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2.
目的:探讨阿司匹林对卵巢癌细胞凋亡的影响以及对凋亡相关基因bcl-2/bax mRNA的作用。方法:用四甲基偶氮唑蓝(MTT)快速比色法分析阿司匹林对卵巢癌细胞株SKOV3生长的抑制作用,用流式细胞术分析方法定量检测细胞凋亡及细胞周期的变化。用RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-2/bax mRNA的表达。结果:阿司匹林对SK-OV3细胞的增殖有明显的抑制作用,并呈量效和时效的关系;1、5、10mmol/L3个浓度的阿司匹林处理细胞48h后,细胞凋亡率呈剂量依赖性增加,而且G0/G1期细胞比例下降,G2/M期细胞比例升高,细胞被阻滞在G2/M期,细胞周期也发生明显改变;阿司匹林可抑制卵巢癌细胞的bcl-2mRNA表达,而上调bax mRNA的表达。结论:阿司匹林能抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖,诱导其凋亡。此作用可能与阿司匹林抑制细胞bcl-2mRNA的表达和上调bax mRNA表达有关。 相似文献
3.
细胞凋亡存在于多细胞生物的整个生命过程当中,可及时清除机体内多余和受损伤的细胞,维持组织器官的稳定性。真核细胞主要通过死亡受体介导的外部凋亡途径、内部线粒体途径、B粒酶介导的细胞凋亡途径以及近几年开始关注的内质网应激途径介导细胞凋亡的发生。而参与这些细胞凋亡过程的主要有4类蛋白分子,即凋亡蛋白酶(caspases)、衔接蛋白(adapter proteins)、Bcl-2和凋亡抑制蛋白(IAPs)。细胞凋亡对卵巢储备及一些妇科疾病如子宫内膜异位症、卵巢癌等的发生发展产生影响。 相似文献
4.
目的:探讨黄芩素对人子宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法:MTT法测定黄芩素作用后人子宫颈癌HeLa细胞的生长抑制率;Hoechst 33258荧光染色法和Annexin-V/PI双染流式细胞术检测黄芩素诱导HeLa细胞凋亡的作用;Westernblot观察黄芩素对HeLa细胞bcl-2、Bax、caspase 3及p53表达的影响。结果:(1)不同浓度黄芩素作用24h后均可抑制HeLa细胞生长(P<0.05);(2)黄芩素作用24h后,HeLa细胞呈典型的凋亡形态学改变,凋亡率亦显著增加(P<0.01);(3)细胞内Bax、p53和caspase 3表达显著上调,bcl-2表达明显下调(P<0.05)。结论:黄芩素通过调控凋亡相关基因的表达,诱导HeLa细胞凋亡。 相似文献
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Bax、Bcl-2ASODN联合转染增强宫颈癌HeLa细胞放射敏感性的实验研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:研究凋亡抑制基因bcl-2反义寡核苷酸(ASODN)和促凋亡基因bax联合转染对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响,进而探求其放射增敏作用。方法:用逆转录病毒颗粒感染HeLa细胞,获得HeLa-bax细胞后,将bcl-2ASODN转染HeLa及HeLa-bax细胞,36h后放射治疗,通过MTT法、细胞形态学及流式细胞仪检测细胞增殖与凋亡,半定量RT-PCR测bcl-2及bax基因的表达。结果:(1)HeLa细胞经bcl-2ASODN及bax联合转染并放疗后,光镜观察有明显凋亡趋势;(2)MTT法及流式细胞仪检测其凋亡率明显高于单基因转染+放疗组(P<0.05);(3)RT-PCR结果显示,bax基因表达显著增强,而bcl-2基因表达较各对照组明显减弱。结论:凋亡抑制基因bcl-2ASODN和促凋亡基因bax联合转染诱导HeLa细胞凋亡效果明显优于单基因转染,可有效提高HeLa细胞的放射敏感性。 相似文献
