低砷染毒大鼠肾脏蛋白质组学研究

目的对低剂量砷暴露大鼠肾脏进行蛋白质组学研究,探讨早期砷暴露的生物学标志物。方法选取健康雄性SD大鼠48只,按体质量随机分为4组,每组12只,即对照组(0μg/L),低剂量染毒组(50μg/L),中剂量染毒组(150μg/L),高剂量染毒组(450μg/L)。染毒4周后处死大鼠,取其肾脏运用蛋白质组学技术(双向凝胶电泳)分离蛋白,凝胶经扫描后用Pdquest图形分析软件对2-DE图谱进行了分析,鉴定染毒SD大鼠和正常SD大鼠肾脏蛋白质的差异表达。结果定性分析发现,与对照组比较,低剂量组新出现了2个蛋白质点,消失了4个蛋白质点;中剂量组新出现了4个蛋白质点,消失了3个蛋白质点;高剂量组新出现了3个蛋白质点,消失了7个蛋白质点。定量分析发现,与对照组比较,低剂量组表达量升高的蛋白质点有4个,降低的有4个;中剂量组表达量升高的蛋白质点有11个,降低的有2个;高剂量组表达量升高的蛋白质点有3个,降低的有4个。结论低砷染毒导致大鼠肾组织中蛋白质差异表达,这些蛋白质可能与砷暴露的毒性作用有关。     

先天性甲状腺功能减退症大脑蛋白质双向电泳分析

目的:比较新生正常大鼠和先天性甲状腺功能减退症(CH)大鼠大脑蛋白质表达的差异,为探讨CH致脑发育障碍发病机制提供线索.方法:制作CH仔鼠动物模型,于出生时称体质量后处死仔鼠,取大脑皮质,应用双向电泳(2-DE)技术分析正常仔鼠与CH仔鼠大脑蛋内质表达的差异情况.放射免疫分析法检测2组大鼠血清游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4),水平.结果:CH组仔鼠体质量、FT3、FT4水平均低于正常组仔鼠.建立了稳定的正常仔鼠与CH仔鼠大脑皮质2-DE图谱,发现2组共有8个蛋白质点存在差异.与正常仔鼠相比,CH仔鼠大脑有3个蛋白质点量上调,2个蛋白质点量下调,有3个蛋白质点仅出现于CH仔鼠组.结论:CH仔鼠大脑差异蛋白表达可能与CH致脑发育障碍的发生、发展密切相关.     

嗅成鞘细胞与神经干细胞共移植对阿尔茨海默病大鼠海马生长相关蛋白-43表达的影响

目的探讨嗅成鞘细胞(OECs)与神经干细胞(NSCs)共移植对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马生长相关蛋白(GAP)-43表达的影响。方法雄性SD大鼠双侧穹隆-海马伞切断,建立AD大鼠模型。实验动物分为4组:NSCs移植组、NSCs与OECs共移植组、AD模型组、正常对照组,每组30只。从SD胎鼠(孕16～18d)取材,在体外分别培养和共培养OECs与NSCs,并将共培养的OECs与NSCs移植于AD大鼠大脑侧脑室;观察各组大鼠行为学、宿主脑海马GAP-43和NOS阳性神经元表达的变化。结果①NSCs与OECs共移植组潜伏期明显缩短、通过平台次数明显增加,与NSCs移植组、AD模型组差异有统计学意义(P<0.05)。②反转录聚合酶链反应(RT-PCR)与Western Blot分析,NSCs与OECs共移植组宿主脑海马GAP-43mRNA和GAP-43蛋白的表达量高于NSCs移植组、AD模型组(P<0.05)。③NSCs与OECs共移植组NOS阳性细胞(22.2±1.7)较NSCs移植组(13.1±1.9)、AD模型组(7.1±0.9)明显增多(P<0.05)。结论嗅成鞘细胞与神经干细胞共移植能促进宿主脑海马GAP-43的表达,其可能在AD大鼠中枢神经系统损伤时具有促进神经再生和修复的作用。     

