人乳头瘤病毒DNA相关序列与p53基因突变对大肠癌生物学行为 …

目的 探讨人乳头瘤病毒ＤＮＡ相关序列与ｐ５３基因突变及Ｐ５３蛋白表达的关系,及其对大肠癌生物学行为的影响。方法 采用ＰＣＲ方法检测大肠癌及癌旁组织,肝转移灶中ＨＰＶＤＮＡ相关序列。并应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ及免疫组化技术分别检测Ｐ５３基因突变及Ｐ５３蛋白表达。     

p16基因突变在人脑胶质瘤癌变中的作用

评估ｐ１６基因在胶质瘤发病机制中的作用。方法 用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ，差别ＰＣＲ等方法检测了２７例胶质瘤标本及对照正常脑组织，瘤旁组织及其它病变标本ｐ１６基因。结果 胶质瘤组中有４例存在ＳＳＣＰ泳动变位，提示存在点突变或微小突变．差别ＰＣＲ显示１例纯合缺失，１８例杂合缺失，正常组无任何形式的突变，胶质瘤组与正常组的总突变差异有显著意义。     

乳癌中p16,c-erbB-2的表达及意义

探讨ｐ１６和ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白表达与乳癌临床病理因素及预后的关系。方法 采用免疫组化和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术,分别检测５０例乳癌ｐ１６,ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白的表达和２０例乳癌ｐ１６基因的纯合性缺失及突变。结果 ５０例乳癌中,１７例（３４．０％）ｐ１６蛋白表达阳性,２４例（４８．０％）ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白表达阳性。２０例乳癌中无ｐ１６基因的纯合性缺失,１例ｐ１６基因外显子２有点突变。结果表明,ｐ１６     

膀胱癌多发或复发的克隆起源

目的 探讨人膀胱移行上皮癌多发性、复发性的细胞克隆起源。方法 采用ｐ５３基因突变的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析及ＤＮＡ测序检测６例患者１４个表浅、低分级原发加多发或复发的膀胱移行上皮癌标本及ｐ２１＾ＷＡＦ１／ＣＩＰ１蛋白的表达。结果 在１４个膀胱移行上皮癌标本均有ｐ５３基因的点突变,同一例患者所有标本的点突变分别在同一位点上;１４个膀胱移行上皮癌标本中仅有５个有ｐ２１＾ＷＡＦ１／ＣＩＰ１蛋白的表达。结论     

人乳头瘤病毒DNA相关序列与p53基因突变对大肠癌生物学行为的影响50例报告

目的探讨人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）ＤＮＡ相关序列与ｐ５３基因突变及ｐ５３蛋白表达的关系及其对大肠癌生物学行为的影响。方法采用ＰＣＲ方法检测大肠癌及癌旁组织、肝转移灶中ＨＰＶＤＮＡ相关序列。并应用ＰＣＲＳＳＣＰ及免疫组化技术分别检测ｐ５３基因突变及ｐ５３蛋白表达。结果在５０例大肠癌中,检出ＨＰＶ１６、１８ＤＮＡ相关序列２６例（５２０％）,其中ＨＰＶ１６ＤＮＡ４例（８０％）,ＨＰＶ１８ＤＮＡ２２例（４４０％）。ｐ５３基因突变率为５６０％。ｐ５３蛋白表达阳性率为４２０％。ＨＰＶＤＮＡ相关序列与ｐ５３基因突变及ｐ５３蛋白表达呈正比关系。结论ＨＰＶＤＮＡ相关序列可促进细胞转化、致ｐ５３基因突变、抑制细胞的凋亡,与大肠癌的发生发展有密切关系。     

p16基因和地塞米松对人胶质瘤细胞的影响

ｐ16基因是一个多种肿瘤抑制基因 ,也是细胞周期蛋白依赖性激酶 (ＣＤＫ ) 4的抑制因子 ,它参与细胞周期的调控 ,并在人类多种肿瘤中有缺失和突变。在胶质瘤中仅纯合缺失就高达 90 % [1] 。为了研究外源性ｐ16基因对胶质瘤的影响 ,我们采用聚合酶链反应 (ＰＣＲ )、逆转录 ＰＣＲ(ＲＴ ＰＣＲ)和免疫组织化学方法确定了人脑胶质瘤细胞系ＳＨＧ 44 ｐ16基因缺失并将人 ｐ16基因ｃＤＮＡ哺乳动物细胞表达载体转染ＳＨＧ 44 ,观察外源性ｐ16基因对胶质瘤细胞的作用 ,探讨地塞米松对转染 ｐ16基因肿瘤细胞有无更为明显的促分化作用。一、材料和…     

