微孔板杂交法检测结核分枝杆菌的初步临床应用

目的：对ＰＣＲ－微孔板杂交法的临床应用进行评价。方法：取临床标本２６８例分别进行抗酸染色、培养、ＰＣＲ扩增产物电泳、ＰＣＲ微孔板杂交四种方法的比较。结果：在２１６份临床高度怀疑有结核分枝杆菌感染的患者标本中,ＰＣＲ－微孔板杂交法检测阳阳性为９８例,其检出率高于ＰＣＲ－电泳法（９１／２１８）、培养法（８１／２１８）和抗酸染色法（５６／２１８）,５０份临床证实无结核分枝杆菌感染的病人标本,四种方法均未     

基于DPO的四重荧光PCR检测常见分枝杆菌方法的建立与应用

目的 利用多重荧光PCR技术,建立一种快速、准确、特异的检测常见分枝杆菌的方法.方法 以分枝杆菌16S rRNA作为检测靶基因,设计双启动寡核苷酸(DPO)引物和TaqMan探针,探针的5’端分别用FAM 、ROX、HEX和JOE进行荧光标记,3’端标记淬灭荧光.通过对4种分枝杆菌标准株基因组DNA的扩增,评价多重荧光PCR方法的特异性和灵敏度.采用建立的多重荧光PCR方法,采用该方法检测2010年6至12月杭州市红十字会医院68例结核科住院患者清晨痰液标本,结果与细菌培养和抗酸染色镜检进行比较.采用x2检验比较3种方法的阳性率.结果 该方法可准确、特异地鉴定结核分枝杆菌和3种常见非结核分枝杆菌,检测灵敏度均为1 ×101 cfu/ml.对68份痰液标本进行检测,结果显示31份检测结果阳性,阳性率45.6％,明显高于涂片染色镜检(阳性率14.7％),差异具有统计学意义(x2=15.4,P ＜0.05),其中28例为结核分枝杆菌,1例为鸟分枝杆菌,2例为胞内分枝杆菌,与细菌培养鉴定方法一致.1例培养阳性而PCR检测结果阴性标本经16SrRNA扩增测序鉴定为龟分枝杆菌.结论 本研究建立的多重荧光PCR方法敏感、特异、快速,能有效检测结核分枝杆菌和常见非结核分枝杆菌,可用于分枝杆菌感染者的实验室快速诊断.     

临床5种检测结核分枝杆菌方法的比较研究

为进一步加强对结核分枝杆菌的检测 ,提高结核病的诊治率 ,我们对临床 5种检测结核分枝杆菌的方法进行了比较研究 ,现将结果报告如下。一、材料和方法1.样品来源　晨痰和空腹静脉血 3ｍｌ均来自 1997年初至 2 0 0 1年 3月底在我院传染科确诊为结核病患者 89例及健康体检者 (2 38人均无结核病史 )。2 .检测试剂及方法　萋 纳氏抗酸染色法、金胺“Ｏ”荧光染色法、分离培养 (Ｌ Ｊ培养基 )、结核抗体 (ＥＬＩＳＡ ,华美试剂 )、聚合酶链反应 (ＰＣＲ ,华美试剂 ) ,均严格按试剂盒说明或常规方法进行。二、结果见表 1。其中在 39例分离培养阳…     

多聚酶链式反应快速检测肺活检组织中的结核杆菌DNA

利用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）对３１例病理可疑诊断为结核的肺活检切片进行结核菌ＮＤＡ的检测，并与抗酸染色进行了比较。用蛋白酶Ｋ和冻融裂解法快提切片中ＤＮＡ。３１例中有２４例ＰＣＲ阳性，１４例抗酸染色阳性；其中１７例抗酸染色阴性经ＰＣＲ检出１２例阳性，１４例抗酸染色阳性ＰＣＲ检出１２例阳性。ＰＣＲ检测阳性率明显高于抗酸染色（Ｐ＜０．０１）。说明ＰＣＲ用于肺活检组织诊断结核是一快速、敏感性较高、特异性较强的技术。此外，对影响ＰＣＲ结果的因素进行了分析。     

微孔板杂交法检测结核分枝杆菌的初步临床应用

目的:对PCR-微孔板杂交法的临床应用进行评价.方法:取临床标本268份分别进行抗酸染色、培养、PCR扩增产物电泳、PCR微孔板杂交四种方法的比较.结果:在216份临床高度怀疑有结核分枝杆菌感染的患者标本中,PCR-微孔板杂交法检出阳性为98例,其检出率高于PCR-电泳法(91/218)、培养法(81/218)和抗酸染色法(56/218).50份临床证实无结核分枝杆菌感染的病人标本,四种方法均未能检出结核分枝杆菌.结论:PCR-微孔板杂交法是高度敏感、高度特异的快速检测结核分枝杆菌方法.     

