用离体豚鼠心脏Langendorff法灌注,I型胶原酶分离心肌细胞,并调整细胞数为2×109L-1。在细胞外钙含量为2mmol/L情况下,采用F-2000型荧光分光光度计进行心肌细胞内钙含量测定,计算细胞内游钙离子浓度。将心肌细胞悬液分为6组,分别为常氧及缺氧条件下的对照组、葛根素注射液组、硝苯地平组。在常氧条件下(氧分压=15.9kPa),观察100s后,随机选择3组分别加入营养液10μL、葛根素注射液10μL(终浓度:0.1mmol/L)、硝苯地平l0μL(终浓度:20mmol/L)观察100,200,300,400,500s。而另外3组在缺氧条件下(氮气:0.1cm3/s)也分别给予同浓度的上述3种药物后,按上述5个时间点进行观察。采用荧光分光光度计动态测量不同条件下各组心肌细胞内游离钙离子浓度的变化。结果:①在静息(0～100s)常氧状态(氧分压=15.9kPa)及控制细胞外细胞内游离钙离子浓度为2mmo1/L(生理情况)时,6组的心肌细胞内游离钙离子浓度无显著差异(P>0.05),故知6组的组间一致性较好,具有可比性。②心肌细胞内游离钙离子浓度:葛根素注射液组和硝苯地平组给药后100,200,300,400,500s均明显低于对照组(P<0.05～0.01)。但葛根素注射液组下降速度较硝苯地平组慢(P<0.05～0.01)。③心肌细胞内游离钙离子浓度:缺氧状态下,葛根素注射液组缺氧后100,200,300,400,500s增加较对照组缓慢(163.7±19.7),(224.2±20.7),(309.7±15.1),(424.7±14.0),(477.5±21.5)nmol/L;(208.8±28.9),(328.5±14.4),(401.8±21.2),(534.3±20.8),(751.4±36.0)nmol/L,P<0.01犦。硝苯地平组在缺氧后100,200,300,400,500s比对照组增加少(P<0.01),且降低速率较葛根素注射液组高犤硝本地平组:(109.4±19.6),(140.8±16.2),(203.1±15.2),(265.4±17.3),(301.7±24.1)nmol/L,P<0.01犦。结论:在常氧条件下葛根素注射液使心肌细胞内游离钙离子浓度明显下降;缺氧条件下,葛根素注射液延缓缺氧所引起的心肌细胞内游离钙离子浓度增加,从而阻止心肌细胞内钙超载,对心肌起到保护作用。葛根素注射液的作用与经典的钙通道阻断剂硝苯地平相似,但与硝苯地平比较,具有相对缓慢的抑制缺氧后心肌细胞内游离钙离子浓度升高的特点。     

钙三醇和甲状旁腺素对鼠心肌细胞凋亡的影响及机制

目的：研究甲状旁腺素(parathyroid hormone，PTH)对心肌细胞内游离钙和细胞凋亡的影响，以及钙三醇的修复作用。方法：利用培养的新生SD大鼠(n=25)心肌细胞，以F1uo-3／AM负载，通过激光共聚焦显微镜测定细胞内游离钙浓度([Ca^2+],)；采用透射电镜和流式细胞仪观察细胞凋亡的变化。结果：PTH1-34 0．01μmol／L和0．1μmol／L刺激7d后，心肌细胞内钙荧光强度分别为186．0&;#177;43．6，217．9&;#177;22．2，、细胞凋亡率分别为(6．97&;#177;1．00)％和(12．58&;#177;1．75)％较对照组[(77．7&;#177;19．9)％，(0．12&;#177;0．11)％]显著增加，差异有显著性意义(F=158．52,54．19．P&;lt;0．01)。若以PTH1-34 0．1 μol／L刺激，并同时加入0．001μmol／L的钙三醇干预上述指标明显降低[分别为(114．3&;#177;29．9)％，(3．43&;#177;0．40)％]，差异有显著性意义(F=158．52，54．19，P&;lt;0．01)；但同时应用0．1μmol／L钙三醇干预，则无显著改善。结论：PTH1-34可以浓度依赖性增加心肌细胞内[Ca^2+]i，诱导细胞肥大和凋亡；适宜浓度的钙三醇干预，具有修复作用。     

二苯乙烯苷对谷氨酸致原代培养大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的观察二苯乙烯苷对谷氨酸 (Glu)致原代培养大鼠海马神经元损伤的保护作用。方法原代培养大鼠海马神经元细胞与不同浓度的二苯乙烯苷 (5— 10 0 μmol/L)共同孵育 2 4h ,加入工具药Glu(终浓度为 5 0 0 μmol/L)孵育。四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞存活率 ;乳酸脱氢酶 (LDH )漏出率法测定细胞膜损伤 ;使用荧光指示试剂Fluo 3 /AM负载后 ,在激光共聚焦显微镜下观察不同细胞内Ca2 的荧光强度。结果不同浓度的二苯乙烯苷与细胞孵育 2 4h后可明显拮抗Glu介导的神经毒性作用 ,细胞存活率明显增加 ,LDH漏出减少 ,细胞死亡率降低 ,并呈明显剂量依赖关系 ;细胞内的Ca2 荧光强度降低。结论二苯乙烯苷拮抗Glu诱导的神经毒作用的机制可能为选择性抑制大剂量Glu引起的Ca2 浓度异常升高。