碘过量对大鼠甲状腺细胞线粒体超氧化物生成和膜电位的影响

目的 探讨碘过量对Fisher大鼠甲状腺细胞(FRTL)线粒体超氧化物生成和膜电位(△ψ)的影响.方法 FRTL细胞分别以10-4mol/L碘化钾(KI)、10 U/L促甲状腺素(TSH)、10-4mol/L KI+10 U/L TSH 处理24 h,利用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测FRTL细胞增殖情况,利用MitoSOX探针通过活细胞影像法检测线粒体超氧化物生成,利用罗丹明123(rh123)通过荧光分光光度计检测△ψ的变化.结果 细胞增殖情况,KI组(0.794±0.144)明显低于对照组(1.000±0.183,P<0.05),TSH组(1.215±0.156)明显高于对照组(P<0.05),KI+TSH组(1.025±0.254)与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),但明显高于KI组(P<0.05);细胞MitoSOX平均荧光强度(MFI),KI组和KI+TSH组(18.16±6.57、13.33±2.92)明显高于对照组(9.74±3.24,P均<0.05),TSH组(6.64±2.15)明显低于对照组(P<0.05),但KI+TSH组明显低于KI组(P<0.05);细胞rh123 MFI,KI组和KI+TSH组(210 593±31 328、295 525±34 243)明显低于对照组(407 824±37 198,P均<0.05),而KI+TSH组明显高于KI组(P<0.05),TSH组(411 187±72 852)与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 碘过量(10-4mol/L KI)能造成FRTL细胞线粒体过氧化损伤,抑制细胞增殖,10 U/L TSH能够促进FRTL细胞增殖,减轻碘过量对FRTL细胞线粒体的过氧化损伤.     

碘过量对大鼠甲状腺细胞线粒体超氧化物生成和膜电位的影响

Objective To investigate the effects of iodine excess on mitochondrial superoxide production and mitoehondrial membrane potential(△ψ)changes in Fisher rat thyroid cell line(FRTL)cells.Methods FRTL cells were treated with 10-4mol/L potassium iodine(KI),10 U/L thyrotropin(TSH),10-4 mol/L KI+10 U/L TSH respectively for 24 h.Effects on cell proliferation were assayed by methyl thiazolyl tetrazolium(MTT)colorimetric method.Changes of mitochondrial superoxide production and △ψ were measured by live cell imaging and spectrofluorometer using MitoSOX and rhodamine 123(rh123)respectively.Results Absorbance(A)in the KI group (0.794±0.144)showed a significant decline compared to the control group(1.000 ±0.183,P<0.05),whereas a significant elevation was observed in the TSH group(1.215±0.156,P<0.05).No significant differences was found between the KI+TSH group(1.025±0.254)and the control group(P>0.05),but the former was marked higher than the KI group(P<0.05).Compared to the control group(9.74±3.24).MitoSOX mean fluorescence intensity (MFI)in the KI and KI+TSH groups(18.16±6.57,13.33±2.92)were significantly increased(all P<0.05),which was a significant decline in the TSH group(6.64±2.15,P<0.05).MitoSOX MFI in the KI+TSH group was lower than the KI group(P<0.05).Rh123 MFI in the KI and KI+TSH groups(210 593±31 328,295 525±34 243)showed significant decline than the control group(407 824±37 198,all P<0.05).Compared with the KI group.the KI+TSH group pronouncedly attenuated the reduction of Rh 123 MFI(P<0.05).No significant differences of Rh 123 MFI were found between the TSH group(411 187 ± 72 852) and the control group(P > 0.05). Conclusion Iodine excess (10-4 mol/L KI) may lead to peroxide damage on the mitochondria of FRTL cells, and cell proliferation is inhibited. Combining treatment with 10 U/L TSH may attenuate mitochondrial peroxide damage and inhibition of cell proliferation caused by iodine excess.     

人遗传印记基因PEG10对L02细胞线粒体膜电位的影响

人遗传印记基因PEG10定位于人7号染色体长臂2区1带,是一个反转座子衍生而来的父系表达的遗传印记基因.PEG10基因高表达于肝癌细胞系HepG2和大多数肝细胞癌组织中,在良性肝病组织及非肝脏来源的肿瘤细胞系中没有检测出该基因的表达.PEG10基因的表达水平与肝细胞癌的转移潜能正相关,并且可以促进正常人肝细胞L02增殖,提示PEGl0基因可能在人肝细胞癌的发生过程中起重要作用.本研究通过检测L02细胞转染前后线粒体膜电位及增殖细胞核抗原(PCNA)表达的改变,初步探讨PEG10基因促人肝细胞增殖的机制.     