吗啡成瘾和正常大鼠的前额叶皮质表达蛋白质组变化的初步研究

目的建立和比较吗啡成瘾与正常大鼠前额叶皮质(PFC)蛋白质双向电泳图谱,寻找和鉴定吗啡成瘾大鼠PFC中的差异蛋白表达谱。方法以固相pH梯度等电聚焦为第一向和垂直SDS-PAGE为第二向,分别对正常对照大鼠和吗啡成瘾大鼠的PFC蛋白质样品进行二维分离,2-DE图谱经ImageMaster 2D Platinumv5.0软件分析,选取4个差异蛋白点用基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行鉴定。结果通过对2-DE图谱蛋白斑点的匹配及对比分析,与吗啡成瘾相关的差异表达蛋白斑点为87个;经质谱鉴定出2个有意义的差异表达的蛋白斑点:Snap25亚型β-Snap25突触相关蛋白25、β-肌动蛋白。结论吗啡成瘾组与正常对照组大鼠PFC蛋白表达存在差异;初步鉴定了大鼠前额叶皮质中与吗啡成瘾相关的差异蛋白,其表达的变化可能通过多种途经影响PFC神经元功能,为我们研究阿片类物质依赖作用机制提出了新的思路和方向。     

Protein expressions in macrophage-derived foam cells：comparative analysis by two-dimensional gel electrophoresis

目的:研究氧化低密度脂蛋白诱导的U937泡沫细胞中蛋白质组的差异表达。方法:泡沫细胞模型由人类单核细胞系白血病U937细胞经氧化低密度脂蛋白诱导而成,将对照U937细胞与U937泡沫细胞的蛋白提取物分别进行双向凝胶电泳(2-DE)分离,凝胶经银染后,于PDquest 2-DE图像分析软件中进行图像处理,利用ExPASy蛋白质组学网站中U937细胞的蛋白表达谱信息,对所得的U937泡沫细胞2-DE图谱作进一步鉴定。结果:通过对2-DE蛋白图谱的分析,共150点与参考胶相匹配(匹配率:75％),与U937细胞图谱相比,泡沫细胞中有37个蛋白点表达量有显著性变化(P<0.05),与对照U937细胞相比,在U937泡沫细胞中28个蛋白点表达量上调,9个点表达量下调,其中,8个U937细胞中表达的蛋白点,在U937泡沫细胞中未检测到;而11个在泡沫细胞中表达的蛋白点,未在对照U937细胞中表达。结论:本研究首次建立经氧化低密度脂蛋白诱导的U937泡沫细胞的蛋白差异表达谱,从而提供了对动脉粥样硬化病理过程中巨噬源性泡沫细胞功能性分析研究的新思路。     

黄芩苷下调p-STAT3诱导神经干细胞向神经元分化*

目的观察黄芩苷促进神经干细胞（NSCs）体外向神经元分化过程中信号传导子与转录激活子(STAT)的磷酸化蛋白表达水平。方法从孕14～15 d的SD大鼠胚胎大脑皮质中分离NSCs,体外培养传代,实验用第3代NSCs。随机分为对照组,低、中、高黄芩苷组（分别含黄芩苷7.5、15、30μmol/L）,白血病抑制因子（LIF）+碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）组和黄芩苷+LIF+bFGF组。培养6 d后,细胞免疫荧光化学染色法观察各组中微管相关蛋白2(MAP-2)、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达水平。培养2 h与6 d后,用Western blot方法观察各组中STAT3蛋白磷酸化水平。结果黄芩苷可使NSCs中MAP-2表达增加,GFAP表达减弱;LIF+bFGF可促进NSCs中GFAP表达增加;黄芩苷可抑制LIF+bFGF引起的NSCs中GFAP的表达增加。黄芩苷可下调NSCs中STAT3蛋白磷酸化水平;LIF+bFGF可上调NSCs中STAT3蛋白磷酸化水平;黄芩苷可抑制LIF+bFGF引起的NSCs中STAT3蛋白磷酸化水平的上调（P＜0.05）。结论黄芩苷可诱导NSCs向神经元分化并抑制其向星形胶质细胞分化,该作用可能经下调NSCs中STAT3的磷酸化水平来实现。     

