应用富血小板血浆和骨髓基质细胞构建细胞-膜片及其异位成骨的实验研究

目的：探讨应用富血小板血浆（platelet rich plasma,PRP）和骨髓基质细胞（marrow stromal cells,MSCs）构建细胞-膜片的方法并评价膜片包裹珊瑚支架后的异位成骨能力。方法：将体外培养扩增的兔MSCs悬液与PRP混合,滴加到6孔培养板上,再滴加牛凝血酶溶液,形成凝胶样MSCs／PRP混合物,置于孵箱内培养。第1周用DMEM完全培养液,后2周改用DMEM诱导培养液。用得到的细胞-膜片包裹珊瑚圆片后,植入裸鼠背部皮下,以单纯珊瑚植入作对照。术后4周和8周取材,通过组织学观察,评价其异位成骨情况。结果：细胞-膜片具有一定的韧性和可操作性。扫描电镜观察显示：膜片由大量的纺锤样成骨细胞有规律地密集在一起而形成。组织学观察显示：术后4周和8周,膜-支架复合体珊瑚支架的表面及其孔洞内有大量的软骨或骨形成,以软骨内成骨的方式成骨;单纯珊瑚植入组,珊瑚表面及其孔洞内有大量纤维结缔组织长入,未见软骨或骨形成。结论：用PRP和MSCs构建细胞-膜片的方法简便,膜片包裹珊瑚支架形成的膜一支架复合体具有良好异位成骨能力。     

应用珊瑚／骨髓基质细胞／富血小板血浆组织工程骨修复兔颅骨缺损

目的：评价珊瑚／骨髓基质细胞（MSCs）／富血小板血浆（PRP）组织工程骨修复骨缺损的效果。方法：将兔MSCs悬液与同一供体来源的PRP混合后滴加到珊瑚团片上,形成珊瑚／MSCs／PRP复合物,用其修复MSCs和PRP来源兔颅骨极限缺损。自体颅骨或单纯珊瑚植入作为对照。术后6周和12周,通过组织学观察和组织形态测量分析．评价其骨修复效果。实验数据采用SPSS11．0软件包处理,两组之间差异采用t检验。结果：组织学观察显示,珊瑚／MSCs／PRP组,术后第6周,在整个缺损区珊瑚表面及其孔洞内有大量新骨形成;第12周,缺损区珊瑚完全降解吸收,被成熟的板层骨取代,缺损表现为完全的骨修复.图像分析显示：术后第6周和第12周,珊瑚／MSCs／PRP组的成骨量显著多于珊瑚组（P〈0．01）;术后第12周,珊瑚／MSCs／PRP组成骨量与自体骨组接近（P〉0．05）。结论：应用珊瑚作为支架材料、MSCs作为种子细胞、PRP作为内源性生长因子构建的组织工程骨修复骨缺损效果良好,与自体骨移植相近．是较理想的骨移植替代材料．     

富血小板血浆对珊瑚支架上骨髓基质细胞增殖和成骨分化的影响

目的：评价富血小板血浆（plateletrichplasma，PRP）对珊瑚支架上骨髓基质细胞（marrowstromalcells，MSCs）增殖和成骨分化的影响。方法：将体外培养、扩增和诱导的兔MSCs悬液与同一供体来源的PRP混合，滴加到珊瑚圆片上，再滴加牛凝血酶溶液，形成珊瑚／MSCs／PRP复合物，继续在体外培养。以珊瑚／MSCs复合物和珊瑚／PRP复合物作对照。8d和14d，通过MTT法检测MSCs增殖情况；通过组织化学方法检测培养液中碱性磷酸酶活性和骨钙素含量；通过扫描电镜观察MSCs在珊瑚支架上附着、生长和增殖情况。结果：珊瑚／MSCs／PRP组的光密度值明显大于珊瑚／MSCs组（P〈0．05）；珊瑚／MSCs／PRP组培养液中的ALP活性和OC含量明显大于珊瑚／MSCs组（P〈0．05）；扫描电镜显示：珊瑚／MSCs／PRP组，大量MSCs附着于珊瑚表面和孔洞壁，可见孔洞内有血小板和纤维网格样结构存在；珊瑚／MSCs组，珊瑚表面和孔洞壁有少量MSCs附着；珊瑚／PRP组，珊瑚表面及其孔洞内有大量的血小板和纤维网格样结构存在。结论：PRP促进了珊瑚支架上MSCs的增殖、成骨分化和粘附。     

