白藜芦醇减少肥胖小鼠肝细胞焦亡的初步探讨

目的 研究白藜芦醇（resveratrol,RES）减少肥胖小鼠细胞焦亡致肝损伤的机制。方法 将雄性C57BL/6小鼠随机分为标准(SCD)、高脂（HFD）及高脂+白藜芦醇（HFD+RES）饮食3组，标准或高脂饮食喂养，HFD+RES小鼠在高脂饮食的同时胃饲白藜芦醇（400 mg/（kg·d）），持续22 w。测定体重，分析血脂和interleukin-1 beta (IL-1β)、interleukin-18(IL-18)水平，HE染色检测肝脏组织的形态学变化，免疫组化检测去乙酰化酶sirtuin-1(SIRT1)、P66SHC、NLR family pyrin domain containing 3 (NLRP3)的定位和表达，实时荧光定量RT-PCR和Western blot分析SIRT1、P66SHC(66kuSrchomology2domain-containingprotein)、NLRP3、cysteinylaspartatespecificproteinase-1(caspase-1)、gasdermin-D (GSDMD)、interleukin-1 beta (IL...     

急性胰腺炎患者外周血细胞焦亡相关因子表达及与预后的关系研究

目的 检测急性胰腺炎(AP)患者血清细胞焦亡相关因子核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)水平,并探讨其与AP患者病情严重程度及预后的关系。方法 选取2020年4月—2021年2月于本院住院治疗的264例AP患者为研究对象,根据严重程度将其分为重症AP(SAP)组86例、中重症AP(MSAP)组89例和轻症AP(MAP)组89例,根据SAP患者和MSAP患者28 d生存情况将其分为生存组145例和死亡组30例。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清细胞焦亡相关因子NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18水平,采用多因素Logistic回归分析影响AP患者预后的因素。结果 SAP组血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18水平均高于MSAP组和MAP组,MSAP组血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18水平均高于MAP组(P <0.05)。死亡组血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18...     

microRNA-703调控NLRP3介导的焦亡和炎症反应抑制小鼠子宫内膜异位症研究

目的：探讨microRNA-703(miR-703)调控NLRP3介导的焦亡和炎症反应影响小鼠子宫内膜异位症(EM)进展机制。方法：采用小鼠-小鼠腹腔植入方法构建子宫内膜异位症BABL/C小鼠模型。将小鼠分为EM组和对照组。免疫印迹法和酶联免疫法检测两组焦亡标志蛋白(NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1)和炎症因子表达(IL-1β、IL-18、TNF-α、IL-6)。实时荧光定量PCR检测两组miR-703含量。造模成功的小鼠分别腹腔注射miR-703 NC(EM+NC阴性组)、pre-miR-703(EM+miR-703组),检测两组小鼠子宫内膜异位组织大小,焦亡标志蛋白及炎性因子表达。结果：EM组小鼠NLRP3、caspase-1蛋白表达均高于对照组,炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α、IL-6水平(1.33±0.11ng/ml, 0.66±0.08ng/ml, 179.69±3.78pg/ml, 90.375±4.63pg/ml)均高于对照组(0.30±0.05ng/ml, 0.21±0.03ng/ml, 50.51±2.96pg/ml, 24.99...     

基于NLRP3炎症信号通路探讨山核桃叶总黄酮抗高尿酸血症作用机制研究

目的探讨山核桃叶总黄酮对高尿酸血症模型小鼠NLRP3炎性信号表达的影响。方法 ICR雄鼠腹腔注射氧嗪酸钾建立高尿酸血症动物模型,并将造模成功后的小鼠按体质量随机分为6组,每组8只,分别为模型组、Caspase-1抑制剂组、苯溴马隆组、山核桃叶总黄酮低剂量、中剂量、高剂量(50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg)组,另设正常组。用ELISA法检测各组血清IL-1β前体、IL-1β、IL-18炎性因子水平;Western blot检测肾脏组织NLRP3、Caspase-1、ASC表达情况。结果与正常组比较,模型组NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-1β前体、IL-1β、IL-18表达显著升高(P0.05);与模型组比较,山核桃叶总黄酮高剂量组IL-1β和IL-18的水平显著降低(P0.01),肾脏组织NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白相对表达量均显著降低(P0.01)。结论山核桃叶总黄酮可通过干预高尿酸血症模型小鼠体内NLRP3信号的传导,降低炎性因子的表达,减轻炎症反应。     

