机械压力对人牙周膜成纤维细胞TGF-β1蛋白表达的影响

目的：探明机械压力与人牙周膜成纤维细胞转化生长因子β1（transforming growth factor beta-1,TGF-β1）蛋白表达的关系。方法：本实验采用细胞加载装置,对人牙周膜成纤维细胞施加0kPa、250kPa、500kPa、1000kPa的压力,通过酶联免疫吸附实验,分别检测细胞受力后6h、12h、18h、24h时TGF-β1的含量。结果：加载250kPa组、500kPa组在细胞受力后各个时段TGF-β1含量没有变化;1000kPa组在细胞受力后的第12h,TGF-β1含量显著降低。结论：人牙周膜成纤维细胞合成TGF-β1受到机械压力的调控;在一定载荷作用下,TGF-β1的含量随着压力的增大而有所降低。     

机械压力对人牙周膜成纤维细胞增殖活力的影响

目的:探讨不同力值和不同时间的压力对人牙周膜成纤维细胞增殖活力的影响。方法:采用细胞加载装置,对细胞分别施加0、0.25、0.5、1.0 MPa的压力30 min;施加1.0 MPa的压力,分别持续10、30、50 min,通过四唑盐比色实验(MTT法)检测细胞受力后6、12、18、24、30、36 h的OD值。结果:0.25、0.5 MPa组的OD值与对照组无显著性差异(P>0.05);1.0 MPa压力下,加载30 min和加载50 min组有显著性差异(P<0.05),表现为受力后6 h细胞OD值即明显降低,12 h进一步降低,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),24 h后细胞OD值与对照组无差异。结论:人牙周膜成纤维细胞的增殖活力和压力值以及压力作用时间存在一定的关系;细胞的增殖活力随着压力值的增加、压力作用时间的延长而有所降低,但这种影响是可逆的。     

人牙周膜成纤维细胞的培养及牵张应变诱导凋亡研究

目的:探讨人牙周膜成纤维细胞的分离、培养及在牵张应变作用下发生早期凋亡的情况。方法:刮取健康人前磨牙牙周膜,进行牙周膜成纤维细胞的分离、培养及生长曲线描绘。经3～4代传代培养后,对细胞加载1%～20%的牵张应变,加载时间分别为30min,1h、6h、12h然后通过流式细胞仪检测Annexin V-FITC(异硫氰酸荧光素)及激光扫描共聚焦显微镜进行细胞的早期凋亡鉴定。结果:人牙周膜成纤维细胞传代到12代以后,细胞逐渐呈衰老生状,胞体变大,细胞生长缓慢。人牙周膜成纤维细胞的凋亡率在30min组低于对照组,但两者间无统计学差异。在6h内,人牙周膜成纤维细胞的凋亡情况随加载时间和加载应力的增加而增加(P<0.05)。在12h时所有组的细胞凋亡均减少。结论:人牙周膜成纤维细胞的使用最好在12代以内,尤其是3～4代细胞的活力、增殖能力较好。牵张应变可以诱导细胞发生早期凋亡。     

HGF在人牙周膜成纤维细胞中的表达

目的：观察HGF在人牙周膜成纤维细胞中的表达及探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）、白细胞介素-1β（IL-1β）与HGF之间的关系。方法：分别采用IL-1β梯度浓度、最佳干预浓度和TGF-β1梯度浓度干预第5代人牙周膜成纤维细胞,并运用酶联免疫技术检测人牙周膜成纤维细胞的上清液中HGF的表达。结果：经IL-1β单独作用,人牙周膜成纤维细胞的上清液中HGF的含量较空白对照组高,并优选出IL-1β的最佳干预浓度为10 ng/mL。当一定浓度的TGF-β1和10 ng/mL的IL-1β联合干预人牙周膜成纤维细胞,该细胞上清液中HGF的含量较单独IL-1β作用组低。结论：TGF-β1能够抑制IL-1β诱导的人牙周膜成纤维细胞分泌HGF。     

