AngⅡ对血管内皮细胞表达粘附分子和释放NO的影响

目的观察AngⅡ对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达粘附分子(ICAM-1和VCAM-1)及内皮NO生成的影响,讨论三者之间的关系和可能机制.方法采用胰蛋白酶消化法进行HUVECs的原代培养,3～5代用于实验;通过RT-PCR和Western Blot检测两种粘附分子的mRNA和蛋白表达水平;利用Griees反应原理测定上清NO释放量.结果HUVECs未活化时不表达VCAM-1而ICAM-1呈低表达状态;AngⅡ在生理浓度时(10-9 mol/L)即可刺激HUVECs表达ICAM-1和VCAM-1 mRNA,随浓度增加表达增强;10-7 mol/L AngⅡ在不同时间点刺激HUVECs 6 h即有ICAM-1 mRNA和VCAM-1 mRNA较高表达,但高峰有所不同,前者在10 h左右,后者为12 h.在AngⅡ刺激下两种粘附分子的蛋白表达水平和趋势与mRNA相似;并随浓度增加而明显抑制NO生成.结论AngⅡ明显增强HUVECs表达粘附分子,并抑制其NO生成,具有显著的促炎和促动脉粥样硬化作用.     

阿托伐他汀对AngⅡ诱导内皮细胞VCAM-1和ICAM-1 mRNA表达的影响

目的:观察阿托伐他汀对于血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的培养人脐静脉内皮细胞表达血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)mRNA的影响,探讨阿托伐他汀的非降脂作用和潜在的治疗作用.方法:培养人脐静脉内皮细胞,取生长良好的第2、3代细胞进行实验.将细胞分为三组:对照组、AngⅡ组、阿托伐他汀干预组.对照组加培养液,AngⅡ组以不同浓度的AngⅡ与细胞共孵育24 h,干预组首先用不同浓度的阿托伐他汀(0.05μmol/L,0.1 μmol/L,1.0 μmol/L,10 μmol/L)分别作用1 h,而后加1 μmol/L Ang Ⅱ与细胞共育24 h.半定量RT-PCR测定粘附分子ICAM-1和VCAM-1mRNA的表达.结果:Ang Ⅱ能上调ICAM-1和VCAM-1的表达,阿托伐他汀在一定程度上可抑制上述作用.结论:阿托伐他汀可抑制粘附分子ICAM-1和VCAM-1 mRNA表达,可能具有增加粥样斑块稳定性和延缓动脉粥样硬化进程的作用.     

血管紧张素Ⅱ调控人脐静脉内皮细胞表达血凝素样氧化低密度脂蛋白受体

目的：研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对人脐静脉内皮细胞表达血凝素样氧化低密度脂蛋白受体（LOX－1）基因转录和蛋白表达的影响。方法：将不同浓AngⅡ(10^-5mol/L－10^－5mol/L）与人脐静脉内皮细胞（HUVECs）共孵育24h，将10^-6mol/LAngⅡ与HUVECs作用不同时间（0、3、6、12、24、36、48h）后，用细胞酶联免疫法和半定量RT－PCR分别检测LOX－1蛋白和mRNA表达。结果：10^-5mol/L－－10^-10mol/LAngⅡ作用24h，使内皮细胞LOX－1蛋白一达的OD值与对照组相比显著增加（P＜0．001），其中AngⅡ浓度为10^-5mol/L－10^-9mol/L时，LOX－1表达增加呈浓度依赖性。10^-10mol/LAngⅡ的作用结果与10^-9mol/LAngⅡ的作用结果差异无显著性；10^-5mol/L－10^-8mol/LAngⅡ可以使内皮细胞LOX－1mRNA的表达增加，分别为对照组的4．43、4．25、2．71和1．84倍。10^-9mol/L,10^-10mol/AngⅡ作用24h,LOX－1mRNA表达与对照组相比无显著变化（P＞0．05）。用 10^-6mol/LAngⅡ作用HUVECs不同时间，发现共孵育3h后，内皮细胞LOX－1mRNA的表达和LOX－1蛋白表达的OD值与对照组相比都有显著增加（P＜0．001），随着时间延长，LOX－1mRNA的表达至24h左右达最高峰；LOX－1蛋白表达至24－36h达到最高峰之后表达量逐渐减低，结论：AngⅡ能明显增加强HUVECs表达LOX－1，并随着AngⅡ浓度的增加和作用时间的延长，LOX－1表达增加。     