叶酸对脑梗死大鼠星形胶质细胞GFAP表达的影响

目的:探讨叶酸对脑梗死大鼠星形胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法:将SD大鼠随机分为假手术(SO)组、缺血(IM)组、缺血 低剂量叶酸(IM LFA)组和缺血 高剂量叶酸(IM HFA)组。通过叶酸灌胃给药28d后制备大脑中动脉栓塞模型,采用免疫荧光双标记的方法检测各组大鼠脑缺血后脑组织GFAP的荧光强度及BrdU GFAP双标阳性细胞密度。结果:在7d及14d4组均可见BrdU GFAP双标阳性星形胶质细胞,缺血 叶酸组GFAP荧光强度及BrdU GFAP双标阳性细胞密度均高于IM组及SO组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:补充叶酸可以使星形胶质细胞GFAP表达增强,并促进神经干细胞的分化,从而对脑梗死大鼠具有保护作用。     

脑脊液S-100B与儿童病毒性脑炎脑脊液蛋白组学关系的研究

目的分析病毒性脑炎(VE)患儿和对照组儿童脑脊液(CSF)蛋白质组的表达差异,筛选VE特异性蛋白,探讨其与VE的关系,为VE的早期诊断提供线索。方法以三氯醋酸/丙酮沉淀法提取VE患儿和对照组儿童CSF总蛋白,固相pH梯度二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)技术分离蛋白质,应用双向电泳凝胶分析软件(PDQuest 7.3.1)对2-DE凝胶进行量化比较分析,识别差异表达明显的蛋白质点,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)得到肽质量指纹图谱(PMF),在Mascot数据库中进行蛋白质匹配,鉴定部分差异蛋白质。结果VE患儿和对照组CSF蛋白2-DE凝胶图谱上分别平均显示442和401个点,有23个点蛋白质表达存在2倍以上的差异,选取5个表达明显上调的蛋白质点进行质谱鉴定,成功鉴定出钙结合蛋白S100B。结论钙结合蛋白S100B在VE患儿和无中枢神经系统病变的对照组儿童CSF的蛋白表达上存在明显差异,可能是VE密切相关的疾病特异性蛋白,并有可能成为VE诊断的分子标志物。     

神经干细胞对AD大鼠行为及突触素Ⅰ表达的影响

目的:探究神经干细胞(NSCs)移植对β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力及海马组织内突触素I表达的影响。方法:采用β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)注射到大鼠海马组织内建立阿尔茨海默病(AD)大鼠动物模型,通过Y迷宫测试大鼠学习记忆能力和Western blot技术检测大鼠海马组织内Synapsin I表达。结果:与对照组比较,AD模型组、细胞移植组大鼠学习记忆和大鼠海马组织内Synapsin I蛋白表达量均低(P<0.05),与AD模型组比较,细胞移植组大鼠学习记忆能力和大鼠海马组织内Synapsin I蛋白表达量均较高(P<0.05)。结论:NSCs能显著改善AD大鼠的学习记忆能力,可能与上调突触素Ⅰ的表达有关。     