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目的:观察格尔德霉素(geldanamycin,GA)在体外对宫颈癌HeLa细胞抗凋亡基因bcl-2和mRNA转录、蛋白表达水平的影响。方法:分别给予宫颈癌HeLa细胞0,0.02,0.2,2,10μmol/L浓度GA处理24h,用annexin V方法检测细胞凋亡,半定量PCR检测bcl-2、Hsp90 mRNA转录水平,用10μmol/L的GA处理HeLa细胞3、12、24、48h后,Western blot检测bcl-2、Hsp90蛋白表达水平的变化。结果:宫颈癌HeLa细胞经不同浓度的GA作用24h,细胞凋亡指数呈剂量依赖性增加,bcl-2 mRNA表达呈剂量依赖性降低,bcl-2蛋白表达水平呈时间依赖性降低,处理组与对照组之间的差异有统计学意义;但GA对Hsp90 mRNA和蛋白表达水平无明显影响。结论:GA可抑制宫颈癌HeLa细胞抗凋亡基因bcl-2的转录和表达,促进凋亡。 相似文献
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肿瘤发生、发展是一个多因素、多步骤的过程.细胞周期调控异常、细胞凋亡异常、生长因子或细胞因子信号转导异常都可能导致增殖调控异常而发生肿瘤.基因在肿瘤发生、发展过程中的作用是当今肿瘤发生机制研究的热点,其中癌基因异常激活与抑癌基因失活在肿瘤发生、发展中有重要意义. 相似文献
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目的:研究外源性野生型p53(wtp53)基因对宫颈癌HeLa细胞中的致癌基因环氧合酶-2(COX-2)的影响,以及抑制HeLa细胞生长的作用。方法:用脂质体介导的转染技术将野生型p53基因转染到HeLa细胞。实验分为2组,p53转染组(p53-HeLa组)和空白对照组(HeLa组),wtp53表达用逆转录-多聚酶链反应鉴定,并检测p53mR-NA和COX-2mRNA瞬时转染及稳定转染前后表达的变化。CCK-8染色法绘制细胞生长曲线。结果:野生型p53基因转染后HeLa细胞中的p53mRNA表达增加,COX-2mRNA表达减少。通过对细胞生长曲线的分析,转染后与转染前相比,生长明显减慢(P<0.01),wtp53对HeLa细胞有抑制作用。结论:外源性wtp53基因表达可抑制宫颈癌He-La细胞中COX-2mRNA的表达;wtp53可能通过抑制COX-2对宫颈癌HeLa细胞产生抑制作用,进而阻碍肿瘤的生长。 相似文献
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目的:研究阿司匹林(ASA)联用PT方案[奥沙利铂(OXA)+多西紫杉醇(DOC)]抑制人宫颈癌细胞株HeLa增殖的作用。方法:倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,MTT法检测并计算各组药物的细胞抑制率,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期变化及细胞凋亡率。结果:ASA可抑制HeLa细胞生长,作用24h时将肿瘤细胞聚集在G0/G1期并可诱导细胞凋亡。ASA与PT联用可显著抑制HeLa细胞增殖(P<0.05),不同时间PT增敏比依次为1.33、1.32、1.56,且联合用药诱导细胞凋亡作用显著增强。结论:ASA与PT方案协同可抑制人宫颈癌HeLa细胞株增殖,ASA有望用于宫颈癌的内科治疗。 相似文献
