制备鼠疫菌赫氏培养基经验浅谈

鼠疫菌赫氏培养基用于保证鼠疫菌繁殖、保持其活力的物质,它有液体、半固体、固体三种形态.含有碳水化合物、氮物质、无机盐、维生素和水等,它在鼠疫病原检验中发挥着重要作用[1].其成份和质量直接影响鼠疫菌的生长、繁殖与分离.本文对鼠疫菌赫氏培养基的作用、制备、贮存、影响因素等各环节应采取的各项措施进行阐述,以便不断完善和提高培养基的质控水平,为鼠疫检测工作提供优质的培养基.     

不同pH值的赫氏干燥培养基对鼠疫菌生长影响观察

摘要:目的　观察不同pH值的赫氏干燥培养基对鼠疫菌生长的影响,从中筛选鼠疫菌生长的最适pH值。方法　同一批号的赫氏干燥培养基分别加入到pH值为6.2、6.6、7.0、7.4、7.8、8.2的蒸馏水溶液中,121℃30 min高压灭菌后倾注平皿。通过进行鼠疫菌强毒141标准株和鼠疫菌弱毒EV 76巴黎株菌落计数实验,观察不同pH值的赫氏干燥培养基对鼠疫菌生长的差异。结果　不同pH值的赫氏干燥培养基对鼠疫菌的生长均有影响且其差异有统计学意义（EV76χ2＝190.804,P＜0.05;141χ2＝151.742,P＜0.05）。EV76株鼠疫菌和141株鼠疫菌在pH值7.0的赫氏干燥培养基中活菌数值最大。结论　赫氏干燥培养基对鼠疫菌生长的最适pH值为7.0。     

显色培养基快速检测沙门菌效果的研究

目的:评价显色培养基对沙门菌的检测效果,探讨显色法在实际应用中的可行性。方法:本实验室研制的沙门菌(Salmonellasp.)显色培养基HKSal与经典培养基SS、DHL琼脂和国外两种同类商品化显色培养基(ZWSalI和ZWSa-lII)作对比,分别对19株质控菌、40种人工污染样品和45种实际样品进行检测。结果:3种显色培养基均具有良好的选择性及特异性;在对7株质控菌、人工污染样品和实际样品检测中,HKSal、ZWSalI和ZWSalII沙门菌显色培养基与经典培养基SS和DHL可以达到相近的检测限和灵敏度。HKSal沙门菌显色培养基对某些沙门菌的灵敏度比ZWSalII沙门菌显色培养基更高。结论:本实验室研究试制的显色培养基HKSal与国外其它的两种显色培养基一样,都具有较好的检测效果,可大大提高沙门菌的检测效率,在实际应用中具有较大的应用价值。     

显色培养基与ATB专家系统筛选ESBLs的比较

目的评价产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)显色培养基法与ATB专家系统法在筛选产超广谱β-内酰胺酶肠杆菌中的可靠性。方法对临床分离的120株大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌,同时用ATB细菌鉴定仪及药敏专家系统与ESBLs显色培养基法作筛选对比试验。结果 ESBLs显色培养基法阳性率为50.0%,ATB专家系统阳性率为41.7%,2种方法阳性率比较,差异有统计学意义(χ2=4.50,P<0.05);以ATB专家系统为标准,ESBLs显色培养基法筛选ESBLs的灵敏度为92.0%,特异性为80.0%,阳性预告值为76.7%,阴性预告值为93.3%。结论 ESBLs显色培养基法具有较好的灵敏度和阴性预告值,可以作为筛选ESBLs的较好方法。     

鼠疫耶尔森菌EV76免疫蛋白质组学初步分析

目的建立鼠疫耶尔森菌的免疫蛋白质组学研究方法 ,初步筛选鼠疫耶尔森菌特异性抗原。方法利用双向电泳技术对37℃培养的鼠疫耶尔森菌EV76株全菌蛋白进行分离,结合免疫印迹技术寻找能与鼠疫耶尔森菌免疫兔血清发生免疫反应的蛋白质,并用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对阳性蛋白点进行鉴定。结果与鼠疫耶尔森菌免疫兔血清反应的鼠疫EV76株蛋白点共472个,经基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定出277个,对应于159种蛋白,其中,35种蛋白为耶尔森菌特有,5种蛋白[F1荚膜抗原(F1 capsule antigen)、鼠毒素(murine toxin)、鼠疫菌素(pesticin)、纤维蛋白溶解酶原激活因子(Pla)、F1抗原伴侣蛋白(F1 chaperone protein)]为鼠疫耶尔森菌特有。结论初步完成鼠疫耶尔森菌EV76株的免疫蛋白质组学分析,筛选出具有抗原活性的鼠疫耶尔森菌特有蛋白,为后续特异性诊断技术的建立和疫苗研究奠定良好的基础。     