脐血源性神经干细胞移植对缺血缺氧性脑损伤新生大鼠的治疗作用

目的 探讨人脐血源性神经干细胞(NSCs)移植治疗缺血缺氧性脑损伤(HIBD)新生大鼠的可行性.方法 7d龄大鼠随机分成NSCs移植(A)组、HIBD模型对照(B)组和正常对照(C)组,每组40只.从人脐血中分离出单个核细胞(UBC-MNCs),定向诱导分化出NSCs并行溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)标记,经尾静脉移植到HIBD新生大鼠体内.免疫组化法检测移植后1、7、14、21 d各组动物脑组织易损区室管膜前下区(SVZa)神经巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、BrdU染色阳性细胞表达情况及移植细胞在脑内的存活、迁移和分化情况.结果 UBC-MNCs可体外培养并定向诱导分化为NSCs,A组SVZa区NSE、BrdU阳性细胞表达量较B组均增高(P<0.01);移植早期Nestin增高,移植后14 d达峰,以后逐渐下降(P(0.01);A组GFAP表达较B组降低,大鼠损伤区面积显著减小(P<0.01).结论 移植的NSCs可在HIBD新生大鼠SVZa存活、增殖及分化,促进组织结构恢复和细胞功能重建,NSCs移植是治疗HIBD的一种新途径.     

移植神经干细胞在脑缺血大鼠损伤脑区的定向分化及其对运动功能的影响

目的:研究神经干细胞(NSCs)移植对大鼠脑缺血模型损伤脑区结构和功能的影响。方法:从新生的Wistar大鼠脑组织中分离、培养NSCs。制作大鼠脑缺血再灌注模型,24h后移植BrdU标记的NSC于梗死灶同侧的侧脑室。记录损伤和移植后的大鼠运动功能评分,研究移植后的NSC迁徙、定向分化的情况及其与宿主细胞间的关系。结果:大鼠NSCs移植后部分可在体内存活并迁徒至脑缺血病灶区,在缺血区内能分化成为神经元细胞并与宿主神经细胞形态一致,运动神经功能评分与对照组相比有统计学差异(P<0.05)。结论:移植的NSCs对缺血损伤脑区结构有修复作用,可改善脑缺血模型动物运动功能。     

神经干细胞移植对Alzheimer病大鼠脑形态及动物行为学影响

目的 :观察移植入 Alzheimer病 (AD)大鼠脑内的神经干细胞存活、分化及功能。方法 :由新生大鼠海马分离培养神经干细胞 ,采用切断穹窿海马伞的方法制作 AD大鼠模型 ,模型建立 8～ 10 d后行神经干细胞移植。移植 1个月后 ,通过暗回避试验检测大鼠的学习记忆能力 ,应用尼氏染色 ,乙酰胆碱酯酶 (Ach E)染色观察体内移植神经干细胞的存活 ,分化以及 AD大鼠 Ach E纤维密度的变化。结果 :神经干细胞在额叶和海马都能够存活 ,分化成神经元 ,可与宿主建立突触联系 ,在海马区移植神经干细胞的生长优于额叶。与对照组相比 ,接受神经干细胞移植鼠的暗回避潜伏期变长 (P <0 .0 5 ) ,探索次数减少(P<0 .0 5 ) ,海马 Ach E纤维密度增加 (P <0 .0 5 )。结论 :神经干细胞能够在 AD大鼠额叶、海马存活、分化 ,并可导致 Ach E纤维密度增加 ,AD大鼠学习、记忆能力改善     

滥用止咳药水与叶酸缺乏相关研究

目的:探讨止咳药水滥用与叶酸缺乏的关系。方法:根据入选标准收集2008年4月至2012年4月间住院的止咳药水成瘾患者200例为病例组;同期健康体检者200例为对照组,检测两组血清叶酸、维生素B12水平。结果:病例组(止咳药水滥用组)血清叶酸水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.001);病例组血小板计数显著高于对照组(P<0.05);病例组血清维生素B12水平显著低于对照组(P<0.01)。病例组中,血清叶酸和维生素B12缺乏的发生率分别为40%(对照组6%,P<0.001,RR=6.0)和25%(对照组0%)。维生素B12水平和血清叶酸水平之间存在正相关(P=0.004,R=0.28)。结论:叶酸缺乏可能与止咳药水滥用有关。     