α-亚麻酸植物甾醇酯调节SIRT1抑制油酸和胆固醇联合诱导的HepG2细胞焦亡

目的 探讨α-亚麻酸植物甾醇酯（PS-ALA）对油酸和胆固醇（OA/Cho）联合诱导的肝细胞焦亡的改善作用，并基于SIRT1信号分子进一步探索潜在的分子机制。方法 采用OA/Cho联合诱导HepG2细胞焦亡，同时给予PS-ALA、PS、ALA干预。油红O染色观察细胞脂质沉积；Hoechst33342/PI双染评价焦亡发生情况；蛋白免疫印迹检测细胞焦亡信号通路关键蛋白NLRP3、Caspase-1 p20、GSDMD-N的表达水平；免疫荧光染色检测NLRP3的表达水平；免疫荧光双标记进行SIRT1和NLRP3以及SIRT1和GSDMD-N共定位。结果 与正常对照组相比，OA/Cho组细胞内有大量脂滴沉积，并且发生明显的细胞焦亡，细胞焦亡信号通路关键蛋白NLRP3、Caspase-1 p20和GSDMD-N的表达水平显著增加，PS-ALA干预后显著改善OA/Cho诱导的细胞内脂质沉积，并有效抑制细胞焦亡。进一步的分子机制研究发现PS-ALA显著上调SIRT1的表达水平并同时降低NLRP3和GSDMD-N的表达水平。结论 PS-ALA能有效抑制OA/Cho诱导的HepG2细胞焦亡，其分子机制...     

枸杞多糖抑制NLRP3炎性通路改善睡眠剥夺大鼠的行为能力研究

目的 通过研究枸杞多糖对睡眠剥夺实验性大鼠行为能力及海马组织NOD样受体蛋白3(nod like receptor protein 3,NLRP3)炎性通路的影响,分析枸杞多糖改善睡眠剥夺诱导行为能力降低的作用机理。方法 自2020年9月1日—2021年5月31日,采用随机数字法把大鼠分成4组：正常睡眠组、睡眠剥夺组、舒乐安定组和枸杞多糖组。正常睡眠组：正常饲养和睡眠;睡眠剥夺组：每日剥夺睡眠18 h,持续4周;舒乐安定组和枸杞多糖组：在睡眠剥夺组的基础上分别每日给予舒乐安定（0.54 mg/kg）和枸杞多糖（6 mg/kg）。通过水迷宫实验分析大鼠行为能力的变化,ELISA分析大鼠血清白介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、白介素-18(interleukin-18, IL-18)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)的水平,Western blot评估各实验组海马组织里NLRP3、天冬半胱氨酸酶-1(Caspase-1)和白介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)蛋白的含量。结果 与正常睡眠组相比,睡眠...     

巨细胞病毒感染诱发高血压血管病变的细胞焦亡机制

目的探索细胞焦亡在小鼠巨细胞病毒(MCMV)感染诱发血压升高这一血管病变过程中的重要影响。方法选取两周龄健康雄性C57小鼠15只,正常饲养5 d后随机平均分为模拟感染组(腹腔注射PBS),实验组(感染MCMV组)和抑制剂组(转染MCMV并注射焦亡抑制剂MCC950)。实验六周后测量各组小鼠血压;蛋白质免疫印迹法(WB)检测各组小鼠动脉组织焦亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶-1(caspas-1)、消皮素D(GSDMD)、白细胞介素-1β(Interleukin-1β)、IL-18、 Pro-caspase-1及GSDMD-N的表达变化;检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)的释放水平;酶联免疫吸附法检测各组小鼠血清中高血压相关促炎因子IL-1β、IL-18、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及血清及动脉组织中血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ)的表达情况。结果与模拟感染组比较,感染MCMV组小鼠血压、焦亡相关蛋白(caspase-1、GSDMD-N、IL-1β、IL-18)以及血清IL-1β、IL-18、LDH、IL-6、TNF-α、MCP-1表达均升高(P0.05),动脉组织和血清AngiotensinⅡ表达升高(P0.05);与感染MCMV组比较,感染MCMV+MC9950组小鼠上述指标水平均降低(P0.05)。结论巨细胞病毒通过诱导细胞焦亡诱发高血压血管病变。     