膀胱癌MDM2、p53基因表达的临床意义

我们运用点杂交、ＰＣＲ ＳＳＣＰ、免疫组化技术 (ＩＨＣ)分别对膀胱移行细胞癌(ＴＣＣ)组织和配对癌旁组织 ,以及非ＴＣＣ正常膀胱粘膜组织中ＭＤＭ2 基因扩增和表达 ,ｐ5 3表达和点突变情况进行对比检测 ,报告如下。材料与方法　ＴＣＣ及对应的癌旁组织标本各 2 3例 ,非ＴＣＣ正常膀胱粘膜标本 2 0例 ,ＨＥ染色诊断。按ＵＩＣＣ和ＷＨＯ标准 ,Ⅰ级 5例 ,Ⅱ～Ⅲ级 18例 ;Ｔｉｓ～Ｔ16例 ,Ｔ2 ～Ｔ4 17例。组织ＤＮＡ提取 ,测定样品浓度并判断纯度。根据ｐ5 3基因核苷酸序列 ,设计四对引物分别扩增 ｐ5 3基因第 5、6、7、8外显子。外显子包…     

检测胆汁P53和K—ras突变基因对诊断大肠癌肝转移的价值

探讨检测胆汁ｐ５３和Ｋ－ｒａｓ基因突变对诊断大肠癌肝转移的价值２。方法采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法对６２例大肠癌病的原发生和胆汁标本进行检测Ｐ５３和Ｋ－ｒａｓ基因突变的结果进行分析。     

大肠癌患者粪便中C-erbB-2扩增和p53突变的检测及临床意义

目的　建立大肠癌患者粪便 Ｃｅｒｂ Ｂ２ 扩增及ｐ５３ 突变的检测方法,探讨大肠癌的基因诊断的临床意义。 方法　以差异聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ） 、 Ｐ Ｃ Ｒ单链构象多态性分析（ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ） 银染技术,分别检测大肠癌患者粪便 Ｃｅｒｂ Ｂ２ 扩增及ｐ５３ 突变。 结果　１４ 例中查出 Ｃｅｒｂ Ｂ２ 扩增７ 例（５０ ％ ） ,ｐ５３ 突变８ 例（５７ ％ ） ,二基因联合检出１１ 例（７９ ％ ） 。２ 例粪便潜血试验（ Ｆ Ｏ Ｂ Ｔ） 阴性中,１ 例 Ｃｅｒｂ Ｂ２扩增及ｐ５３ 突变均阳性,另１ 例ｐ５３ 突变阳性。 结论　联合多基因检测能对大肠癌的基因诊断提供更多的帮助,粪便 Ｄ Ｎ Ａ 标本的 Ｃｅｒｂ Ｂ２ 扩增及ｐ５３ 突变分析可为筛查尚无出血或 Ｆ Ｏ Ｂ Ｔ 假阴性的大肠癌及大肠癌高危个体的一种新的有效手段。     

