肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡在急性肺损伤中的作用

细胞凋亡 (Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)又称为程序性细胞死亡(Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ ,ＰＣＤ) ,是一种由基因调控的主动而有序的细胞死亡过程 ,参与机体许多重要的生理及病理过程。目前认为许多参与全身炎症反应的细胞和介质均可对细胞凋亡产生影响 ,因此细胞凋亡已开始成为全身炎症性疾病的研究热点。急性肺损伤 (Ａｃｕｔｅｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙ ,ＡＬＩ)是指机体遭受严重感染、创伤、辐射、休克等打击后 ,出现的以弥漫性肺泡毛细血管膜损伤导致的肺水肿和微肺不张为病理特征的一种肺部炎症和通透性增加综合征 ,目前认为是机体…     

不同通气方式对机械通气引起急性肺损伤兔模型的影响

目的：通过表面活性物质缺乏的兔肺模型，评估传统通气模式９ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌｍｅｃｈａｎｉｃａｌｖｅｎｔｉｌａｔｉｏｎ，ＣＭＶ）与允许性高碳酸血症加最佳ＰＥＥＰ（ｐｅｒｍｉｓｓｉｖｅｈｙｐｅｒｃａｐｎｉａａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｉｄｅａｌＰＥＥＰｖｅｎｔｉｌａｔｉｏｎ，ＰＨＹ＋ＰＥＥＰｉ）的通气模式对肺损伤的影响，了解肿瘤坏死因子α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｓｉｓｆａｃｔｏｒ－α，ＴＮＦα）与机     

肠缺血再灌注时肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡与肺损伤

目的 观察肠缺血再灌注中肺损伤与肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的关系及其可能的发生机制。方法 Wistar大鼠,肠系膜上动脉夹闭后松夹造成肠缺血再灌注。不同时间点活杀动物,测肺通透指数、肺泡灌洗液（BALF）和血浆中NO、IL-2含量,分离肺泡Ⅱ型上皮细胞,观察凋亡率。结果与结论 肠缺血再灌注可能引起肺损伤;肠缺血再灌注后肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡率上升,再灌注30 min 达高峰;缺血再灌注后血、BALF中NO、IL-2增加;肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡率与肺通透指数显著相关,BALF中IL-2水平与肺通透指数、肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡率显著相关。     

肺纤维化形成过程中大鼠成纤维细胞对肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响

目的:研究在平阳霉素诱导的大鼠肺纤维化形成过程中肺成纤维细胞对肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响。方法:先将大鼠分成平阳霉素组和生理盐水组,平阳霉素组气管内给药复制大鼠肺纤维化动物模型(平阳霉素3mg/kg),生理盐水组气管内注射等量生理盐水,分别于7,28 d处死平阳霉素组大鼠10只,生理盐水组大鼠4只,其中平阳霉素组及生理盐水组各取3只提取肺成纤维细胞,平阳霉素组6只提取大鼠原代Ⅱ型肺泡上皮细胞,分别进行培养。待两种细胞均已贴壁后,再进行如下分组即:①实验组:用平阳霉素组肺成纤维细胞上清液加入平阳霉素组肺泡Ⅱ型上皮细胞并培养48 h;②对照组:用生理盐水组肺成纤维细胞上清液加入平阳霉素组肺泡Ⅱ型上皮细胞并培养48 h。用半定量RT-PCR法检测实验组和对照组中肺泡Ⅱ型上皮细胞SP-A、TGF-β及HGF mRNA表达的变化。结果:①SP-A mRNA和HGF mRNA的表达实验组低于对照组(P相似文献   

