吐温在血清总蛋白测定中双缩脲法的应用

双缩脲法测定血清总蛋白常遇到显色后,显色液出现混浊,往往使测定结果偏高。为了解决混浊问题,我们在方法上进行改进,经过1年多的观察,效果满意,现报告如下。一、试剂双缩脲试剂;20％吐温-80。二、方法同双缩脲法。当发现显色后出现混浊时,在该反应管内加1滴20％吐温-80,并用力振摇显色液很块变清晰,即可比色计算结果。三、结果在20份总蛋白测定管中加双缩脲试剂水浴显色20分钟后,未出现混浊,进行一次比色,又在各管加20％吐温-80 1滴振摇混均后再比色1次。先后两次比色结果,经统计处理,t=1.8,P>0.05,无显著性差异。总蛋白显色后出现混浊,主要是标本含脂类高。我们收集总蛋白测定显色液混浊标本20份,同时测定标本甘油三脂和总胆固醇。其甘油三脂都高于160mg％,而胆固醇在正常范围内。表明吐温的作用在于溶解脂类物质。吐温-80的应用:原先我们用吐温原     

手工酶比色法检测高浓度血糖的一点改进

血液中葡萄糖的准确测定 ,对糖尿病的诊断及治疗效果判定具有重要意义。日常工作中 ,常遇到高浓度的血糖血样 ,特别是在检测病人餐后血糖时 ,样品的吸光度值往往大于 0 8甚至 1 0 ,通常是估计读数 ,造成结果的不准确 ,或者用半定量法重做测定 ,既浪费试剂又要再等一段时间才能得到结果。为此我们在检测高浓度血糖血样时 ,对显色深的样本改用 0 5ｃｍ厚度的比色杯取代通常用的 1ｃｍ厚度的比色杯进行比色 ,比色的结果乘以 2 ,其结果与半定量法、全自动生化仪法相比非常近似 ,差异无显著意义。实验方法是取高浓度血糖血清一份 ,分别用半定量…     

迈克肌酐试剂在 AU5421仪器上测定偏高实验及分析

目的：探讨引起AU5421生化仪测定（酶法）肌酐值升高的原因。方法利用混合血清，通过迈克肌酐（ Crea）试剂精密度试验、试剂针之间交叉污染试验、比色杯之间交叉污染试验，找出故障原因。结果精密度试验，Crea试剂检测CV值外圈和内圈分别为0．92和1．04，精密度良好；试剂之间肌酸激酶（ CK）及同工酶（ CKMB） R2试剂会对Crea测定有影响；Crea测定结果与内、外圈精密度结果一致性较好，内外圈试剂针间、比色杯间无交叉污染。结论自动生化分析仪临床检验应用中，影响测量结果的因素主要有试剂针引起的交叉污染、比色杯引起的交叉污染、搅拌棒引起的交叉污染。对测量结果产生偏差的原因进行多方面分析，及时调整仪器，保证测量结果的准确性。     

三酰甘油与总胆固醇试剂对总胆汁酸测定的干扰

目的通过实验研究三酰甘油和总胆固醇试剂对总胆汁酸（TBA）测定的干扰及消除。方法以Randox质控血清为样本,分别单独测定TBA,测定三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）后测定TBA和经过不同的清洗程序、测定通道后测量TBA并测量TG、TC试剂中的TBA含量。结果先测量TG、TC后再测量TBA．其均值分别为（64．33±3．22）μmol／L和（56．34±3．56）μmol／L,与对照组的（20．34±4．66）μmol／L相比,差异有统计学意义（P〈0．01）;TG经过特殊清洗及增加比色杯和试剂针清洗后,TBA测量值与正常比较无区别（P〉0．05）;TC经过特殊清洗后,仍高于对照（P〈0．05）,但增加比色杯和试剂针清洗后,TBA测量值与正常比较无区别（P〉0．05）;先进行TC、TG测量后连续10次TBA含量,可以看到前6次结果与对照组之间差异有统计学意义（P〈0．05）,从第7次开始,差异无统计学意义（P〉0．05）,但测量值仍有轻微区别;TC、TG试剂中TBA含量高于生理盐水（P〈0．01）。结论TC、TG试剂中含有高剂量TBA,可能对试剂针、比色杯造成污染;仪器清洗和改变测量通道可以抵抗这种污染,但真正的消除还需依赖技术的进步。     