细胞焦亡相关因子表达对2型糖尿病患者动脉粥样硬化性心血管病的预测作用

目的 探讨细胞焦亡相关因子NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、白介素-1β(IL-1β)及白介素-18(IL-18)表达对2型糖尿病(T2DM)患者合并动脉粥样硬化性心血管病(ASCVD)的预测作用。方法 回顾性分析2020年1月—2021年6月于本院就诊的90例T2DM患者的临床资料，全部患者均于入院后测定NLRP3炎性小体、Caspase-1、IL-1β及IL-18水平，根据是否合并ASCVD将其分为ASCVD组与单纯T2DM组，采用单因素及多因素logistic回归分析T2DM患者合并ASCVD的影响因素，通过绘制受试者工作特征曲线(ROC)评估NLRP3炎性小体、Caspase-1、IL-1β及IL-18水平对T2DM患者合并ASCVD的预测价值。结果 单因素分析结果显示，ASCVD组年龄、男性占比、高血压占比、空腹血糖、T2DM病程以及血浆NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18表达水平高于T2DM组(P<0.05);多因素logistic回归结果显示，年龄(大)、高血压以及血浆NLRP3炎性小体、I...     

SIRT1激活剂通过TLR4/NF-κB信号通路改善慢性牙周炎小鼠的炎症反应

目的探索沉默信息调节因子1(SIRT1)激活剂SRT1720对于慢性牙周炎小鼠炎症反应的作用以及其机制是否与Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路有关。方法选取8周龄的雄性C57BL/6小鼠40只, 分为空白对照组(n=8)和实验组(n=32)。实验组小鼠结扎牙周袋并给予高糖饮用水喂养, 实验组再随机分为模型组(n=8)和SRT1720组(n=24), 空白对照组和模型组每天生理盐水灌胃, SRT1720组根据SRT1720剂量不同又分为低剂量组[20 mg/(kg·d), n=8]、中剂量组[50 mg/(kg·d), n=8]和高剂量组[100 mg/(kg·d), n=8]。4周后, ELISA法检测各组小鼠龈沟液中白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达水平;RT-qPCR法检测各组小鼠牙龈组织IL-6、IL-1β、MCP-1、SIRT1、TLR4、NF-κB p65的mRNA表达水平;Western blot测定小鼠牙龈组织中SIRT1、TLR4、NF-κB p65蛋白表达水平。结果与空白对照组比较, 实...     

丹参酮对脓毒症大鼠心功能的保护作用机制

目的初步探究丹参酮对脓毒症大鼠心脏损伤的保护作用机制。方法选取40只SD大鼠,随机分为四组分别为假手术+生理盐水组、假手术+丹参酮组、模型+生理盐水组以及模型+丹参酮组。其中模型+生理盐水组和模型+丹参酮组大鼠采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症模型,造模成功的基础上丹参酮处理12 h。检测大鼠心脏功能、炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。苏木素-伊红(HE)染色观察心肌形态学变化;蛋白质免疫印迹检测心肌组织凋亡相关蛋白(Caspase-3、Bax、Bcl-2)和焦亡执行者消皮素E(GSDME)表达。结果与假手术+生理盐水组相比,模型+生理盐水组大鼠心功能减退,心肌炎症细胞因子IL-1β、IL-18、TNF-α增加,Caspase-3、Bax、GSDME-N蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调。与模型+生理盐水组相比,模型+丹参酮组心功能恢复,心肌炎症细胞因子IL-1β、IL-18、TNF-α降低,Caspase-3、Bax、GSDME-N蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调。结论丹参酮对脓毒症大鼠心脏损伤具有良好保护作用,其机制可能是通过降低心肌炎症反应,抑制细胞凋亡以及焦亡过程。     

