反相高效液相色谱法测定人血中血小板活化因子方法学的…

目的：探讨用反相高效液相色谱法（ＲＨＰＬＣ）测定人血中血小板活化因子（ＰＡＦ）方法学的实用性。方法：分析实验影响因素，并与生物法对比观察，对不同年龄段正常人与冠心病患者血中ＰＡＦ含量进行测定与分析，结果：证实ＲＨＰＬＣ法测定ＰＡＦ操作简便，与经典生物法有良好的相关性，（ｒ＝０．９０７９）。结论；用ＲＨＰＬＣ法测定血中ＰＡＦ的干扰因素少，重复性好，测定的血ＰＡＦ值具有可靠性，能较准确地反映血中的ＰＡ     

血小板活化因子反相高效液相色谱法测定及其在老年性疾病中的应用

目的 建立血小板活化因子(PAF)的反相高效液相色谱(rHPLC)检测法,与生物学检测法比较,探讨其在老年脑梗死、高血压、冠心病等疾病中的意义。方法 采用rHPLC对100例健康对照者、23例脑梗死、28例高血压病、65例冠心痛患者血PAF进行分析。结果 rHPLC法与生物学法相关性较好,操作简便,重复性好,灵敏度高,干扰因素少。脑梗死、冠心痛患者血PAF值显著高于参考值（P＜0．01);高血压病组与对照组比较,无显著性差异(P＞0．05)。结论 rHPLC法测定PAF更具可靠性,更能正确地反映血中PAF水平;有助于进一步推动PAF的临床与基础研究。     

高效薄层层析法分析人血中血小板活化因子

本室用高效薄层层析法(HPTLC)对人血中血小板活化因子(PAF)进行直接测定,用高效硅胶G及普通硅胶G薄板两次展开,用岛津CS-930型薄层扫描仪定量,测出人血中PAF,灵敏度达ng水平,经生物鉴定法证实了本法的可靠性,并初步分析了正常人10例,肺心病患者13例,两组差异无显著意义(p>0.05)。     

反相高效液相色谱法测定夜宁糖浆中大黄素的含量

夜宁糖浆由合欢皮、首乌腾、女贞子、灵芝、大枣、甘草、浮小麦七种中药材加工制成，多见采用薄层扫描法测定其改剂型产品夜宁胶囊中大黄素的含量的方法，为了更好地控制产品的内在质量，保证临床用药的安全有效，本文采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定制剂中大黄素的含量，并进行了方法学考察，得到了比较满意的结果。     

高效液相色谱法测定空白血浆中伪麻黄碱的含量

背景:盐酸伪麻黄碱的测定方法有滴定法、分光光度法、气相色谱法、毛细管电泳法、高效液相色谱法和液质联用等方法,选取合适的方法检测药物在血液中的浓度对指导临床合理、安全用药具有十分重要的意义。目的:建立反相高效液相色谱法测定空白血浆中伪麻黄碱含量的方法。设计:单一样本实验。单位:武汉大学人民医院药学部。材料:实验于2005-05/07在武汉大学人民医院药学部实验室完成。盐酸伪麻黄碱标准品(湖北省药检所提供);空白血浆(孝感市中心血站提供)。方法:准确配制含盐酸伪麻黄碱浓度为50,100,200,500,750,1000μg/L的系列标准血浆样品,采用有机溶剂萃取血浆中的伪麻黄碱,并用高效液相的方法测定其含量。采用ZorbaxSB-C18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相:0.2%磷酸溶液-乙腈(95∶5),流速:1.0mL/min,检测波长为194nm。主要观察指标:通过制备标准曲线、精密度和回收率评价方法的准确性和可行性。结果:线性范围50～1000μg/L(r=0.9993),平均回收率79.20%。日内、日间RSD<5%,限按信噪比为2计算,盐酸伪麻黄碱的最低检测为25μg/L。结论:反相高效液相的方法简便、准确,适用于伪麻黄碱药代动力学和生物等效性研究。     

急性脊髓损伤患者血小板活化因子的动态变化及其I临床意义

血小板活化因子（platelet activating factor,PAF）具有极强的致炎作用,是炎症的自体有效递质,在创伤等炎症反应过程中发挥重要作用。目前,国内学者多通过多巴胺、去甲。肾上腺素等炎症介质含量的变化,了解致病化学介质损伤作用的本质。为此,本研究观察了36例急性脊髓损伤患者血中PAF水平的动态变化,旨在了解PAF在急性脊髓损伤病理变化过程中的意义。     