鼠疫耶尔森菌和假结核耶尔森菌基因鉴别方法的建立及评价

目的 建立鼠疫耶尔森菌和假结核耶尔森菌基因鉴别方法。方法 依据鼠疫菌、假结核菌特有的基因组序列["疫岛(PeI)"和"假岛(PsI)"], 与已公布的12株鼠疫菌和4株假结核菌全基因序列进行比对, 设计特异性的引物, 对鼠疫菌、假结核菌和其他肠道细菌进行鉴定。结果 用52株鼠疫菌、57株假结核菌和其他肠道菌株进行验证, 结果显示, 5对鼠疫菌的鉴定引物中, 2对(PeI2和PeI11)仅在52株鼠疫菌中扩出目的条带, 另3对引物(PeI1、PeI3和PeI12)除鼠疫菌外在部分假结核菌株中也扩出目的条带;5对假结核菌鉴定引物中, 1对引物(PsI1)在52株鼠疫菌和57株假结核菌株中扩出目的条带, 4对引物(PsI7、PsI16、PsI18和 PsI19)仅在57株假结核菌株中均扩出目的条带, 在鼠疫菌中未扩出目的条带。结论 用鼠疫菌和假结核菌共有的PsI1序列、鼠疫菌特有的PeI2和PeI11序列及假结核菌特有的PsI7、PsI16、PsI18和 PsI19序列组成的基因鉴别方法, 可以用于鼠疫菌和假结核菌的基因快速鉴别。     

四川省石渠县青海田鼠鼠疫耶尔森菌营养需求

鼠疫菌是典型的异养菌 ,不同自然疫源地的鼠疫菌表现有不同的营养需求 ,为了查明四川省石渠县鼠疫自然疫源地青海田鼠鼠疫菌的营养特性 ,我们对从青海田鼠体内分离的鼠疫菌做了营养鉴定 ,现将结果报告如下。1　材料与方法1 1　菌株　实验菌株来源于四川省石渠县俄多玛乡青海田鼠鼠疫菌 19株 ,内蒙古阿巴嘎旗布氏田鼠、长爪沙鼠鼠疫菌各 1株 ,青海省共和县、称多县、都兰县喜玛拉雅旱獭 ,腹窦纤蚤鼠疫菌 3株、鼠疫菌141、ＥＶ和假结核菌 0 5各 1株 (表 1)。1 2　最小培养基　选用Ｌａｗｔｏｎ配方[3 ] ,氨基酸浓度 (ｍｇ/ｌ)为ＤＬ -苏氨酸 6…     

志贺氏菌属显色培养基在食品检测中的应用研究

〔目的〕考核志贺氏菌属显色培养基对食品中志贺氏菌的检测效果,确认其是否可作为新型快速检测方法。〔方法〕按国标(GB 4789.5-2003)程序比较几种培养基检测食品中志贺氏菌的效果。〔结果〕志贺氏菌属显色培养基与传统平板SS、麦康凯相比对测试菌株有更高的灵敏度和特异性,可提高检出率。〔结论〕用志贺氏菌属显色培养基检测志贺氏菌是一种新的快速途径,可明显提高检测效率。     

青藏高原鼠疫耶尔森菌基因型分布

目的研究青藏高原鼠疫耶尔森菌（鼠疫菌）基因组型分布特征.方法对分离到的青藏高原鼠疫菌297株,根据已经证实的22个差异区段设计引物,每株鼠疫菌的每个基因差异区段都采用PCR技术进行验证.结果在喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地中,鼠疫菌基因组型有9种,分别为1、5、6、7、8、10、11、新基因组型和Ype-ancestor型,其中以5、8和10型为主,3种基因组型合计所占比例为80.6%（204/253）,而且不同地区鼠疫菌基因组型的分布也不一致.青藏高原青海田鼠鼠疫疫源地鼠疫菌基因组型全部为14型.结论青藏高原鼠疫菌基因组型分布具有明显的地理特征.根据基因组型的分布状况推测出了鼠疫菌在青藏高原的传播路径.     