应用兔骨髓基质细胞膜片与珊瑚支架构建组织工程骨

目的：探讨应用富血小板血浆与骨髓基质细胞（BMSCs）构建骨髓基质细胞膜片，以及应用骨髓基质细胞膜片与珊瑚支架构建组织工程骨的可行性。方法：将取自同一供体兔的BMSCs与富血小板血浆复合后，共同在体外培养10天，构建出BMSCs膜片，用其包裹珊瑚支架后植入裸鼠背部皮下，另以单纯BMSCs种植到珊瑚支架及以单一珊瑚植入作为对照。术后4周和8周取材，通过组织学观察和组织形态测量分析，评价其成骨情况。采用SPSS11．0软件，对所得数据进行统计学分析。结果：BMSCs与富血小板血浆共同在体外培养10d，可构建出厚约2mm的BMSCs膜片。用其包裹珊瑚支架后植入裸鼠背部皮下4周和8周，在珊瑚表面及其孔洞内有大量软骨和骨质形成．其成骨量明显大于单纯BMSCs种植组。单一珊瑚植入组未见骨或软骨形成。结论：将富血小板血浆与BMSCs复合后共同在体外培养，可构建出具有一定厚度的BMSCs膜片，将此膜片包裹珊瑚支架所形成的膜片一支架复合体具有良好的成骨活性.     

富血小板血浆对珊瑚支架上骨髓基质细胞异位成骨的影响

目的：评价富血小板血浆（platelet rich plasma,PRP）对珊瑚支架上骨髓基质细胞（marrow stromal cells,MSCs）异位成骨的影响。方法：将MSCs悬液与同一供体来源的PRP混合后滴加到珊瑚圆片上,形成珊瑚/MSCs/PRP复合物。以同样数量MSCs或PRP制备珊瑚/MSCs和珊瑚/PRP复合物。将3种复合物植入同一裸鼠的背部皮下。术后4周和8周取材,通过组织学观察和组织形态测量分析评价其异位成骨情况。结果：植入后4周或8周,珊瑚/MSCs/PRP组珊瑚表面及其孔洞内有大量的软骨或骨质形成;珊瑚/MSCs组珊瑚表面及其孔洞内也有软骨或骨质形成,并有纤维结缔组织长入;珊瑚/MSCs/PRP组形成的软骨或骨质的量明显多于珊瑚/MSCs组（P〈0.01）;珊瑚/PRP组珊瑚周围及其孔洞内有大量纤维组织,未见骨或软骨形成。结论：PRP促进了珊瑚支架上MSCs的异位成骨。     

钛网加强的BMSC/珊瑚修复下颌骨缺损的实验研究

目的:观察钛网加强的骨髓基质细胞(BMSC) /珊瑚复合物对下颌骨缺损的修复能力。方法:体外培养兔BMSC,经扩增、诱导分化后复合角孔珊瑚,植入自体下颌骨缺损区,修复骨缺损,并采用钛网固位和加强,植入 6、12周后进行X线观察和组织学检查,观察骨形成情况。结果:骨髓基质细胞 (BMSC) /珊瑚复合物有很强的成骨作用。实验组X线观察有骨形成,组织学染色证实有新骨形成,骨磨片显示钛网和新骨获得良好的骨愈合。结论:钛网 /BMSC/珊瑚复合物可修复兔下颌骨缺损,有良好的临床应用前景。     

鸵鸟骨转化多相钙磷陶瓷用于组织工程支架修复颅骨缺损实验研究

目的 观察鸵鸟骨转化多相钙磷陶瓷支架用于组织工程支架修复颅骨缺损的成骨性能.方法 来源于髂骨松质骨的自体骨髓基质细胞经含地塞米松、抗坏血酸、β-甘油磷酸钠的诱导液培养,直至培养皿底部形成一层膜性结构,用该膜性结构包绕多相钙磷陶瓷支架后将其植入兔颅骨缺损区.单纯支架材料植入和不植入材料作为对照.植入后4 w、8 w取材,通过X线片分析、大体和组织学观察评价其成骨性能.结果 支架/细胞复合物植入后4 w,在材料表面及孔隙内形成部分成熟骨和骨髓组织;植入后8w,更多的成熟骨形成,新形成的组织工程骨与颅骨融合.结论 支架/细胞复合物能够有效地修复颅骨缺损,鸵鸟骨转化多相钙磷陶瓷可能成为一种有发展前景的骨组织工程支架材料.     