二氧化硅扰乱P2X7离子通道介导NLRP3炎性小体依赖的巨噬细胞焦亡在矽肺发病中的作用

目的 利用稳定表达凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的小鼠巨噬细胞系(RAW-ASC)构建巨噬细胞焦亡体外模型,深入探讨不同粒径二氧化硅(SiO₂)粉尘诱导核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体依赖的巨噬细胞焦亡机制及其在矽肺发病中的潜在作用。方法 以脂多糖(LPS,1 μg/ml)预处理RAW-ASC巨噬细胞6 h,纳米(100 μg/ml)或微米(750 μg/ml)SiO₂粉尘暴露4 h,构建巨噬细胞焦亡体外模型,同时匹配空白对照组、LPS预处理组和焦亡阳性对照组(1 μg/ml LPS预处理6 h后,3 mmol/L ATP处理4 h),检测各组细胞活性、增殖能力、破裂状况和焦亡相关蛋白表达情况。针对离子通道和焦亡通路相关靶点,分别加入NLRP3抑制剂和嘌呤能P2X7受体(P2X7)拮抗剂,评估SiO₂诱发焦亡改变。结果 与对照组相比,纳米和微米SiO₂粉尘均可减弱巨噬细胞活力并抑制细胞增殖,还可促进细胞裂解,使细胞外乳酸脱氢酶(LDH)(纳米组:t=78.906,P<0.001; 微米组:t=8.123,P<0.001)、细胞内活性氧(ROS)(纳米组:t=5.662,P<0.001; 微米组:t=11.761,P<0.001)和钙离子(Ca²⁺)(纳米组:t=13.224,P<0.001; 微米组:t =40.733,P<0.001)水平升高,加速ATP耗竭(纳米组:t =4.898,P<0.001; 微米组:t =6.029,P<0.001),上调焦亡相关蛋白NLRP3、ASC、半胱天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、Gasdermin D(GSDMD)和白介素-1β(IL-1β)表达(纳米SiO₂组:t=5.476,P =0.008; t=5.846,P=0.017; t=8.078,P=0.006; t=8.420,P=0.004; t=5.361,P=0.003; 微米SiO₂组:t=4.411,P=0.013; t=6.154,P=0.015; t=7.188,P=0.002; t=14.265,P<0.001; t=8.574,P<0.001)。加入NLRP3抑制剂或P2X7拮抗剂后,NLRP3蛋白表达水平下调(纳米组:t=3.894,P=0.007; t=13.954,P<0.001; 微米组:t=2.470,P=0.034; t=13.263,P<0.001)。结论 纳米和微米级SiO₂粉尘暴露均可抑制巨噬细胞活性和增殖能力,扰乱P2X7离子通道对ATP的传递能力,诱发NLRP3依赖巨噬细胞焦亡,相关过程可能是矽肺发病的重要环节。     

婴幼儿呼吸道合胞病毒肺炎外周血单核细胞miR-146a和miR-155的表达及与炎症反应关系

目的 探讨婴幼儿呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎外周血单核细胞(PBMCs)miR-146a和miR-155的表达及与炎症反应关系。方法 选取2017年1月－2019年1月三峡大学第三临床医学院葛洲坝集团中心医院收治的84例RSV肺炎患儿作为研究组,根据病情严重程度分为轻度组和重度组。选取同期体检健康婴幼儿80例作为对照组,采集受试者外周血并分离单核细胞,采用实时荧光定量PCR检测单核细胞中miR-146a和miR-155水平,采用酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)水平,Pearson法分析两组受试者miR-146a、miR-155水平与炎症因子水平的相关性。结果 重度组患儿PBMCs中miR-146a水平明显低于轻度组与对照组(F=31.907,P＜0.05),轻度组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);重度组患儿PBMCs中miR-155水平显著高于轻度组、对照组(F=143.127,P＜0.05),轻度组高于对照组(P＜0.05);研究组患儿血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8水平均高于对照组(t=36.627、39.350、22.743、10.617,P＜0.05)。RSV肺炎患儿miR-146a与TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8表达呈负相关(r=-0.473、-0.502、-0.396、-0.337,P＜0.05),miR-155与TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8表达呈正相关(r=0.451、0.394、0.359、0.382,P＜0.05)。结论 RSV肺炎患儿PBMCs中miR-146a低表达,miR-155高表达,并与患儿疾病严重程度及炎症反应相关。     