恒磁场对内皮细胞分泌与表达ICAM,VCAM-1及与单核细胞黏附率的影响

目的:观察恒磁场对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌与表达细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)及与人单核细胞株THP1黏附率的影响.方法:采用体外培养第3代的HUVECs,实验分为6组:对照组、AngⅡ(1×10-6mol/L)组及AngⅡ 不同磁感应强度(1Gs,5Gs,10Gs,20Gs)的恒磁场组.各组细胞于单纯培养或磁场作用24h后收集标本,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养液中ICAM-1,VCAM-1的分泌量,免疫细胞化学检测ICAM-1,VCAM-1的蛋白表达,计数法观察HUVECs与THP-1的黏附率.结果:AngⅡ1×10-6mol/L使HUVECs的ICAM-1和VCAM-1分泌及表达量显著增高(P<0.05vs对照组),而1,5,10和20Gs恒磁场组细胞ICAM-1的分泌和表达量显著低于AngⅡ组(P<0.05).AngⅡ1×10-6mol/L使HUVECs与THP-1的黏附率显著增加(P<0.05vs对照组),而1,5,10和20Gs恒磁场组HUVECs与THP-1的黏附率显著低于AngⅡ组(P<0.05).结论:恒磁场可拮抗AngⅡ的作用,抑制HUVECs的ICAM-1和VCAM-1分泌与表达及与HUVECs单核细胞的黏附率.     

趋化因子Fractalkine在血管紧张素II诱导内皮细胞ICAM-1表达中的作用

目的 研究Fractalkine（FKN）在血管紧张素II（Ang II）诱导内皮细胞表达细胞间黏附分子-1（ICAM-1）中的作用.方法 取人脐静脉内皮细胞（HUVECs）培养,分别给予低、高浓度（10-7 mol/L,10-6 mol/L）Ang II干预12、24、48 h,采用MTT检测内皮细胞活性,Western blot检测ICAM-1和FKN蛋白表达;小RNA转染内皮细胞后,用高浓度Ang II培养24 h并检测各组细胞FKN mRNA表达及ICAM-1和FKN蛋白表达.结果 Ang II可降低HUVECs活性并促进ICAM-1及FKN蛋白表达,高浓度AngII对内皮细胞活性影响较大;FKN siRNA转染可显著抑制FKN mRNA表达,且在高浓度Ang II作用24 h后,被转染细胞的FKN mRNA表达量仍显著低于阴性对照＋Ang II组（P＜0.05）,且ICAM-1及FKN蛋白表达显著减少.结论 Ang II可降低内皮细胞活性并促进内皮细胞ICAM-1和FKN蛋白表达,趋化因子FKN介导了Ang II诱导的内皮细胞ICAM-1蛋白表达过程.     

烟酸抑制血管紧张素Ⅱ诱导的内皮细胞C反应蛋白的表达

目的探讨烟酸对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）C反应蛋白表达的影响。方法分别使用不同浓度烟酸（0.25、0.5或1.0 mM）预处理HUVECs不同时间（1、2、6、12及24 h）后,使用血管紧张素Ⅱ（1μmol/L）诱导HUVECs表达C反应蛋白。荧光实时定量PCR（RT-PCR）检测CRP mRNA的变化。Western Blot检测CRP蛋白和NF-κB p65蛋白的变化。结果烟酸能抑制血管紧张素Ⅱ诱导的HUVECs中CRP mRNA和蛋白的表达,而且这种抑制呈时间和浓度依赖性。HUVECs在使用1 mmol/L烟酸预处理24 h后,AngⅡ＋Niacin组与AngⅡ组相比,NF-κB蛋白表达有明显下降,同时CRP蛋白表达也同步下降。结论烟酸能抑制血管紧张素诱导的HUVECs中CRP mRNA及蛋白的表达,抑制NF-κB是可能的机制之一。     