骨髓基质干细胞接种于珊瑚修复兔颅骨缺损的实验研究

目的在骨缺损中植入骨形成细胞和细胞附着的支架材料，观察缺损的修复情况。方法体外扩增兔骨髓基质干细胞(MSCs)，将MSCs按2×10     

组织工程骨修复9例颅骨缺损畸形初步报道

目的：探讨利用自体骨髓间充质干细胞（BMSC）作为种子细胞的组织工程骨修复外伤后颅骨缺损畸形的可行性。方法：运用自体BMSC组织工程骨技术,对9例外伤术后颅骨缺损患者行颅骨修复手术。抽取患者自体骨髓,密度梯度离心法分离BMSC,经体外扩增和成骨诱导后,接种部分脱钙骨支架材料,构建组织工程骨。细胞材料复合物体外共培养1周后,手术植入颅骨缺损区。分别于术后1周和3、6、12个月进行临床外形和三维CT检查,随访治疗效果。结果：术后1周三维CT显示,颅骨缺损区被所植入的组织工程骨填充,头颅外形明显改善。术后3至12个月CT显示,组织工程骨形成并修复颅骨缺损,新生骨与骨缺损断端融合。9例患者中2例术后失访,2例高龄患者及大面积骨缺损患者发生不同程度的组织工程骨吸收现象,其余均良好地修复了颅骨缺损。结论：通过选择适宜的病例,以自体BMSC作为种子细胞,运用组织工程技术可以在人体内形成稳定的组织工程化骨并修复颅骨缺损。     

骨髓间充质干细胞结合珊瑚人工骨移植修复牙周缺损的实验研究

目的评估自体骨髓间充质干细胞（MSCs）种植珊瑚人工骨（NC）后形成的复合物结合牙周引导组织再生术治疗狗牙周缺损的效果。方法（1）体外分离获得狗的MSCs，矿化培养液进行成骨诱导，检测细胞的成骨活性；（2）将NC和PLGA—NC复合膜分别吸附MSCs共培养，观察复合物的形态：（3）将MSCs与NC共培养10d后的复合物移植到狗的牙周实验性骨缺损处。8周后行组织学染色牙周再生检测。结果（1）诱导后的MSCs成骨活性明显，矿化结节茜素红染色和Ⅰ型胶原免疫组化染色阳性；（2）MSCs与NC和PLGA—NC复合膜均有较好的生物相容性；（3）MSCs—NC复合物移植后可修复牙周缺损。结论MSCs有望成为牙周前体细胞的体外来源，骨组织工程学方法修复牙周缺损是可行的。     

PRP对纳米HA/PLGA复合支架上鼠骨骼肌卫星细胞增殖和成骨活性的影响

目的:研究富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)对纳米羟基磷灰石(nano-hydroxyapatite,nHA)/聚乳酸乙醇酸(poly lactic acid-co-glycolic acid,PLGA)(nHA/PLGA)支架上SD大鼠骨骼肌卫星细胞(muscle satellite cells,MSCs)黏附、增殖和成骨活性的影响。方法:将体外培养、扩增的鼠MSCs与同一供体来源的PRP混合,滴加到nHA/PLGA支架上,形成MSCs/PRP/nHA/PLGA复合物(实验组),继续在体外培养,以MSCs/nHA/PLGA复合物作为对照组。通过扫描电镜观察MSCs在支架上黏附、生长和增殖情况;水溶性四氮唑法(WST-1)法测定MSCs增殖情况;碘化丙啶(PI)与钙黄绿素-AM(Calcein-AM)检测MSCs的荧光活性;组织化学方法检测培养液中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性和骨钙素(osteocalcin,OC)含量;RT-PCR检测骨桥蛋白(osteopontin,OPN)mRNA的表达。结果:扫描电镜观察显示,实验组大量MSCs黏附在支架表面及其洞壁上,并大量增殖和分泌骨基质,而对照组复合材料表面细胞附着较少;WST-1测定实验组吸光度值明显大于对照组(P<0.05);PI荧光染色二组的死细胞数量均较少;实验组ALP活性和OC含量均较对照组增高明显(P<0.05);RT-PCR结果显示OPN在实验组中表达明显增强。结论:PRP促进了nHA/PLGA支架上鼠MSCs黏附、增殖和成骨分化。     