慢性碘过量对大鼠甲状腺细胞凋亡的影响

目的 探讨慢性轻中度碘过量对甲状腺细胞凋亡的影响,观察限碘后的恢复情况.方法 将Wistar大鼠分入4组:对照组、1.5倍、3倍和6倍高碘组,每日给碘量分别为4、6、12和24 μg,于实验1至8个月分批处死动物.部分高碘8个月大鼠限碘3个月(4μg/d).采用砷铈催化分光光度法测定尿碘浓度,应用Annexin V染色流式细胞术和电镜对甲状腺细胞凋亡定量定性,碘化丙碇染色流式细胞术测定细胞周期,分子探针(DCFH-DA)荧光定量细胞内活性氧簇(ROS)水平.应用流式细胞术和免疫组织化学方法检测凋亡相关蛋白的表达.结果 3倍和6倍高碘组4个月和8个月时,甲状腺细胞凋亡率和ROS水平显著高于对照(均P<0.05),限碘后恢复正常.6倍碘组4个月和8个月时,甲状腺增殖期细胞比例著升高(5%和6% vs 3%,均P<0.05),静止期细胞比例显著下降(64%和67% vs 80%,均P<0.05).3倍和6倍碘组8个月时,Fas、FasL、TRAIL蛋白表达水平比对照组高2-4倍,限碘后未恢复.Bcl-2和Bax蛋白的表达不变.6倍碘组8个月时,细胞凋亡率、ROS水平及给碘量三者之间显著正相关(r=0.637～0.790,P<0.01).结论 慢性碘过最能增加甲状腺细胞凋亡,ROS过多产生可能涉及其机制.     

碘过量不同处理时间对Fischer大鼠甲状腺细胞线粒体过氧化损伤的影响

目的探讨碘过量不同处理时间对Fischer大鼠甲状腺细胞线粒体过氧化损伤的影响。方法采用含0(对照组)、0.1 mmol/L碘化钾的Coons F12培养基培养Fischer大鼠甲状腺细胞2、6 h、1 d,对小鼠抗大鼠细胞色素C蛋白、死亡细胞百分比、线粒体超氧化物生成、乳酸脱氢酶活力进行检测分析研究。结果 0.1 mmol/L碘化钾组处理2 h、6 h、1 d时,小鼠抗大鼠细胞色素C强阳性细胞率远高于对照组(P<0.05);Fischer大鼠甲状腺细胞线粒体超氧化物生成明显高于对照组(P<0.05),且处理2 h时增长幅度最大;随着0.1 mmol/L碘化钾处理时间的增加,培养液上清中乳酸脱氢酶活力程序持续增加趋势,处理2、6 h、1 d时乳酸脱氢酶活力明显高于对照组(P<0.05)。结论碘过量处理2 h可能会导致Fischer大鼠甲状腺细胞线粒体发生过氧化损伤,而处理1 d则极有可能导致细胞凋亡。     

纳洛酮对缺氧大鼠皮质神经元细胞线粒体膜电位的影响

目的观察缺氧对大鼠皮质神经元细胞线粒体膜电位的影响及纳洛酮的保护作用。方法取体外培养12天的Wistar大鼠皮质神经元细胞,随机分为正常对照组、缺氧组、缺氧加纳洛酮组,缺氧6 h后在常氧下继续培养24h。用流式细胞仪检测不同时间段培养的神经元细胞线粒体膜电位。结果缺氧能诱导神经元细胞线粒体膜电位明显降低。纳洛酮组皮质神经元细胞在缺氧6 h及再复氧24 h后细胞线粒体膜电位明显高于缺氧组(P<0.01)。结论纳洛酮可改善缺氧诱导的大鼠皮质神经元细胞线粒体膜电位降低,对神经元细胞具有保护作用。     