单试剂与双试剂双缩脲法测定血清总蛋白的比较

目的将双缩脲试剂由单试剂改为双试剂方法,并就两种不同剂型方法作比较.方法双试剂配制,第1试剂为不含硫酸铜的双缩脲空白试剂,第2试剂系将单试剂中的硫酸铜增加1倍,二者等量混合即成单试剂.选取黄疸、脂浊、溶血及外观正常标本用两种方法同时在日立7060自动生化分析仪上测定总蛋白含量.结果血清总胆红素每增加100μ mol/L时,单试剂法总蛋增加.8 g/L,双试剂法不受干扰;脂浊血清对单试剂法结果影响十分明显,而双试剂法则完全可以排除脂浊干扰;溶血标本每1 g/L血红蛋白可使单试剂法总蛋白结果约增加2.2 g/L,双试剂法可基本去除此干扰;对外观正常标本两种方法测定结果差异无显著性.结论双剂型双缩脲法在不改变单试剂法反应原理,保留其优点的基础上,能克服黄疸、脂浊、溶血的干扰,具有很好的准确度和精密度,且适合于自动分析.     

用于筛选天然产物中脲酶抑制剂的脲酶活性测试方法的建立

抑制幽门螺杆菌产生的脲酶具有治疗胃炎和消化性溃疡的作用。用酚红指示剂和Ｂｅｒｔｈｅｌｏｔ试剂在９６孔培养板上检测重组脲酶活性，其灵敏度指标酚红法每ｍｇ酶蛋白引起的每分钟吸光度变化。△Ａ为６．９，而Ｂｅｒｔｈｅｌｏｔ法每ｍｇ酶蛋白引起的每分钟吸光度比值变化△Ａ为３１３。结果表明用Ｂｅｒｔｈｅｌｏｔ试剂检测重组脲酶活性适宜在９６孔培养板上大规模筛选天然产物中的脲酶抑制剂。     

高脂血的蛋白质测定

通常用的双缩脲试剂，在测定高脂血清时由于血清混浊，产生干扰，这种干扰通常用丙酮或乙醚来处理。操作非常烦琐。本介绍以KOH代替NaOH按Doumas配方配制的双缩脲试剂测定脂血中的蛋白质．结果比较令人满意。     

Olympus生化仪检测脂肪酶的交叉污染来源分析及处理对策

目的 通过分析Olympus全自动生化分析仪检测脂肪酶（LPS）过程中的交叉污染来源,探讨处理生化仪交叉污染的对策.方法 以去离子水作为样本,通过检测不同项目组合＋LPS筛查可能污染源项目的 组合 将可能污染源组合中各项目的 试剂作为分析样本进行LPS检测,确定具体污染源项目 同样以去离子水作为样本,通过安排可能污染源项目与LPS的检测顺序、组合及重复检测次数来确定试剂针及搅拌棒的交叉污染率 采用混合血清作为样本,按照AU640生化仪比色杯使用规律安排可能污染源项目与LPS的检测顺序、组合及重复检测次数来确定比色杯的交叉污染率.根据交叉污染的不同来源和种类采取相应的处理对策.结果 筛查试验发现血脂组合对LPS检测存在严重的正干扰,其中总胆固醇（T Cho1）、甘油三酯（TG）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）检测试剂中可能存在LPS的干扰物质.三者在LPS检测过程中均存在试剂针、搅拌棒和比色杯的携带污染,其中试剂针及搅拌棒的携带污染率为120.3%～565.8%,比色杯的携带污染率为235.2%～450.5%.通过（1）设置AU640生化仪试剂针、搅拌棒和比色杯的特殊清洗程序 （2）将LPS与交叉污染项目分别设置在AU5400生化仪的内、外圈反应杯检测,携带污染情况得到了明显改善.结论 通过以上的实验可以筛查出LPS检测过程中的交叉污染来源,并对两种不同型号的Olympus生化仪采取不同的处理对策,有效的解决了检测试剂的交叉污染问题.     