比较四种消化方法对神经干细胞传代增殖及活性的影响

目的：观察4种消化方法对体外培养的神经干细胞（N SC s）增殖及活性的影响。方法：原代培养新生大鼠海马N SC s,采用机械消化、0.25%单纯胰酶、0.25%胰酶＋0.02%EDTA和0.02%EDTA 4种不同消化方法对N SC s球进行传代培养,经四唑盐比色法（M TT法）法检测不同方法对N SC s活性及增殖能力的变化。结果：与机械消化相比,0.25%单纯胰酶组,0.25%胰酶＋EDTA组消化后的大鼠海马N SC s球长时间不聚集,细胞增殖停顿,而单纯EDTA组则明显提高了N SC s的增殖及活性,其余各组差异无统计学意义。结论：随培养时间延长,单纯0.02%EDTA组能够显著提高体外培养的大鼠海马N SC s的增殖水平及活力,且对细胞的后续损伤相对较小。     

Megaloblastic anaemia in Zimbabwe. II: Diagnostic significance of red cell indices in

Studies of red cell indices viz: Rbc count, Hb, Hct ratio, MCV, MCH and MCHC were carried out in normal subjects (n = 62) and in patients with: B12 deficiency (n = 34); folate deficiency (n = 17); and B12 and folate deficiency (n = 18). Although these red cell parameters were diagnostically useful (2P less than 5 x 10(-3)) in distinguishing the patients' groups from the control group; they showed no ability to distinguish the deficient groups from each other. However, their practical and diagnostic significance as screening tests in the local environs is briefly highlighted.     

亚低温联合载神经干细胞的纤维蛋白支架对颅脑创伤的修复作用

目的 研究大鼠颅脑创伤 （TBI） 后原位移植神经干细胞 （NSCs） 治疗的可能性, 探讨载有 NSCs 的纤维蛋白支架及与亚低温（MHT）联合对 TBI 的治疗作用。方法 从孕 14 d SD 大鼠皮质组织中分离 NSCs, 与纤维蛋白支架共培养, 应用扫描电镜观察支架及 NSCs 的形态, 并通过免疫荧光检测细胞类型。将 48 只雄性 SD 大鼠随机分成 TBI 组 （A 组）、 TBI+NSC 组 （B 组）、 TBI+MHT 组 （C 组）、 TBI+NSC+MHT 组 （D 组）, 每组 12 只。A 组通过液压损伤仪行 TBI 造模; B 组 TBI 后接受 NSCs 移植治疗; C 组 TBI 后接受 MHT 治疗; D 组 TBI 后接受 NSCs 与 MHT 联合治疗。分别在第 14、 28 天通过神经功能缺陷评分 （mNSS） 和水迷宫实验对大鼠进行神经功能评价; 28 d 后取脑组织切片, 行细胞免疫荧光检测, 观察移植后的 NSCs 在体内分化情况。结果 电镜扫描显示, NSCs 与纤维蛋白支架共培养 3 d 后形态无明显改变; 免疫荧光提示 NSCs 特异性标志物 Nestin 阳性表达, 表明神经干细胞在纤维蛋白支架上存活; D 组大鼠的 mNSS 在第 14 天和第 28 天均低于 A、 B、 C 各组; 水迷宫结果显示, D 组大鼠逃避潜伏期短于 A、 B、 C 各组; D 组 28 d 后脑组织取材可追踪到 BrdU 标记的神经干细胞分化为了神经元。结论 纤维蛋白支架与 NSCs 生物相容性良好, 具有可降解性。亚低温与载 NSCs 的纤维蛋白支架对大鼠 TBI 后的神经功能修复具有协同作用。     