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IL-24对宫颈癌细胞株Siha细胞生长和凋亡的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:利用穿梭质粒pAd track CMV,探讨抑癌基因IL-24对宫颈癌细胞株Siha细胞生长和凋亡的影响。方法:将携带目的基因IL-24的穿梭质粒pAd track CMV转染入体外培养的宫颈癌细胞株Siha细胞,用MTT法检测细胞的生长增殖,用流式细胞术测定细胞周期及凋亡率。结果:经MTT法测定,3组Siha细胞OD值的总体差异有统计学意义(P<0.001),两两比较,IL-24组Siha细胞OD值明显低于空质粒组和阴性对照组(P<0.001),空质粒组和阴性对照组Siha细胞OD值则无明显差异(P=0.100);经流式细胞术测定,3组Siha细胞早期凋亡率的总体差异有统计学意义(P<0.05),两两比较,IL-24组Siha细胞早期凋亡率明显高于空质粒组和阴性对照组(P<0.05),空质粒组和阴性对照组Siha细胞的早期凋亡率无明显差异(P>0.05);与空质粒组和阴性对照组Siha细胞相比,IL-24组Siha细胞G0/G1期细胞增多(P<0.05),S期细胞减少(P<0.05),G2/M期细胞减少(P<0.05),空质粒组和阴性对照组则无明显差异(P>0.05)。结论:IL-24对宫颈癌细胞有抑制生长、诱导凋亡的作用。 相似文献
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Liu Wei Tang Chunsheng Rong Fengnian 《现代妇产科进展》2005,14(1):77-80
Inthelightofapoptosis ,tumorswereresultsofdis ordersofproliferationandapoptosis .Nowadayswhetherinducingapoptosisbecameanewstandardtodevelopanti cancerdrugs .Sodiumbutyrate (NaB)isoneoftheshortchainfattyacidsnaturallyformedingastrointestinaltractsthatcouldinhibitdeacetylationofhistones .Recentstud ieshaveshownthatNaBcouldinduceapoptosisinavari etyofcancercelllinesinvitro[1,2 ] .Inthisexperiment,westudiedtheeffectofNaBonhumanovarianepithelialcancercells (3AOcells)anditsactionmechanism .Inpa… 相似文献
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目的:观察顺铂对TRAIL蛋白诱导子宫颈癌Caski细胞株凋亡的调节作用,并探讨其作用机理。方法:传代培养宫颈癌Caski细胞,依照所加药物不同,将细胞分为TRAIL组、顺铂组、TRAIL+顺铂组、TRAIL序贯顺铂组、顺铂序贯TRAIL组以及空白对照组,分别于加药后不同时间应用:(1)倒置显微镜观察细胞的生长状态;(2)MTT法检测TRAIL蛋白与顺铂单用、联用以及序贯应用对Caski细胞的生长抑制率;(3)Caspase-8活性检测试剂盒检测不同用药方式对Caski细胞Caspase-8活力的影响;(4)流式细胞术检测Caski细胞TRAIL受体DR4,DR5,DcR1,DcR2的表达,以及1.0mg/L顺铂作用细胞24h后表达量的变化;(5)半定量RT-PCR分析顺铂作用细胞8h后4种受体mRNA水平的变化。结果:(1)TRAIL蛋白和顺铂对Caski细胞有不同程度的生长抑制作用;(2)100ng/mlTRAIL蛋白和1.0mg/L顺铂单用作用24h细胞生长抑制率分别为35.44%、50.26%,联合应用后增至89.66%,联合用药与单独用药差异有统计学意义(P<0.05);(3)顺铂序贯TRAIL蛋白生长抑制率79.88%,TRAIL蛋白序贯顺铂55.73%,两实验组的差异有统计学意义(P<0.01);(4)Caspase-8活力在顺铂序贯TRAIL组的表达最强,为单用TRAIL组的1.52倍;(5)Caski细胞4种TRAIL受体均有