反相高效液相色谱法测定水杨酸苯酚搽剂中水杨酸及苯酚含量

目的:建立测定水杨酸苯酚擦剂中水杨酸和苯酚含量的方法。方法:采用反相液相色谱法,色谱柱采用ηBondapakC18反相柱,流动相为甲醇-0.01mol·L-1醋酸钠-10%乙酸(50:50:0.2),检测波长为272nm。结果:水杨酸及苯酚的线性范围分别为0.01￣0.06mg·mL-1("=0.9990)和0.004￣0.024mg·mL-1(#=0.9993);加样回收率分别为98.54%,RSD=1.2%(n=7)及98.68%,RSD=0.48%(n=7);方法:精密度的RSD=0.72%～0.67%(n=5)。结论:方法简便、灵敏,结果准确,可用于该制剂的含量测定。     

反相高效液相色谱法测定血浆罗哌卡因的浓度

目的建立测定罗哌卡因血药浓度的反相高效液相色谱法.方法血浆样品加入利多卡因作内标,经正己烷-二氯甲烷-异丙醇(100∶50∶5)提取后,以乙腈-0.025mol/L磷酸缓冲液(pH 3.0)(体积比20∶80)为流动相,采用Diamonsil钻石C18柱(200mm×4.6mm,5 μm)分离,检测波长220 nm.结果线性范围0.040 mg/L～7.500 mg/L,最低检测浓度为0.025 mg.应用本法测定了4只犬静脉注射罗哌卡因(10 μmoL/kg)后不同时间的血药浓度.结论反相高效液相色谱法测定血浆罗哌卡因的浓度方法快速、简便,适用于药代动力学研究.     

固相萃取反相高效液相色谱法测定全血环孢素A

目的　建立固相萃取反相高效液相色谱法测定全血环孢素A的方法。方法　全血中的环孢素A采用Wa tersSep PakC18萃取小柱提取浓缩 ,色谱柱WatersNova PakC18;流动相　乙腈∶甲醇∶水 (32 0∶30∶15 0 ,V/V) ;流速 0 6 5ml/min ;检测波长 2 0 6nm ,环孢素D作内标。结果　方法的回收率为 95 8% ,相对标准差 (RSD)为 7 5 % ,线性范围为5 0～ 2 0 0 0 μg/L ,r=0 9999。 结论　该方法特异、敏感、准确 ,可用于全血环孢素A的测定。     

微粒色谱法和高效液相色谱法检测糖化血红蛋白的相关性研究

目的分析微粒色谱法和高效液相色谱法在糖化血红蛋白(HbA1c)检测中的相关性和临床符合情况。方法依照美国临床和实验室标准协会(CLSI)的EP9-A2文件要求,每日随机抽取重庆市急救中心门诊或住院患者血液标本8份,连续5d,共采取40份。分别用微粒色谱法和高效液相色谱法测定HbA1c,并对数据进行比较分析。结果对两种方法测定的HbA1c结果进行比对分析,结果表明两检测系统内重复性好,符合相关性实验要求;方法间无离群点存在;线性回归方程为Y=1.088 5 X-0.521 4,相关系数r=0.993,95%置信区间(B^C,low,B^C,high)为(0.019 1,0.181 8),在允许误差(-0.35,0.35)之内,两种方法测定结果无明显差异,不存在有意义的偏倚。结论微粒色谱法和高效液相色谱法可比性高,相关性好,符合临床需求,检验科可根据自身条件,选择适合的测定方法。     

高效液相色谱法测定血清葡萄糖

摘要：目的:建立一种测定血清葡萄糖（glucose,Glu）的高效液相色谱法（HPLC）,探讨其能否作为血清Glu测定的参考方法。 方法:以D-半乳糖（D-galactose）为内标物,用无水乙醇沉淀、去除血清中的蛋白质,在pH 9.1条件下与1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）反应,用HPLC测定血清Glu衍生产物、D-半乳糖衍生产物,用标准曲线法定量;对建立的方法进行方法学评价。 结果:本法测定血清Glu的批内变异系数（CV）为0.33%～0.67%,平均0.51%;批间CV为0.02%～0.85%,平均0.38%;总CV为0.47%～1.03%,平均0.68%。回收率为98.22%～101.96%。分析Glu的参考物质SRM 965a,测定结果与认定值的偏差为-0.928%～0.347%,平均偏差为-0.072%。 结论:初步建立了测定血清Glu的HPLC法;该法准确、精密,有望作为血清Glu测定的候选参考方法。     