周期性牵张肺泡Ⅱ型上皮细胞早期凋亡现象

目的应用细胞力学的方法探讨周期性牵张肺泡Ⅱ型上皮细胞,并观察其早期凋亡现象。方法周期性牵张肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549,首先观察细胞在不同机械力作用下的凋亡情况,分为对照组和机械牵张组(5%、15%、30%应力,0.5 Hz,机械牵张4 h)。然后给予细胞应力15%、0.5 Hz、机械牵张0~8 h,观察在不同时间点的细胞凋亡。最后给予细胞应力15%,周期性牵张4 h,牵张频率分别为0、0.2、0.5和1 Hz,观察不同周期频率的机械牵张时细胞凋亡情况。采用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果周期性牵张肺泡上皮细胞A549、0.5 Hz和机械牵张4 h后,细胞早期凋亡随着牵张应力的增加而增加。当给予细胞15%应力和0.5 Hz的机械牵张后,随着牵张时间的延长,早期凋亡细胞的比率增加。给予细胞15%应力,周期性牵张4 h,随着牵张频率的增加早期凋亡的细胞也显著增加。结论机械应力刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞可导致细胞凋亡,这在细胞力学水平为机械通气所致肺损伤提供了实验依据。     

周期性牵张肺泡Ⅱ型上皮细胞早期凋亡现象

目的 应用细胞力学的方法探讨周期性牵张肺泡Ⅱ型上皮细胞,并观察其早期凋亡现象.方法 周期性牵张肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549,首先观察细胞在不同机械力作用下的凋亡情况,分为对照组和机械牵张组(5%、15%、30%应力,0.5 Hz,机械牵张4 h).然后给予细胞应力15%、0.5 Hz、机械牵张0～8 h,观察在不同时间点的细胞凋亡.最后给予细胞应力15%,周期性牵张4 h,牵张频率分别为0、0.2、0.5和1 Hz,观察不同周期频率的机械牵张时细胞凋亡情况.采用流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 周期性牵张肺泡上皮细胞A549、0.5 Hz和机械牵张4 h后,细胞早期凋亡随着牵张应力的增加而增加.当给予细胞15%应力和0.5 Hz的机械牵张后,随着牵张时间的延长,早期凋亡细胞的比率增加.给予细胞15%应力,周期性牵张4 h,随着牵张频率的增加早期凋亡的细胞也显著增加.结论 机械应力刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞可导致细胞凋亡,这在细胞力学水平为机械通气所致肺损伤提供了实验依据.     

机械通气抢救重症Ⅱ型呼衰体会

本文分析10例采用机械呼吸机抢救重症Ⅱ型呼衰过程中的经验与教训,对气管插管及气管切开的选择、上机的时机、合理用机、撤机时机及拔管问题提出初步看法,认为应早上机,合理用机,早撤机,早拔管。     

不同时间高氧对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞能量代谢的影响

目的 探讨不同时间高浓度氧对肺泡Ⅱ型上皮细胞线粒体能量代谢的影响。方法 将大鼠RLE-6TN细胞分为对照组(21%O₂常规培养4 h)、高氧1、2、3、4 h组(95%O₂分别培养1、2、3、4 h)。采用荧光素酶化学发光法检测各组细胞的三磷酸腺苷(ATP)含量,采用微量法检测线粒体呼吸链复合体V活性,荧光探针JC-1检测细胞线粒体膜电位,实时荧光定量PCR法检测线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ的核心亚基NADH脱氢酶亚基1(ND1)、细胞色素b(Cytb)、细胞色素C氧化酶亚基I(COXI)、ATP酶6(ATPase6)mRNA的表达水平。结果 与对照组比较,高氧1、2、3、4 h组细胞线粒体呼吸链复合体核心亚基ND1(q=24.800,P<0.001;q=13.650,P<0.001;q=9.869,P<0.001;q=20.700,P<0.001)、COXI(q=16.750,P<0.001;q=10.120,P<0.001;q=8.476,P<0.001;q=14.060,P<0.001...     