荧光定量PCR检测抗酸染色涂片刮削物中结核分枝杆菌DNA的可行性

目的:分析荧光定量PCR技术检测抗酸染色涂片刮削物中结核分枝杆菌DNA的检测能力.方法:应用结核分枝杆菌(TB)核酸检测试剂(PCR-荧光探针法)检测80例阴性、25例1-9条/300视野、95例1+、40例2+、21例3+、20例4+抗酸染色显微镜检查结果的涂片刮削物结核分枝杆菌DNA,分析不同阳性等级涂片的靶DNA检出情况,并应用Spearman等级相关分析阳性等级与检出基因拷贝数的相关性.结果:在1-9条/300视野、1+、2+、3+、4+的涂片刮削物中,分别有7、48、31、19、20例结核分枝杆菌DNA检测阳性,阳性检出率分别为28.00％、50.53％、77.50％、90.48％和100.00％,总检出率为62.19％,阳性等级与靶基因拷贝数检测结果呈正相关(r=0.684,P＜0.001);80例阴性涂片刮削物检测结果均呈阴性.结论:荧光定量PCR技术对2+以上的抗酸染色涂片刮削物中的结核分枝杆菌DNA具有较好的检测效能,但对本属于荧光定量PCR技术检测灵敏度范围的1+涂片的低阳性检出率则需更进一步的研究.     

聚合酶链反应-微孔板杂交技术用于结核分枝杆菌的检测

目的建立结核分枝杆菌的ＰＣＲ酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）方法，使ＰＣＲ结果判定更加客观。方法我们使用玻璃粉吸附提纯模板ＤＮＡ，将ＰＣＲ引物５′端标记生物素，用ＰＣＲ产物与微孔板中预先包被的克隆靶基因杂交，然后用酶标链霉亲和素与杂交体中的生物素结合，最后用酶底物与所标记酶进行显色反应，通过测定其吸光度来判断结果。结果所建立的ＰＣＲＥＬＩＳＡ检测法可提高检测的灵敏度和特异性。对５０份来自结核病人高度怀疑有结核分枝杆菌的标本检测表明，ＰＣＲＥＬＩＳＡ检出２２份阳性，比抗酸染色法（７／５０）、培养法（１３／５０）和ＰＣＲ电泳法（１８／５０）检出率高，而２０份证实无结核分枝杆菌的标本，几种方法检查均为阴性。结论该法可敏感、特异和客观地检测临床标本中的结核分枝杆菌。     

细针穿刺细胞学与抗酸染色检验在淋巴结核诊断中的比较

目的比较细针穿刺细胞学与抗酸染色在淋巴结核临床诊断中的应用价值。方法对100例淋巴结病变患者穿刺物标本应用细针穿刺细胞学和涂片抗酸染色法检测,对2种检测方法的结果进行比较分析。结果 100例淋巴结核细胞学分型不同时期,抗酸染色阳性例数不同,其中结核结节期44例中抗酸染色阳性2例;干酪样坏死期38例中抗酸染色阳性36例,其他各期抗酸染色阳性几乎为0。结论细针穿刺细胞学诊断淋巴结核不同时期抗酸染色阳性率不同,其中干酪样坏死期抗酸染色阳性率最高,细针穿刺细胞学和抗酸染色相结合在临床上有重要的应用价值。     

细针穿刺细胞学与抗酸染色检验在淋巴结核诊断中的比较

目的比较细针穿刺细胞学与抗酸染色在淋巴结核临床诊断中的应用价值。方法对100例淋巴结病变患者穿刺物标本应用细针穿刺细胞学和涂片抗酸染色法检测,对2种检测方法的结果进行比较分析。结果 100例淋巴结核细胞学分型不同时期,抗酸染色阳性例数不同,其中结核结节期44例中抗酸染色阳性2例;干酪样坏死期38例中抗酸染色阳性36例,其他各期抗酸染色阳性几乎为0。结论细针穿刺细胞学诊断淋巴结核不同时期抗酸染色阳性率不同,其中干酪样坏死期抗酸染色阳性率最高,细针穿刺细胞学和抗酸染色相结合在临床上有重要的应用价值。     