高效液相色谱法测定血浆同型半胱氨酸

目的 建立测定血浆同型半胱氨酸的高效液相色谱（ＨＰＬＣ）方法。方法 血浆同型半胱氨酸经巯基乙醇还原后用碘乙酸封闭巯基,。再与邻苯二甲醛（ＯＰＡ）反应完成衍生化,以磺在同型半胱氨酸为内标,经Ｃ１８反相柱进行色谱分离,荧光检测器测定结果。结果测定线性范围达１５０μｍｏｌ／Ｌ,最低检测限为１．０μｍｏｌ／Ｌ日内不精密度３．７－４．２％,日间不精密度３．８－４．３％;方法回收率９３－１０２％。结论本方法     

改良反相高效液相色谱法监测血清中甲氨喋呤浓度及临床应用

目的建立一种反相高效液相色谱法(RP-HPLC)检测肿瘤患者血清中甲氨喋呤(MTX)浓度的方法。方法色谱柱为反相柱C18(150.00 mm×4.60 mm),柱温35℃。流动相为0.15 mol/L乙酸钠∶乙腈=89∶11(体积比),流速1.5 m l/m in。进样量为10μl,检测波长303 nm,用高氯酸沉淀血清标本的蛋白。结果血清中MTX的检测范围为0.25~100.00 mg/L,决定系数(r2)=0.999,线性关系良好,平均回收率100.95%,日内及日间相对标准差(RSD)均<5%。结论RP-HPLC适用于临床对血药浓度的监测。     

Low-dose acetylsalicylic acid therapy monitored with ultra high performance liquid chromatography

Objectives

Assessment of compliance in patients on low-dose acetylsalicylic acid (ASA) therapy is limited to interview, pill counting, witnessed ASA intake, and measurement of thromboxane B₂ levels. We validated a new, sensitive assay for analyzing blood levels of ASA and the metabolite salicylic acid (SA).

Design and methods

Blood samples were withdrawn from 10 healthy volunteers and 50 patients with stable coronary artery disease, before and after intake of 75 mg ASA. Plasma was mixed with acetonitrile, and 2-methylbenzoic acid was added as internal standard. After filtration, ASA and SA were quantified with ultra high performance liquid chromatography (UHPLC). Separation was accomplished with an isocratic flow of acetonitrile in phosphate buffer pH 2.5, and a Zorbax RRHD C₁₈ analytical column. Detection was achieved with wavelength photodiode array detection set at 237 nm.

Results

The ASA- and SA-assay showed linearity (r² > 0.999) within the range of 0.2–200 μg/mL, and with detection limits of 170 ng/mL and 53 ng/mL. The intra- and inter-day imprecision for ASA and SA were 2.2–5.9%, 3.4–11.7% and 1.8–8.0%, 3.8–9.4%, respectively. Recovery was between 89 and 103% for both assays. More than 60 coadministered drugs were investigated for interference, and only one drug interfered with the ASA-assay and none with the SA-assay. ASA was measurable 1 h after intake of 75 mg ASA, and SA was measurable 1 and 6 h after ASA intake.

Conclusion

We developed a fast and reliable UHPLC assay with a high sensitivity and selectivity, suitable for monitoring of compliance in patients treated with low-dose ASA.     

高效液相色谱法测定血清甘油三脂的研究

本文研究用高效液相色谱测定血清甘油三脂含量的方法。结果表明 ,用 1,2 ,4 丁三醇作内标 ,2 30nm为测定波长 ,在本文色谱条件下 ,测定血清甘油三脂的含量 ,其结果准确、灵敏、回收率高、操作较简便 ,是测定血清甘油三脂含量较理想的方法     