表达,但表达丰度不同,顺铂可以上调死亡受体的表达;(6)顺铂处理细胞8h后DR4,DR5mRNA表达水平明显升高,DR4为对照组的1.40倍,DR5为对照组的1.57倍,差异有统计学意义(P<0.05);(7)用顺铂处理前后DcR1,DcR2表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Caski为TRAIL蛋白敏感细胞,顺铂通过上调死亡受体4、5表达、提高Caspase-8活性,增强TRAIL蛋白抑制子宫颈癌Caski细胞生长的作用;顺铂序贯TRAIL的配伍方式具有更强的诱导Caski细胞凋亡的作用。 相似文献
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目的:探讨Ⅰ型磷酸酶抑制亚基1(PPI1)对人宫颈癌细胞系HeLa细胞周期的影响及其作用机制。方法:分别将PPI1野生型和短片段突变活化型基因通过脂质体介导转染人宫颈癌HeLa细胞,用RT-PCR和Western blot鉴定目的基因的表达;用流式细胞术分析瞬时转染HeLa细胞的细胞周期。对稳定转染的HeLa细胞用脱氧胸苷处理,通过流式细胞术观察PPI1对同步化HeLa细胞的细胞周期进展的影响。用免疫印迹分析细胞周期相关蛋白表达水平的变化。结果:野生型和突变活化型PPI1在HeLa细胞中均能有效表达。突变活化型PPI1基因的瞬时转染可使HeLa细胞G2/M期比例明显升高。经脱氧胸苷处理过的同步化的稳定转染的HeLa细胞中,突变活化型和野生型PPI1均可使HeLa细胞停滞在G2/M期的时间长于对照组,而且前者更明显。免疫印迹显示:突变活化型PPI1瞬时表达48h后,cyclin A、cyclin B1、p53和p21表达上调。经脱氧胸苷同步化并恢复正常培养基后,稳定表达突变活化型PPI1的细胞cyclin B1在10.5和12h,p53在6、7.5、9和10.5h表达明显增强;稳定表达野生型PPI1的细胞cyclin B1在10.5h的表达也比对照组明显增强。结论:突变活化型的Ⅰ型磷酸酶抑制亚基1可诱导宫颈癌HeLa细胞G2/M期停滞,它与cyclin A和cyclin B1表达上调及cyclin B1降解滞后有关,而G2/M期停滞的维持与p53和p21表达上调有关。 相似文献
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目的探讨2-甲氧雌二醇(2-ME2)对HeLaS3细胞的作用,以及对鼠荷人宫颈癌移植瘤的作用。方法应用细胞增殖检测和细胞周期分析,检测加入不同浓度2-ME2的HeLaS3细胞及二甲基亚砜(实验组)的生长情况和细胞周期变化,以仅加入二甲基亚砜的HeLaS3细胞作为对照(对照组);采用荧光显微镜观察HeLaS3细胞的形态变化,以DNA电泳检测细胞凋亡情况;采用蛋白印迹法检测2-ME,对诱生型一氧化氮合酶(iNOS)的表达。此外,建立鼠荷人宫颈癌移植瘤模型,口饲2-ME2(75mg/kg)14d,检测肿瘤体积的变化,并通过原位细胞凋亡检测,分析肿瘤中的细胞凋亡情况。结果1μmol/L2-ME2作用48h后,HeLaS3新生细胞数是对照组的81%(P〈0.05),作用96h,是对照组的19%(P〈0.01)。5μmol/L2-ME2作用20h后,凋亡细胞由对照组的4%增至16%,G2/M期细胞由对照组的16%增至55%(P〈0.01);荧光显微镜发现典型的核固缩及形态异常的有丝分裂中期细胞,DNA电泳发现典型的梯状DNA条带。iNOS的表达随2-ME:作用时间延长和浓度增加而变化,与凋亡变化相似,而且iNOS抑制剂1400W抑制了2-ME2诱导的细胞凋亡。在动物实验中,与对照组相比,2-ME2治疗组宫颈癌移植瘤体积下降34%;原位细胞检测发现,2-ME2治疗组肿瘤切片中凋亡和坏死细胞增多。结论2-ME2具有抑制人类宫颈癌细胞HeLaS3及鼠荷人宫颈癌移植瘤生长的作用,有可能成为宫颈癌抑制剂, 相似文献