莫西沙星对大鼠气道平滑肌细胞线粒体膜电位及凋亡的影响

目的 观察大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)在不同浓度的莫西沙星作用下,其线粒体膜电位（△Ψm）和半胱氨酸天冬氨酰蛋白酶-3（Caspase-3）表达及细胞凋亡的变化,探讨莫西沙星促进ASMC凋亡的可能机制。方法体外原代培养大鼠ASMC,按随机数字表法分为空白对照组、莫西沙星40 mg/L组（M40组）、80 mg/L组（M80组）、120 mg/L组（M120组）和200 mg/L组（M200组）,均孵育48 h后,Annexin-V/PI双标记流式细胞仪分析法检测细胞凋亡率,用JC-1荧光探针在免疫荧光显微镜下检测细胞△Ψm的变化,Western blot法检测凋亡蛋白Caspase-3的表达。结果各莫西沙星浓度组（M40组、M80组、M120组及M200组）的细胞凋亡率分别为(2.95±0.21)％、(7.39±0.63)％、(13.39±0.40)％和(21.20±1.42)％,均明显高于空白对照组的(0.94±0.05)％(均P＜0.01),并存在浓度依赖性(r=0.974,P＜0.01);荧光显微镜检测显示空白对照组以红色荧光为主,随着莫西沙星浓度增大,红色/绿色荧光强度值比率(分别为6.54±0.15、4.48±0.14、2.25±0.10和1.99±0.12)逐渐降低,与空白对照组(10.02±0.20)相比差异有统计学意义（均P＜0.01）,并存在药物浓度依赖性（r=-0.946,P＜0.01）;Western blot检测显示,空白对照组几乎无Caspase-3蛋白表达(0.31±0.03),各莫西沙星浓度组Caspase-3蛋白表达(分别为0.45±0.05、0.59±0.04、0.69±0.06和0.84±0.04)均明显高于空白对照组(0.31±0.03)（均P＜0.01）,同时也存在浓度依赖性(r=0.979,P＜0.01)。各组细胞凋亡率与△Ψm水平呈负相关（r=-0.887,P＜0.01）,与凋亡蛋白Caspase-3水平呈正相关(r=0.955,P＜0.01),各组细胞△Ψm水平与Caspase-3水平呈负相关(r=-0.951,P＜0.01)。结论 莫西沙星可能通过影响大鼠AΨm促进ASMC凋亡。     

三氧化二砷对肝癌Mahlavu细胞内线粒体跨膜电位的影响

[目的]探讨三氧化二砷（As2O3）作用于肝癌细胞后对其增殖抑制及线粒体跨膜电位（△Ψm）的影响。[方法]用As2O3作用于体外培养人肝癌Mahlavu细胞，用MTT法检测As2O3对人肝癌Mahlavu细胞增殖的影响，并用流式细胞仪观察As2O3对人肝癌Mahlavu细胞△Ψm的影响。[结果]MTT检测显示As2O3能明显抑制人肝癌Mahlavu细胞的增殖，并呈时间和剂量依赖性。流式细胞仪分析显示As2O3作用后的人肝癌Mahlavu细胞内△Ψm明显降低（P〈0．01），并呈时间和剂量依赖性。[结论]As2O3可降低人肝癌Mahlavu细胞△Ψm并可由此诱导细胞凋亡而抑制其增殖。这可能也是As2O3诱导肝癌Mahlavu细胞凋亡的机制之一。     

三氧化二砷对鸡马立克病肿瘤细胞凋亡及线粒体膜电位的影响

目的 研究三氧化二砷(arsenic trioxde,As2O3)诱导体外培养鸡马立克病(Marek disease,MD)肿瘤细胞株MDCC-MSB1细胞凋亡的机制.方法 将体外培养的MDCC-MSB1根据加As2O3终浓度不同分为0(对照)、2、4、8 μmol/L组.As2O3作用48 h后,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTF)检测As2O3对MDCC-MSB1的抑制作用,采用荧光显微镜观察细胞形态学变化.琼脂糖凝胶电泳DNA梯形带检测细胞凋亡,罗丹明123(Rhodamine123)染色流式细胞术检测线粒体膜电位(△ψm)的变化.结果 随As2O3水平增加(0、2、4、8μmol/L),其抑制率逐渐升高,分别为0、(5.34±3.02)%、(10.78±0.55)%、(20.02±3.24)%,任意两组间的比较差异有统计学意义(P<0.01);各组细胞凋亡指数逐渐增高,分别为3.200±0.459、11.543±0.391、17.206±0.636、21.343±0.620.任意两组间的比较差异有统计学意义(P<0.01);4组均出现典型的DNALadder,同时细胞膜完整,但线粒体△ψm下降(PI-/Rh123-)的凋亡细胞增加,增加率分别为(1.06±0.14)%,(4.63±0.04)%、(9.62±0.07)%和(10.39±0.10)%,任意两组间的比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 As2O3可诱导MDCC-MSB1细胞凋亡,其诱导凋亡的途径与△ψm降低有关.     