内毒素对鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞钠泵的影响及机制

目的观察内毒素对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ)钠泵的影响。方法 ATⅡ细胞成功分离纯化后随机分为两组:①对照组(PBS);②LPS组(1μg/mL)药物干预4 h后用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测ATⅡ细胞上钠泵α1、β1亚基mRNA的表达;免疫组化法检测钠泵α1、β1亚基蛋白的表达;用高效液相法测定细胞ATP、ADP、AMP和腺嘌呤核苷酸总量(TAN),间接测得钠泵的活性。结果 RT-PCR结果显示:LPS组α1、β1亚基的mRNA表达较对照组明显降低(P<0.05);酶活性检测结果显示:LPS组钠泵活性较对照组明显增高(P<0.05);免疫组化结果显示:ATⅡ细胞上钠泵α1、β1亚基蛋白均有表达,各组亚基蛋白的表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论内毒素能下调ATⅡ细胞钠泵α1、β1亚基的mRNA表达,应激调节钠泵活性,但对蛋白表达无明显影响,提示钠泵的变化可能与内毒素性肺损伤有关。     

吸入石英粉尘对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响

对大鼠吸入石英粉尘后肺泡Ⅱ型上皮细胞（Ｔ＿Ⅱ）的变化进行了形态学观察和定量分析。９个月的实验结果表明，石英粉尘导致Ｔ＿Ⅱ增生，且呈双相反应，染尘结束后０～４周、和９个月为两个增生高峰期。Ｔ＿Ⅱ胞浆内板层体（ＬＢ）数量增多，肺泡腔内含大士游离ＬＢ，管样髓磷脂。提示增生Ｔ＿Ⅱ合成和分泌表面活性物质的功能增强。     

Ad-HGF对肺泡Ⅱ型上皮细胞的转染表达及增殖效应

目的:观察Ad-HGF对肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ细胞)的转染表达及增殖效应.方法:以不同转染强度(50,100,200 MOI)Ad-GFP转染原代培养大鼠ATⅡ细胞,感染后48 h用流式细胞仪检测转染效率.并以最佳感染强度Ad-HGF转染ATⅡ细胞,ELISA方法检测转染后48, 72 h上清中HGF的表达水平.用MTT法检测表达产物对肺泡上皮细胞的效应.结果:感染强度为100 MOI时,对ATⅡ细胞的转染效率已达89.61%,以100 MOI的Ad-HGF转染6×105细胞后48, 72 h上清中HGF的表达分别为(249.4±1.8) ng和(168.0±26.1)ng,且表达产物对ATⅡ细胞有明显的促增殖作用.结论:Ad-HGF可有效转染ATⅡ细胞并在细胞中表达,表达产物对该细胞有明显的促增殖作用.     

急性肺栓塞大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞形态及功能变化

目的探讨急性肺栓塞大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞功能及形态的变化。方法 16只雄性SD大鼠以随机数字表法随机分为对照组、栓塞组,每组8只。栓塞组以明胶海绵溶液经颈静脉注入制备大鼠肺栓塞模型,经右心导管测定肺动脉压、心率、呼吸频率,并行动脉血气分析;对照组手术过程同栓塞组,颈静脉注入同等体积生理盐水。实验大鼠于造模后24 h时处死,取肺组织制备病理切片,HE染色光镜下观察肺组织病理变化,电镜下观察Ⅱ型上皮细胞形态学改变;留取支气管肺泡灌洗液(BALF)行磷脂测定,肺组织行肺表面活性物质相关蛋白A(SPA)蛋白及mRNA水平测定。结果对照组和栓塞组大鼠肺动脉平均压、动脉血氧分压(单位:mmHg)比较均有统计学差异(14.2±4.1 vs 26.1±7.5,P<0.05;94.1±8.8 vs 80.5±5.8,P<0.05)。对照组和栓塞组肺泡灌洗液磷脂水平分别为(374.17±36.55)mg/100 ml、(311.67±48.56)mg/100 ml(P<0.05)。栓塞组肺组织SPA蛋白、mRNA水平均明显低于对照组(P<0.05)。光镜下24 h时栓塞组大鼠肺组织可见多个血管腔有明胶海绵栓塞;电镜下,对照组大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞形态规则,线粒体、内质网等细胞器丰富,板层小体排列整齐,肺泡表面活性物质层连续完整;栓塞组大鼠Ⅱ型上皮细胞形态欠规则,线粒体肿胀、嵴断裂,板层小体空泡化,肺泡表面活性物质层连续性中断。结论急性肺栓塞后大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞功能及形态均发生明显变化,产生表面活性物质能力显著降低,可能在肺栓塞动脉低氧血症中起重要作用。     