结核杆菌三种实验方法的应用评估

目的比较痰涂片法、实时荧光定量PCR法和免疫结核抗体(金标法)检测对结核病的诊断意义。方法选取2015年7月至2015年10月在我院诊疗疑似或确诊患者172例,进行涂片抗酸染色、实时荧光定量PCR法检测和采集血样进行免疫结核抗体检测。结果 172例检测样本中,抗酸染色痰液标本阳性例数只有20例,阳性率为11.6%。实时荧光定量PCR法阳性例数55例,阳性率31.2%。免疫结核抗体(金标法)阳性例数为87例,阳性率为50.6%。结论三种方法中,以结核抗体阳性率最高,实时荧光定量PCR法次之,抗酸染色法阳性率最低。如果三种方法联合运用,相互佐证,可提高准确性。     

针吸细胞抗酸染色在结核诊断中的应用

目的探讨抗酸染色在细针吸取细胞学中诊断结核的应用价值。方法回顾性分析四川省人民医院病理科细胞室2004年3月至2004年10月38例标本的病理资料。结果38例中，抗酸染色阳性35例，弱阳性1例，阴性2例。阳性检出率为95％。结论针吸物涂片HE染色结合抗酸染色，可大大提高细针吸取细胞学诊断结核的准确率。     

痰结核菌噬菌体生物扩增法与抗酸染色法的相关性分析

目的 探讨痰标本结核菌抗酸染色法与噬菌体裂解法检测的相关性.方法 用噬菌体裂解法检测抗酸染色阴性标本50份及抗酸染色不同阳性程度标本202份进行对比分析.结果 50份抗酸染色阴性标本中检出16份,检出率32%;202份抗酸染色阳性标本用噬菌体裂解法检测,阳性175份,1～8条/300视野～4 检出分别是63.6%,84.8%,86.5%,90.4%,94.7%,总阳性率86.6%.结论 噬菌体裂解法检测抗酸染色阴性标本,敏感性显著高于涂片染色法;检测抗酸染色阳性标本与涂片染色法一致性较高,并且随着涂片中抗酸杆菌菌量的增多呈现正相关.     

荧光染色法与萋-尼染色法检测结核分枝杆菌的效果评价

目的比较荧光染色与抗酸染色(萋-尼染色)检测结核分枝杆菌的结果差异,比较亚甲蓝液、Haris苏木素液、高锰酸钾液作为荧光染色法复染试剂的效果。方法采集疑似结核病症状的患者痰液标本198份,分别进行萋-尼染色和荧光染色,比较分析两种方法结核分枝杆菌检出率的差异。荧光染色分别用0.3%亚甲蓝液、0.5%Haris苏木素液、0.5%高锰酸钾液作为复染剂,比较不同复染剂在荧光显微镜下镜检的效果。结果萋-尼染色分枝杆菌检出率为66.67%(132/198)。荧光染色分枝杆菌检出率为94.9%(188/198),其中,亚甲蓝复染检出率为94.95%(188/198)、苏木素复染检出率94.44%(187/198)、高锰酸钾复染检出率为94.44(187/198),与萋-尼染色比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论荧光染色法阳性检出率明显高于萋-尼染色法,其中0.3%亚甲蓝液是一种良好的背景淬灭复染液。     

多聚酶链式反应速检测肺活检组织中的结核杆菌DNA

利用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）以３１例病理可疑诊断为结核的肺活检切片进行结核菌ＤＮＡ的检测，并与抗酸染色进行了比较。用蛋白酶Ｋ和冻融融解法快提切片ＤＮＡ。３１例中有２４例ＰＣＲ阳性，１４例抗酸染色阳性；其中１７例抗酸色性经ＰＣＲ检出１２例阳性，１４例抗酸染色阳性ＰＣＲ检出１２例阳性。ＰＣＲ检测阳性率明显高于抗酸染色（Ｐ〈０．０１）。说明ＰＣＲ用于活检组织诊断理一快速、敏感性较高、特异性较强的技术。此     

手工法和全自动机器法查找结核杆菌效果比较

目的比较实验室使用全自动机器法和传统手工冷染法进行抗酸染色查找结核杆菌的差异。方法选取2013年1月1日至2014年6月30日上海市中医药大学附属曙光医院确诊的结核患者痰标本346份和其他疾病患者痰标本1 150份,同一份标本分别使用自动染色机和传统手工冷染法进行涂片染色检测,对2张涂片染色结果进行比较。结果同一份痰标本在制片几乎一致的情况下,自动化染色和手工法染色检测结果二者差异均无统计学意义(χ2阴性涂片=0.31,χ2阳性涂片=0.20,P0.05)。结论使用自动化抗酸染色仪查找痰涂片中结核分枝杆菌在临床诊断中具有一定临床意义     