静态张应力作用下人牙周膜成纤维细胞β-catenin和Wnt3a蛋白的表达

目的:研究人牙周膜成纤维细胞在不同大小机械张应力作用下Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin和Wnt3a蛋白的表达变化。方法:运用酶解组织块法体外培养人牙周膜成纤维细胞,将细胞按加力时间的不同(2 h、4 h、6 h)分为3组,每组再按形变率不同将其分为8%、12%和16%3个亚组,并取加力时间0h、形变率0%作为对照组。用western blot技术检测细胞在不同时间点和不同形变率作用下Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin和Wnt3a蛋白的表达变化。结果:Western blot结果显示,人牙周膜成纤维细胞在机械力加载后β-catenin 和Wnt3a蛋白表达显著减少(P<0.05)。在加力时间相同的组内(2 h、4 h、6 h),β-catenin 和Wnt3a蛋白表达随着形变率的增大而逐渐减少(P<0.05)。结论:β-catenin和 Wnt3a参与了静态张应力作用下牙周膜成纤维细胞的代谢,机械力对牙周膜成纤维细胞中Wnt/β-catenin信号通路有抑制作用。     

模拟咬合压力对人牙周膜成纤维细胞COX-2表达的影响

目的：观察模拟咬合压力对人牙周膜成纤维细胞环氧化酶-2(COX-2)基因表达的影响。方法：原代培养人牙周膜成纤维细胞，应用可控压力细胞加载装置模拟咬合压力，分别施加30、60、90kPa的间歇性压力，每次15min，每天3次，在3、5d后提取细胞总RNA，定量后点于尼龙膜上，同时利用引物扩增COX-2基因的一段特异性片段作为cDNA探针，将探针同位素标记后与膜杂交，以观察COX-2在mRNA水平表达的变化。结果：加载模拟咬合压力的人牙周膜成纤维细胞COX-2表达水平明显高于对照组，而且在一定范围内表达水平与加压力值成剂量依赖关系；各加压组加压3d与5d之间细胞COX-2mRNA表达无明显差异。结论：加载模拟咬合压力条件下培养的人牙周膜成纤维细胞COX-2基因表达增高。     

温度变化对体外培养人牙周膜成纤维细胞的影响

目的:在体外观察温度升高对人牙周膜成纤维细胞活力的影响,探讨热牙胶根管充填的安全性.方法:将体外培养人牙周膜成纤维细胞悬液于不同温度及时间培养,用噻唑蓝(MTT)比色法、台酚蓝染色测定细胞的存活,流式细胞分析法测定人牙周膜成纤维细胞凋亡及死亡情况.结果:体外培养人牙周膜成纤维细胞的死亡率随着温度的上升逐渐增加.流式细胞分析显示:50℃组较对照组的坏死细胞比例明显上升,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:温度升高能诱发人牙周膜成纤维细胞活力降低,死亡率、凋亡率上升.     

模拟咬合压力对人牙周膜成纤维细胞细胞周期的影响

临床常见咬合创伤引起牙齿松动、牙周膜腔增宽、牙槽骨吸收。牙周膜受损与牙周膜组织及人牙周膜成纤维细胞(hum an periodontal ligam ent fibrob last,HPLF)的生命活动异常有密切关系[1]。本组应用可控压力细胞加载装置,对HPLF加载不同大小的间断性压力[2],用流式细胞仪观察不同间断性模拟咬合压力对HPLF细胞周期的影响,推测50、100 kPa间断性压力对细胞分裂有抑制作用。1材料和方法1.1牙周膜成纤维细胞原代培养和细胞加载方法取青少年因正畸需要而拔除的前磨牙,组织块法[3]原代培养,反复贴壁纯化。置37℃,50 mL/L CO2,100%湿度CO2…     