艾烟冷凝物对肺泡Ⅱ型上皮细胞A549活性及凋亡的影响

目的观察艾烟冷凝物(PM10采取人体可吸入的艾烟部分)对肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)活性及凋亡的影响。方法体外培养A549细胞,加入不同浓度的艾烟冷凝物,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、荧光显微镜来观察其对A549的细胞活性以及细胞凋亡的影响。结果 MTT法结果显示:与对照组相比,A549的细胞存活率随浓度和时间发生改变,具有明显的时间浓度依赖性;0.12g/L浓度的艾烟冷凝物作用于细胞12 h后可显著提高细胞存活率(P=0.005<0.01);荧光显微镜下观察发现艾烟冷凝物可以引起细胞发生凋亡,且具有浓度依赖性。结论 A549细胞随着艾烟冷凝物浓度的增加、刺激时间的增加而引起细胞活力逐渐下降,表明一定浓度的艾烟冷凝物和一定的刺激时间对细胞具有毒性作用;一定浓度的艾烟冷凝物在较短刺激时间内具有细胞增殖作用,故认为艾烟对细胞的增殖作用可能是艾烟发挥有效作用的重要因素之一;能够引起细胞的凋亡可能是毒性作用的重要因素之一。     

重组HBHA蛋白对肺泡Ⅱ型上皮细胞细胞因子分泌的影响

目的 研究重组HBHA蛋白对肺泡Ⅱ型上皮细胞分泌细胞因子的影响.方法 原核表达并纯化重组HBHA,N端缺失HBHA(HBHA-ΔN)、C端缺失HBHA(HBHA-ΔC)三种蛋白,用以刺激A549细胞,并设置阴性对照,观察A549细胞分泌细胞因子的情况.结果 rHBHA蛋白可以显著提高A549细胞分泌IL-1β,IL-6,TNF-α,INF-γ的水平,而HBHA-△N和HBHA-△C蛋白对A549细胞分泌IL-1β,IL-6,TNF-α,INF-γ和IL-10的作用无显著影响.结论 rHBHA能够促进IL-1β,IL-6,TNF-α,INF-γ分泌,N端和C端缺失后促进作用减弱.提示HBHA在诱导自然免疫以及抵抗结核菌感染中具有重要作用.     

体外循环血清对培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的研究

目的 探讨体外循环（ＣＰＢ）血清对肺泡Ⅱ型上皮细胞（简称ＡＴ－Ⅱ）的损伤作用。方法 原代培养大鼠ＡＴ－Ⅱ,并与ＣＰＢ血清共同孵育后观察其形态及生化指标变化和还原型谷胱甘肽（Ｒ－ＧＳＨ）的保护作用。结果 培养液中ＭＤＡ、ＬＤＨ、ＡＫＰ增加,细胞凋亡率上升,Ｒ－ＧＳＨ能减轻细胞损伤。结论 ＣＰＢ血清能直接损伤ＡＴ－Ⅱ,氧自由基可能是主要原因,这可能是术中肺表面活性物质减少的重要原因。Ｒ－ＧＳＨ在体外能     