Toll样受体2和肠道菌群在高脂饮食诱导的胰岛素抵抗中的作用

目的 研究高脂喂养与基础饮食喂养条件下,野生型（wild type, WT）小鼠与Toll样受体2（Toll like receptor 2,TLR2）基因敲除(TLR2-/-）小鼠肠道菌群的变化及其与胰岛素抵抗的关系。 方法 出生10周龄雄性TLR2-/-小鼠和WT小鼠各两组分别进行高脂饲料与基础饲料喂养,每组3只小鼠,喂养9周后,进行葡萄糖耐量实验（glucose tolerance test, GTT）和胰岛素抵抗实验（insulin resistance test, ITT）实验;收集小鼠粪便进行16S rDNA高通量测序;处死后,ELISA测定血清中细胞因子IL - 6、TNF - α和IL - 10的含量。结果 与基础饮食组的WT小鼠和高脂饮食组的TLR2-/-小鼠相比,高脂饮食组的WT小鼠GTT（t = 3.210,P = 0.033;t = 3.689,P = 0.021）、ITT（t = 3.332,P = 0.029;t = 4.125,P = 0.015）曲线下面积均升高,差异具有统计学意义;与基础饮食组的WT小鼠、基础饮食组的TLR2-/-小鼠和高脂饮食组的TLR2-/-小鼠相比,高脂饮食组的WT小鼠血清炎性因子IL - 6和TNF - α含量均升高,差异具有统计学意义（IL - 6:t = 9.646,P = 0.001;t = 16.02,P＜0.001;t = 7.677,P = 0.002;TNF - α:t = 7.731,P = 0.002;t = 10.73,P＜0.001;t = 5.802,P = 0.004）;抗炎因子IL - 10均降低,差异具有统计学意义（t = 4.219,P = 0.014;t = 27.6,P＜0.001;t = 10.2,P = 0.001）;与基础饮食组的WT小鼠相比,高脂饮食组的WT小鼠肠道菌群组成发生变化,拟杆菌门减少（Z = - 1.528,P = 0.127）,厚壁菌门/拟杆菌门比值升高（Z = - 0.218,P = 0.827）,变形菌门占比升高（Z = - 0.655,P = 0.513）,普雷沃菌属降低（Z = - 0.218,P = 0.827）,颤螺旋菌属和拟杆菌属升高（Z = - 1.528,P = 0.127;Z = - 1.964,P = 0.050）;与基础饮食组的TLR2-/-小鼠相比,高脂饮食组的TLR2-/-小鼠厚壁菌门/拟杆菌门比值没有明显改变,变形菌门占比升高（Z = - 1.964,P = 0.050）,普雷沃菌属降低（Z = - 0.655,P = 0.513）,颤螺旋菌属和拟杆菌属升高（Z = - 1.993,P = 0.046;Z = - 1.528,P = 0.127）。结论 高脂饮食会导致肠道菌群紊乱,并改变小鼠的葡萄糖调节能力,TLR2信号通路的激活促进炎症反应以及胰岛素抵抗的发生,但可能并不通过肠道菌群发挥作用。     

孕哺期铅暴露对雄性子代大鼠海马组织中沉默信息调节因子表达的影响

目的探讨大鼠孕期及哺乳期铅暴露对雄性仔鼠海马组织中沉默信息调节因子(silent information regulator1,SIRT1)表达的影响。方法将12只健康SPF级雌性SD孕鼠随机分为3组,分别为对照组(去离子水)、低剂量铅暴露组(0.5 g/L乙酸铅)和高剂量铅暴露组(2.0 g/L乙酸铅),每组4只。采取自由饮水的方式进行染毒,自妊娠第1天开始至仔鼠21 d断乳为止。在仔鼠断乳后,采用电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)检测6只雄性仔鼠全血和海马组织中铅的含量,采用RT-PCR检测6只雄性仔鼠海马组织SIRT1 mRNA水平的变化,采用Western blot和免疫荧光组织化学法检测6只雄性仔鼠海马组织SIRT1蛋白水平的变化。结果孕哺期不同剂量铅暴露后,雄性仔鼠血铅和海马组织中铅含量均高于对照组,海马中SIRT1 mRNA和蛋白水平的表达均低于对照组,且高剂量铅暴露组仔鼠海马中SIRT1mRNA和蛋白水平低于低剂量组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论孕哺期铅暴露可下调仔鼠海马中SIRT1基因表达,从而可能影响海马神经元功能及仔鼠学习记忆能力。     

Procyanidin B2 Attenuates Nicotine-Induced Hepatocyte Pyroptosis through a PPARγ-Dependent Mechanism