过氧化氢对内皮细胞表面粘附分子表达的影响

目的 研究H2O影响内皮细胞与中性粒细胞的粘附机理。方法 采用流式细胞仪检测了H2O2（250μmol/L）对培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs)表面粘附分子ICAM-1、VCAM-1、E-selectin表达影响的时程变化，和不同浓度H2O2（50、150、250、350、450μmol/L）作用下内皮细胞粘附分子ICAM-1、VCAM-1、E-selectin表达的变化。结果 ①用浓度为250μmol/L的H2O2处理内皮细胞，三种粘附分子表达的时间过程不完全相同，ICAM-1表达持续上调，VCAM-1表达在3小时达到峰值，而后随着时间的延长逐渐下降；E-selectin表达在3小时才开始显著上调，5小时达到峰值，然后随着时间的延长逐渐下降。②用不同浓度的H2O2处理内皮细胞3小时后，介导三种粘附分子表达达到峰值的然后随着时间的延长逐渐下降；③用不同浓度的H2O2处理内皮细胞3小时后，介导三种粘附分子表达达到峰值的浓度不完全相同。ICAM-1和VCAM-1表达在浓度为250μmol/L时达到峰值，而E-selectin表达的峰值在浓度为350μmol/L时，当浓度继续增高时，其表达明显下调。结论 h2O2能引起内皮细胞表达粘附分子表达上调，在中性粒细胞对内皮细胞的粘附过程中起着重要作用，H2O2可能通过激活粘附分子的表达而加重炎症过程。     

内皮细胞微粒对人脐静脉内皮细胞VCAM-1和ICAM-1表达的影响

目的:探讨内皮细胞微粒(Endothelial microparticles,EMPs)对人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)血管细胞粘附分子-1(Vascular cellular adhesion molecule-1,VCAM-1)和细胞间粘附分子-1 (Intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)表达的影响.方法:取生长良好的第4、5代HUVECs,将细胞以1×105个/ml密度接种于5 cm2的培养皿中,待细胞生长近80％融合时进行干预.按0、1×102、1×103、1×104、1×105个ml浓度的EMPs进行分组及刺激,每组12个样本.在共同培养24h后收集细胞.分别采用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹方法检测VCAM-1和ICAM-1 mRNA和蛋白的表达.结果:HUVECs受EMPs刺激,VCAM-1和ICAM-1 mRNA及蛋白表达显著增加,且EMPs的这种作用呈浓度依赖性增强(均P＜0.05).结论:EMPs能上调HUVECs VCAM-1和ICAM-1的表达,EMPs不仅是内皮功能障碍的标记物,还能加重内皮功能损害.     

AngⅡ抑制HUVECs内皮型一氧化氮合酶的表达和NO的释放

目的观察AngⅡ对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及内皮NO生成的影响,探讨其可能机制.方法 采用胰蛋白酶消化法进行HUVECs的原代培养,3～5代用于实验;通过RT-PCR和Western Blot检测eNOS的mRNA和蛋白表达水平;利用Griees反应原理测定上清NO释放量.结果与无刺激组相比, AngⅡ(10-8 M、10-7 M、10-6M)抑制HUVECs eNOS mRNA和蛋白表达(P《0.05);HUVECs未受刺激时NO生成量是(50.21±4.39)μM,不同浓度的AngⅡ(10-8 M、10-7 M、10-6M)与HUVECs共孵育12 h可明显减少NO 释放(30.01±4.10)μM、(21.33±4.81)μM、(16.35±2.56)μM,使其浓度分别下降49.7%、63.4%、71.1%.结论AngⅡ明显抑制HUVECs表达eNOS,并呈浓度效应减少内皮NO的释放.     

姬松茸多糖对LPS诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤的保护机制

目的：探讨姬松茸多糖（ABP）对脂多糖（LPS）诱导的人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）损伤的保护作用及其可能的机制。方法：HUVECs分为Control组、LPS组（终浓度为1 μg/mL LPS构建细胞损伤模型）、LPS+ABP组（LPS基础上分别用10、20、50 μg/mL ABP进行干预）,CCK-8法检测ABP对HUVECs的细胞毒性作用,ELISA法、Western blot及RT-PCR检测各组炎症因子及细胞黏附分子的表达,Western blot和免疫荧光法检测各组NF-κB信号通路相关蛋白表达及核转位。结果：LPS组TNF-α、IL-6、COX-2、iNOS、ICAM-1、VCAM-1蛋白及p-p65/p65、p-IκB/IκB蛋白相对表达量较Control组显著升高（P ＜0.01）;LPS+ABP组随药物浓度升高,TNF-α、IL-6、COX-2、iNOS、ICAM-1、VCAM-1蛋白及p-p65/p65、p-IκB/IκB蛋白表达较LPS组逐渐降低（P ＜0.05）。LPS组TNF-α、IL-6、COX-2、iNOS、ICAM-1、VCAM-1 mRNA较Control组显著升高（P ＜0.01）;LPS+ABP组随药物浓度升高,TNF-α、IL-6、COX-2、iNOS、ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达较LPS组逐渐降低（P ＜0.05）。结论：ABP可以通过抑制LPS诱导的炎症因子和细胞黏附分子的表达来减轻HUVECs的损伤,其机制可能与抑制细胞中NF-κB信号通路的激活有关。     