我国鼠疫耶尔森菌Pgm特征的研究

目的　对从我国不同类型疫源地分离的鼠疫菌进行色素沉着因子 (Pgm )表型的分析。方法　用氯化血红素培养基或刚果红培养基培养鼠疫菌 ,对不同颜色的菌落进行计数 ,计算鼠疫菌Pgm的阳性率。 结果　我国 10个疫源地的 16个生态型和新发现的四川青海田鼠型 ,除昆仑山A、B型外 ,其他各型的菌株均含有Pgm+ 菌 ,以青海田鼠型、锡林郭勒高原型、北天山东段型、北天山西段A型、北天山西段B型菌株的Pgm+ 率为高 ,Pgm+ 菌株 >90 %。结论　青海田鼠型、锡林郭勒高原型、北天山东段型、北天山西段A型、北天山西段B型菌株的Pgm+ 表型稳定。     

一起鼠间鼠疫的实验室检测结果分析

目的 通过对银川市滨河新区红墩子长爪沙鼠鼠疫疫源地自毙鼠及其体蚤、样方捕获鼠进行鼠疫抗原、抗体检测及鼠疫菌的分离,分析鼠疫菌的快速检验法,为动物鼠疫疫区判定和流行病学分析提供可靠的实验室依据。方法 采用鼠疫菌常规检测结合胶体金快速检测试纸和PCR基因检测方法,CIN培养基和耶尔森菌专用培养基培养鼠疫菌。结果 胶体金抗原检测和PCR基因检测结果阳性材料进行鼠疫菌培养均可分离出鼠疫菌;CIN显色平板更易于纯化培养及结果观察,操作简便省时、省力。结论 在基层单位推广胶体金试纸和PCR基因检测诊断技术,节省确诊时间。     

常见致病菌对鼠疫菌生长及形态影响的实验观察

[目的]观察常见几种致病菌对鼠疫菌的生长与形态的影响。[方法]选择5种致病菌与鼠疫菌分别混合接种在不同培养基,置28℃温箱,培养24h后观察菌落生长状况和菌落特征。[结果]结果表明各种菌在不同培养基上对鼠疫菌的生长发育及形态有不同的影响[结论]大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、小肠结肠炎菌、假结核菌对鼠疫菌生长有抑制作用,A群链球菌对鼠疫菌生长有刺激作用。     

鼠疫耶尔森氏菌三色荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立一种三色荧光定量PCR检测鼠疫耶尔森氏菌的方法。方法根据鼠疫耶尔森氏菌pPCP1质粒上的pla基因、编码F1抗原在pMT1质粒上的ca f1基因以及菌体染色体上的3a基因序列,设计特异性的引物和不同荧光标记的Taqman荧光探针,优化反应体系和扩增条件,考察该方法检测的敏感度、特异性、重复性和稳定性,最终建立三色荧光定量PCR检测方法。结果本研究所建立的方法对鼠疫耶尔森氏菌DNA的扩增效率高,最低检出限为1×102copies/ml,特异性高,重复性的变异系数在合理范围内,稳定性好。结论建立了一种同时检测鼠疫耶尔森氏菌pla、ca f1和3a基因的三色荧光定量PCR方法,该方法敏感度和特异性高,能够实现快速检测的目的。     

鼠疫耶尔森氏菌环介导等温扩增检测方法的建立

目的:将环介导等温扩增技术(LAMP)应用于鼠疫耶尔森氏菌的快速检测。方法:针对鼠疫耶尔森氏菌F1基因设计特异性引物,进行LAMP扩增。应用LAMP技术对鼠疫菌和非鼠疫菌进行检测以确定其特异性;对倍比稀释鼠疫菌液进行检测以确定其灵敏度,并与常规PCR方法进行比较。结果:对10种非鼠疫菌进行LAMP扩增,均为阴性结果,证明该方法具有很高的特异性。LAMP方法最低检出量为20个鼠疫菌,比常规PCR方法的灵敏度高10倍。通过加入染料进行LAMP扩增可直接观察结果。结论:本方法检测鼠疫耶尔森氏菌特异性强、灵敏度高,并且操作简便、结果易于判定,有望发展成为快速检测鼠疫耶尔森氏菌的有效手段。     