Procyanidin B2 (PCB2), a natural flavonoid, has been demonstrated to exert anti-oxidation and anti-inflammatory effects on hepatic diseases. Increasing evidence shows the hepatoxicity of nicotine. However, whether PCB2 protects against nicotine-induced hepatoxicity and the underlying mechanisms remains uncharacterized. Here, we reported that nicotine promoted hepatocyte pyroptosis, as evidenced by the elevation of propidium iodide (PI)-positive cells, the activation of Caspase-1 and gasdermin D (GSDMD), the enhanced expression of NOD-like receptor containing pyrin domain 3 (NLRP3) and the increased release of lactate dehydrogenase (LDH), interleukin (IL)-1β and IL-18. The silencing of GSDMD by small interfering RNA (siRNA) efficiently inhibited the release of LDH and the secretion of IL-1β and IL-18. In addition, rosiglitazone (RGZ) prevented hepatocyte pyroptosis induced by nicotine. Furthermore, we showed that PCB2 attenuated nicotine-induced pyroptosis through the activation of peroxisome proliferator-activated receptor-γ (PPARγ) in hepatocytes. Moreover, administration of PCB2 ameliorated liver injury and hepatocyte pyroptosis in nicotine-treated mice. Hence, our findings demonstrated that PCB2 attenuated pyroptosis and liver damage in a PPARγ-dependent manner. Our results suggest a new mechanism by which PCB2 exerts its liver protective effects.     

延迟亚低温保护氧糖剥夺-复氧复糖新生幼鼠脑白质损伤的机制研究

目的 探讨延迟亚低温保护氧糖剥夺-复氧复糖新生幼鼠脑白质损伤的效果及可能机制。方法 建立40只新生幼鼠全脑灌流和氧糖剥夺模型,随机均分为4组每组10只,分别进行亚低温32℃延迟0 h、24 h、48 h、72 h干预。用Western Blot检测髓鞘碱性蛋白(MBP)的蛋白表达情况;用免疫荧光鉴定小胶质细胞的表达情况;用ELISA测定TNF-α、IL-6浓度情况。结果 在亚低温32℃延迟24 h、48 h和72 h的MBP蛋白表达均显著高于对照组0 h(F=478.007,t=-18.180、22.940、-29.670,P<0.001),可发现蛋白表达量与延迟亚低温时长呈显著正相关;随着延迟亚低温时间的延长,小胶质细胞活化程度受到抑制,24 h、48 h和72 h的Iba-1阳性细胞比例均显著低于对照组0 h(F=99.892,t=5.879、9.295、18.760,P<0.001),可发现荧光表达增高与延迟亚低温时间呈显著负相关;TNF-α、IL-6浓度均较对照组0 h显著降低(TNF-α:F=454.197,t=2.184、15.300、15.000,P<0...     

下调Toll样受体4 mRNA 对手足口病模型乳鼠树突状细胞的影响及作用机制研究

目的 分析下调Toll样受体4(TLR4)mRNA对手足口病(HFMD)模型乳鼠树突状细胞的影响及作用机制,为手足口病防治提供依据。方法 选取45只SPF级12日龄BALB/c乳鼠,分离并培养树突状细胞,设计合成TLR4 siRNA序列并做细胞感染。建立手足口病模型,分为模型组、下调组、上调组各15只,下调组乳鼠腹腔注射下调TLR4基因的树突状细胞,上调组腹腔注射上调TLR4基因的树突状细胞,模型组腹腔注射等量灭菌用水。检测三组乳鼠树突状细胞增殖、凋亡,血清白介素-6(IL-6)、白介素-12(IL-12)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路蛋白表达量,并进行比较。结果 下调组不同时间点树突状细胞增殖率低于上调组(t=20.160、19.050、55.380,P＜0.001);下调组不同时间点树突状细胞凋亡率高于上调组(t=34.740、84.570、48.020,P＜0.001)。下调组血清IL-6、IL-12、TNF-α水平低于上调组(t=39.330、12.660、33.690,P＜0.001)。下调组树突状细胞p-p38MAPK、p-JNK、p-ERK1/2蛋白表达量低于上调组(t=33.690、17.470、27.800,P＜0.001)。结论 下调TLR4 mRNA经抑制MAPK通路活化,调控通路蛋白,下调IL-6、IL-12、TNF-α表达,促进手足口病乳鼠树突状细胞凋亡,可以为手足口病防治提供新思路。     