反相高效液相色谱紫外法检测人血清尿酸

目的探讨日本临床化学会(JSCC)推荐的检测人血清尿酸(UA)的反相高效液相色谱紫外(HPLC-UV)法是否可作为候选参考方法来验证同位素稀释质谱法、评价常规方法。方法对反相HPLC-UV法进行复现并进行方法学评价。观察尿酸酶处理人血清样本后的色谱以评价其特异性;检测系列标准液的UA水平并绘制标准曲线,观察线性范围;用朗道公司质控品评价精密度;用UA标准液评价回收率;分别用有证参考物SRM 909b(Ⅰ和Ⅱ)、国家一级标准物质GBW 09176、GBW 09175、GBW 09174评价正确度,并与2008年国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)参考实验室RELA(ring trials for reference labora-tories)结果进行比对;用改良Bland-Altman图评价5种常规检测系统与反相HPLC-UV法间的偏差。结果尿酸酶处理后UA色谱峰消失;本法的线性范围为2.08～1 785μmol/L;批内变异系数(CV)均<0.3%,批间CV均<0.4%,日间CV均<2.3%,总CV均<2.7%;平均相对回收率为96.0%～100.6%;与SRM909bⅠ和Ⅱ靶值的偏移分别为-2.5%、-2.3%;与GBW09176、GBW 09174、GBW 09175靶值的偏移分别为0.29%,-0.74%和0.06%;与参加RELA比对的另3家实验室的平均值进行比较,水平1偏移为0.35%,水平2为-0.69%;Hitachi、Beckman Coulter、Roche、Dade、Vitros常规检测系统检测人血清UA与反相HPLC-UA法的相关系数分别为0.998 9、0.996 5、0.999 2、0.999 2和0.998 7,与反相HPLC-UA法的偏差均小于5%的生物学变异。结论本法特异、简便、快速,精密度好,正确度高,与具有良好溯源的常规测定系统具有良好的相关性和一致性,可推荐作为人血清UA测定的候选参考方法。     

变性高效液相色谱-测序技术在检测乳腺癌BRCA1基因突变中的临床诊断价值

目的探讨变性高效液相色谱（DHPLC）-测序技术在早期检测乳腺癌BRCA1基因突变的临床意义。方法用聚合酶链反应（PCR）扩增BRCA1基因，该扩增产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定后，直接进行DHPLC分析；有峰型改变的样本作测序分析，以确认突变。结果从124例乳腺癌患者中共发现9种突变。包括7种错义突变，其中，1例Stop598，1例A807E合并E809L，1例A807E，2例Y856H，1例T967S，2例11170F，1例R1203G；一种存在于一号内含子的突变，即IVS101—10T〉C17例；一种2号外显子的5’非翻译区突变，即A118T2例。此外，在乳腺癌标本和正常对照标本中都发现有几处常见的单核苷酸多态性位点。结论本研究确定了9种乳腺癌患者可能发生的突变类型，为今后临床应用DHPLC对高危人群BRCA1基因进行早期基因检测提供了9个位点。DHPLC一测序技术可快速、方便地区分带有碱基替换和小片段缺失的DNA片段，是一种可用于早期临床诊断乳腺癌BRCA1基因改变的高效、灵敏和操作简便的方法。     

高效液相色谱分析在HbE筛查中的应用价值

目的探讨高效液相色谱分析法在HbE病筛查中的价值。方法应用高效液相色谱分析仪对24 779例样本进行血红蛋白(Hb)分析,HbA2≥11%的样本进行HbE基因检测。结果 24 779例标本中检出129例HbA2≥11%的样本,含量为14.0%～75.2%(27.2%±9.4%)。经基因检测均确诊为HbE病,包括HbE杂合子、HbE/α-珠蛋白生成障碍性贫血、HbE/β-珠蛋白生成障碍性贫血、HbE/α-β-珠蛋白生成障碍性贫血和HbE纯合子,其HbA2含量分别为(26.1±1.3)%、(18.2±1.8)%、(45.9±8.0)%、38.6%和(73.9±1.8)%。经ROC曲线分析HbA2筛查HbE的临界值为11.7%。结论高效液相色谱不仅能有效地筛查HbE病,还可以通过HbA2含量区分HbE病突变类型及其复合珠蛋白生成障碍性贫血的类型,是筛查HbE病的有效方法。     

反相高效液相色谱法测定人血浆中无环鸟苷

目的对流动相的配方进行改良,建立反相HPLC法测定人血浆中阿昔洛韦浓度。方法采用SphericorbC18色谱柱,以2．5％的乙腈水溶液（内含10mmol/L高氯酸,5mmol/L乙酸钠,3．5mmol/L庚烷磺酸钠）为流动相,紫外检测波长254nm。血浆以高氯酸沉淀后高速离心取上清液分析。结果阿昔洛韦峰和其它杂峰得到很好的分离,最低检测限为30ng/ml（进样50μl,信噪比为3：1）。结论本法快速、简便、灵敏度高,且可检测到阿普洛韦代谢物。