bFGF基因转染的骨髓间充质干细胞在珊瑚骨表面的生长特性

目的：将转染bFGF基因的骨髓间充质干细胞（BMSCs）与珊瑚骨复合培养，观察转染bFGF基因的BMSCs在珊瑚支架材料上的生长状况。方法：穿刺抽取新西兰大白兔胫骨骨髓，采用密度梯度离心法分离BMSCs．采用贴壁筛选法对分离出的BMSCs进行纯化，利用脂质体转染bFGF—pcDNA3到BMSCs。取生长良好的转染bFGF基因的BMSCs和未转染的BMSCs，分别接种于不同珊瑚表面，利用扫描电镜观察珊瑚支架上BMSCs的生长状况：采用MTT法观察细胞一支架复合培养的BMSCs增殖情况，采用SPSS10．0软件包对数据进行t检验。结果：扫描电镜观察显示．复合培养的BMSCs贴附在珊瑚上，并在材料上完全铺展，形态多样，细胞跨越微孔表面或向孔内长人，部分区域有细胞外基质形成。MTT法检测显示，细胞-支架复合培养转染组与复合培养未转染组的BMSCs增殖状况相比有统计学差异（P〈0．05），复合培养转染组，BMSCs生长增殖强于未转染组。而复合培养的转染组与单纯培养转染组BMSCs增殖相比无统计学差异（P〉0．05）。结论：转染bFGF基因的BMSCs在珊瑚支架材料上的生长状况较未转染组好，珊瑚人工骨可以作为BMSCs支架材料，用于构建组织工程骨。     

Influence of platelet-rich plasma on ectopic bone formation of bone marrow stromal cells in porous coral

This study evaluated the effect of platelet-rich plasma (PRP) on the bone formation of marrow stromal cells (MSCs) in porous coral. MSCs in 50 μl of PRP were seeded into natural coral disks (diameter 8.0 mm; thickness 2.0 mm). The composites were clotted and cultured in vitro or implanted subcutaneously into nude mice. Coral scaffolds loading MSCs or PRP alone acted as control. Alkaline phosphatase (ALP) activity of the specimens cultured in vitro for 7 and 14 days was measured, and the level of ectopic bone formation was investigated 4 and 8 weeks after operation. The samples from the coral/PRP/MSC group exhibited significantly higher ALP activity, compared with that from the coral/MSC group or the coral/PRP group (p < 0.05). New bone and/or cartilage formation could be observed in specimens from both coral/PRP/MSC and coral/MSC groups in ectopic sites, and osteogenesis followed the pattern of endochondral bone formation. Histomorphometric analyses showed enhanced cartilage and/or bone formation in the coral/PRP/MSC group, 4 and 8 weeks after implantation. No bone or cartilage formation could be observed in the coral/PRP group. The authors concluded that PRP could improve the ALP activity of MSCs on coral and increase ectopic bone formation.     

富血小板血浆修复种植体周围骨缺损的实验研究

目的探讨富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)修复种植体周围骨缺损的能力。方法Beagle犬4只,拔除单侧下颌1、2、4前磨牙作为实验牙位。3个月后植入种植体,其周围制备骨缺损并植入相应骨移植材料:实验组植入PRP/磷酸三钙(tricalcium phosphate,TCP);对照组植入TCP。8、16周分别处死动物2只,进行组织学、扫描电镜观察,观察新骨形成和种植体-新骨界面情况,能谱分析种植体-新骨界面Ca含量。结果8周及16周通过肉眼及组织学观察,实验组修复效果优于对照组,种植体-新骨界面Ca含量均高于对照组,差异有显著性(P<0.05)。结论PRP/TCP作为修复种植体周围骨缺损的骨移植材料具有可行性。     

VEGF在脱细胞骨基质复合富血小板血浆修复颅骨缺损中的表达

目的：研究血管内皮生长因子（VEGF）在脱细胞骨基质（acellular bone matrix,ABM）复合富血小板血浆（platelet-rich plasma,PRP）修复兔颅骨缺损时的表达及分布,探讨富血小板血浆促进成骨的机制。方法：雄性新西兰大白兔24只,体质量1.5～2.0kg。在兔颅骨两侧分别建立一个1cm×0.5cm全层骨缺损区,同时去除该区骨膜,注意勿伤及硬脑膜。随机选择一侧骨缺损作实验侧,植入复合PRP的ABM;另一侧为对照侧,仅植入ABM。术后第2、4、8、12周末分别处死6只兔取材。免疫组织化学法测定骨缺损修复区血管内皮细胞生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达;应用Image-proplus 5.0图像分析软件测量VEGF表达强度的灰度值。采用SSPS16.0软件包进行t检验。结果：术后2周,实验组VEGF呈强阳性表达,随后急剧下降,以后趋于平缓。对照组在术后2、4周呈阳性表达,以后平缓下降。两组相比,在第2、4周时差异均有显著性（P〈0.05）。第8、12周时,2组表达差异无显著性。结论：VEGF在实验组早期阶段的强阳性表达,说明血管形成活跃。PRP促进骨修复的作用发生在植入后早期,启动了早期活跃的成骨。