NLRP3炎症小体介导血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉血管内皮细胞炎症因子IL-1β的表达

目的研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）NLPR3 炎症小体激活与炎症因子白介素-1β （IL-1β）表达的影响。方法体外培养HUVECs,用AngⅡ的不同浓度和刺激时间刺激HUVECs,找到最适合的AngⅡ刺激浓度 与时间。AngⅡ刺激HUVECs前,预用AngⅡ受体阻断剂氯沙坦阻断AngⅡ作用;NAD（P）H抑制剂DPI或H2O2清除剂CAT降 低胞内活性氧（ROS）含量;用caspase-1抑制剂YVAD阻断caspase-1作用;用NLRP3 siRNA沉默胞内NLRP3表达。运用蛋白 印迹法（western blot）分别检测细胞内NOX4、NLRP3、caspase-1以及IL-1β含量。结果（1）HUVECs在浓度10-9MAngⅡ刺激 12 h后,胞内NOX4、NLRP3、caspase-1以及IL-1β的蛋白表达显著增加;（2）氯沙坦、DPI、CAT、YVAD和NLRP3 siRNA都可减 轻AngⅡ诱导的上述反应。结论AngⅡ通过促进HUVECs活性氧生成,激活NLRP3炎症小体,促进胞内炎症介质IL-1β P17活 性片段生成增加,诱导血管炎症的发生。     

AngⅡ抑制HUVECs内皮型一氧化氮合酶的表达和NO的释放

目的:观察AngⅡ对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及内皮NO生成的影响,探讨其可能机制。方法:采用胰蛋白酶消化法进行HUVECs的原代培养,3~5代用于实验;通过RT-PCR和W estern B lot检测eNOS的mRNA和蛋白表达水平;利用G riees反应原理测定上清NO释放量。结果:与无刺激组相比,AngⅡ(10-8M、10-7M、10-6M)抑制HUVECs eNOS mR-NA和蛋白表达(P<0.05);HUVECs未受刺激时NO生成量是(50.21±4.39)μM,不同浓度的AngⅡ(10-8M、10-7M、10-6M)与HUVECs共孵育12 h可明显减少NO释放(30.01±4.10)μM、(21.33±4.81)μM、(16.35±2.56)μM,使其浓度分别下降49.7%、63.4%、71.1%。结论:AngⅡ明显抑制HUVECs表达eNOS,并呈浓度效应减少内皮NO的释放。     

尿酸盐对血管内皮细胞表达血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)mRNA的影响

目的观察不同浓度或不同时间范围内尿酸盐对人血管内皮细胞（endothelial cell of vessels,ECV）血管细胞粘附分子（VCAM-1）mRNA表达的影响。方法体外培养人血管内皮细胞,分别用710μmol／L、1070μmol／L、1430μmol／L（低、中、高）等不同浓度的尿酸盐刺激,用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术测定血管内皮细胞VCAM-1的mRNA表达;尿酸盐终浓度为1070μmol／L,分别孵育细胞8h、16h、24h、48h后用RT-PCR技术测定血管内皮细胞VCAM-1的mRNA表达。结果（1）低、中、高浓度尿酸盐刺激组细胞VCAM-1的mRNA表达均较空白对照组显著提高（P〈0．01）,以中浓度尿酸盐刺激组表达为最高。（2）内皮细胞在中浓度尿酸盐刺激下,8h、16h、24h、48h VCAM-1的mRNA表达均较空白对照组显著升高（P〈0．01）,但其表达于16h达到峰值。结论尿酸盐能直接作用于人的血管内皮细胞,诱导炎症分子的超表达,这也可能是其促进动脉粥样硬化斑块形成的重要机制之一。     