牙周膜肌成纤维细胞的体外培养及其标志物的表达时效

目的：探讨人牙周膜肌成纤维细胞（MFB）体外培养及其标志物表达的时效性。方法???体外培养人牙周膜成纤维细胞（hPDLF）,72?h内以5μg?L-1终质量浓度的转化生长因子（TGF）-β1诱导hPDLF向MFB转化,免疫细胞化学和免疫组织化学染色检测MFB标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达情况。分别进行12、24、48、72、96和120?h的MFB观察,采用流式细胞术观察MFB长时间培养的细胞活性,采用免疫细胞化学观察MFB长时间培养后的α-SMA表达情况。结果??经TGF-β1诱导后α-SMA呈阳性;诱导至120?h,α-SMA仍呈阳性,72?h内其表达稳定。结论5μg?L-1终质量浓度的TGF-β1成功诱导人牙周膜细胞向MFB转化。MFB体外培养具有时效性,培养0~72?h,其状态稳定。     

碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜成纤维细胞整合素β1亚单位mRNA表达的影响

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人牙周膜成纤维细胞整合素β1亚单位mRNA表达的影响,探讨bFGF在牙周组织再生中的意义.方法 体外培养人牙周膜成纤维细胞,分别用质量浓度0.1、1.0、10.0ng·mL-1的bFGF刺激细胞,培养24、48、72 h,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测牙周膜成纤维细胞内整合素β1亚单位mRNA表达的变化.结果 bFGF可促进入牙周膜成纤维细胞内整合素β1亚单位mRNA的合成,在培养24、48、72 h时,1.0 ng·mL-1组整合素β1亚单位表达均明显高于对照组;培养72 h时各实验组整合素β1亚单位表达均明显高于培养24、48 h时..结论 bFGF通过提高整合素β1亚单位mRNA的表达,促进牙周膜成纤维细胞的黏附,在牙周组织修复再生中起作用.     

丹参对人牙周膜成纤维细胞骨保护素表达的影响

目的:研究丹参对体外培养的人牙周膜成纤维细胞骨保护索(OPG)表达的影响.方法:原代培养人牙周膜成纤维细胞,传代至第5代,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及酶联免疫吸附试验(ELISA),分别检测不同浓度丹参对体外培养的人牙周膜成纤维细胞OPG mRNA表达及上清中OPG蛋白含量改变的影响,采用SPSS15.0软件包对数据进行统计学分析.结果:不同浓度丹参作用1h后,丹参处理组人牙周膜成纤维细胞OPG mRNA表达均较对照组增强(P<0.05);不同浓度丹参作用12h后,丹参处理组上清液中OPG蛋白质含量显著高于对照组(P<0.05).结论:丹参能够促进体外培养的人牙周膜成纤维细胞合成并分泌OPG.     

静态牵张应变对人牙周膜成纤维细胞COX-2表达的影响

目的:探讨牵张应变对体外培养的人牙周膜成纤维细胞COX-2表达的影响。方法:牵张应变量设为0%、8%、13%、18%、23%共5组,每组分别加载1 h8、h、16 h、24 h后收集细胞,免疫组化检测细胞中COX-2的表达,灰度分析并进行统计学处理。结果:8%~18%牵张应变范围,细胞内COX-2表达随着加载时间和应变量的增高而增强,23%应变量作用下COX-2表达降低,且与加载时间无关联。结论:在细胞的生理应变范围(8%、13%、18%)内,静态牵张应变促进人牙周膜成纤维细胞COX-2的表达,当牵张应变量超过生理应变范围(23%),则COX-2的表达量降低。     