线粒体膜电位和细胞色素C在哮喘大鼠气道平滑肌细胞中的表达

目的 观察线粒体膜电位和细胞色素C在哮喘大鼠气道平滑肌细胞中的表达,探讨其在哮喘大鼠气道平滑肌细胞发病机制中的作用.方法 将SD大鼠随机分为对照组和哮喘组,以卵清白蛋白致敏和激发的方法 制备大鼠慢性哮喘模型,用组织贴壁法体外培养气道平滑肌细胞,流式细胞术测细胞线粒体膜电位,免疫蛋白印迹检测细胞色素C.结果 哮喘组线粒体...     

碘缺乏和碘过多对大鼠甲状腺形态和抗氧化能力的影响

目的 探讨机体在碘缺乏和碘过多状态下，甲状腺形态结构和功能的改变。方法 利用碘缺乏病病区的低碘粮食喂养大鼠，同时饮用不同浓度加碘水，复制低，高碘动物模型，于20周后光镜下观察大鼠甲状腺形态结构改变，测定血清激素和甲状腺抗氧化能力。结果 碘过多可导致大鼠甲状腺肿大，但肿大程度明显低于碘缺乏。碘过多对大鼠血清T4、T3水平和甲状腺的抗氧化能力无明显影响。结论 碘过多虽能造成大鼠甲状腺形态结构发生改变，但由于甲状腺有很强的代偿功能，甲状腺的功能基本正常。     

碘缺乏和碘过多对大鼠甲状腺结构与功能的影响

观察碘对大鼠甲状腺结构与功能的影响.低碘组尿碘、组织碘、血清甲状腺激素、组织激素低于适碘组(P＜0.01).碘过量组尿碘、组织碘呈逐渐升高的趋势.血清甲状腺激素、组织T3含量呈依次下降趋势(P＜0.05).光镜下观察,低碘组甲状腺呈现小滤泡增生.5倍高碘和10倍高碘组呈多型性变化.50倍高碘组和100倍高碘组滤泡增生显著.提示碘缺乏与碘过量均可导致甲状腺功能减退.     

Increased lactate production follows loss of mitochondrial membrane potential during apoptosis of human leukaemia cells

Acute tumour-lysis syndrome (ATLS) is a frequently fatal complication after cytoreductive leukaemia therapy. Lactic acidosis is associated with ATLS and its extent is correlated with the severity of ATLS. In the course of cytoreductive therapy, apoptosis is induced in tumour cells, which results in loss of mitochondrial function. We hypothesize that loss of mitochondrial function leads to compensatory glycolysis, which is the main cause of lactate accumulation and acidosis. We tested this hypothesis using the model of glucocorticoid-induced apoptosis in the human acute lymphoblastic leukaemia cell line CCRF-CEM. After induction of glucocorticoid-induced apoptosis, a biphasic course of lactate production was observed. Prior to the onset of apoptosis, i.e. prior to the loss of membrane potential, lactate production was reduced. However, subsequent to loss of mitochondrial membrane potential a massive increase in lactate production was observed (15.5 +/- 0.5 versus 10.17 +/- 0.09 mmol/10(6) cells, P = 0.001). We also demonstrated that inhibition of respiratory chain activity by antimycin A resulted in excess lactate production. In the model cell line used, conditional bcl-2 expression delayed glucocorticoid-induced apoptosis by protecting against loss of mitochondrial membrane potential; bcl-2 expression delayed the increase in lactate production and had no effect on the pre-apoptotic drop in lactate production. Apoptosis-induced lactate production was also observed in other cell lines (HL60, THP1 and OPM2) with various cytotoxic agents [doxorubicin, gemcitabine and vumon (VM26)]. Thus, the data suggest that lactate acidosis can be caused by apoptotic loss of mitochondrial function and massive apoptosis of a tumour mass via lactic acidosis may be the essential pathological event in ATLS.     

缺碘与高碘大鼠甲状腺抗氧化能力的实验研究

目的 研究缺碘与高碘对鼠甲状腺抗氧化能力的影响,探讨自由基对甲状腺的损伤作用。方法 将Wistar大鼠随机分为3组：适碘组（NI）、高碘组（HI）、低碘组（LI）,观察喂养12周、24周大鼠甲状腺及全身抗氧化能力的改变。结果 低碘组大鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）与同期适碘对照组比较无明显变化,丙二醛（MDA）在实验的第24周显著升高;甲状腺组织匀浆SOD、GSH-Px和MDA在12周和24周均明显升高;甲状腺生物膜SOD和MDA在12周和24周均明显高于同期适碘对照组。高碘组血清、组织匀浆及甲状腺生物膜SOD、GSH-Px和MDA在实验过程中均无明显改变。结论 碘缺乏可导致Wistar大鼠甲状腺组织过氧化损伤;而碘过多在本实验期间未表现出对甲状腺的明显损伤作用。     

