缺糖缺氧经内质网应激途径诱导宫颈癌Hela细胞自噬

目的:构建肿瘤细胞体外缺糖缺氧模型,观察缺糖缺氧对肿瘤细胞内质网功能和自噬的影响及其机制。方法:连二亚硫酸钠消耗培养基中氧、平衡盐溶液EBSS取代细胞正常培养液构建缺糖缺氧模型;实验分为对照组(Control)、缺糖缺氧4 h组(4 h)、缺糖缺氧8 h组(8 h)、缺糖缺氧12 h组(12 h)。MDC检测细胞内自噬泡的形成;Western Blotting检测各组肿瘤细胞内质网应激-自噬相关蛋白的表达水平。结果:与对照组相比,MDC结果显示细胞内自噬泡数量明显增加;WesternBlotting结果显示,缺糖缺氧各组细胞LC3-Ⅱ表达水平明显升高,同时内质网应激-自噬相关蛋白GRP78、p-eIF2α、p-PERK表达水平也明显升高。结论:缺糖缺氧通过内质网应激-自噬途径诱导Hela细胞发生自噬。     

自噬介导铁死亡在苯诱导大鼠血液毒性中的作用

目的 探讨自噬介导铁死亡在苯诱导的大鼠血液毒性中的作用。方法 将80只Wistar雄性大鼠随机分为4组，对照组、染苯组（BZ）、染苯+铁死亡抑制剂组（BZ+Fer-1）和染苯+自噬抑制剂组（BZ+3MA），每组20只。BZ组按照注射体积200 μl/100 g于大鼠皮下注射苯油混合物，染毒浓度为800 mg/kg；对照组注射等量玉米油；抑制剂组按照400 μl/100 g给药量进行大鼠腹腔注射，抑制剂浓度为10 mg/kg，每周注射3次，连续给药4周。分别于第7、14、21、28天观察大鼠体质量变化；眼内眦静脉取血检测各组大鼠血常规。以异氟烷麻醉大鼠脱臼处死后心脏取血并分离血清，检测大鼠血清中丙二醛（MDA）和亚铁离子（Fe2+）水平变化；分离一侧股骨，采用HE染色法观察各组大鼠股骨病理组织学变化，收集股骨骨髓单个核细胞（BMMNCs）；蛋白免疫印迹（Western blot）法检测股骨骨髓细胞转铁蛋白受体（TFRC）、长链脂酰辅酶A合成酶4（ACSL4）、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、铁蛋白重链（FTH1）和自噬相关蛋白（p62、LC3Ⅱ/Ⅰ）等相关蛋白的表达水平。结果 与对照组相比，BZ组21 d后大鼠体质量显著下降（P<0.05）；14 d后外周血WBC、21 d后RBC和Hb显著下降（P<0.05）。股骨病理检测结果显示，BZ组大鼠股骨骨髓造血细胞减少，脂肪细胞增多；血清MDA、Fe2+水平及BMMNCs中TFRC、ACSL4、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平较对照组显著增高（P<0.05），GPX4、p62、FTH1蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。与BZ组大鼠相比，BZ+Fer-1组和BZ+3MA组大鼠体质量和血WBC计数显著增加，外周血RBC和Hb水平明显增加，且显著高于对照组（P<0.05）；MDA、Fe2+含量以及TFRC、ACSL4、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平显著降低（P<0.05），GPX4、FTH1、p62蛋白表达水平显著增高（P<0.05）。结论 苯可诱导大鼠造血机能障碍，自噬介导的铁死亡在苯诱导大鼠血液毒性发生中具有重要作用。     

Beclin1介导的自噬在辐射诱导细胞早衰中的作用

自噬是机体及细胞必不可少的调节过程,在维持细胞的正常生理状态过程中发挥重要的作用.Beclin1是自噬的核心功能基因之一,其影响自噬体形成,并通过自噬影响肿瘤的发生和发展.研究发现Beclin1在p62蛋白介导的早衰调控中发挥一定作用,电离辐射可引起细胞发生自噬及早衰等细胞反应,导致细胞死亡.研究Beclin1介导的自...     

组蛋白去乙酰化酶6介导蛋白包涵体-自噬-溶酶体途径在百草枯诱导多巴胺能神经元自噬障碍中的作用

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶6（HDAC6）介导蛋白包涵体-自噬-溶酶体途径（AALP）在百草枯（PQ）诱导多巴胺能神经元自噬障碍中的作用。方法:以人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）作为多巴胺能神经元的体外模型,将细胞分为对照组和PQ染毒组（不同浓度PQ处理）。用不同浓度PQ （0、25、50、100、200和400 ...     

细胞自噬与肺纤维化疾病

肺纤维化是多种肺疾病常见的终末期病理学改变,其发生发展是由多种细胞、细胞因子、蛋白酶共同参与控制。研究表明,细胞自噬在肺部炎症和纤维化过程中发挥着重要作用,可以通过抑制炎性细胞因子和促纤维化因子的分泌、降解成纤维细胞中的胶原蛋白以及抑制上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程,达到减轻肺纤维化的作用。本文就细胞自噬在特发性肺纤维化(IPF)、肺囊性纤维化(PCF)和矽肺所致肺纤维化(silicotic pulmonary fibrosis)中的作用及机制进行简要归纳,为今后工作提供参考。     