复合探针荧光定量PCR法检测鼠疫耶尔森氏菌的实验研究

目的建立用复合探针荧光定量PCR快速检测鼠疫耶尔森氏菌的方法。方法研究根据鼠疫耶尔森氏菌pla基因的核苷酸序列设计特异引物,通过PCR法的特异性、灵敏度和重复性研究,建立了复合探针荧光定量PCR检测鼠疫耶尔森氏菌的方法,用于鼠疫的筛选和诊断。结果该检测方法的特异性为100%,最低可检出10个拷贝的质粒DNA分子,可对1×101~1×106拷贝范围内的模板进行定量,最低可检测至1×102cfu/ml细菌。该方法的精密度好,阳性质控品和阴性质控品不同时间测定3次及同一时间5次重复实验结果Cv值均<5%。结论本研究建立的复合探针实时荧光定量PCR检测鼠疫耶尔森氏菌的方法,可对鼠疫耶尔森氏菌进行快速检测、准确辨别和早期诊断,对鼠疫的早期快速诊断具有重要意义。     

鼠疫耶尔森菌TaqMan探针实时荧光定量PCR快速检测

目的 建立一种快速检测鼠疫耶尔森菌的方法.方法 以编码F1抗原的基因caf1为靶序列,人工合成基因序列,制备重组质粒作为鼠疫耶尔森菌检测的标准样品;用实时荧光定量聚合酶链反应(fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)技术,针对pMT1质粒上的caf1基因设计引物和TaqMan荧光探针,进行实时FQ-PCR检验,评价该方法的准确性、敏感性及特异性.建立鼠疫耶尔森菌TaqMan探针实时FQ-PCR检测方法.结果 本研究成功构建了质粒pUC57-caf1,引物、探针特异性良好,标准曲线在5.03×102～5.03×107拷贝数之间,具有较好的线性关系,相关系数1.0.实时FQ-PCR检验最低可检测出5.03×102拷贝数的重组质粒,灵敏度比普通PCR高100倍.特异性检测试验可选择性检测出鼠疫耶尔森菌,与其他细菌无交叉反应,结果与普通PCR一致.对同一浓度的重组质粒进行15个平行样品的重复性试验,Ct值标准差为0.28.结论 建立TaqMan探针实时FQ-PCR检测技术,能够快速、准确、特异的检测鼠疫耶尔森菌,为鼠疫监控、诊断提供技术支持.     

中国鼠疫菌某些生化特征及流行病学意义

目的 探讨中国鼠疫菌株生化表征的遗传变异与分型地位。方法 采用平皿单菌落法，实验观察我国17个生态型共336株鼠疫菌酵解麦芽糖、鼠李糖、阿胶糖、甘油及脱氮反应的变化。结果 发现松辽平原、滇闽居民区和滇西纵谷区3个生态型部分菌株对甘油、阿胶糖、麦芽糖酵解有变异，可同时出现酵解和不酵解的单菌落，而且特性较稳定；其余14个生态型鼠疫菌单菌落酵解能力与过去资料报道一致无明显变化；根据实验结果可将中国鼠疫菌分为12个生化型。结论 我国鼠疫菌对糖酵解特性稳定，具有一定的分型意义，滇闽居民区与滇西纵谷区生态型鼠疫菌株可能源于一个祖先。     

一例历史鼠疫患者坟墓中的土壤检测报告

目的:了解鼠疫菌在历史鼠疫患者坟墓土壤中的存在状况。方法:采用赫氏培养基对鼠疫菌进行培养,同时利用Real-time定量荧光PCR对样本进行定性分析。结果:病原培养及荧光定量PCR定性分析显示样本均为阴性。结论:鼠疫菌在历史鼠疫患者坟墓的土壤中无法存活64年。