Effect of iodine excess on morphology of mouse thyroid follicle and pancreatic acinar cells

正Objective To explore the effect of different levels of iodine excess on morphological changes of mouse thyroid follicle and pancreatic acinar cells.Methods Sixty female mice (BALB/c) were selected and their body weight were 18-22 g. The mice were divided into 6groups according to body weight via the random number table method, 10 mice in each group. Potassium iodate was added to drinking water in exposure groups with iodine contents of 300, 600, 1 200, 2 400, and 4 800μg/L, while normal group (control) was given normal     

低碘和高碘对大鼠甲状腺细胞凋亡的影响

目的 研究低碘和高碘对大鼠甲状腺细胞凋亡的影响。方法 利用病区的低碘粮食喂养大鼠，同时饮用不同质量浓度的加碘水，复制低碘和高碘动物模型，于20周后在光、电镜下观察甲状腺形态结构改变，原位末端标记方法对甲状腺细胞凋亡进行检测。结果 与对照组相比，低碘和高碘组甲状腺凋亡细胞数明显增多。结论 低碘和高碘均诱发大鼠甲状腺细胞凋亡，进而调节甲状腺的形态结构和功能。其中以低碘组作用明显，提示细胞凋亡过度是引起低碘和高碘性甲状腺功能低下的重要原因。     

锌对缺碘大鼠甲状腺细胞膜脂流动性的影响

目的：观察锌对缺碘大鼠甲状腺细胞膜脂流动性的影响。方法：应用缺碘饲料喂养Wistar大鼠复制缺碘动物模型，同时设补碘，补葡萄糖酸锌和复合锌组，实验中水碘，实验结束时测血清，组织锌含量；以DPH为荧光探剂，荧光偏振法测甲状腺细胞膜荧光偏振度（P）和膜相对流动性（MFU）。结果：缺碘组尿碘降低，加碘组和两组加锌组尿碘，组织锌升高，缺碘组甲状腺细胞膜脂P值升高，MFU降低；加碘组P值和MFU基本达到对照组水平，两组加锌组较缺碘组P值降低，MFU升高，结论：缺碘大鼠甲状腺细胞膜脂流动性降低，补锌可拮抗缺碘所致甲状腺细胞膜损伤，但作用不及补碘显著。     

解偶联蛋白2过表达张氏肝细胞的构建及其对线粒体膜电位和活性氧的影响

目的 构建稳定过表达人解偶联蛋白2 (UCP2)的张氏肝细胞株,观察UCP2对线粒体膜电位(MMP)和活性氧(ROS)的作用. 方法 将含有人UCP2 cDNA全长的重组质粒(pcDNA3.1-hU CP2)转染张氏肝细胞系,pcDNA3.1空载体作为对照.Zeocin筛选稳定表达UCP2的细胞株,Western blot和免疫细胞化学鉴定UCP2蛋白表达.利用不同剂量UCP2抑制剂京尼平(25、50、100μmol/L),预处理稳定表达UCP2的细胞株.荧光分光光度法检测MMP和ROS水平变化.数据分析用单因素方差分析和q检验(Newman-keuls法),P＜0.05为差异有统计学意义.结果 pcDNA3.1-hU CP2成功转染张氏肝细胞,UCP2相对表达量约为对照组的1.6倍.过表达细胞罗丹明123和2 ′,7 ′ -二氯氢化荧光素二脂荧光强度(分别为11.11±2.76和4.97±0.62)均明显低于正常对照组张氏肝细胞(分别为15.56±2.55和6.14±1.25,q值分别为4.80和3.35,P＜0.01和P＜ 0.05)和空载体对照组肝细胞(分别为16.11±2.93和6.23±1.13,q值分别为5.40和3.60,P＜0.01和P＜ 0.05);空载体组上述两指标与正常对照组相比,差异均无统计学意义.京尼平低、中、高剂量组与过表达组相比,罗丹明123的荧光强度(分别为14.89±2.89,17.89±2.93,24.00±2.55,q值分别为4.08,7.33和13.93,P值均＜0.01)和2 ′,7 ′-二氯氢化荧光素二脂的荧光强度(分别为9.16±0.78,10.84±1.09, 11.83±1.25,q值分别为12.00,16.83和19.67,P值均＜0.01)均明显升高,并呈现剂量依赖性.结论 成功构建稳定过表达人U CP2的张氏肝细胞株,UCP2表达水平及活性变化可通过MMP和ROS影响线粒体功能.