结核杆菌（TB）PCR荧光诊断试剂盒的临床应用

目的：探讨半定量ＴＢ－ＰＣＲ荧光探针诊断试剂盒的临床应用价值。方法 以双盲法对１１５例结核病和５９例非结核病人的痰标本进行厚涂片抗酸染色检查、结核菌培养、荧光探针ＴＢ－ＰＣＲ检查对比。结果：三种方法检测的敏感性分别为３２．２％，５９．１％，７１．３％，荧光探针ＴＢ－ＰＣＲ法的敏感性显著高于培养法和涂片法（Ｐ〈０．０１和Ｐ〈０．０５）。特异性分别为９３．２％、９１．５％、９４．９％，差异无显著性。结     

金胺“O”荧光染色LED显微镜检测痰中抗酸杆菌的应用

目的探讨金胺"O"荧光染色LED显微镜法在检测痰中抗酸杆菌的应用。方法依据《中国结核病防治规划﹑痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》对2106例痰标本同时用萋-尼氏抗酸染色法和金胺"O"荧光染色法查找抗酸杆菌,比较两种方法的实验结果,分析金胺"O"荧光染色LED显微镜检测抗酸杆菌的灵敏度和特异性。结果 2106例痰标本中荧光染色阳性315例,阳性率15.0%;萋-尼氏染色阳性283例,阳性率13.4%,两种方法符合率89.8%。对比两组检测结果,金胺"O"荧光染色LED显微镜法检测的灵敏度和特异性均较高。结论金胺"O"荧光染色LED显微镜法是一种检测灵敏度高﹑特异性好﹑操作简便﹑快速的方法,对结核病患者的早期诊断和治疗具有重要意义。     

分枝杆菌实验室诊断方法比较

  目的  了解分枝杆菌实验室检测中培养、涂片抗酸染色及PCR-荧光探针法的应用情况与诊断价值。   方法  回顾2013年1月至2015年12月北京协和医院送检分枝杆菌的10 326份培养、25 269份涂片抗酸染色及5949份PCR-荧光探针法检测的标本种类分布及阳性标本检出率, 比较3种检测方法的差异及诊断价值。   结果  培养法以血液标本数量最多(31.4%), 涂片抗酸染色和PCR-荧光探针法均以痰标本数量最多(40.3%和40.4%)。PCR-荧光探针法阳性标本检出率(8.9%)明显高于培养(5.6%)和涂片抗酸染色(1.9%)(P < 0.05)。以培养法为金标准, PCR-荧光探针法的敏感度(42.9%)高于涂片抗酸染色法(31.3%), 特异度(95.2%)低于涂片抗酸染色法(97.4%)(P均 < 0.05)。   结论   3种分枝杆菌实验室检测方法中, PCR-荧光探针法的阳性标本检出率和敏感度均较高, 在实验室分枝杆菌属的检测中具有重要价值。     

结核感染T细胞、结核抗体、抗酸染色3种方法的临床评价

目的评价结核感染T细胞检测、结核抗体、抗酸染色3种方法检测对结核病诊断的价值。方法对怀疑结核的患者标本进行抗酸染色的检测、结核感染T细胞检测、结核抗体的检测,最后对3种方法的结果对结核病的诊断效果进行判断。结果本研究共纳入80例患者,抗酸染色阳性的24例,结核感染T细胞检测四项结果均阳性的58例,结核抗体阳性的65例,最终确诊结核患者为62例。结论 3种方法中抗酸染色作为一个传统的方法不可丢弃,抗酸染色的方法最可靠,但是阳性率偏低;结核感染T细胞检测容易出现假阴性,此方法检测时间漫长,但是是一种具有较高敏感性和特异性的检测结核感染的技术;结核抗体检测容易出现假阳性(打过卡介苗的患者也可以出现阳性),也是一种不可缺少的辅助诊断方法。在对结核病的诊断过程中,三者进行联合检测可以增加了对结核病诊断的正确率,减少假阳性率与假阴性率。     

荧光定量聚合酶链反应在淋巴结结核鉴别诊断中的应用

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测结核分枝杆菌(MTB)DNA在淋巴结结核鉴别诊断中的作用。方法选取近4年来74例淋巴结结核病例及24例其他对照病例,同时作细针吸取细胞学(FNAC)、抗酸染色、MTBDNA检测,采用χ2检验比较抗酸染色与FQ-PCR检测阳性率的差异。结果 74例标本中,抗酸染色阳性32例(43.2%),MTBDNA阳性52例(70.3%),抗酸染色与FQ-PCR检测MTB的阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。结论在干酪型淋巴结结核诊断中PCR阳性率达82.3%,与涂片抗酸染色相比诊断率明显提高,有很大优势和应用价值。