黄芩苷对牙龈成纤维细胞和牙周膜细胞上ICAM-1表达调节的研究

目的 :观察黄芩苷对IL - 1β诱导的牙龈成纤维细胞 (humangingivalfibrobl -asts ,HGF)和牙周膜细胞 (peri odontalligamentcells ,PDLcells)上细胞间粘附分子 - 1表达的影响。方法 :应用体外细胞培养和细胞免疫组化及图像分析方法。结果 :正常牙龈成纤维细胞和牙周膜细胞上细胞间粘附分子 - 1表达阴性或弱阳性 ;1μg/mLIL - 1β能诱导细胞间粘附分子 - 1在牙龈成纤维细胞和牙周膜细胞上强阳性表达 ;0 .1μg/mL黄芩苷对IL - 1β诱导的牙龈成纤维细胞和牙周膜细胞上细胞间粘附分子 - 1的表达有显著抑制作用 (P <0 .0 1)。结论 :黄芩苷可抑制IL -1β诱导的细胞间粘附分子 - 1在牙龈成纤维细胞和牙周膜细胞上表达 ,提示黄芩苷具有抗细胞粘附的作用     

静压力对髁突软骨转化生长因子β1表达影响的体外研究

目的:观察静压力对体外培养髁突软骨细胞表达TGF-β1的影响。方法:解剖、培养SD大鼠髁突软骨,应用静压力加载装置对实验组软骨加载强度为10kPa的持续静压力1h。对照组除软骨不加力外,其它培养条件与实验组相同,加力完成后2组同时收集样本。用免疫组化技术检测2-实验组和对照组髁突软骨TGF-β1的含量和分布,用彩色病理图像分析仪检测髁突软骨各层TGF-β1表达的强度。结果:实验组的髁突软骨各层细胞TGF-β1表达均增强,与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。其中成软骨细胞层改变最明显(P<0.01)。结论:静压力促进髁突软骨各层细胞TGF-β1表达增强,其中成软骨细胞层表达增强最为明显。     

机械牵张作用对牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的 :观察机械牵张作用对牙周膜成纤维细胞 (PDLFs)增殖能力的影响。方法 :用自行研制的细胞加载系统对PDLFs施以频率为 6次 /min(每次为 5s牵拉、5s松弛 ) ,幅度 12 %的牵张力 ,于加载 2 4、48、96h后 ,通过细胞计数、流式细胞仪检测观察PDLFs增殖能力的改变情况。结果 :在不同的时间点 ,加力组及对照组的细胞数均不断增加 ,在 48h及 96h时加力组结果明显高于对照组。流式细胞仪结果显示在不同时间点加力组处于DNA合成期的细胞数明显高于对照组。结论 :在对培养的人PDLFs施加频率为 6次 /min、幅度 12 %的牵张力时 ,对细胞的增殖起一定的促进作用     

牙周膜成纤维细胞在三维静电纺丝纳米纤维支架上的培养

目的:研究人牙周膜成纤维细胞与静电纺丝聚乳酸/聚己内酯纳米纤维支架体外培养的生物相容性.方法:分离、培养人牙周膜成纤维细胞,接种在静电纺丝纳米纤维支架上,与常规培养条件下的细胞进行比较,观察生长形态、生长曲线、倍增时间及活性.结果:人牙周膜成纤维细胞生长情况与常规培养基本一致,2组间的倍增时间比较无统计学差异(P＞0.05),活细胞百分率与正常培养无明显统计学差异(P＞0.05).结论:人牙周膜成纤维细胞在三维静电纺丝纳米纤维上生长、增殖,该支架材料具有很好的生物相容性,可作为牙周膜组织工程候选支架材料.     