肠缺血再灌注时肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡与肺损伤

目的 观察肠缺血再灌注中肺损伤与肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的关系及其可能的发生机制。方法 Ｗｉｓｔａｒ大鼠,肠系膜上动脉夹闭后松夹造成肠缺血再灌注,不同时间点活杀动物,测肺通透指数,肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）和血浆中ＮＯ、ＩＬ－２含量,分离肺泡Ⅱ型上皮细胞,观察凋亡率。结果与结论 肠缺血再灌注可能引起肺损伤：肠缺血再灌注后肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡来上升,再灌注３０ｍｉｎ达高峰;缺血再灌注后血,ＢＡＬＦ中ＮＯ、Ｉ     

氧化应激对肺泡Ⅱ型上皮细胞的损伤作用及JNK信号转导机制

目的:探讨氧化应激状态下肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar type Ⅱ epithelial cell,ATⅡ)存活、凋亡和JNK(c-jun NH2-terminal kinase)的调控机制.方法:采用过氧化氢(Hydrogen peroxide,H2O2)刺激原代大鼠ATⅡ细胞,复制活性氧(Reactive oxygen species,ROS)攻击ATⅡ细胞损伤模型.蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测ATⅡ细胞受500μmol/L H2O2刺激后磷酸化JNK的动态变化,四甲基偶氮唑盐反应比色法(MTT法)检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,并观察JNK抑制剂SP600125干预前后存活率和凋亡率的变化.结果:ATⅡ细胞在受H2O2刺激后随作用时间的延长细胞存活率下降,凋亡率增加;H2O2刺激可导致JNK的磷酸化激活,使用SP600125后,细胞存活率增加,凋亡率降低.结论:H2O2以时间依赖的方式诱导ATⅡ细胞凋亡,抑制JNK信号激活对氧化应激状态下的ATⅡ细胞可能起到保护作用.     

不同体积分数氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞体外生长状态的影响

目的:探讨不同氧体积分数状态下,胎鼠原代肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar typeⅡepithelial cell,AECⅡ)体外生长状态的变化.方法:原代培养胎鼠AECⅡ并用电镜鉴定;建立氧体积分数0.95组(95%O2)、氧体积分数0.4组(40%O2)和空气组(21%O2)3种氧化损伤性细胞模型,各自暴露12、...     

p53在氧化应激下肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡中的作用

目的:探讨氧化应激状态下肺泡II型上皮细胞(ATIIcells)凋亡时,activecaspase-3的表达和p53在细胞内分布情况.方法:原代培养大鼠ATII细胞,用500μmol/L过氧化氢(H2O2)处理,建立氧化损伤性细胞模型.经DAPI染色后观察细胞核的形态变化.流式细胞术检测H2O2刺激后细胞凋亡率的变化;蛋白质免疫印迹法检测H2O2刺激后activecaspase-3的表达变化.免疫荧光染色后观察p53的表达和细胞内分布.结果:DAPI染色发现,正常对照组细胞核较大,发出浅蓝色的荧光,而H2O2刺激后,细胞核发生致密浓染,核周出现光晕等改变.与正常对照组比较,随H2O2刺激时间延长,细胞凋亡率显著上升(P<0.05);Western Blot检测发现H2O2刺激后,activecaspase-3蛋白表达增加(P<0.05).激光共聚焦显微镜观察发现正常细胞p53表达微弱,H2O2刺激3h后,p53表达显著增强,主要集中于细胞核.结论:氧化应激能促使activecaspase-3蛋白表达增加及p53细胞核内表达增加,诱导细胞发生凋亡;p53可能通过转录依赖的途径诱导细胞凋亡.     

机械通气治疗Ⅱ型呼吸衰竭的方法探讨与护理

应用机械通气治疗慢性阻塞性肺病(COPD)呼吸衰竭,临床取得了肯定的疗效.但存在着长期通气后,患者呼吸机依赖,造成撤机困难,治疗时间延长,甚至放弃治疗.现将我科成功的治疗方法和护理经验介绍如下.