α-亚麻酸植物甾醇酯调节自噬改善油酸诱导的HepG2细胞脂肪变性

目的 观察α-亚麻酸植物甾醇酯（PS - ALA）对油酸（OA）诱导的肝细胞脂肪变性的影响,并从调节自噬角度进一步探索其可能的分子机制。方法 将HepG2细胞分为:对照组（Control）、模型组（OA）、ALA组（OA + ALA）、PS组（OA + PS）和PS - ALA组（OA + PS - ALA）。CCK - 8检测细胞活力;尼罗红染色观察肝细胞脂滴积累;GPO - PAP法测定细胞中TG的含量;Western blot检测自噬相关蛋白LC3II和p62蛋白表达水平;免疫荧光检测自噬调控因子p - mTORC1、LC3II和p62表达水平。采用单因素方差分析进行多组实验结果间的比较;采用LSD法和Dunnett T3法进行两两比较。结果 PS - ALA显著降低OA诱导的HepG2细胞脂质沉积和TG水平,且效果优于α- 亚麻酸（ALA）或者植物甾醇（PS）单独干预（F = 35.198, P＜0.001）;PS - ALA显著降低HepG2细胞LC3II和p62的蛋白表达水平,促进细胞自噬（F = 10.614, P = 0.001; F = 20.222 , P＜0.001）;进一步的分子机制研究表明PS - ALA抑制OA引起的mTORC1磷酸化激活（F = 644.164 , P＜0.001）,同时伴随LC3II和p62的表达水平降低（F = 393.234, P＜0.001; F = 668.414 , P＜0.001）。结论 PS - ALA显著改善OA诱导的HepG2细胞脂肪变性,其分子机制可能与抑制mTORC1磷酸化促进自噬有关。     

葛根素对高糖诱导的RSC96细胞凋亡和自噬相关蛋白的影响

目的探讨葛根素对高糖诱导的RSC96细胞损伤的保护作用是否与自噬调节有关。方法建立体外RSC96细胞高糖损伤模型,根据Westernblot检测CleavedCaspase-3蛋白判断造模成功与否。通过CCK-8法确定葛根素干预浓度。免疫细胞化学法检测Beclin-1蛋白的表达;Western blot检测Cleaved Caspase-3、LC3-Ⅱ、p62、Beclin-1蛋白的表达。结果与高糖组相比,葛根素预处理可显著提高高糖诱导后RSC96细胞的存活率(P<0.05),抑制Cleaved Caspase-3蛋白的表达(P<0.05),抑制LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白的表达(P<0.05),增强p62蛋白的表达(P<0.05)。结论葛根素可改善由高糖诱导的RSC96细胞损伤,其机制可能与其抑制LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达、提高p62蛋白表达有关。[营养学报,2020,42(3):281-286]     

内质网应激在维生素E琥珀酸酯诱导的胃癌细胞凋亡和自噬中作用的研究

目的 明确内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)在维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate, VES)激活人胃癌MKN28细胞自噬和凋亡中发挥的作用。方法 体外培养人胃癌MKN28细胞,不同剂量(5,10,15,20μg/ml)VES处理细胞24小时后,Western blot检测ERS标志物GRP78,自噬标志物LC3、Beclin-1,凋亡相关蛋白Caspase-3和ERS凋亡通路关键信号分子CHOP的表达情况,流式细胞仪检测不同剂量组凋亡率。选择ERS抑制剂4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid, 4-PBA),ERS激活剂衣霉素(Tunicamycin, TM)自噬激活剂雷帕霉素(Rapamycin, RAPA),设置对照组、4-PBA组(3 mmol/L)、TM组(5μg/ml)、VES组(20μg/ml)、VES+4-PBA组、RAPA组(100 nmol/L),检测GRP78、LC3、Beclin-1、Caspase-3和CHOP蛋白的表达情况,同时检测不同组细胞凋亡率或在电子显微镜下观察自噬体形态...     

AEG-1调控细胞自噬及上皮间质转化诱导甲状腺乳头状癌增殖和转移的机制研究

目的:研究星形胶质细胞升高基因1(AEG-1)调控细胞自噬及上皮间质转化(EMT)诱导甲状腺乳头状癌(PTC)增殖和转移及其作用机制。方法:体外培养正常甲状腺细胞和PTC细胞。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测AEG-1在PTC细胞中的表达,选择AEG-1最高表达的PTC细胞进行AEG-1 shRNA的感染,分为...     

转录因子C/EBP对肝癌细胞SMMC-7721影响

目的 探讨靶向CCAAT/增强子结合蛋白-β(C/EBPβ)基因沉默对肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡、迁移的影响。方法 设计C/EBP-β及eGFP、shRNA序列,装入pLKO.1-TRC质粒,进行慢病毒包装,感染肝癌SMMC-7721细胞,嘌呤霉素筛选并培养稳定干扰细胞株,cell counting kit-8(CCK-8试剂盒)法、transwell细胞迁移实验分别检测沉默C/EBP-β基因对SMMC-7721细胞增殖和迁移能力的影响,蛋白印迹(Western blot)检测干扰效率及沉默C/EBP-β基因对SMMC-7721细胞的凋亡相关蛋白影响。结果 沉默C/EBP-β基因的SMMC-7721-pLKO-sh-C/EBP-β肿瘤细胞的增殖速度明显提高(相对增值率136.8%,P<0.05),细胞迁移能力也明显增强(迁移抑制率为-292.3%,P<0.05),且细胞周期蛋白cyclin B1的表达增强(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达增强(P<0.05),凋亡相关蛋白Bax的表达下降(P<0.05)。结论 沉默C/EBP-β对肝癌细胞SMMC-7721的增殖、迁移有促进作用,对其凋亡有抑制作用。