IL-21通过Notch信号调控人牙周膜细胞RANKL表达和增殖的研究

目的:观察IL-21对人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG的表达以及增殖活性的影响,以及Notch信号通路在其中的作用,探讨IL-21在根尖周炎骨破坏中的作用机制。方法:使用不同浓度(0、10、50、100 μg/L)的IL-21作用于人牙周膜成纤维细胞,并选择最佳刺激浓度IL-21(50 μg/L)处理人牙周膜成纤维细胞,观察不同的时间点(0、12、24 h),通过实时定量PCR和ELISA的方法检测细胞中RANKL/OPG的表达水平。同时使用实时定量PCR和Western-blot检测IL-21对人牙周膜成纤维细胞Notch1表达水平的影响。运用Notch信号的阻断剂GSI(5 μmol/L)预处理人牙周膜成纤维细胞后,再检测IL-21对人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG的表达水平的影响。CCK8法测定各个实验组细胞增殖活性。结果:IL-21可显著提高人牙周膜成纤维细胞RANKL的表达水平,对OPG的表达无显著影响。IL-21显著抑制人牙周膜成纤维细胞的增殖活性。结论:IL-21通过Notch信号通路上调人牙周膜成纤维细胞的RANKL表达,抑制其增殖活性。     

中药补肾固齿丸对牙周炎治疗作用机制的探讨

目的研究补肾固齿丸水提液对LPS影响人牙周膜成纤维细胞生长及分泌IL-1β作用的调节能力,初步探讨补肾固齿丸的治病作用机理,以期为更好的利用中药治疗牙周病提供理论依据。方法人牙周膜成纤维细胞分别与脂多糖LPS 50μg／ml、LPS 50μg／ml＋补肾固齿丸水提液12．5μg／ml、LPS 50μml＋补肾固齿丸水提液25μml、LPS 50μg／ml＋补肾固齿丸水提液50μg／ml共同孵育6、72h,于6h收集细胞培养上清液,应用ELISA法检测细胞IL-1β分泌水平;72h应用MTT法检测存活细胞数量,评价细胞生长增殖情况。结果LPS可显著抑制牙周膜成纤维细胞生长（OD=0．198±0．097）,并刺激细胞IL-1β分泌水平显著升高（1．122±0．370pg／ml）（P〈0．01）;而补肾固齿丸水提液25μg／ml和50μg／ml则可显著抑制LPS的细胞毒性作用（OD=0．354±0．055,OD=0．368±0．029）、细胞IL-1β泌量也显著降低（0．685±0．168pg／ml,0．525±0．143pg／ml）,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论补肾固齿丸有效治疗牙周病的作用机理可能与降低细菌对宿主细胞生长抑制的毒性作用以及调节宿主免疫反应作用有关。     

牵张应变作用下人牙周膜细胞内磷脂酶C-γ1水平的变化

目的:观察机械牵张应变作用下,人牙周膜细胞(HPDLCs)内磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)水平的变化。方法:通过原代和传代培养,获得性状稳定的人牙周膜细胞,使用动态机械应变细胞加载仪对细胞进行1%、10%和20%动态牵张应变加载。加载不同时间,通过流式细胞仪对细胞进行PLC-γ1水平检测。采用SPSS13.0软件包对数据进行方差分析。结果:在加载牵张应变初期,细胞内的PLC-γ1水平维持较低水平;随着牵张应变加载时间的延长,牙周膜细胞内的PLC-γ1水平逐渐升高。50min时,PLC-γ1水平达到各应变组的最高值(P<0.01)。随着加载时间的继续延长,60min时,各应变组的PLC-γ1水平都显著下降(P<0.01)。结论:牵张应变可引起细胞内PLC-γ1水平的变化。     

牵张力作用下培养的人牙周膜成纤维细胞生成NO的实验研究

目的：观察在机械牵张力作用下牙周膜成纤维细胞NO的生成情况以及iNOS的表达情况。方法：用自行研制的细胞加载系统，对培养至第4代的人牙周膜成纤维细胞施以频率为每分钟6个周期（5s拉伸，5s松弛）、拉伸率为12％的牵张力，分别于加载后3，10，20，40，60min取上清液进行NO含量检测；以及于加载24，48，96h后固定细胞，进行iNOS免疫组化反应。结果：NO含量在所研究时间范围内逐渐增加；iNOS免疫组化结果显示iNOS的染色强度随着作用时间延长而增强。结论：牙周膜成纤维细胞在机械牵张力作用下合成NO增多，它可能通过合成和释放NO这一途径，在应力作用下的牙周组织改建过程中起作用。