黄芪甲苷对体外神经干细胞增殖作用影响的研究

目的探讨黄芪甲苷(astragaloside,AS)对神经干细胞增殖的影响。方法体外培养大鼠胎鼠神经干细胞,Nestin免疫化学染色鉴定NSCs,BrdU标记鉴定NSCs增殖。BrdU标记免疫细胞化学染色检测神经干细胞增殖能力。实时定量PCR技术探讨黄芪甲苷促进NSCs增殖的作用机制。结果Nestin鉴定为阳性,Brdu标记亦呈阳性;BrdU标记结果表明,黄芪甲苷高、中、低剂量组NSCs的增殖率明显提高(P<0.05,P<0.01)。实时定量PCR结果表明在诱导NSCs增殖过程中,黄芪甲苷高剂量组Hes5基因表达增加(P<0.05)。结论黄芪甲苷对NSCs增殖具有明显的诱导作用,其可能通过上调与细胞增殖相关基因Hes1、Hes5、cyclinD1表达而起作用,但也可能调节与其它增殖通路有关。     

Survival and differentiation of transplanted neural stem cells in mice brain with MPTP-induced Parkinson disease

AIM: To determine survival and differentiation of cultured neural stem cells (NSCs) into viable and functional neurons upon transplantation into mice brain of MPTP-induced Parkinson disease (PD). METHODS: Mouse model of PD was established with two subcutaneous (sc) injections of 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP, 40 mg/kg) twice, 16h apart. NSCs isolated from rat embryo midbrain were cultured in clonal density. After labeled with 5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU), the NSCs were transplanted into the uni-or bi-lateral striatum of PD mouse. Tyrosine hydroxylase (TH) immunofluorescence was used to evaluate the toxicity of MPTP on the neural cells in the substantia nigra. Immunohistology and laser confocal microscope were used to detect the survival and differentiation of transplanted NSCs. RESULTS: The cultured NSCs generated neurospheres and differentiated into neuron and astrocyte. It indicated that the cultured NSCs were multipotent and self-renewal in vitro. TH-positive neural cells were     

Clinical Appropriateness of Serum Folate ordering pattern in a tertiary care hospital in Saudi Arabia

Folate, also known as vitamin B9, is a co-factor necessary for DNA synthesis. Folate deficiency is associated mainly with hematological findings including megaloblastic anemia and pancytopenia. Many countries have mandated grain fortification with micronutrients including folic acid resulting in a reduced prevalence of folate deficiency. Saudi Arabia imports most of the grain products and folate is usually added after milling. There are no local studies to address the folate deficiency prevalence. In this study we aimed to analyse the clinical appropriateness of ordering practice of serum Folate level.MethodWe reviewed all serum folate requests received at our laboratory in Aseer Central Hospital over one-year period (July 2018 June 2019). We collected patients’ demographics from the electronic requests along with biochemical results of serum B12, ferritin and CBC results. We assessed appropriateness of orders against pre-specified criteria and applied statistical tests to explore for any association or significance.ResultsSerum folate requests from 614 patients were received during the study period. Serum B12 (543, 88%), and serum ferritin (511, 83%) were concurrently requested. The most common reason for request, when available, was anemia. Anemia was present in (313, 51%) of the subjects for which microcytic anemia was predominant (199, 63.5%), followed by normocytic anemia (101, 33%) and only 10 subjects had macrocytic anemia (3.2%). The most common hematinics’ deficiency was ferritin (30%) followed by B12 (17.2%). Serum folate deficiency was low, observed in only 2.8%. Low folate levels were not significantly different between the group with anemia and the normal hemoglobin group.ConclusionThis study identifies a commonly inappropriate serum folate ordering practice that includes ordering all hematinics at the same visit without considering the possible anemia etiologies. The excessive requests might be related to doctors attempt to avoid multiple blood extractions and to try to reduce the time for diagnosis. These policies are generating unnecessary costs and time loss. Education, phasing out or restricting some tests and introducing laboratory policies like sample storing could help reduce unnecessary requests.