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1.
目的:构建肿瘤细胞体外缺糖缺氧模型,观察缺糖缺氧对肿瘤细胞内质网功能和自噬的影响及其机制。方法:连二亚硫酸钠消耗培养基中氧、平衡盐溶液EBSS取代细胞正常培养液构建缺糖缺氧模型;实验分为对照组(Control)、缺糖缺氧4 h组(4 h)、缺糖缺氧8 h组(8 h)、缺糖缺氧12 h组(12 h)。MDC检测细胞内自噬泡的形成;Western Blotting检测各组肿瘤细胞内质网应激-自噬相关蛋白的表达水平。结果:与对照组相比,MDC结果显示细胞内自噬泡数量明显增加;WesternBlotting结果显示,缺糖缺氧各组细胞LC3-Ⅱ表达水平明显升高,同时内质网应激-自噬相关蛋白GRP78、p-eIF2α、p-PERK表达水平也明显升高。结论:缺糖缺氧通过内质网应激-自噬途径诱导Hela细胞发生自噬。 相似文献
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目的 探讨自噬介导铁死亡在苯诱导的大鼠血液毒性中的作用。方法 将80只Wistar雄性大鼠随机分为4组,对照组、染苯组(BZ)、染苯+铁死亡抑制剂组(BZ+Fer-1)和染苯+自噬抑制剂组(BZ+3MA),每组20只。BZ组按照注射体积200 μl/100 g于大鼠皮下注射苯油混合物,染毒浓度为800 mg/kg;对照组注射等量玉米油;抑制剂组按照400 μl/100 g给药量进行大鼠腹腔注射,抑制剂浓度为10 mg/kg,每周注射3次,连续给药4周。分别于第7、14、21、28天观察大鼠体质量变化;眼内眦静脉取血检测各组大鼠血常规。以异氟烷麻醉大鼠脱臼处死后心脏取血并分离血清,检测大鼠血清中丙二醛(MDA)和亚铁离子(Fe2+)水平变化;分离一侧股骨,采用HE染色法观察各组大鼠股骨病理组织学变化,收集股骨骨髓单个核细胞(BMMNCs);蛋白免疫印迹(Western blot)法检测股骨骨髓细胞转铁蛋白受体(TFRC)、长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁蛋白重链(FTH1)和自噬相关蛋白(p62、LC3Ⅱ/Ⅰ)等相关蛋白的表达水平。结果 与对照组相比,BZ组21 d后大鼠体质量显著下降(P<0.05);14 d后外周血WBC、21 d后RBC和Hb显著下降(P<0.05)。股骨病理检测结果显示,BZ组大鼠股骨骨髓造血细胞减少,脂肪细胞增多;血清MDA、Fe2+水平及BMMNCs中TFRC、ACSL4、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平较对照组显著增高(P<0.05),GPX4、p62、FTH1蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与BZ组大鼠相比,BZ+Fer-1组和BZ+3MA组大鼠体质量和血WBC计数显著增加,外周血RBC和Hb水平明显增加,且显著高于对照组(P<0.05);MDA、Fe2+含量以及TFRC、ACSL4、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平显著降低(P<0.05),GPX4、FTH1、p62蛋白表达水平显著增高(P<0.05)。结论 苯可诱导大鼠造血机能障碍,自噬介导的铁死亡在苯诱导大鼠血液毒性发生中具有重要作用。 相似文献
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目的:探讨组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)介导蛋白包涵体-自噬-溶酶体途径(AALP)在百草枯(PQ)诱导多巴胺能神经元自噬障碍中的作用。方法:以人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)作为多巴胺能神经元的体外模型,将细胞分为对照组和PQ染毒组(不同浓度PQ处理)。用不同浓度PQ (0、25、50、100、200和400 ... 相似文献
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肺纤维化是多种肺疾病常见的终末期病理学改变,其发生发展是由多种细胞、细胞因子、蛋白酶共同参与控制。研究表明,细胞自噬在肺部炎症和纤维化过程中发挥着重要作用,可以通过抑制炎性细胞因子和促纤维化因子的分泌、降解成纤维细胞中的胶原蛋白以及抑制上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程,达到减轻肺纤维化的作用。本文就细胞自噬在特发性肺纤维化(IPF)、肺囊性纤维化(PCF)和矽肺所致肺纤维化(silicotic pulmonary fibrosis)中的作用及机制进行简要归纳,为今后工作提供参考。 相似文献