血管紧张素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞分泌NO和ET1的影响

目的通过体外细胞实验研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌NO和ET1的影响,探讨其可能的机制。方法体外培养HUVECs,对其进行不同浓度AngⅡ刺激(1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6mol/L刺激组),及相同浓度不同作用时间AngⅡ刺激(1×10-7mol/L刺激2、6、12、18、24 h),并应用不同的受体阻断剂(AT1R阻断剂替米沙坦、AT2R阻断剂PD123319)及信号通路阻断剂(Erk1/2阻断剂PD98059、P38 MAPK阻断剂SB203580、PKC阻断剂Staurosporine)观察AngⅡ的作用通路,用ELISA法检测细胞分泌的内皮素1(ET1),用Griess法检测一氧化氮(NO),用RT-PCR方法检测e NOS/ET1 mRNA水平。结果 AngⅡ对血管内皮细胞的刺激作用有浓度效应,AngⅡ越高,e NOS mRNA表达和NO水平越低,而ET1 mRNA表达与蛋白水平越高;AngⅡ对内皮细胞功能的影响有时间效应,AngⅡ作用时间越长,NO/ET1水平越低;替米沙坦、PD98059和SB203580能阻断AngⅡ的效应;而PD123319和Staurosporine不能阻断AngⅡ的效应。结论 AngⅡ可损伤内皮细胞的分泌功能,表现为NO降低而ET1升高,其通过AT1R发挥,用并可能通过Erk1/2及MAPK信号通路途径起作用。     

姜黄素和氯沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导的内皮间质细胞转化的作用及机制研究

目的 研究姜黄素和氯沙坦对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的内皮间质细胞转化(EndMT)的作用及机制.方法 培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)然后分为4组:对照组(不加刺激药物的正常培养组);AngⅡ组(加入刺激浓度为0.1 μmol/L或1μmol/L的AngⅡ);姜黄素+AngⅡ组(先加入12.5 μmol/L的姜黄素预孵1h,再加入1 μmol/L的AngⅡ);氯沙坦+AngⅡ组(先加入10 μmol/L的氯沙坦孵育2h,再加入1μmol/L的AngⅡ);刺激24 h后行划痕试验检测各组细胞迁移能力改变和CCK-8检测细胞活力;刺激5d后,显微镜观察各组细胞形态变化和Western blot检测各组血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达量.结果 HUVECs经AngⅡ刺激后形态改变,长梭形样细胞明显增多;姜黄素和氯沙坦可维持内皮细胞铺路石样形态.AngⅡ呈浓度依赖性地降低HUVECs存活率(P＜0.01);各组存活率均＞50％(均P＜0.05).相比对照组,AngⅡ促进HUVECs的迁移(P＜0.05);相比AngⅡ组,加入姜黄素和氯沙坦可抑制HUVECs的迁移(均P＜0.05).AngⅡ可诱导EndMT,AngⅡ刺激5d后VE-cadherin表达减弱(P=0.003),而α-SMA和TGF-B1的表达都明显增强(均P＜0.01),姜黄素和氯沙坦使VE-cadherin表达明显增加,而α-SMA和TGF-β1的表达均明显下调.结论 姜黄素和氯沙坦通过下调TGF-β1表达抑制AngⅡ诱导的EndMT.     

过氧化酶体增殖物激活受体α抑制血管紧张素Ⅱ促心肌纤维化作用的试验研究

目的：探讨体外条件下过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）促心肌纤维化的抑制作用。方法：培养新生Wistar大鼠原代心脏成纤维细胞(CFs),以AngⅡ10-7mol/L刺激,体外模拟心肌纤维化,再用不同浓度的PPARα激动剂苯扎贝特作用于细胞。用MTT比色法检测CFs的增殖情况,采用RT PCR法检测Ⅰ型胶原（collagen I）、基质金属蛋白酶（MMP） 2、金属蛋白酶组织抑制因子（TIMP)-1 mRNA的表达。 结果：① AngⅡ刺激后12h,CFs的collagen Ⅰ、TIMP-1 mRNA表达明显增加,MMP-2 mRNA表达减少;苯扎贝特呈剂量依赖性抑制AngⅡ的作用, PPARα特异性抑制剂MK886可以完全抑制苯扎贝特的作用;② AngⅡ明显促进CFs增殖,苯扎贝特不能抑制AngⅡ的促增殖作用。结论： PPARα途径活化后抑制AngⅡ的促心肌纤维化作用。     

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞表达ICAM-2及与树突状细胞粘附的影响

目的 探讨同型半胱氨酸（Hcy）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）分泌和表达细胞间粘附分子-2（1-CAM-2）以及内皮细胞与树突状细胞（DC）粘附的影响。方法 在人脐静脉内皮细胞培养基中加入浓度为0．5mmol／L的Hey作用不同时间，以及加入不同浓度的Hey作用24h。用ELISA法检测内皮细胞培养基中HU-VECs分泌ICAM-2的蛋白含量，用Western blot法检测HUVECs表达ICAM-2的蛋白含量，用分子探针标记的DC与HUVECs共孵育，共聚焦显微镜下计数粘附于HUVECs的DC数量，以检测Hey对HUVECs与DC粘附的影响。结果用0．5mmol／L Hey干预后，HUVECs分泌ICAM-2蛋白在12h开始高于空白组（P〈0．05），24h和48h均增加显著（均P〈0．01）；而ICAM-2蛋白的表达在6h开始高于空白组（P〈0．05），24h达峰值（P〈0．01），48h下降显著，且与空白组相比无统计学差异。用不同浓度的Hey干预24h后，ICAM-2蛋白的分泌和表达及HUVECs与Dc粘附均呈剂量依赖性增加，当Hey浓度高于0．5mmol／L时增加更显著。结论 Hey能刺激HUVECs分泌和表达ICAM-2蛋白，从而促进HUVECs与DC的粘附，这可能是其诱导动脉粥样硬化早期形成的重要机制之一。     