ALT试剂盒日常质量监控方法的选择及其参数应用

为有效观察以辅酶 I为指示酶的试剂盒质量 ,对 ALT试剂盒用 5种物理方法进行了测量 ,测量值分别计算变异系数 ,并按其大小以方法的形式排序为 :试剂空白吸光度 >冰点渗透压 >电导率 >p H>比重。试剂空白吸光度值变化较敏感且特异 ,通过在样品配对 t检验无显著性意义的区间内 ,设置试剂空白 OD值、下降平均 OD值、下降极限 OD值等三个水平 ,对试剂日常使用、保存以及更新提供参数指导。     

戊二醛消毒剂对酶联免疫法检测结果的影响

目的探讨戊二醛消毒剂对酶联免疫法(ELISA)造成的假阳性及假阴性影响,为临床免疫实验室合理选择消毒剂提供依据。方法夹心ELISA(以乙肝表面抗原试剂进行实验)及竞争ELISA(以乙肝e抗体试剂进行实验),以自带阴性及阳性血清进行实验,至加入显色液后,加入戊二醛2μl,加入终止液,以全自动酶标仪进行比色,对数据进行分析。结果戊二醛使ELISA各孔显黄色,吸光度值升高,夹心法达阳性判断标准,竞争法达阴性判断标准。结论临床免疫实验室在使用戊二醛消毒剂时,应密切观察显色剂颜色的改变,以便及时发现假阳性及假阴性影响,保证检验结果的准确性。     

多酶清洗液保湿在器械清洗中的作用

器械清洗的目的是通过物理和化学的方法将物品上的有机物、无机物和微生物尽可能降低至比较安全的水平，清洗彻底是保证消毒或灭菌成功的关键，器械使用后要保持湿润，防止干燥，如不能在1～2h之内及时清洗，须将物品浸于含酶液体中。自2007年我院对手术器械进行多酶清洗液保湿的预处理，清洗效果良好，现报道如下。     

免疫比浊法测定胱抑素C抗原过量研究

目的:通过对免疫比浊法测定胱抑素C抗原抗体剂量反应曲线的研究分析,筛选试剂研制过程中最合适的抗体用量,研制出优质的试剂,同时准确掌握试剂盒抗原过量的情况,指导临床应用过程中及时对抗原过量的标本进行稀释,从而确保高浓度临床标本测定的准确性.方法:通过配制一系列浓度由高到低的抗原溶液,与采用不同抗体用量但各项性能仍符合注册标准的试剂进行反应,记录反应吸光度,绘制抗原抗体剂量反应曲线,通过对比不同抗体用量配制的试剂的抗原抗体剂量反应曲线达到峰值时的抗原浓度值及吸光度值,结合仪器吸光度测定量程,确定试剂盒研制过程中抗体的最佳用量.     

生化试剂对胆汁酸测定的交叉污染及防范措施

目的探讨生化试剂对胆汁酸（TBA）测定的交叉污染及防范措施。方法①采用放大的方法,将总胆汁酸作为观察项目,其他常规生化项目ALT、CREA、GGT、AST、TP、UA、ALB、TBIL、DBIL、TG、CHOL、HDL、BUN、APOA、APOB、GLU、FRUC作为干扰项目,筛查并确认对总胆汁酸测定有明显干扰的项目;②设定特殊清洗程序来降低干扰。结果本实验发现尿酸、三酰甘油、总胆固醇对总胆汁酸测定有明显的正干扰。设置加强水冲洗试剂针程序可有效的去除尿酸的干扰;设置在总胆汁酸项目加试剂前对仪器固定比色杯自动清洗后再进行特殊清洗,可消除因试剂携带污染对总汁酸测定的干扰。结论全自动生化分析仪测定总胆汁酸存在项目间的交叉污染,设置特殊清洗方式可有效地消除因试剂携带污染对TBA测定的干扰。     

国内各种清洗液的研究现状

目前国内大部分的中型和大型医院都使用日立全自动生化分析仪,由于该型仪器的检测速度快、准确性又好,很受广大医院的欢迎.但基本上均使用原装配套的清洗液,该型仪器的清洗液耗量很大,原装配套的价格又昂贵,增加了医院的负担,也就是增加了病人的负担.本科也试用过国内市场上现有的自配清洗液,但特别异常的结果经复查后又正常的现象比使用原装清洗液时明显增多,换上原装清洗液几天后则没有这种现象.可能是自配清洗液的清洗效果差或对某些检测项目有干扰作用.     