前列腺癌中P53基因突变及蛋白表达的研究

运用免疫组织化学ＬＳＡＢ法（链菌素－生物素标记法），结合ＰＣＲ－ＲＦＬＰ（ＰＣＲ限制性片段长度多态）、ＰＣＲ－ＳＳＣＰ（ＰＣＲ单链结构多态）技术，探讨了３４例前列腺癌穿刺标本中Ｐ５３蛋白表达及基因（５～８外显子）突变情况，发现３４例前列腺场中７例有Ｐ５３蛋白表达阳性，阳性率为２０．６％。２０例前列腺良性增生及１０例正常前列腺组织中Ｐ５３蛋白表达均为阴性（Ｐ＜０．０５），在前列腺癌高、中分化组及前列腺癌低、未分化组Ｐ５３蛋白表达阳性率分别为５．３％及４０％（Ｐ＜０．０５），在ＰＣＲ－ＲＦＬＰ中提示１例前列腺癌中有Ｐ５３突变，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ中提示３例Ｐ５３基因突变（５～６外显子），一例无Ｐ５３基因扩增产物，高度怀疑为Ｐ５３基因的缺失，３４例前列腺癌中，ＣＴ及骨扫描提示有转移者为１０例，其中５例为Ｐ５３蛋白表达阳性，阳性率５０％，与非转移组阳性率比较Ｐ＜０．０５。本研究表明Ｐ５３基因突变参与前列腺癌的发生发展过程，与其转移的生物学行为关系密切。分析了以上不同方法在检测Ｐ５３基因突变中的价值。     

肝细胞癌p53基因变异和鼠双微体癌基因表达的研究

我们对 34例肝细胞癌ｐ5 3基因的改变情况进行了系统的研究 ,同时还研究了鼠双微体基因 (ｍｕｒｉｎｅｄｏｕｂｌｅｍｉｎｕｔｅ2 ,ＭＤＭ2 )在ＨＣＣ组织中的表达 ,探讨了其与ｐ5 3基因突变的关系及其在ＨＣＣ发生过程中的可能作用。一、材料与方法1.标本来源 :肝癌标本 34例 ,肝硬化标本 10例 ,均来自我院外科手术切除的标本。采用酚 :氯仿抽提 ,无水乙醇沉淀法提取组织ＤＮＡ。2 .聚合酶链反应—单链构象多态性(ＰＣＲ ＳＳＣＰ)和ＤＮＡ序列分析 :ＰＣＲ扩增ｐ5 3基因 4、5、6、7和 8共 5个外显子的片段 ,所用引物序列参见文献 [1]。取…     

nm23-H1 基因杂合性缺失及突变与大肠癌转移抑制

应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交和ＲＴ－ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染,克隆及序列测定检测３６例大肠癌组织标本中ｎｍ２３－Ｈ１杂合性缺失和突变情况。结果：本组标本ｎｍ２３－Ｈ１杂合性缺失率为２９．６３％,Ｄｕｋｅ’ｓＤ期及远处转移大肠癌有较高的杂合性缺失发生率;大肠癌中未见ｎｍ２３－Ｈ１ＡＤ基因突变 。     

一例前列腺癌P53基因第6外显子中的移码突变

以ＰＣＲ单链构象多态（ＰＣＲＳＳＣＰ）分析及ＰＣＲ直接测序技术，结合免疫组织化学方法，对１例前列腺癌患者治疗前的前列腺穿刺组织及内分泌治疗后复发的手术切除标本中不同部位随机取材的肿瘤组织进行Ｐ５３基因第５，６外显子及Ｐ５３蛋白表达的检测，发现在第６外显子的第２０８密码子存在碱基插入突变（ＧＡＣ→ＧＡＴ），免疫组织化学检测中未发现Ｐ５３蛋白的过量表达。前列腺癌中尚未见有此种Ｐ５３基因突变的文献报道。     

应用PCR-SSCP法检测胆管癌组织DPC4基因突变

肿瘤抑制基因ＤＰＣ4(ｄｅｌｅｔｅｄｉｎｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒｌｏｃｕｓ4,ＤＰＣ4)参与细胞生长、分化的调节,其突变常导致肿瘤形成和转移。我们应用ＰＣＲＳＳＣＰ法检测ＤＰＣ4基因突变情况。1.材料与方法:(1)ＤＰＣ4ＤＮＡ提取:41例病理证实胆管癌的手术切除石腊标本,癌旁组织作对照。每例5μｍ的石腊病理切片,提取基因组ＤＮＡ。(2)ＰＣＲＳＳＣＰ分析:选择包括突变“热点”在内的第1、8、11外显子保守区的序列各合成一对引物。ＰＣＲ反应体系50μｌ,含05μｃｉα32ＰｄＡＴＰ1μｌ。取5μｌ扩增产物,与变性液混匀变性,骤…     