长期睡眠剥夺下调AMPK/SIRT1/PGC-1α通路引起小鼠脂代谢紊乱

目的探讨长期睡眠剥夺对小鼠肝组织腺苷酸激活蛋白激酶(adenosine 5’-monophosphateactivated protein kinase,AMPK)/沉默信息调节因子1(silent information regulation1,SIRT1)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator 1α,PGC-1α)系统的影响。方法2月龄C57BL/6J小鼠16只随机分为睡眠剥夺组和正常对照组,睡眠剥夺组利用睡眠剥夺仪每天剥夺睡眠20 h,每周剥夺6 d,连续10周。正常对照组在相同实验条件下自由睡眠10周。每周测量一次体重,10周后进行小鼠体成分测定,并采集血液、肝脏和脂肪组织样本,检测血清褪黑素水平、肝组织AMPKα、SIRT1、PGC-1α及胆固醇调节元件结合蛋白1C(sterol regulatory element-binding protein 1C,SREBP-1C)蛋白表达水平,以及脂肪组织中脂肪合成关键酶脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)、乙酰辅酶A羧化酶1(acetyl CoA carbosylase 1,ACC1)表达水平。结果建模结束后,睡眠剥夺组小鼠体重显著高于对照组(F=10.955,P=0.006),且从第6周末开始,睡眠剥夺组小鼠体重明显高于对照组(F=8.535,P=0.012),并且睡眠剥夺组小鼠体脂量[(14.58±1.70)%]高于对照组[(11.24±1.64)%](t=4.007,P=0.001),血清褪黑素浓度[(2.33±0.53)ng/ml]低于对照组[(2.87±0.23)ng/ml](t=2.643,P=0.019),AMPK通路中的AMPKα(t=7.134,P<0.001)、SIRT1(t=7.531,P<0.001)、PGC-1α(t=11.537,P<0.001)表达水平降低,AMPK/SIRT1/PGC-1α通路下调。而SREBP-1C表达水平升高,差异有统计学意义(t=-4.496,P=0.001)。同时睡眠剥夺小鼠脂肪组织中FAS(t=-4.375,P=0.001)、ACC1表达水平均升高(t=-4.072,P=0.001)。结论长期睡眠剥夺可致褪黑素受体介导的AMPK/SIRT1/PGC-1α通路抑制,并且脂肪合成相关基因表达增强,引起能量代谢特别是脂代谢稳态失调和体脂增加。     

FIL-6与TNF—α、TGF—β在EAE大鼠表达的相关性分析

目的探索IL-6在实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）中的作用机制。方法将25只雌性Wistar大鼠随机分为EAE组（n=15）、对照组（n=10）。利用免疫组化染色技术观察IL-6、TNF-α、TGF—β的表达，进行相关性分析。结果IL-6灰度值与症状评分呈负相关（r=-0．953，P〈0．05）、与TNF-α呈正相关（r=0．967，P〈0．05），IL-6与TGF—β呈无相关（r=-0．492，P〉0．05）.TNF—α灰度值与症状评分呈负相关（r=-0．978，P〈0．05），TNF—α与TGF—β无相关（r=-0．502，P〉0．05）。TGF-β灰度值与症状评分无相关（r=0．470，P〉0．05）。结论IL-6参与EAE的过程，可能是一种致炎因子。     

Sirt1、炎症因子与抗阴道结核治疗的相关性研究

目的探究沉默信息调节因子1(Sirt1)、炎症因子表达水平与阴道结核患者抗结核疗效的相关性。方法选取2012年1月至2019年1月温州市第六人民医院27例阴道结核患者作为研究对象,观察抗结核治疗前后血清Sirt1及炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达水平的变化。结果所有阴道结核患者进行抗结核治疗后,炎症症状明显改善。抗结核治疗后,炎症因子IL-6、TNF-α、TGF-β1的表达水平显著下降(t值分别为2.438、2.541、1.953,均P <0.05),血清Sirt1水平显著升高(t=2.635,P <0.05);Sirt1表达水平与IL-6、TNF-α、TGF-β1表达水平均呈负相关(r值分别为-0.857、-0.978、-0.937,均P <0.05);抗结核治疗中症状改善所需时间与Sirt1的表达水平呈负相关(r=-0.945,P <0.05)。结论 Sirt1、炎症因子表达水平是阴道结核患者抗结核疗效的影响因素,对Sirt1表达水平的干预在阴道结核患者的抗结核治疗中可能具有积极的临床意义。