脱氢表雄酮对氧化低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞表达VCAM-1的影响

目的探讨雄激素脱氢表雄酮（DHEA）对氧化低密度脂蛋白（ox—LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）表达血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）的影响。方法体外培养HUVECs，采用免疫细胞化学、Western blot、原位杂交等方法，观察不同浓度DHEA（1，5，50μmol／L）对ox—LDL诱导的HUVECs表达VCAM-1的影响。结果ox—LDL诱导培养HUVECs后，HUVECs VCAM-1表达明显升高，预先用DHEA处理HUVECs可使VCAM-1的表达降低（P〈0．01），且这种降低呈浓度依赖性。结论DHEA能浓度依赖性地抑制ox-LDL诱导的HUVECs VCAM-1的表达。     

血管紧张素Ⅱ对外周血内皮祖细胞KDR mRNA表达的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对外周血内皮祖细胞（EPCs）血管内皮生长因子受体2（VEGFR-2／KDR）mRNA表达的影响。方法密度梯度离心法获取外周血单个核细胞（MNCs）,培养7天后,收集贴壁细胞并加入不同浓度AngⅡ（10^-5mol／L,10^-7mol／L,10^-9mol／L）干预一定时间（6h,12h,24h和48h）。多波长激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-I和DiI-acLDL双染色细胞为正在分化的EPCs,流式细胞仪检测其表面标志进一步鉴定EPCs,倒置荧光显微镜下计数。然后,收集贴壁细胞,Trizol法提取总RNA,以RT-PCR法对EPCs的KDR mRNA表达进行半定量测定,并观察缬沙坦（valsartan）对此的影响。结果AngⅡ呈浓度依赖方式诱导KDR mRNA的表达增加;10^-5mol／L的AngⅡ作用6h,EPCs的KDR mRNA表达即有显著增加（P〈0．01）,随着时间延长,KDR mRNA表达逐渐增加,至48h达最高峰。而缬沙坦可显著抑制AngⅡ诱导的KDR mRNA的表达增加,使之接近于正常水平。结论AngⅡ可显著增加EPCs的KDR mRNA表达,并呈浓度和时间依赖性。此作用可被ATI受体拮抗剂缬沙坦所阻断,提示AngⅡ通过AT1受体介导上调EPCs的KDR mRNA的表达。     

转染血管紧张素Ⅱ受体反义核苷酸对心肌细胞生长的作用

目的：评价转染AT1反义核苷酸（AT1A）对心肌细胞血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）受体亚型mRNA表达,及蛋白质和核酸合成的作用。方法：RT-PCR克隆AT1 cDNA序列（476bp),将克隆的AT1 cDNA反向插入PcDNA3.1(5.4kb),构建一完整的含AT1A的质粒（PAT1A）,并转染入培养的心肌细胞,RT-PCR和免疫印迹鉴定其转染后AT1 mRNA和蛋白表达。比较AngⅡ10^-7 mol/L刺激24h后的转染及非转染的心肌细胞AT1及AT2 mRNA表达（RT-PCR）、蛋白质和核酸合成（^3H-Leu及^3H-TdR掺入量）。结果：成功构建PAT1A。转染心肌细胞AT1mRNA和蛋白表达量显著减少,与正常对照心肌细胞相比差异有非常显著性（P＜0.01)。AngⅡ10^-7mol/L刺激24h后,与非转梁心肌细胞相比,转染组AT1 mRNA表达明显减少,AT2 mRNA表达明显增加（P＜0.01),但两组间^3H-Leu及^3H-TdR掺入量差异均无显著性（P＞0.05)。结论：经AT1A封闭后,心肌细胞AT1mRNA表达显著抑制,同时AT2 mRNA上调。单纯封闭AT1mRNA并不能有效阻断AngⅡ介导的心肌细胞生长。