大肠癌组织中结直肠癌缺失基因mRNA及增殖细胞核抗原的表达

目的 探讨结直肠癌缺失基因（ＤＣＣＧ）及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）与大肠癌的临床病理特征关系，方法 用逆转录ＰＣＲ及免疫组织化学染色方法，分别检测ＤＣＣＧｍＲＮＡ及ＰＣＮＡ在３３例大肠腺癌及正常粘膜组织中的表达状况。结果 （１）ＤＣＣＧｍＲＮＡ表达缺失率为６１％，ＰＣＮＡ指数为３％～９７％。（２）大肠癌组织ＤＣＣＧｍＲＮＡ表达缺失及及ＰＣＮＡ指数与肿瘤分化程度，浸润深度和转移情况有显著相关性（Ｐ〉     

人大肠癌组织P53基因突变的初步研究

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术对照分析１８例大肠腺癌及正常结肠粘膜组织Ｐ５３基因第５、６、７和８外显子。发现８例大肠癌组织出现了反映Ｐ５３基因突变的异常条带。结果提示Ｐ５３基因的突变与大肠癌发生和发展有关。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ能在ＤＮＡ片段的不同部位检测ＤＮＡ多态性和点突变。该方法灵敏、快速，对大肠癌的基因诊断具有潜在性应用价值。     

特异扩增法检测大肠癌淋巴结微转移突变等位基因的研究

我们设计用Ｋ ｒａｓ基因第一外显子 (12 / 13密码子 )和结肠腺瘤性息肉(ＡＰＣ)基因突变聚集区 (ＭＣＲ)引物 ,采用多基因聚合酶链反应 单链构象多态性 (ＰＣＲ ＳＳＣＰ)和突变等位基因特异扩增 (ＭＡＳＡ)法对 6 0例大肠癌的癌组织及突变病例所属常规病理检查转移阴性的淋巴结进行联合检测 ,探讨癌基因检测淋巴结微转移的途径及意义 ,并经ＤＮＡ序列分析证明了此方法学的可靠性。一、材料与方法1.材料 :6 0例大肠癌病例选自第一军医大学附属南方医院。将根治术切下的标本在 30ｍｉｎ内切取癌组织 ,并分 3站 (肠壁、肠系膜中部、肠系膜根…     

大肠癌组织中HPV和C—erbB—2基因的检测及其关系研究

检测大肠癌组织中ＨＶＰ和Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因，探讨大肠癌组织中ＨＰＶ的存在与Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因的扩增之间的关系。方法 应用ＰＣＲ技术检测２１例大肠癌标本中ＨＰＶ及Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因。检测Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因同时进行差异ＰＣＲ，以确定Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因拷贝数的变化。     

骨肉瘤组织中p16基因的缺失突变及CDK4基因的扩增

目的 确定在原发性骨肉瘤中是否有Ｐ１６基因的异常及Ｐ１６基因异常与ＣＤＫ基因扩增之间的关系。方法 应用定量Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ方法分析确定Ｐ１６基因的缺失及ＣＤＫ基因的扩增。用ＰＣＲ＝ＳＳＣＰ方法检测Ｐ１６基因突变,结果：在６０例分析Ｐ１６基因的标本中有５例（９％）存在Ｐ１６基因的重排或缺失。均发生于原发肿瘤。在６７例分析ＣＤＫ４基因的标本中,有６例（９％）存在ＣＤＫ４基因的扩是有包括３例,     

原发性膀胱移行细胞癌p16基因缺失突变的研究

目的 探讨ｐ１６基因的原发性膀胱移行细胞癌中的改变。方法 应用多聚酶链（ＰＣＲ）和多聚酶链－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法对３８例膀胱移行细胞癌标本ｐ１６基因的缺失、突变进行分析。结果 原发性膀胱移行细胞癌ｐ１６基因缺失率为１８．４２％，未观察到突变。缺失、突变率明显低于培养的膀胱癌细胞系。结论 肿瘤细胞自原体转入培养环境的适应阶段ｐ１６基因缺失或突变可能有助于肿瘤细胞的增殖，在膀胱肿瘤细胞传代中起有重要作用。