高灵敏度微量高效液相色谱法分析中样品吸附和进样残留

目的:解决高灵敏度微量HPLC分析中样品吸附和进样残留问题.方法:用荧光检测、全自动进样的HPLC分析法对胰岛增敏剂(RGL)分析过程使用的容器、自动进样器使用的清洗液种类、自动清洗程序进行考察.结果:当RGL浓度<10ng/ml时,玻璃试管对RGL的吸附率达9.54%,而用聚丙烯试管的吸附率为0.53%.当进样上柱量500ng时,用清洗液甲醇/水(90/10)经自动标准清洗程序清洗1次后,RGL残留0.27ng(以相对峰面积计算);改进清洗程序加用流动相清洗六通阀,清洗1次后,RGL残留小于0.055ng.结论:聚丙烯容器可避免RGL的吸附损失,改进自动清洗程序可解决进样残留对分析的影响.     

荧光分光光度法测定片剂和膏剂中的双氯芬酸

双氯芬酸 ( diclofenac)是非甾体类抗炎药。本文介绍用荧光分光光度法测定片剂和软膏剂中的双氯芬酸 ,将药物在 0 .0 1 mol· L-1HCl溶液中于激发波长 ( λexc) 2 87nm、发射波长 ( λem) 362 nm处测量荧光强度。浓度在 0 .2～ 5.0 mg· L-1范围内呈线性关系。赋形剂和处方中配伍的维生素 B12 和对乙酰氨基酚对测定方法无干扰 ,该方法快速、灵敏、选择性好。仪器　荧光分光光度计 ,装有 1 50 W氙灯 ,1 .0cm石英比色杯 ,隙缝宽为 5.0 nm,λexc=( 2 87± 3)nm,λem=( 362± 2 ) nm。吸光度用分光光度计测定 ,1 .0石英比色杯。　　试剂　双…     

快速多酶清洗液在手术器械清洗中的效果观察

目的 探讨快速多酶清洗液在手术器械清洗中的效果.方法 搜集手术器械360件,均为沾染明显血迹的器械,并随机分为两组进行清洗,每组各180件,对照组给予常规清洗,观察组先用常规方法清洗,再加用快速多酶清洗液清洗,清洗干净后比较两组的清洗效果及隐血阳性率.结果 观察组的洁净度为95％,隐血阳性率为5.56％,对照组的洁净度为50,56％,隐血阳性率为49.44％,两组各项指标相比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 快速多酶清洗液用于手术器械清洗中,不但具有洁净彻底,隐血阳性率低等优点,而且操作简便,器械耗损小,延长使用寿命.     

用于筛选天然产物中脲酶制剂的脲酶活性测试方法的建立

抑制幽门螺杆菌产生的脲酶具有治疗胃炎和消化性溃疡的作用。用酚红指示剂和Ｂｅｒｔｈｅｌｏｔ试剂在９６孔培养板上检测重组脲酶活性，其灵敏度指标酚红法每ｍｇ酶蛋白引起的每分钟吸光度变化。     

酚酞及其试纸变色性能的观测

目的 观测酚酞及其试纸在碱性区域的pH分辨能力.方法 紫外可见分光光度法和色差计法.结果 碱性溶液中酚酞在553 nm处的吸光度随pH值增加而加大,pH14时快速褪色.酚酞试纸在pH8 ～ 14区间相邻pH值之间的色差较大.结论 可按相邻pH值之间吸光度之差或色差的大小判断酚酞和酚酞试纸的pH分辨能力.可用酚酞试纸和配套使用的比色版检测碱性溶液的pH值.     

慢性肾衰竭大鼠24h尿液总蛋白定量的方法学研究

目的通过5/6肾切除法制备慢性肾衰竭大鼠模型,考察双缩脲法和考马斯亮蓝法进行尿总蛋白定量。方法应用双缩脲法和考马斯亮蓝法同时进行测定,针对后者测定结果偏低的缺陷,采取提高染色液磷酸量,增加质子化程度的方法进行改进。结果同一条件下双缩脲法的测定值比标准值高,改良考马斯亮蓝法的测定值与标准值较接近。结论双缩脲法不适用于检测尿蛋白含量,改良考马斯亮蓝法是检测蛋白含量的理想方法。