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目的 利用RNA干扰技术沉默宫颈癌HeLa细胞中DNA甲基转移酶(DNMT)1基因的表达,探讨沉默DNMT1基因后对HeLa细胞增殖及凋亡的影响.方法 针对DNMT1基因构建短发夹状RNA(shRNA)重组载体pshRNA-DNMT1-A、B和C质粒,并行酶切鉴定和测序分析.采用RT-PCR技术筛选出其中RNA干扰效果最佳的重组载体,通过脂质体介导转染宫颈癌HeLa细胞(转染组),以空载体组(转染空载体pSilencer3.1-H1质粒)和未转染组(未作任何处理)为对照.采用RT-PCR技术和蛋白印迹法分别检测转染前后HeLa细胞中DNMT1 mRNA和蛋白表达的变化,活细胞计数(CCK-8)法和双染法流式细胞术分别检测转染前后HeLa细胞增殖和凋亡的变化.结果 (1)酶切鉴定和测序分析证实,靶向DNMTI的3个shRNA重组载体pshRNA-DNMT1-A、B和C质粒构建成功.RT-PCR技术筛选显示,重组载体pshRNA-DNMT1-B质粒的干扰效果最佳.(2)RT-PCR技术检测显示,转染组转染24、48及72 h时HeLa细胞中DNMT1 mRNA的相对表达水平分别为0.406±0.057、0.191±0.036、0.104±0.015,明显低于空载体组和未转染组(分别为0.520±0.020、0.537±0.041,P<0.05).蛋白印迹法检测显示,转染组转染24、48及72 h时细胞中DNMT1蛋白的相对表达水平分别为0.197±0.024、0.075±0.015、0.040±0.013,明显低于卒载体组和未转染组(分别为0.273±0.010、0.283±0.016,P<0.05).(3)CCK-8法检测显示,转染组转染24、48、72、96、120 h时HeLa细胞存活率分别为70.8%、64.8%、51.6%、45.3%、38.0%,分别与空载体组和未转染组各时间点比较,差异均有统计学意义(P<0.01).双染法流式细胞术检测显示,转染组转染24、48及72 h时的细胞凋亡率分别为(17.7±1.3)%、(35.3±1.3)%、(47.6±1.6)%,明显高于空载体组及未转染组[分别为(4.9±0.5)%、(5.1±0.7)%,P<0.05].结论 RNA干扰技术能成功沉默宫颈癌HeLa细胞中DNMT1基因的表达,通过下调DNMT1基因的表达可抑制宫颈癌细胞增殖、促进细胞凋亡. 相似文献
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雌、孕激素对人宫颈癌HeLa细胞体外生长影响的研究 总被引:8,自引:0,他引:8
目的 :探讨雌二醇 (E2 )、孕酮 (P)对人宫颈癌HeLa细胞体外增殖及凋亡的影响。方法 :体外培养人宫颈癌HeLa细胞 ,免疫组化方法 ,测定其雌激素受体 (ER)、孕激素受体 (PR)的表达 ;不同浓度的E2 、P和E2 +P作用于HeLa细胞 ,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观测HeLa细胞的增殖 ;流式细胞仪 (FCM)检测细胞周期、细胞凋亡率及细胞内bcl 2蛋白的表达 ;光学、电子显微镜检测其形态学和超微结构变化。结果 :HeLa细胞PR表达明显高于ER(P <0 .0 1)。E2 对HeLa细胞有明显促生长作用 (P <0 .0 1) ,P和E2 +P对细胞生长有明显的抑制作用 (P <0 .0 1) ,增殖抑制率与浓度呈正相关 (P <0 .0 5 )。FCM显示E2 组细胞周期S期比例上升 ,凋亡率下降 ,细胞内bcl 2蛋白表达上升 ;P组和E2 +P组G0 /G1期细胞比例上升 ,S期细胞比例下降 ,凋亡率上升 ,细胞内bcl 2蛋白表达下降 (P <0 .0 1)。光镜和电镜可见E2 组细胞生长良好 ,P组和E2 +P组可见细胞凋亡的形态学改变。结论 :E2 对宫颈癌HeLa细胞具有促进增殖、抗凋亡作用 ;P则抑制HeLa细胞增殖 ,并诱导其凋亡 ;E2 +P显示了抑制增殖、诱导凋亡的增强作用。足量的P可拮抗E2 对宫颈癌细胞的促增殖作用。 相似文献