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目的 观察α-亚麻酸植物甾醇酯(PS - ALA)对油酸(OA)诱导的肝细胞脂肪变性的影响,并从调节自噬角度进一步探索其可能的分子机制。方法 将HepG2细胞分为:对照组(Control)、模型组(OA)、ALA组(OA + ALA)、PS组(OA + PS)和PS - ALA组(OA + PS - ALA)。CCK - 8检测细胞活力;尼罗红染色观察肝细胞脂滴积累;GPO - PAP法测定细胞中TG的含量;Western blot检测自噬相关蛋白LC3II和p62蛋白表达水平;免疫荧光检测自噬调控因子p - mTORC1、LC3II和p62表达水平。采用单因素方差分析进行多组实验结果间的比较;采用LSD法和Dunnett T3法进行两两比较。结果 PS - ALA显著降低OA诱导的HepG2细胞脂质沉积和TG水平,且效果优于α- 亚麻酸(ALA)或者植物甾醇(PS)单独干预(F = 35.198, P<0.001);PS - ALA显著降低HepG2细胞LC3II和p62的蛋白表达水平,促进细胞自噬(F = 10.614, P = 0.001; F = 20.222 , P<0.001);进一步的分子机制研究表明PS - ALA抑制OA引起的mTORC1磷酸化激活(F = 644.164 , P<0.001),同时伴随LC3II和p62的表达水平降低(F = 393.234, P<0.001; F = 668.414 , P<0.001)。结论 PS - ALA显著改善OA诱导的HepG2细胞脂肪变性,其分子机制可能与抑制mTORC1磷酸化促进自噬有关。 相似文献
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目的探讨葛根素对高糖诱导的RSC96细胞损伤的保护作用是否与自噬调节有关。方法建立体外RSC96细胞高糖损伤模型,根据Westernblot检测CleavedCaspase-3蛋白判断造模成功与否。通过CCK-8法确定葛根素干预浓度。免疫细胞化学法检测Beclin-1蛋白的表达;Western blot检测Cleaved Caspase-3、LC3-Ⅱ、p62、Beclin-1蛋白的表达。结果与高糖组相比,葛根素预处理可显著提高高糖诱导后RSC96细胞的存活率(P<0.05),抑制Cleaved Caspase-3蛋白的表达(P<0.05),抑制LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白的表达(P<0.05),增强p62蛋白的表达(P<0.05)。结论葛根素可改善由高糖诱导的RSC96细胞损伤,其机制可能与其抑制LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达、提高p62蛋白表达有关。[营养学报,2020,42(3):281-286] 相似文献
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目的 明确内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)在维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate, VES)激活人胃癌MKN28细胞自噬和凋亡中发挥的作用。方法 体外培养人胃癌MKN28细胞,不同剂量(5,10,15,20μg/ml)VES处理细胞24小时后,Western blot检测ERS标志物GRP78,自噬标志物LC3、Beclin-1,凋亡相关蛋白Caspase-3和ERS凋亡通路关键信号分子CHOP的表达情况,流式细胞仪检测不同剂量组凋亡率。选择ERS抑制剂4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid, 4-PBA),ERS激活剂衣霉素(Tunicamycin, TM)自噬激活剂雷帕霉素(Rapamycin, RAPA),设置对照组、4-PBA组(3 mmol/L)、TM组(5μg/ml)、VES组(20μg/ml)、VES+4-PBA组、RAPA组(100 nmol/L),检测GRP78、LC3、Beclin-1、Caspase-3和CHOP蛋白的表达情况,同时检测不同组细胞凋亡率或在电子显微镜下观察自噬体形态... 相似文献
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目的 探讨靶向CCAAT/增强子结合蛋白-β(C/EBPβ)基因沉默对肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡、迁移的影响。方法 设计C/EBP-β及eGFP、shRNA序列,装入pLKO.1-TRC质粒,进行慢病毒包装,感染肝癌SMMC-7721细胞,嘌呤霉素筛选并培养稳定干扰细胞株,cell counting kit-8(CCK-8试剂盒)法、transwell细胞迁移实验分别检测沉默C/EBP-β基因对SMMC-7721细胞增殖和迁移能力的影响,蛋白印迹(Western blot)检测干扰效率及沉默C/EBP-β基因对SMMC-7721细胞的凋亡相关蛋白影响。结果 沉默C/EBP-β基因的SMMC-7721-pLKO-sh-C/EBP-β肿瘤细胞的增殖速度明显提高(相对增值率136.8%,P<0.05),细胞迁移能力也明显增强(迁移抑制率为-292.3%,P<0.05),且细胞周期蛋白cyclin B1的表达增强(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达增强(P<0.05),凋亡相关蛋白Bax的表达下降(P<0.05)。结论 沉默C/EBP-β对肝癌细胞SMMC-7721的增殖、迁移有促进作用,对其凋亡有抑制作用。 相似文献